甘露消毒丹对温病湿热证大鼠LBP mRNA、CD14 mRNA、NF-κBp动态干预

目的观察甘露消毒丹对温病湿热证大鼠细胞内毒素特异性受体(LBP mRNA),(CDl4 mRNA)及(NF-κBp65)表达变化的动态干预,深入探讨清热化湿方的治疗机制.方法分为正常组、湿热模型组(高脂 高温高湿 大肠杆菌)、清热化湿组;采用逆转录.聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肝巨噬细胞LBP mRNA,CD14 mRNA,免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-κBp65活化.结果模型组在感染6,12,24 h等不同时相点LBP mRNA,CDl4 mRNA,NF-kB表达逐渐非常显著增强,且不同时相点之间比较均有显著性差异,说明随着病程的发展,湿热模型LBP mRNA,CD14 mRNA,NF-kB出表达逐渐增强.治疗组6,12,24 h等不同时相点比较,LBP mRNA,CD14 mRNA表达减弱,具有非常显著性差异;24 h时相点治疗组与模型组比较LBP mRNA,CD14 mRNA表达减弱有非常显著性差异,但仍未恢复正常,说明LBP mRNA,CD14 mRNA遏制衰减是一个缓慢的过程.而治疗组NF-kB表达6,12,24 h各时相点间比较无显著性差异;且与正常组比较NF-kB激活均无显著性变化.结论甘露消毒丹对温病湿热证大鼠肝巨噬细胞LBP mRNA,CD14 mRNA及NF-kB的激活具有较好的干预调控作用,能中止炎症介质的转录,限制急性炎症反应.     

肝炎病毒温病湿热证模型小鼠肝脏NF-κB表达的研究

目的：以小鼠肝炎病毒A59株（MHV-A59）和大肠杆菌作为生物致病因子,建立2种小鼠温病湿热证动物模型,从肝脏核因子KB（NF-κB）表达探讨温病湿热证的部分致病机制。方法：①温病湿热证的致病机制：动物随机分为正常组、模型组、肠茵组共3组,免疫组化法检测小鼠肝脏NF-κB;②造模因素在MHV-A59温病湿热证致病机制形成中的地位：动物随机分为正常组、模型组、湿热组（肥甘饮食＋湿热外环境造模）、病毒组（单纯MHV-A59造模）共4组,免疫组化法检测小鼠肝脏NF-κB;③清热祛湿类方药的对温病湿热证机制的反证：动物随机分为正常组、模型组、A药组（模型组用蒿芩清胆汤治疗）,B药组（模型组用黄连解毒汤治疗）、C药组（模型组用三仁汤治疗）等5组,免疫组化法检测小鼠肝脏NF-KB表达。结果：模型组、肠茵组肝脏NF-KB表达较正常组明显升高（P〈0．05,P〈0．01）。病毒组、模型组肝脏NF-KB表达较正常组明显升高（P〈0．01）,湿热组较正常组升高不明显（P〉0．05）,病毒组与模型组无明显差异（P〉0．05）。与模型组比较,B药组肝脏NF-κB表达明显降低（P〈0．05）。结论：肝脏NF-κB表达增强是温病湿热证共同的致病机制之一,在MHV-A59温病湿热证形成中,MHV-A59因素主导着炎症;清热祛湿类方药具有不同程度降低肝脏NF-κB,反证了温病湿热证的上述致病机制。     

甘露消毒丹对湿热证型病毒性肺炎小鼠模型的多靶点干预作用

目的探讨甘露消毒丹对湿热证型病毒性肺炎小鼠模型的多靶点干预作用。方法通过肥甘饮食、湿热环境、流感病毒感染三因素合并,构建湿热证型病毒性肺炎动物模型。随机分为模型组、甘露消毒丹组、利巴韦林组和空白组。滴鼻感染病毒2h后灌胃给药,2次/d,连续给药6d,观察并记录小鼠肛温、体重;实验结束后处死小鼠,生化法检测血清中CHOL、LDL-C、HDL-C含量;ELISA法检测血清中IL-4、TNF-α浓度;免疫组化法检测NF-κB、AQP1、AQP5蛋白的表达;HE染色观察小鼠肺组织病理变化;RT-PCR法检测病毒核酸mRNA表达。结果与模型组相比,甘露消毒丹组小鼠血清中CHOL、LDL-C、HDL-C无明显变化(P0.05);血清中IL-4水平降低(P0.05);肺组织AQP1光密度降低(P0.01);肺组织HE染色示肺部组织炎性浸润情况减轻;病毒核酸mRNA表达明显降低(P0.05)。结论甘露消毒丹对湿热型病毒性肺炎的治疗可能是通过影响炎性因子含量及炎性相关的AQP1的表达,抑制湿热证病毒性肺炎模型的炎性反应,同时抑制病毒核酸mRNA表达,为临床治疗湿热证型病毒性肺炎提供现代药理学依据。     

TLR4在参苏饮及其拆方含药血清诱导炎症16HBE hBD-2mRNA表达中的作用机制研究

目的:使用益气解表代表方参苏饮(《太平惠民和剂局方》)及其拆方的含药血清对炎症16HBE进行干预,从中探讨TLR4在hBD-2mRNA表达中的作用。方法:传代培养16HBE细胞后将其分为5组,用LPS建立细胞炎症模型,加入TLR4抑制剂Anti-Human CD284后分别将培养液替换为含有提前制备的参苏饮及其拆方含药血清培养液,在给药后不同时间点(1/2h,1h,3h,5h,8h)分别取出相应组别细胞培养板,提取细胞总RNA,使用real time PCR检测16HBE炎症模型中以上时间点NF-κBp65 mRNA、hBD-2 mRNA表达量。结果:与空白组比较,模型组NF-κBp65 mRNA相对表达量在1h、5h显著升高(P0.05),而hBD-2 mRNA相对表达量仅在1h显著升高(P0.05)。与模型组比较,参苏饮全方组NF-κBp65 mRNA、hBD-2 mRNA相对表达量仅在5h显著升高(P0.05);益气解表组NF-κBp65 mRNA、hBD-2 mRNA相对表达量仅在3h显著升高(P0.05)。结论:Anti-Human CD284阻断TLR4后,参苏饮诱导炎症16HBE表达NF-κBp65 mRNA、hBD-2mRNA明显受抑,表明参苏饮上调NF-κBp65 mRNA、hBD-2 mRNA需要TLR4参与。     

甘露消毒丹对湿热证大鼠内毒素转导信号的动态干预

目的:观察甘露消毒丹对温病湿热证大鼠细胞内毒素特异性受体LBPmRNA、cD14mRNA、TL-R4mRNA及NF-KBp65表达变化的动态干预,深入探讨清热化湿方的治疗机制.方法:分为正常组、湿热模型组(高脂 高温高湿 大肠杆菌)、清热化湿组;采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肝巨噬细胞LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA,免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-KBp65活化.结果:模型组在感染6h、12h、24h等不同时相点LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-kB表达非常显著增强,且不同时相点之间比较均有显著性差异,说明随着病程的发展,湿热模型LBPmRNA、CD14mRNA、IL-R4mRNA、NF-KB表达逐渐增强.治疗组6h、12h、24h等不同时相点比较,LBPmRNA、CD14rimRnA、TL-R4mRNA表达减弱,具有非常显著性差异;24h时相点治疗组与模型组比较LBPmRNA、CD14mRNA、TL-R4mRNA表达减弱有非常显著性差异,但仍未恢复正常,与正常组比较仍有极显著性差异,说明LBPmR-NA遏制衰减是一个缓慢的过程.而治疗组NF-kB激活6h、12h、24h各时相点间比较均无显著性差异;且与正常组比较NF-kB激活均无显著性变化.结论:甘露消毒丹对温病湿热证大鼠肝巨噬细胞LBPm-RNA及NF-kB的激活具有较好的干预调控作用,能中止炎症介质的转录,限制急性炎症反应.     

温病湿热证动物模型中炎症因子与水通道蛋白表达的实验研究

目的:采用复合多因素造模法,给予小鼠肥甘饮食、酒伤、劳役等方法并加以湿热外环境以建立湿热证小鼠模型,探讨湿热证中炎症反应与AQP之间的关系。方法:将40只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、脂多糖(LPS)组、湿热组、脾虚组,观察小鼠日常活动以及体征,测量小鼠每周体质量变化,采用HE染色检测舌部病理形态学变化。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中LPS和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;免疫组化法检测结肠组织中核转录因子κBp65(NF-κBp65)、Toll样受体4(TLR4)、水通道蛋白质(AQP)3和水通道蛋白质(AQP)4的阳性表达。结果:与正常组相比,LPS组、湿热组、脾虚组中LPS、TNF-α、NF-κBp65、TLR4、AQP3的表达升高(P0.001),AQP4的表达下降(P0.001);与LPS组相比,湿热组、脾虚组LPS、TNF-α的含量下降(P0.001),湿热组NF-κBp65、AQP4的表达升高(P0.05),脾虚组TLR4、AQP3、AQP4的表达升高。结论:湿热证小鼠LPS、TNF-α、NF-κBp65、TLR4的水平增高与水通道蛋白AQP3、AQP4关系密切,而LPS的在其中的机制有待进一步深入研究。     

4种归肺经中药对肺热证小鼠TLR2,NF-κB表达变化的研究

目的:研究麻黄、干姜、黄芩、桑白皮4味归肺经中药对肺热证小鼠肺组织TLR2,NF-κB p65表达的影响,探讨这4味中药干预肺热证的作用机制。方法:将100只健康KM种小鼠随机分为正常对照组、模型组、麻黄、干姜、黄芩、桑白皮组(20,10 g·kg^-1),鼻腔滴入肺炎链球菌菌液建立小鼠肺热证模型,分别给予不同中药治疗,应用免疫组化法检测肺组织TLR2,NF-κB p65蛋白含量,Real-time PCR法检测肺组织TLR2,NF-κB p65 mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组TLR2,NF-κB p65蛋白含量升高（P<0.01）,mRNA表达上调（P<0.01或P<0.05）;与模型组比较,麻黄高、低剂量组、干姜低剂量组、黄芩高剂量组TLR2蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）;麻黄高、低剂量组、干姜低剂量组、黄芩高、低剂量组、桑白皮高、低剂量组NF-κB p65蛋白含量降低（P<0.05或P<0.01）;麻黄高、低剂量组、干姜高、低剂量组、黄芩高剂量组、桑白皮高剂量组TLR2 mRNA表达下调（P<0.01或P<0.05）。结论:麻黄、干姜、黄芩、桑白皮可能通过下调TLR2,NF-κB p65蛋白及mRNA表达,介导TLR2/NF-κB炎症信号通路,从而减轻小鼠肺热证肺组织损伤。     

芪冬活血饮对LPS致炎巨噬细胞炎症反应的作用及机制探讨

目的:通过观察芪冬活血饮大鼠药物血清对NF-κB抑制巨噬细胞炎症细胞因子及TLR4、Cav-1、NF-κBp65 mRNA表达的影响,探讨其炎症调控的机制。方法:将巨噬细胞分为空白对照组(UT组)、LPS组、NF-κB抑制组(NI组)、NF-κB抑制+LPS组(NL组)、LPS加空白血清组(LB组)、LPS加药物血清组(LD组)、NF-κB抑制+LPS+空白血清组(NLB组),NF-κB抑制+LPS+药物血清组(NLD组)8组。巨噬细胞予阻断剂阻断0.5 h后加入LPS致炎,并予药物血清干预,LPS处理12 h后测定各组细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-10水平,及TLR4、Cav-1、NF-κBp65 mRNA相对表达量。结果:LD组TNF-α、IL-1β、IL-10水平及NF-κBp65、Cav-1、TLR4 mRNA相对表达量均低于LB组和LPS组,比较有统计学意义;NLD组TNF-α、IL-1β、IL-10水平及NF-κBp65、Cav-1、TLR4mRNA相对表达量均低于NL组,两组TNF-α、IL-1β有显著统计学差异,NF-κBp65mRNA、IL-10比较差异无统计学意义,Cav-1、TLR4mRNA比较差异有统计学意义。结论:芪冬活血饮药物血清可减轻LPS刺激的巨噬细胞炎性反应;除TLR4/Cav-1/NF-κBp65途径外,芪冬活血饮还可以通过非NF-κBp65途径降低炎症反应。     

芪风固表颗粒对肺炎链球菌感染小鼠肺组织Toll样受体4/核因子-κBp65信号通路的影响

目的：研究芪风固表颗粒对肺炎链球菌(Spn)感染小鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)/核因子-κBp65(NF-κBp65)信号通路影响。方法：实验分为正常对照组、模型组、阳性对照组(泛福舒0.63 mg/kg)和芪风固表颗粒高(2.6 g/kg)、中(1.3 g/kg)、低(0.65 g/kg)剂量组,每组10只。各药物组预防给药40 d后,乙醚麻醉小鼠,滴鼻感染7.66×10¹⁴CFU/mLSpn50μL 1次,感染48 h后处死小鼠。HE染色观察各组小鼠肺组织病理变化,免疫组化检测肺组织TLR4和NF-κBP65蛋白表达水平,RT-PCR检测肺组织TLR-4和NF-κBp65mRNA相对表达水平。结果：HE染色结果表明,模型组小鼠肺组织有明显炎性浸润,芪风固表颗粒高、中剂量组肺组织炎性浸润程度减轻且支气管病变发生率低于模型组。与模型组比较,泛舒福组、芪风固表颗粒高、中剂量组肺组织TLR4和NF-κBP65蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),各剂量组TLR-4mRNA相对表达水平降低(P<0.01),芪风固表颗粒高剂量组NF-κBp...     

不同年龄小鼠感染流感病毒后TLR4/NF-κB信号通路改变的对比研究

目的:观察流感病毒对幼龄鼠与成龄鼠肺组织NF-κB p65及TLR4的表达的影响。方法:昆明种小鼠随机分为幼龄模型组、成龄模型组、幼龄正常对照组、成龄正常对照组,每组40只,采用经鼻腔接种甲型流感病毒FM1株使小鼠产生肺炎。各组小鼠感染第1、3、5、7天,处死动物取材,每组各取10只,采用免疫组化染色法检测各组小鼠肺组织NF-k B p65和TLR4的表达。结果:幼龄鼠TLR4、NF-κB P65表达显著升高,成龄鼠轻度升高,二者差异显著。结论:幼龄鼠和成龄鼠IV感染后肺组织TLR4-NF-κB P65信号通路活化程度不同。     

固本防哮饮对小鼠哮喘缓解期TLR4及TLR7的调节作用

目的:观察固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠模型Toll-样受体(TLR) 4,TLR7,核转录因子-κB p65(NF-κB p65),NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的调节作用,探讨固本防哮饮治疗哮喘缓解期的机制。方法:呼吸道合胞病毒(RSV)联合鸡卵蛋白(OVA)对3周龄BALB/c小鼠制备哮喘缓解期模型,将60只小鼠分为空白组、模型组、地塞米松组(0. 001 g·kg~(-1))以及固本防哮饮低、中、高剂量(6. 5,13,26 g·kg~(-1))组,分别进行干预,共给药28 d,每天1次。给药结束后处死小鼠,苏木素-伊红(HE)染色观察哮喘小鼠肺组织病理形态学变化,并对肺部炎症情况进行评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织TLR4,TLR7,IκBα及肺组织细胞核内NF-κB p65蛋白表达水平;免疫荧光共聚焦观察NF-κB p65在细胞核表达情况。结果:与空白组比较,模型组小鼠肺组织有明显炎症细胞浸润及支气管狭窄(P 0. 01),同时小鼠肺组织细胞核内NF-κB p65分布显著增多(P 0. 01),表达明显增高(P 0. 05),TLR4,TLR7,IκBα蛋白表达明显降低(P 0. 05);与模型组比较,固本防哮饮各剂量组能显著缓解小鼠肺组织炎症浸润(P 0. 01),降低肺组织核蛋白NF-κB p65的表达(P 0. 01),核蛋白NF-κB p65入核情况减轻(P 0. 01),同时显著增加TLR4,TLR7,IκBα蛋白的表达(P 0. 01)。结论:固本防哮饮能够缓解气道炎症,并且可能是通过调节TLR4,TLR7,NF-κB p65,IκBα实现其治疗作用。     

银翘散提取物对流感病毒性肺炎小鼠组织TLR4及NF-κB p65的影响

目的观察银翘散提取物对流感病毒性肺炎小鼠组织TLR4及NF-κB p65表达的影响。方法昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、银翘散组和利巴韦林组,每组10只,采用鼻腔接种甲型流感病毒FM1株诱导幼龄小鼠肺炎,于感染前1天,银翘散组灌服中药提取物,利巴韦林组腹腔注射利巴韦林注射液,正常组和模型组以等体积的生理盐水灌胃。观察各组小鼠的一般状态、肺组织形态学,各组小鼠感染5天后处死,采用免疫组化染色法检测各组小鼠肺组织NFB p65和TLR4的表达。结果与正常组相比,模型组小鼠肺组织中NF-κB p65、TLR4的表达显著增高(P0.05),银翘散组NF-κB p65、TLR4的表达较模型组明显降低(P0.05)。结论 NF-κB p65、TLR4表达降低,很可能是银翘散提取物治疗流感病毒性肺炎小鼠的机理。     

甘露消毒丹及其拆方对CoxA16感染小鼠炎症因子及NF-κB信号通路的影响

目的:观察甘露消毒丹及其拆方对柯萨奇16病毒(Cox A16)感染模型小鼠脾组织IL-10、TGF-α含量及脑组织NF-κB蛋白的影响,探讨甘露消毒丹及其清残方、芳残方抗炎的可能机制。方法:ICR纯种小白鼠40只,随机分为5组,即空白组、模型组、全方组、芳残方组(甘露消毒丹中芳香化湿药物组成)、清残方组(甘露消毒丹中清热解毒药物组成),予单次腹腔注射Cox A16制备感染模型,采用ELISA法检测各组小鼠脾组织中的IL-10、TGF-α的表达,用Western blot法测定脑组织中NF-κB蛋白的含量变化。结果:与空白组比较,模型组脾组织IL-10、TGF-α含量升高,脑组织NF-κB相对表达量上调(P0.05或P0.01);与模型组比较,全方组脾组织IL-10、TGF-α含量显著升高,脑组织NF-κB相对表达量明显下调(P0.05或P0.01);与芳残方组比较,全方组脾组织IL-10含量增加、脑组织NF-κB相对表达量下调(P0.05);与清残方组比较,全方组脾组织TGF-α含量增加、脑组织NF-κB相对表达量下调(P0.05)。结论:甘露消毒丹及其拆方对Cox A16感染模型小鼠抗炎作用机制可能与增加脾组织IL-10、TGF-α含量,下调脑组织NF-κB相对表达量有关。     

清肺排毒汤对LPS诱导急性肺损伤小鼠炎症的作用

目的 探讨清肺排毒汤对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的抗炎作用及其机制。方法 小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组及清肺排毒汤低、高剂量组,除对照组外,其余各组采用气管穿刺注射LPS建立ALI模型,造模成功后给予相应药物干预7 d。记录小鼠存活率、肺湿干重比,HE染色观察肺损伤程度,吉姆萨染色法及血液分析仪分类计数肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞,RT-qPCR法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达,ELISA法检测小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达。结果 与模型组比较,清肺排毒汤高剂量组小鼠肺水肿和损伤程度,血清、BALF中炎性细胞因子和炎性细胞数量,肺组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达和肺组织TLR4、MyD88、p-NF-κB p65,p-IκBα蛋白表达均有不同程度降低(P<0.05,P<0.01)。结论 清肺排毒汤可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制炎症因子和介质释放,减轻LPS诱...     

流感病毒性肺炎湿热证小鼠TLR-7介导信号通路的变化

目的通过人工气候模拟,观察流感病毒性肺炎湿热证小鼠Toll样受体7(TLR-7)介导信号通路的变化,探讨病毒性疾病湿热证的物质基础。方法将50只BALB/c小鼠随机分为正常对照组10只、单纯湿热组10只、湿热模型组15只、单纯病毒组15只。单纯湿热组:全程高脂饲料喂养,连续10天置于气候箱;湿热模型组:全程高脂饲料喂养,连续10天置于气候箱,第11天接种病毒,接种病毒后不再置入气候箱;单纯病毒组:全程普通饲料喂养14天,不置入气候箱,第11天接种病毒1次,继续喂养3天,第15天处死采集标本,每组随机选取8个样本检测,比较各组TLR-7、核因子-κB(NF-κB)、髓样分化因子88(MyD88)mRNA表达水平。结果湿热模型组TLR-7、MyD88、NF-κB三者mRNA表达水平较其他3组增高,但TLR-7、MyD884组间差异无统计学意义(P>0.05),NF-κB水平湿热模型组高于其他3组(P<0.05或P<0.01)。结论湿热因素干预能上调TLR-7介导信号因子,尤其是下游信号因子NF-κB,从而激发Tol1-NF-κB信号通路,导致湿热模型组小鼠肺脏病变程度较单纯病毒组重。     

三仁汤对湿热证型病毒性肺炎小鼠模型的多靶点干预作用

目的:探讨三仁汤对湿热证型病毒性肺炎小鼠模型的多靶点干预作用。方法:通过肥甘饮食、湿热环境、流感病毒感染三因素合并,构建湿热证型病毒性肺炎动物模型。随机分为模型组、三仁汤组、利巴韦林组和空白组。滴鼻感染病毒2 h后灌胃给药,2次/d,连续给药6 d后处死动物。生化法检测血清中CHOL、LDL-C、HDL-C含量;HE染色观察小鼠肺组织病理变化;免疫组化法检测NF-κB、AQP1、AQP5蛋白的表达;RT-PCR法检测病毒核酸mRNA表达。结果:与模型组相比,三仁汤组小鼠血清中CHOL、LDL-C、HDL-C无明显变化(P0.05);肺组织HE染色示肺部组织炎性浸润情况减轻;肺组织NF-κB光密度降低(P0.05);病毒核酸mRNA表达降低(P0.05)。结论:三仁汤能通过影响炎性相关的NF-κB,抑制湿热证病毒性肺炎模型的炎性反应,同时抑制病毒核酸mRNA表达,为临床治疗湿热证型病毒性肺炎提供现代药理学依据。     

肠炎清对ICUC大鼠结肠组织TLR4、NF-κB蛋白表达、TLR4mRNA的影响

目的通过观察肠炎清对免疫复合溃疡型结肠炎模型(ICUC)大鼠结肠组织Toll样受体4(TLR 4)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨肠炎清治疗IBD的作用机制。方法采用三硝基苯磺酸(TNBS)加免疫复合法造模。将大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、肠炎清低、中、高剂量组(8.33、16.67、33.33m L/kg)、柳氮磺吡啶(SASP)组(0.5g/kg)。造模后第2 d,用药组分别给予相应药物灌胃7d,给药7天后麻醉处死大鼠,取新鲜结肠标本,采用免疫组化法检测TLR 4、NF-κBp65的表达,实时定量PCR法(qRT-PCR)检测TLR 4mRNA的表达。结果免疫组化结果:NF-κBp65和TLR4在各组各只动物均可见阳性表达,其中肠炎清高剂量组及SASP组可显著下调NF-κBp65的表达,有统计学差异(P0.05)。TLR4在各给药组与模型组比较未见显著差异(P0.05)。PCR结果:与模型对照组相比,各给药组大鼠结肠组织TLR4表达均为阳性,但未见统计学差异(P0.05)。结论下调TLR4、NF-κBp65的表达,是肠炎清治疗IBD的作用机制之一。     

槐定碱与TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响

目的:研究槐定碱及TLR4/MD-2阻断剂对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影响,探讨其抗内毒素的药理机制。方法:培养RAW264.7巨噬细胞,分为5组:空白对照组,LPS模型组,槐定碱+LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+LPS组,TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组,各组分别于处理完毕后120 min时收集细胞及细胞培养液。West-ern blot检测TLR4蛋白表达,免疫细胞化学检测NF-κB蛋白的分布与表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB,TNF-αmRNA表达,放射免疫分析法检测细胞培养液中TNF-α含量。结果:与LPS模型组比较,槐定碱+LPS组TLR4蛋白,NF-κBmRNA与NF-κB入核率,TNF-αmRNA及培养液中TNF-α含量均显著降低(P<0.01);TLR4/MD-2阻断剂+LPS组与TLR4/MD-2阻断剂+槐定碱+LPS组NF-κB mRNA及NF-κB入核率,TNF-αmRNA及培养液中TNF-α含量均低于LPS模型组(P<0.01),接近空白对照组,但2组之间上述各值的差异均无统计学意义。结论:TLR4/MD-2可能是槐定碱作用的靶位之一,槐定碱抑制TLR4-NF-κB-TNF-α通路活化可能是其抗内毒素机制之一。     

固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠IKK/NF-κB信号通路的调控作用

目的:探讨中药复方固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠IκB激酶(IKKβ)及核转录因子(NF-κB)表达的影响。方法:采用卵蛋白(OVA)致敏和呼吸道合胞病毒(RSV)滴鼻诱导激发BALB/c雌性小鼠,建立哮喘缓解期动物模型,随机分为正常组,模型组,固本防哮饮低、中、高剂量组,孟鲁司特钠组及地塞米松组。用Real-time PCR和Western Blot法分别检测肺组织中IKKβ、NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达水平。结果:模型组小鼠肺组织中IKKβ、NF-κBp65 mRNA和蛋白表达均显著高于正常组(P0.01);固本防哮饮低、中、高剂量组,孟鲁司特钠组及地塞米松组小鼠肺组织中IKKβ、NF-κBp65 mRNA和蛋白表达均低于模型组(P0.05)。结论:哮喘缓解期气道炎症可能与IKKβ、NF-κBp65mRNA和蛋白高表达有关。固本防哮饮在一定程度上能降低IKKβ、NF-κBp65 mRNA和蛋白高表达,提示固本防哮饮能抑制IKK/NF-κB信号通路的活性,从而减轻气道炎症,预防哮喘发作。     

热毒宁注射液对LPS诱导ALI/ARDS小鼠TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

目的 探讨热毒宁注射液对LPS诱导急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)小鼠肺损伤的保护作用及对TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法 将小鼠随机分为对照组、模型组、热毒宁注射液组、地塞米松(阳性药)组，每组6只，气管注射LPS溶液制备ALI/ARDS模型，造模后3 h给予各组相应药物，连续干预7 d后，检测小鼠肺湿/干重比、肺组织MPO活性及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)水平，HE染色观察肺组织病理改变，Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、IKKα、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。结果 与对照组比较，模型组小鼠肺湿/干重比、肺组织MPO活性、血清炎性因子水平和肺组织TLR4、MyD88、IKKα、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),肺泡腔增大，肺泡壁增厚，肺部有大量的炎性细胞浸润；与模型组比较，热毒宁注射液组和地塞米松组小鼠肺湿/干重比、肺组织MPO活性、血清炎性因子水平和肺组织TLR4、MyD88、I...