Lumican蛋白多糖在正常SD大鼠牙胚发育中时间和空间的表达

目的:观察SD大鼠牙胚发育过程中Lumican蛋白多糖在时间和空间上的表达。方法:分别取妊娠17.5、19.5 d的胎鼠和出生后1.5、3.5、5.5 d新生鼠的下颌第一磨牙牙胚,采用免疫组化染色的方法观察Lumican蛋白多糖在大鼠牙胚中的定位和表达。结果:正常大鼠牙胚发育过程中,帽状期牙胚中(E17)牙囊、牙板、内、外釉上皮的细胞中Lumican均有较强表达;钟状早期牙胚各细胞中Lumican的表达呈阳性;分泌期成釉细胞、成牙本质细胞中Lumican表达呈阳性,随着发育的进行,成釉细胞和成牙本质细胞中的表达逐渐减弱(P<0.05)。结论:正常大鼠牙胚发育过程中Lumican的表达呈一定的时间和空间分布,随着发育的不同阶段而有所改变。     

ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空表达

目的:研究ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空分布。方法:采用免疫组织化学方法和图像分析技术观察ADAM28在小鼠牙胚发育各期的表达分布及差异。结果:ADAM28在牙胚发育各时期均有不同程度的表达。帽状期开始即在口腔上皮及成釉器星网层细胞、基底膜、牙乳头细胞和牙囊细胞表达强阳性,到钟状晚期,成釉细胞、釉基质、上皮根鞘和牙乳头细胞阳性表达;至冠根硬组织发育期,成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘、成牙骨质细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞阳性表达。结论:ADAM28作为上皮和间充质间重要的信号分子,参与了从蕾状期到钟状晚期、从基质分泌到硬组织形成的牙冠、牙根形态发生过程,它可能在牙源性间充质细胞的早期形成、增殖与分化启动中发挥重要作用。     

核心结合因子a1在小鼠牙齿发育过程中的表达

目的：观察Cbfal蛋白在小鼠牙胚发育过程中的表达情况。方法：用自制的Cbfal多克隆抗体，采用免疫组化染色观察其时空表达特性。结果：Cbfal蛋白在帽状期牙胚中表达较广泛，在钟状早、中期牙胚表达于内釉细胞、成釉细胞以及紧靠成牙本质细胞层的牙乳头细胞，而在钟状晚期，Cbfal在牙乳头表达为阴性，成牙本质细胞层弱阳性，成釉细胞为阳性或强阳性。结论：Cbfal可能在小鼠牙胚发育，尤其是在成牙本质细胞和成釉细胞分化过程中具有重要作用。     

过量氟对大鼠切牙发育过程中Smad3表达的影响

目的：研究过量氟对大鼠切牙发育过程中Smad3表达的影响，探讨氟斑牙的发病机制。方法：选择20只Wistar大鼠，随机分成2组：Ⅰ组（蒸馏水组）和Ⅱ组（0．1g／L F^-）。饲养8周处死动物，利用免疫组化染色的方法观察过量氟对大鼠成釉细胞及成牙本质细胞中Smad3表达的影响。结果：免疫组化结果经图像分析显示实验组大鼠切牙成釉细胞及成牙本质细胞中Smad3的表达均低于对照组（P〈0．01），存在显著性差异。结论：过量氟可能通过抑制Smad3的表达来干扰上皮和间充质之间正常的信号转导，进而使釉质的分化发育受到影响。这有可能是氟牙症发生的细胞内机制之一。     

大鼠牙齿发育过程中骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达

目的：探讨骨涎蛋白（bone sialoprotein BSP)和骨折蛋白（osteopontin,OPN)在大鼠牙齿发育中的时间和空间分布特点，及两者在矿化中的作用。方法：用免疫组化方法检测了SD大鼠出生后1d及1，2，3 ，5，8周的牙胚和颌骨中BSP及OPN的表达特点。结果：成熟的成釉细胞，成牙本质细胞，成牙骨质细胞和成骨细胞及基质中均表达BSP和OPN，牙骨质和牙槽骨中SBP和OPN的表达高于牙釉质的牙本质，在牙骨质和牙槽骨中，BSP在未矿化的基质和已矿化的基质中均有高表达，而OPN仅在矿化的前沿和新生线处有高表达。结论：BSP和OPN在大鼠牙齿及颌骨的形成和矿化中具有重要作用。尤其是OPN与牙釉质的形成也有重要关系。BSP和OPN的表达特点不同，提示二者在矿化组织的形成和矿化中的作用不同。     

过量氟对大鼠下切牙发育过程中釉蛋白表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠下切牙发育过程中釉蛋白表达的影响。方法 选择20只Wistar大鼠,随机分成实验组和对照组。饲养8周后处死,利用HE染色和免疫组织化学染色的方法观察过量氟对大鼠成釉细胞形态及釉蛋白表达的影响。结果 实验组大鼠下切牙成釉细胞由原有的高柱状结构变矮,细胞排列成多层,釉基质形成混乱,成釉细胞和成牙本质细胞中釉蛋白表达明显低于对照组,其差异有统计学意义（P<0.01）。结论 过量氟可抑制釉蛋白表达,影响釉质发育。     

PHEX抗体对小鼠牙胚发育影响的实验研究

目的:研究PHEX抗体对小鼠牙胚发育的影响,探讨PHEX在牙齿发育过程的作用.方法:E17孕鼠尾静脉注射浓度分别为0.1mg/kg(A组)和0.5mg/kg(B组)的PHEX抗体.对照组N组注射0.1mol/LPBS.采用Mallory三色法染色观察钟状早期(E18)、钟状晚期(P1)、牙齿硬组织形成和矿化期(P3)牙胚的发育情况.免疫组织化学染色观察牙胚中PHEX蛋白的表达情况.结果:Mallory三色法染色结果显示;3组牙胚中釉质的发育无显著差异;成牙本质细胞的分化和牙本质的形成在A、N组中未见明显区别,而在B组中则明显延迟和抑制.E18、P1、P3 3组成釉细胞中的PHEX蛋白在牙胚中的表达均呈强阳性.P1、P3 A组和N组中成牙本质细胞中的PHEX表达也呈强阳性,但B组在P1期靠近基底膜的牙乳头细胞中表达呈弱阳性,在P3期也仅有少量的弱阳性表达.结论:0.5 mg/kg浓度的PHEX抗体可显著抑制成牙本质细胞的分化以及PHEX在其中的表达,进而抑制牙本质的生成;PHEX抗体对成釉细胞的发育和釉质的矿化无明显作用.     

Shh在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的 :通过检测Shh(SonicHedgehog)在大鼠牙胚发育不同时期的表达 ,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法 :采用免疫组化方法 ,观察大鼠牙齿发育各阶段标本中Shh的表达。结果 :大鼠牙齿发育早期 ,Shh表达于口腔上皮和牙上皮 ;帽状期表达于成釉器 ;钟状期 ,成釉细胞和成牙本质细胞表达阳性。结论 :Shh在牙齿发育过程中的表达有时空特异性 ,提示它参与牙釉质和牙本质的形成     

釉原蛋白在人牙胚发育不同时期表达的免疫组化研究

目的：探讨釉原蛋白在人牙胚发育不同时期的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学方法观察釉原蛋白在不同发育阶段人牙胚中的分布。结果：在前成釉细胞、基底膜及前成牙本质细胞相邻部位都呈阳性反应。牙乳头细胞及牙本质呈阴性反应。釉原蛋白分布于釉质全层，在釉质浅层及与成釉细胞界面处呈线状强阳性染色，在后期矿化成熟时，成釉细胞及釉质染色阴性。结论：釉原蛋白与成釉细胞、成牙本质细胞的分化及釉质的矿化有关。     

基质金属蛋白酶-8在人和大鼠牙胚发育钟状期的表达

目的　研究基质金属蛋白酶-8(MMP-8)在牙胚发育牙本质形成过程中的表达。方法　免疫组织化学方法检测MMP-8在人牙胚发育钟状期的表达;原位杂交方法检测MMP-8 mRNA在大鼠牙胚发育钟状期的表达。结果　 MMP-8在人牙胚钟状晚期硬组织形成期成牙本质细胞和牙本质基质阳性表达,近髓腔处,牙本质染色更深;MMP-8 mRNA在大鼠牙胚发育钟状早期个别分化的成牙本质细胞表达阳性,钟状晚期,即硬组织形成期,MMP-8mRNA在成牙本质细胞表达强阳性。结论　MMP-8可能参与了人和大鼠牙胚发育过程牙本质基质改建。     

过量氟对大鼠切牙成釉细胞Cbfα1表达的影响

目的:了解过量氟对大鼠切牙核心结合因子(Cbfα1)蛋白表达的影响,从蛋白水平探讨氟斑牙的发病机制.方法:20只Wistar大鼠,随机分为实验组(饮用100mg/L氟化水)和对照组(饮用蒸馏水),饲养8周后,处死大鼠,获取切牙标本,通过免疫组化染色进行观察,比较Cbfα1在2组大鼠切牙成釉细胞中的表达情况,采用Axioplan 2imaging显微图像分析系统和SPSS10.0软件包分别进行图像和数据统计分析.结果:免疫组化结果显示,Cbfα1在分泌期的成釉细胞胞核中明显表达,实验组阳性率(35.28±1.20)%显著高于对照组(14.41±4.07)%,差异有显著性(P＜0.01).结论:过量氟有可能引起Cbfα1蛋白在分泌期成釉细胞中的表达增多,从而在某种程度上影响釉质的矿化和发育,导致釉质发育障碍.     

不同硒水平对氟中毒大鼠牙胚发育的影响

目的:研究不同硒水平对氟中毒大鼠牙胚发育的影响。方法:雄性SD大鼠60只,随机分为6组。对照组饮蒸馏水饲普通饲料,实验组饮含氟(F-)45mg/L的蒸馏水,氟组饲普通饲料,氟硒1组饲含硒1.37mg/kg的饲料,氟硒2组饲含硒1.6mg/kg的饲料,氟硒3组饲含硒2.3mg/kg的饲料,氟硒四组饲含硒4mg/kg的饲料,饲养8周后断头处死大鼠,运用免疫组织化学检测技术检测smad3、shh在分泌期成釉细胞中的表达水平。结果:免疫组化结果为对照组大鼠成釉细胞中smad3、shh为阳性表达,氟组大鼠成釉细胞中smad3、shh表达比对照组明显减弱;氟硒组smad3、shh表达强于氟组,其中氟硒3组最好。结论:硒拮抗氟中毒作用的机制可能与调控牙胚发育作用的信号转导因子Smad3和Shh的表达有一定的关联,且2.3mg/kg硒效果最好。     

过量氟对大鼠切牙釉丛蛋白表达的影响

目的研究过量氟对大鼠切牙发育过程中釉丛蛋白表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法选择20只Wistar大鼠,随机分成两组:对照组(蒸馏水组)和实验组(100mg/LF-)。复制大鼠氟斑牙模型。饲养8周处死动物,利用免疫组化和实时荧光定量PCR(Real-TimePCR)方法观察过量氟对大鼠切牙中釉丛蛋白表达的影响。结果免疫组化结果显示釉丛蛋白在分泌前期和分泌期的成釉细胞中呈阳性表达。实验组釉丛蛋白的表达明显弱于对照组,存在显著性差异(P<0.01)。Real-TimePCR结果显示釉丛蛋白mRNA在对照组表达明显高于在实验组表达水平(P<0.01)。结论过量氟可能通过抑制釉丛蛋白的表达,从而影响釉质的矿化,导致釉质发育障碍。     

饮水型氟中毒动物模型建立及硬组织形态学改变的研究

目的建立慢性饮水型氟中毒动物模型并观察其硬组织形态学改变。方法 48只Wistar大鼠随机分成4组,建立氟中毒动物模型。染氟组分别饮用含氟化钠浓度为50、100、150 mg/L的自来水,对照组饮用常规自来水。8周后取大鼠切牙及股骨,通过组织HE染色方法观察各组大鼠切牙成釉细胞和大鼠骨组织形态学改变,采用氟离子选择电极测定各组大鼠血氟、牙氟及骨氟浓度。结果实验组大鼠切牙出现不同的氟牙症表现。各染氟组大鼠血氟(F=11.234,P<0.05),牙氟(F=275.148,P<0.05),骨氟(F=217.337,P<0.05)含量显著高于对照组,且随浓度增加而增加,各组间均具有显著差异。HE染色发现实验组大鼠切牙成釉细胞排列不规则呈多层,高柱状细胞结构变矮或消失,少量细胞发生扭曲,且随氟浓度增加以上病理学改变加重。大鼠股骨HE染色发现实验组骨组织出现骨小梁增多,排列致密等骨硬化性表现,骨骺板增厚,增殖层软骨细胞排列紊乱,随浓度的增加以上病理学改变加重。结论长时间饮用高浓度含氟水可引起慢性氟中毒,硬组织出现氟斑牙和氟骨症的病理学改变。     

不同质量浓度氟对大鼠切牙成釉细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的研究不同质量浓度氟对大鼠切牙生长过程中转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法40只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。3组分别为低剂量氟组（F-质量浓度60 mg·L-1,13只）、高剂量氟组（F-质量浓度120 mg·L-1,13只）和对照组（蒸馏水,14只）。10周后取材,采用苏木精-伊红（HE）染色和免疫组织化学染色的方法观察氟对大鼠切牙成釉细胞的形态及TGF-β1表达的影响。结果实验组大鼠切牙均出现典型的氟斑牙症状,牙面出现白垩色改变,釉质表面有横纹。HE染色结果显示成釉细胞形态发生改变,细胞排列紊乱,甚至成灶性堆积,可见空泡性变。免疫组织化学染色结果显示TGF-β1在分泌期和成熟期成釉细胞均为强阳性表达,在星网状层、中间层均为阳性表达,在新形成的釉基质中呈阳性表达。2个实验组TGF-β1的表达强度明显低于对照组（P<0.01）,2个实验组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论氟可能通过抑制TGF-β1的表达而干扰了成釉细胞的分化和基质分泌,造成釉质发育障碍。     

地氟病区人牙胚成釉细胞的结构改变

目的：观察地氟病区和非地氟病区人牙胚成釉细胞形态及结构的改变,探讨其在氟牙症形成过程中的作用。方法：观察地氟病区引产胎儿牙胚成釉细胞形态学和超微结构的改变,并与非地氟病区引产胎儿牙胚作对比。同时测定母体尿氟含量。结果：HE染色结果表明实验组胎儿成釉细胞排列极不规则,高度变矮,一些细胞发生扭曲,细胞内出现颗粒和空泡。透射电镜观察显示实验组成釉细胞细胞器减少,粗面内质网明显扩张,线粒体肿胀、变形,胞浆内有空泡产生,一些细胞呈现凋亡迹象。结论：过量氟影响成釉细胞超微结构,继而导致其功能异常,与氟牙症形成有相关性。     

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目的探讨氟斑牙的发病机制及褪黑素是否对氟斑牙的发生有拮抗作用。方法 2009年3—10月于中国医科大学公共卫生学院将40只Wistar大鼠随机分为6组,包括阴性对照组、低氟组、高氟组、低氟+褪黑素组、高氟+褪黑素组。建立氟斑牙动物模型,制作切片后行HE染色,光镜下观察各组大鼠切牙成釉细胞形态。结果单纯给氟组大鼠。出现牙面粗糙、棕白色相间横纹、白垩色改变,高氟组大鼠的氟斑牙改变较低氟组的改变典型;成釉细胞扭曲变形,正常的高柱状形态丧失,胞内出现空泡等。注射褪黑素组与单纯给氟组的切牙一般状态及成釉细胞形态、排列未见明显差异。结论氟对大鼠切牙的成釉细胞有毒性效应,饮水氟含量高所致氟斑牙症状加重。褪黑素对氟斑牙的发生是否有拮抗作用有待进一步研究。     

氟对大鼠氟斑牙形成和成釉细胞DNA损伤的研究

目的：研究在氟中毒引起氟斑牙时,氟对大鼠切牙成釉细胞DNA损伤的影响。方法：给雄性SD大鼠饮用含10、50、100mg/LNaF的高氟水120d,制备氟斑牙模型,用单细胞凝胶电泳检测DNA的损伤。结果：雄性SD大鼠饮用高氟水后,血清氟含量较对照组显著增高,P〈0.05。饮水氟含量与血清氟含量的相关系数为0.9153（P〈0.05）,具有较好的剂量-效应关系,大鼠切牙呈现典型的氟斑牙改变。在50mg/LNaF的剂量条件下,大鼠切牙成釉细胞彗星长与对照组比较,P〈0.05。在100mg/LNaF的剂量条件下,彗星长、Olive尾距、尾分布距与对照组比较,P〈0.05,而尾长值虽比对照组增加,但P〉0.05。低剂量染氟组（10mg/LNaF）大鼠切牙成釉细胞DNA损伤情况与对照组比较,没有显著性差异（P〉0.05）。结论：在氟中毒引起氟斑牙的过程中,大鼠切牙成釉细胞发生明显的DNA损伤。     

过量氟对大鼠切牙碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠切牙碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）表达的影响，从分子水平探讨氟牙症的发病机制。方法将20只Wistar大鼠按随机数字表法随机分为两组：对照组（饮用蒸馏水）和实验组（饮用100mg／L氟化水），复制氟牙症动物模型，8周末处死动物，获取切牙标本，免疫组化染色观察bFGF在大鼠切牙的表达定位及其在对照组与实验组切牙表达的变化。结果bFGF在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞中均呈阳性表达。实验组bFGF的表达明显弱于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论过量氟可抑制bFGF的表达，从而影响上皮与间充质之间的相互介导作用，导致釉质发育障碍。