动脉粥样硬化对平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达之影响

目的：究动脉粥样硬化对ＳＭＣ凋亡及凋亡相关基因表达的影响,探讨凋亡的分子机制及晚期ＡＳ斑块破裂之原因。方法：采用高维生素Ｄ３＋高脂肪高胆固醇饲料喂养法建立大鼠ＡＳ的模型;运用ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳法鉴定基因组ＤＮＡ的断裂情况,使用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测Ｐ５３,ｃ－ｍｙｃ及ｂｃｌ－２基因的表达活性。结果：ａ．ＡＳ斑块中ＳＭＣ的ＤＮＡ片断在电泳呈特征性梯状分布,ｂ．ＡＳ斑块中Ｐ５３及Ｃ－ｍｙｃ基因     

Bcl—2和p53蛋白表达对肝硬变和肝细胞癌中细胞增殖和凋亡的 …

利用原位ＤＮＡ末端转移酶标记技术及Ｓ 疫组织化学方法检测了肝硬变和肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中凋亡细胞,ｐ５３,ｂｃｌ－２蛋白和ＰＣＮＡ的表达。结果显示：ＨＣＣ与肝硬变组织比较,凋亡细胞密度低,ＰＣＮＡ阳性细胞密度高ｐ５３和ｂｃｌ－２蛋白阳性强度高,且均与ＨＣＣ分化程序有关。提示ｐ５３和ｂｃｌ－２蛋白可能是通过其过度表达影响细胞增殖和细胞凋亡失衡,并以“选择性细胞增殖”形式导致的发生和发展。     

反义bcl─2RNA促进HL─60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础．方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用．结果：ｐＤＯＲ－ＡＢ转入ＨＬ－６０细胞并表达ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ；细胞内Ｂｃｌ－２蛋白含量明显下降；细胞周期分析可见凋亡峰；电镜下可见凋亡细胞；ＤＮＡ凝胶电泳出现梯状电泳带．结论：反义ｂｃｌ－２瞬时表达可促进ＨＬ－６０细胞的凋亡，ｂｃｌ－２在ＨＬ－６０细胞凋亡的调节中起重要作用     

人乳腺癌MCF—7细胞凋亡过程中p53与bcl—2表达的时序性

目的：研究细胞凋亡过程中ｐ５３与ｂｃｌ－２基因表达变化的时序关系，以探索ｐ５３调控ｂｃｌ－２的可能性。方法：选择具有野生型ｐ５３的人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系，用５－Ｆｕ为诱导剂诱导细胞凋亡；用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测细胞凋亡过程中ｐ５３与ｂｃｌ－２表达变化的时序性。结果：ｐ５３表达增高出现在ｂｃｌ－２表达降低之前。结论：ｐ５３在时序上具有作为ｂｃｌ－２基因负调控转录因子的可能性     

肝癌组织中bax,突变p53和c—myc蛋白测定

目的：检测肝癌组织中促细胞凋亡基因、癌基因和抗基因的治疗。方法 用免疫组化技术ＡＢＣ法,测定肝细胞中的ｂａｘ、ｐ５３和ｃ－ｍｙｃ蛋白。结果 ｐ５３基因突变、ｃ－ｍｙｃ基因激活导致肝癌的发生,同时,促细胞凋亡基因ｂａｘ基因增强,细胞凋亡剧烈。     

慢性阻塞性肺病患者肺内细胞增殖与凋亡的研究

目的研究细胞增殖、凋亡及其调节基因在慢性阻塞性肺病（ＣＯＰＤ）继发肺动脉高压中的作用。方法应用免疫组化及原位缺口末端ＤＮＡ碎片标记技术检测ＣＯＰＤ患者肺内细胞增殖及凋亡,并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测ＣＯＰＤ患者肺内ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及ｐ５３基因表达。结果ＣＯＰＤ患者及对照组肺内（包括肺小血管壁）均存在着一定比率的增殖及凋亡细胞。两组相比,ＣＯＰＤ组增殖指数增高而凋亡指数减少,增殖与凋亡比值显著增高,约为对照组４倍。在ＣＯＰＤ患者肺内,增殖细胞绝大部分位于肺小血管壁,而凋亡细胞在肺小血管壁上较对照组少见。ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及蛋白表达在ＣＯＰＤ肺内比对照组明显增高,主要在肺小血管壁。ｃｍｙｃｍＲＮＡ表达量约为对照组３倍,ｂｃｌ２ｍＲＮＡ三条带表达量约为对照组２５～３５倍,ｐ５３基因ｍＲＮＡ表达量比对照组显著减少,约为１／３倍。结论可能由于ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及ｐ５３基因异常表达所致的细胞增殖与凋亡异常参与了ＣＯＰＤ时的肺血管结构改建的调节,亦即参与了ＣＯＰＤ继发的肺动脉高压过程     

转染bcl—1基因抑制足叶乙甙诱导的K562细胞凋亡

观察ｂｃｌ－２对Ｋ５６２细胞凋亡的影响。方法：用真核表达质粒ｐ２９０－ｂｃｌ－２转染Ｋ５６２细胞，用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ和蛋白表达；用ＭＴＴ实验检测Ｋ５６２细胞对化疗药物足叶乙甙的敏感性变化；用ＤＮＡ“ｌａｄｄｅｒ”检测ｂｃｌ－２对凋亡的影响。     

bcl—2及p53癌基因在子宫内膜癌中的表达及意义

目的 探讨 子宫内膜癌及其癌前病变ｂｃｌ－２及ｐ５３基因的表达及与凋亡的关系。方法 利用微波免疫组化ＡＢＣ方法检测肿瘤组织内ｂｃｌ－２蛋白及ｐ５３蛋白的分布情况。结果 正常和单纯性增生子宫内膜ｂｃｌ－２蛋白和ｐ５３蛋白均为阴性反应。     

维医成熟、清除剂诱导人Hela细胞凋亡时p53与bcl-2基因的表达

近年来,发现细胞凋亡对造血、免疫和肿瘤发生机制具有重要的作用,肿瘤抑制基因是当前肿瘤遗传学及分子生物学的研究热点。而其中ｐ５３基因与肿瘤关系最为密切,６０％以上的人类肿瘤细胞中存在ｐ５３基因的突变失活。野生型ｐ５３能抑制肿瘤发生,是抗癌基因．而突变型则反而促进肿瘤发生,成为癌基因。Ｐ５３与ｂｃｌ－２基因都是细胞凋亡的关键基因。ｐ５３基因可促进细胞凋亡,ｂｃｌ－２基因则可抑制凋亡。 ｂｃｌ－２基因下凋是细胞凋亡的重要环节,因而探讨其下调机制极为重要。ＦＡＳ和ｂｃｌ－２蛋白是确认的２个与淋巴Ｔ细胞凋…     

8—Br—cAMP对肺癌NSCLC—3细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：观察８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人肺癌ＮＳＣＬＣ－３细胞凋亡相关基因表达的影响。方法：将体外培育的ＮＳＣＬＣ－３细胞分为实验组和对照组,采用原位杂交方法观察８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对ＮＳＣＬＧ－３细胞ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达的影响。结果：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后的实验且较未加８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ的对照组－ｃ－ｍｙｃ,ｂｃｌ－２基因表达降低（Ｐ〈０．０１）。结论：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可下调与ＮＳＣＬＣ－３     

p53、c-myc基因蛋白产物及增殖细胞核抗原在肝细胞癌中的同步检测

目的为弄清Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ基因和细胞增殖活性与肝细胞癌（ＨＣＣ）发生发展的关系。方法应用免疫组化方法检测了３０例肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ基因蛋白产物以及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果Ｐ５３,ｃ－ｍｙｃ基因表达率分别为４６．７％和５６７％。ｐ５３在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级肝癌组织的表达率有递增趋势;而ｃ－ｎｌｙＣ基因在三级间的表达率却无明显区别。ｐ５３与ｃ－ｍｙｃ基因的同时表达率为２３３％。ＰＣＮＡ阳性细胞的分布在ＨＣＣ中呈四种类型：散在型、边缘型、镶嵌型和弥漫型。ＰＣＮＡ标记指数与ＨＣＣ的分级相关。ｐ５３阳性的ＨＣＣ中ＰＣＮＡＬＩ为５３．８±２４．３,阴性的为３３．１±１５．７（Ｐ＜０．０５）;ｃ－ｍｐｃ基因表达阳性与阴性的ＰＣＮＡＬＩ分别为３８、７±２２．９、４２．８±２１．６（Ｐ＞０．０５）。结论ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ基因均与ＨＣＣ的发生、发展有关,但两者之间无依存关系;伴有ｐ５３基因突变的ＨＣＣ中癌细胞增生活跃,恶性程度高。     

子宫内膜良恶性病变bcl－2，p53蛋白表达的免疫组化研究

用ＡＢＣ免疫组化方法观察８５例子宫内膜良恶性病变ｂｃｌ－２和ｐ５３蛋白的表达．结果：各型子官内膜增生ｂｃ１－２高表达，ｐ５３阴性表达。子宫内膜典型腺癌Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级ｂｃ１－２阳性分别为１６／２０例，５／８例和２／７例，显示ｂｃ１－２表达随典型腺癌分化程度降低而降低（Ｐ＜０．０５），ｐ５３阳性分别为３／２０Ｒ例，３／８例和４／７例，显示ｐ５３蛋白表达随典型腺癌分化程度降低而升高（Ｐ＜０．０５）子宫内膜癌ｂｃｌ－２和ｐ５３蛋白表达呈负相关。结果还提示，ｂｃ１－２和ｐ５３可能对宫内膜癌具有重要作用。     

顺铂对肝癌细胞凋亡中wtp53,C—myc基因表达的影响

目的 研究顺铂对抑癌基因ｗｔｐ５３及癌基因Ｃ－ｍｙｃ在肝癌细胞凋亡过程中表达的影响。方法 用抑癌药顺铂诱导凋亡,通过细胞形态学检查,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳证明调亡发生,采用原位杂交技术检测ｗｔｐ５３,Ｃ－ｍｙｃ基因在人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１凋亡过程中的表达。结果 ｗｔｐ５３基因在顺铂作用后１ｈ开始表达,６ｈ达到高峰,１２ｈ则明显下降。Ｃ－ｍｙｃ基因在顺铂作用后表达逐渐增强,１２ｈ达到高峰。结论     

N—ras和C—myc反义寡核苷酸与p53和p16基因联合抑制人肝 …

目的：研究反义癌基因与抑癌基因联合抑制肝癌细胞生长的效果。方法：利用基因重组方法构建携带ｐ１６基因、ｐ５３基因的融合表达载体（ｐｃＤＮＡ１６￣５３）,利用基因合成仪体外合成Ｎ－ｒａｓ、Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸、并将Ｎ－ｒａｓ,Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸与ｐｃＤＮＡ１６￣５３融合表达载体转染到人肝癌细胞系ＳＭＭＣ７７２１细胞中,观察肝癌细胞生长情况及软琼脂集落形成能力。结果：联合治疗组肝癌细胞增殖速度最慢     

乳腺癌

目的探讨肿瘤多药抗性（ｍｄｒ１）的基因调控及其特异的凋亡机制。方法在建立的ｍｄｒ１肿瘤裸鼠的瘤组织中,采用ＡＢＣ免疫组化法,检测Ｐ－１７０、ｃ－ｍｙｃ、野生型ｐ５３、ｐ１６、Ｆａｓ和Ｂｃ１－２等蛋白的表达。结果发现ｍｄｒ１肿瘤细胞的ｃ－ｍｙｃ表达增强;经抗ｍｄｒ１－ｒｉｂｏｚｙｍｅ部分逆转ＭＤＲ表型后,ｍｄｒ１肿瘤细胞的ｐ５３表达有所升高。结论ｃ－ｍｙｃ、ｐ５３可能参与了对ｍｄｒ１基因表达的调控,其中ｃ－ｍｙｃ可能起着激活ｍｄｒ１基因转录的作用。实验还发现ｍｄｒ１肿瘤细胞的Ｆａｓ蛋白缺失、Ｂｃ１－２表达升高,提示ｍｄｒ１肿瘤可能拥有自己特异的凋亡调节机制。     

VP—16诱导PC—3细胞凋亡和bcl—2及kc—myc基因表达的研究

目的 研究ＶＰ－１６诱导ＰＣ－３细胞凋亡和癌基因ｂｌｃ－２及Ｃ－ｍｙｃ表达的关系。方法 用末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和流式细胞术（ＦＣＭ）研究ＰＣ－３细胞凋亡,以免疫组化方法研究ｂｃｌ－２及Ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。结果 ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ检测表明,ＰＣ－３细胞的凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用时间延长而升高;免疫组化结果显示：ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ基因表达的阳性百分率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用     

转促凋亡基因胃癌细胞的光动力学治疗实验研究

目的;评价转促凋亡基因胃癌细胞的光动力学治疗效果。方法：分析用携带野生型ｐ５３ｃＤｎＡ和我ｂｃｌ－１序列的逆转录志导胃腺癌细胞系ＭＧＣ８０３,稳定表达后加光敏剂并红光照射,检测细胞存活及凋亡。结果：在序列的逆转录病毒转导胃腺癌细胞系ＭＧＣ８０３,稳定表达后加光敏剂并红光照,检测细胞存活及凋亡。结果：在光敏剂及红光作用以生型Ｐ５３反义ｂｃｌ－２都能使转导细胞的存活率降低,凋亡增加。结论：野生型Ｐ５３     

p53基因失活与大肠腺癌病理改变的关系

目的探讨ｐ５３基因失活与大肠腺癌Ｄｕｋｅｓ分期、转移等病理改变的关系。方法Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ和ＲＦＬＰ分析大肠腺癌组织中１７ｐＬＯＨ的改变：ＲＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测大肠腺癌ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变;两种单抗（ＰＡｂ２４０．ＰＡｂ１８０１）ＬＳＡＢ免疫组化方法检测大肠腺癌ｐ５３蛋白表达,ＳＰＳＳ下Ｆｉｓｈｅｒ'ｓｅｘａｃｔｔｅｓｔ处理结果。结果１０９例大肠腺癌中,１７ｐＬＯＨ与Ｄｕｋｅｓ＇Ｄ期和远处转移有关（Ｐ＜０．０１）;１８７例大肠腺癌中,ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变与Ｄｕｋｅｓ'Ｃ期和淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０１）;１００例大肠腺癌中,ＰＡｂ２４０和ＰＡｂ１８０１单抗阳性率分别为７６％和６２％,两种单抗相加总阳性率为８２％。ｐ５３蛋白高表达与Ｄｕｋｅｓ＇分期及癌转移间的关系无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论ｐ５３基因失活参与大肠腺癌的病理发展各阶段和转移行为;高频率的ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变和高频率１７ｐＬＯＨ的出现,分别提示Ｄｕｋｅｓ'Ｃ期和Ｄｕｋｅｓ'Ｄ期的病理阶段形成,这两种ｐ５３基因的改变分别提示淋巴结转移和远处转移的分子生物学标记。免疫组化方法可检测突变型ｐ５３基因产物高表达,对大肠肿瘤良恶性细胞鉴别     

p^53cDNA突变和突变型p^53蛋白表达与大肠癌预后的关系

目的 探讨ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变和突变型ｐ＾５３基因蛋白表达与大肠腺癌预后的关系。方法 ＲＴ－ＳＳＣＰ检测大肠腺癌组织ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变，ＰＡｂ２４０单抗免疫组化检测腺癌组织突变型ｐ＾５３基因蛋白表达，比较两者与大肠腺癌预后的关系。结果 １００例大肠腺癌中，ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变５１例（５１％），突变型ｐ５３基因蛋白高表达７６例（７６％），两者同步阳性４９例：ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变与突     

细胞凋亡水平及ER,p53,Bcl—2基因产物表达与乳腺癌生物学行 …

目的：探讨细胞凋亡、ＥＲ、ｐ５３及Ｂｃｌ－２基因产物表达在人类乳腺癌中的生物学意义。方法：对８６例乳腺癌和２４例乳腺良性病变行细胞凋亡检测（ＴＵＮＥＬ法）和ｐ５３、Ｂｃｌ－２、ＥＲ的免疫组化染色（Ｓ－Ｐ法）。结果：细胞凋亡水平与Ｂｃｌ－２、ＥＲ的表达和淋巴结转移;ｐ５３表达与组织学分级和ＥＲ的表达;Ｂｃｌ－２表达与组织学分级和患者的生存期差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。细胞凋亡和ｐ５３、Ｂｃｌ－２基