多重PCR在幽门螺杆菌检测及分型中的应用

应用多重ＰＣＲ同时扩增１６ＳｒＲＮＡ和ｃａｇＡ基因来检测幽门螺杆菌感染及其分型。ＰＣＲ产物经ＤＮＡ序列测定证实为转异性扩增，敏感度为１０＾２ＣＦＵ／ｍｌ。４８株Ｈｐ菌株中，Ｉ型菌株（ｃａｇＡ＋）２６株（５４．２％）；５５０份胃粘液标本，Ｈｐ阳性（１６ＳｒＲＮＡ基因＋）２１６份（４７．５％），其中Ｉ型Ｈｐ１３９份（５３．３％）。     

原位PCR检测幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因Ａ (ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉｃｙｔｏｔｏｘｉｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄｇｅｎｅＡ ,Ｈｐ ｃａｇＡ)与胃部疾病关系的研究已成为当前热点。本文采用原位聚合酶链反应、常规ＰＣＲ及原位杂交等检测方法对胃病患者中胃粘膜Ｈｐ ｃａｇＡ进     

消化性溃疡患者血清HpCagA抗体的检测

幽门螺杆菌 (Ｈｅｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ ,Ｈｐ)是慢性胃炎、消化性溃疡的重要致病因素已被人们所公认 ,但临床上只有少数Ｈｐ感染者发展为消化性溃疡。近年来人们的研究主要集中于Ｈｐ的ＣａｇＡ、ＶａｎＡ这两个致病基因上。研究发现ＣａｇＡ阳性Ｈｐ菌株感染能增加发生消化性溃疡、萎缩性胃炎及胃癌的危险性 ,而且可能与溃疡病的治疗效果和预后相关连〔1、2〕,ＣａｇＡ被认为是Ｈｐ的毒力标志。ＣａｇＡ为一强免疫性物质 ,在Ｈｐ感染者体内可产生特异性ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ等抗体 ,其血清中抗体水平较准确地反映了患者带Ｃａｇ…     

竞争性定量聚合酶链反应检测幽门螺杆菌cagA基因

目的 建立竞争性聚合酶链反应（ＰＣＲ）定量检测幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白基因Ａ（ｃａｇＡ）的方法。方法 以重组ＰＣＲ将乳糖操纵子中乳糖调节蛋白（ＬａｃＩ）的特异性结合序列（２１ｂｐ）插入ｃａｇＡ基因的一段序列（４００ｂｐ）中得到重组ｃａｇＡ基因片段（ｒｆｃａｇＡ）。体外克隆并表达谷胱甘肽转硫酶－ＬａｃＩ（ＧＳＴ－ＬａｃＩ）的融合蛋白,其一端具有ＣＳＴ活性,另一端可特异性地与ｒｆｃａｇＡ结合     

产细胞毒素幽门螺杆菌感染与胃黏膜肠上皮化生的关系：附180例检测结果

目的：探讨产细胞毒素幽门杆菌（Ｈｐ）感染与慢性萎缩性胃炎肠化生之间的关系。方法：测定１８０例伴幽门螺杆菌感染的慢性萎缩性胃炎患者的抗Ｈｐ细胞毒素相关蛋白Ａ免疫球蛋白Ｇ（ＣａｇＡＨｐ－ＩｇＧ）,并将结果与胃黏膜肠化生程度进行比较。结果：单纯萎缩性胃炎４０例中,ＣａｇＡＨｐ－ＩｇＧ阳性１２例,占３０％,萎缩伴轻度肠化生９０例中阳性６１例占６８％;萎缩伴中度肠化生３８例中阳性２８例占７４％;萎缩伴重度肠     

幽门螺杆菌检测方法的评价

幽门螺杆菌(Ｈｐ)感染与胃十二指肠病密切相关。我们对目前临床实验室常用的血清学试验、体外尿素酶试验、Ｈｐ镜检和聚合酶链反应(ＰＣＲ)检测Ｈｐ-ＤＮＡ进行了评价。一、材料和方法1对象:186例消化系症状就诊的患者。年龄15～66岁,平均年龄456岁。经胃镜和病理学检查确诊为慢性浅表性胃炎(ＣＳＧ)68例、慢性萎缩性胃炎(ＣＡＧ)40例、十二指肠溃疡(ＤＵ)29例、胃溃疡(ＧＵ)31例、复合性溃疡(ＭＵ)5例及胃癌(ＧＣ)13例。当天抽静脉血3ｍｌ,分出血清,-20℃保存。2快速尿素酶试验(ＲＵＴ):1ｍｉｎ尿素酶试剂(深圳)。3细菌形态学检查:粘膜切片…     

幽门螺旋杆菌感染的胃外表现

目的研究幽门螺旋杆菌感染的胃外表现。方法７４例患者均行胃镜检查和Ｈｐ诊断实验,Ｈｐ感染由胃粘膜组织病理（Ｇｉｅｍｓａ染色）和组织ＰＣＲ共同确定,ＣａｇＡ表达由ＰＣＲ法测定。观察数据包括全血细胞计数、肝功能、肾功能等生化指标检测。结果７４例病人中,５２例（７０．３％）确定有Ｈｐ感染,其中３１例（４１．８％）表现为ＣａｇＡ阳性。相对于Ｈｐ阴性组,Ｈｐ阳性组患者外周血中白细胞总数和中性粒细胞计数明显升高,有显著性差异（６．４９±０．３ＶＳ５．０８±０．３,Ｐ＜０．０１;３．９２±０．２ＶＳ２．８７±０．１,Ｐ＜０．０１）。ＣａｇＡ阳性组血清ＡＳＴ水平明显高于ＣａｇＡ阴性组,差别有显著性（２８．２６±１．４ＶＳ１９．７５±０．９,Ｐ＜０．０１）。结论本研究证实Ｈｐ感染与外周血白细胞总数和中性粒细胞数的异常有关,ＣａｇＡ阳性则与血清ＡＳＴ水平的升高有关。     

不同幽门螺杆菌培养滤波对胃上皮细胞端粒酶活性的影响

虽然有动物实验[1] 显示幽门螺杆菌 (Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ或Ｈｐ)感染可诱导蒙古沙土鼠腺胃癌的发生 ,但是人类感染Ｈｐ后的临床转归多种多样 ,不同的临床转归除宿主、环境因素外 ,Ｈｐ菌株的不同是不可忽略的因素。近年来发现端粒酶的激活在恶性肿瘤中是普遍存在的。为此本研究分析不同Ｈｐ的毒性产物对胃上皮细胞端粒酶活性的影响 ,以阐明Ｈｐ与胃癌的发病机制。一、材料与方法1 Ｈｐ菌株的鉴定[2 ,3 ] :对我科冻存的分离自我院临床胃癌患者的和慢性浅表性胃炎患者的Ｈｐ进行ｃａｇＡ、ｖａｃＡ亚型鉴定。采用特异引物扩增ＨｐｃａｇＡ基因及…     

一种无创HpSA法诊断Hp感染

幽门螺杆菌 (ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒＰｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)是引起成人和小儿的慢性胃炎、十二指肠溃疡、消化不良等疾病的常见病原菌。Ｈｐ的检测方法很多 ,如内窥镜活检组织的培养、染色、快速尿素酶试验、ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ等 ,但均有创伤性。作者为了寻求一种无创检测技术而建立了幽门螺杆菌粪便抗原 (Ｈ .ｐｙｌｏｒｉＳｔｏｏｌＡｎｔｉ ｇｅｎＥＩＡ :ＥＩＡＨｐＳＡ法 )并与另一种无创诊断技术13Ｃ 尿素呼吸实验 (Ｃａｒｂｏｎ 13 ＵｒｅａＢｒｅａｔｈＴｅｓｔ:13Ｃ ＵＢＴ)进行了对比分析。方法　病人由欧洲 11个内窥镜研究中心提…     

酶免疫法检测粪便幽门螺杆菌抗原

目的 探讨酶免疫测定法检测幽门螺杆菌粪便抗原（ＨｐＳＡ）在诊断幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染中的价值。方法 用酶免疫测定法检测６３例患者粪便标本ＨｐＳＡ,其中６１例同时进行＾１３Ｃ－尿素呼气试验（＾１３Ｃ－ＵＢＴ）,且３１例患者也采用组织学方法进行检查。以＾１３Ｃ－ＵＢＴ作为金标准,对酶免疫测定法和组织学方法进行初步评价。结果酶免疫测定法的敏感性为９４．７％,特异性为９５．７％,准确性为９４．１％,阳性预     

幽门螺杆菌cagA基因株与消化道疾病

幽门螺杆菌不同的毒力决定其致病能力，感染了幽门螺杆菌的人群在部分无症状，只有少部分人表现不同程度的症状，可能是感染不同毒力的菌株所致，拥有ｃａｇＡ基因的均为高毒株（ｃａｇＡ＋株）与消化道疾病，尤其胃癌密切相关，对ｃａｇＡ＋株深入研究，有助于加深对幽门螺杆菌致病机理的认识。     

PCR法扩增脲酶B基因在快速诊断幽门螺杆菌感染中的应用研究

应用基于幽门累杆菌脲酶Ｂ基因的引物建立了检测幽门螺杆菌的ＰＣＲ方法。５６例内窥镜胃组织标本中,细菌培养阳性３４份,ＰＣＲ阳性３６份;１７２份用自制采样器所取的胃粘液标本中,ＰＣＲ阳性１０６份,其中经组织培养ＨＰ阳性的３４例患者的胃粘标本ＰＣＲ阳性。研究结果提示,ＰＣＲ方法扩增酶基因检测幽螺杆菌具有快速、简便、准确的优点,在幽门螺杆菌感染的快速诊断、疗效观察、复发机理和流行病学调查研究中均有重要价值     

酶免疫法与三种血清学试剂在检测儿童幽门螺杆菌抗体中的应用比较

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)的感染可发生于儿童期。本研究通过ＲＯＣ曲线分析确立ＥＩＡ法检测儿童Ｈｐ感染的血清特异性ＩｇＧ抗体临床决定水平 ,并与三种商品化试剂盒进行比较。材料与方法　 (1)实验对象 :从 6 6名Ｈｐ感染儿童静脉采集血清 99份进行ＥＩＡ试验 ;从门诊儿童采集血清 16 9份进行ＥＩＡ法与商品试剂盒比较试验。 (2 )商品试剂盒 :以Ｈｐ酸提取物为抗原的Ｐｙｌｏｒｉｓｅｔ(芬兰 ) ;以高分子量膜相关蛋白混合物作抗原的ＨＭ ＣＡＰ(美国 ) ;以Ｈｐ酸提物为抗原的Ｈｅｌｉｃｏ Ｇ(英国 )。 (3)…     

幽门螺杆菌毒力岛及其病原性研究进展

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)于 1982年首次在人胃活检组织中分离 ,是一种革兰阴性微需氧菌 ,与胃炎、消化性溃疡和胃癌的发病密切相关[1] 。毒力岛或称致病岛 (ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｉｓｌａｎｄ ,ＰＡＩ)是近年来在细菌学领域中出现的一个新名词 ,与细菌的致病性密切相关[2 ] 。幽门螺杆菌毒力岛(Ｈｐ ＰＡＩ)是由Ⅳ型分泌系统编码基因水平转移获得的 ,是细菌毒性的主要决定因素[1] 。本文对Ｈｐ ＰＡＩ及其致病性研究进展 ,综述如下。1　幽门螺杆菌毒力岛及其主要功能幽门螺杆菌 (Ｈｐ)含有多种毒力岛 …     

幽门螺杆菌细胞毒抗体酶免疫检测在消化道疾病诊断中的应用

目的：评估幽门螺杆菌细胞毒抗体（ＣａｇＡＨＰ－ＩｇＧ）检测在消化道疾病诊断中的应用价值。方法：对胃镜检查、组织学、尿素酶试验主宰的１５７例各种消化道疾病患者的血清,用酶免疫检测试剂盒进行ＣａｇＡＨＰ－ＩｇＧ抗休的检测。结果：在４５例浮华道溃疡病人血清中ＣａｇＡＨＰ－ＩｇＧ抗体阳性３７例,阳性率８２．２％,９９例消化道炎症病人血清中ＣａｇＡＨＰ－ＩｇＧ抗体阳性３４例,阳性率３４。３％,１３例胃癌症人     

PCR和ELISA对单纯疱疹病毒Ⅰ型脑炎的诊断价值

应用ＰＣＲ和ＡＢＣ－ＥＣＩＳＡ法同步检测１０４例临床拟诊病毒性脑炎患者配对脑脊液和血清１３６份。其中２１例患者的３４份配对标本特异性ＩｇＧ阳性及３１例患者的４１份脑脊液中ＨＳＶ－Ⅰ型ＤＮＡ阳性，判为单纯疱疹病毒性脑炎。ＰＣＲ在病早期阳性率较高，病中晚期ＩｇＧ阳性较集中，二法可在临床诊断中互补．     

PCR法和14C呼气试验检测幽门螺杆菌的比较

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和１４Ｃ呼气试验（１４Ｃ－ＵＢＴ）对６６例上消化道疾病患者进行幽门螺杆菌（Ｈｐ）检测，结果ＰＣＲ检出率为６９．７％，１４Ｃ－ＵＢＴ检出率为７１．２％，ＰＣＲ、１４Ｃ－ＵＢＴ两种方法诊断Ｈｐ感染的敏感性均为１００％，特异性分别为９５．２％和９０．５％，精确性分别为９８．５％和９７．０％；慢性萎缩性胃炎和慢性浅表性胃炎Ｈｐ检出率分别为７７．８％和６５．０％，两者无显著性差异；Ｈｐ感染无性别差异。研究结果表明，１４Ｃ－ＵＢＴ和采用自制的采样器获取胃粘膜组织进行ＰＣＲ检测Ｈｐ均具有非创伤性、简便、高敏感性和特异性的优点，后者还可进行Ｈｐ细胞毒株和非细胞毒株的区分，克服了１４Ｃ－ＵＢＴ具有一定的放射性和使用有毒试剂的缺点     

聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。     

粪便幽门螺杆菌抗原测定的临床价值评价

根治幽门螺杆菌 (Ｈｐ)感染已成为治疗慢性活动性胃炎、消化性溃疡的重要组成部分。近来发现Ｈｐ感染患者粪便存在Ｈｐ特异性抗原 ,测定粪便Ｈｐ抗原可能是诊断Ｈｐ感染的理想方法之一。本研究通过自行建立的酶免疫法对Ｈｐ感染患者进行粪便Ｈｐ抗原测定 ,报道如下。一、材料和方法1 标本来源与收集 :Ｈｐ感染阳性患者新鲜粪便 64份(快速尿素酶试验、甲基美蓝染色和1 3Ｃ尿素呼气试验均阳性 ) ,其中男 40例 ,女 2 4例 ,年龄 2 3～ 56岁 ,平均 43 6岁 ,在上述病例中 53例经质子泵抑制剂 (洛赛克 ) +两联抗生素(氨苄西林 /克拉霉素 +替硝唑 )…     

多重聚合酶链反应检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的应用一种敏感快速的多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）,检测耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）和凝固酶阴性葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）。方法临床分离的北京地区金黄色葡萄球菌１２３株,ＭＲＣＮＳ１２２株,用溶壁素和蛋白酶Ｋ制备模板ＤＮＡ,设计葡萄球菌甲氧西林耐药的决定基因,金黄色葡萄球菌独有的一个辅助基因和细菌中均有的１６ＳｒＲＮＡ基因引物,通过多重ＰＣＲ技术对标本进行扩增。结果１２３株金黄色葡萄球菌的ｆｅｍＡ基因１００％（１２３／１２３）阳性,ｍｅｃＡ基因阳性的占１８．７％（２３／１２３）,１２２株ＭＲＣＮＳ的ｆｅｍＡ１００％（１２２／１２２）阴性,ｍｅｃＡ阳性的占２４．６％（３０／１２２）。１６ＳｒＲＮＡ基因片断在多重ＰＣＲ中作为内部参照避免了假阴性结果的出现。结论建立的多重ＰＣＲ技术检测ＭＲＳＡ和ＭＲＣＮＳ具有敏感、快速、特异的特点,是一种可靠的实验诊断手段。