非小细胞肺癌细胞分泌蛋白谱的鉴定

目的筛选非小细胞肺癌潜在的早期诊断标志物，对非小细胞肺癌细胞系A549的分泌蛋白进行鉴定。方法收集A549细胞培养上清中的蛋白进行蛋白双向电泳，应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）及生物信息学鉴定A549凝胶上特有的蛋白质点。结果鉴定出人属的蛋白质点17个，包括α肌动蛋白，γ肌动蛋白，α烯醇酶（ENO1），锰-超氧化物歧化酶（MnSOD），谷胱甘肽S转移酶P（GSTP1—1），Dihydrodiol dehydrogenase 2（DDH），磷酸甘油酸变位酶1（PGAM1），葡萄糖依赖性胰岛素释放肽受体（GIPR），肽基脯氨基顺反异构酶（PPIA），磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP），蛋白基因产物9．5（PGP9．5），Peroxiredoxin1（PDX1），Galectin-1及专利蛋白WO0222660等。结论该研究为非小细胞肺癌早期诊断标志物的筛选提供了新的方法和候选分子。     

肺癌细胞分泌蛋白特异性抗体检测

目的研究肺癌患者血清中是否存在肺癌细胞分泌蛋白的特异性抗体。方法收集34例非小细胞肺癌患者血清、12例小细胞肺癌肺癌患者血清及15例健康对照者血清。收集A549细胞及HBE细胞培养的培养液上清液，同时收集胎牛血清培养液做对照；进行蛋白SDS—PAGE分离及电转膜。用肺癌患者及健康对照者的血清作第一抗体进行蛋白印迹检测。只与A549培养液蛋白样品有反应条带，而与HBE及对照无反应即认为是蛋白印迹阳性。结果在分子量约为30kD的蛋白条带处，有61．8％（21／34）的非小细胞肺癌患者血清中存在分泌蛋白的抗体，小细胞肺癌患者（0／12）及健康对照者血清中未发现阳性条带（0／15）。结论非小细胞肺癌患者血清中存在分子量约为30kD的A549分泌蛋白特异性抗体。     

间隙连接蛋白43和E-钙黏素在肺癌组织中的表达及临床意义

  目的 探讨间隙连接蛋白（Cx43）和上皮细胞钙黏素（E-钙黏素）在非小细胞肺癌中的表达特征及其临床意义。方法 应用免疫组化ABC法检测50例原发性肺癌组织中Cx43和E-钙黏素的表达情况，分析其表达与肺癌临床病理的关系。结果 Cx43和E-钙黏素在非小细胞肺癌中的阳性表达率分别为54 %和46 %，20例癌旁组织中均可见E-钙黏素和Cx43阳性表达。随着肿瘤进展，Cx43和E-cadherin表达逐渐降低，在Ⅰ、Ⅱ期非小细胞肺癌中阳性表达率明显高于Ⅲ、Ⅳ期；中、高分化的肺癌阳性表达率明显高于低分化的肺癌；肺癌伴淋巴结转移者的E-钙黏素表达水平低于无淋巴结转移者；Cx43表达与肺癌有无淋巴结转移无明显相关性。Cx43在肺腺癌组织中的阳性表达率明显高于鳞癌和大细胞未分化癌（P＜0.05）。E-钙黏素的表达与非小细胞肺癌的组织类型无明显相关性。     

clusterin、Bax及p53在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究

背景与目的已有的研究表明簇集蛋白(clusterin)是近年新发现的凋亡相关因子,在多种肿瘤中上调表达,在肿瘤的发生发展中起重要作用。clusterin的抗凋亡作用与其他抗凋亡因子有相关性。本文旨在探讨clusterin、Bax和p53在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其与肺癌发生发展的关系。方法采用SP免疫组化方法和Western blot法,检测NSCLC组织中clusterin、Bax和p53的表达情况,并结合临床和病理资料进行分析。结果免疫组化显示clusterin在79.25%(42/53)的NSCLC组织中阳性表达。NSCLC组织中clusterin表达阳性率明显高于正常肺组织(χ2=23.68,P<0.05),与肿瘤的分化程度(rs=0.464,P<0.01)、临床分期(rs=0.320,P<0.01)及有无淋巴结转移(rs=0.255,P<0.05)呈正相关,但与年龄、性别及病理分型无关。clusterin与p53的表达呈正相关(rs=0.589,P<0.01),与Bax的表达呈负相关(rs=-0.346,P<0.01)。Western blot法显示clusterin在NSCLC组织中的表达水平明显高于正常肺组织(0.541±0.010比0.201±0.020,P<0.05)。结论clusterin可能通过抗凋亡机制在肺癌的生物学特性中发挥重要作用。     

非小细胞肺癌分泌蛋白的蛋白质组学研究

背景与目的:癌细胞分泌蛋白是潜在的血清标志物,而且对肿瘤的早期筛选也具有重要意义。因此,系统、全面地研究肿瘤细胞分泌蛋白对于肿瘤血清标志物的筛选具有重要意义。本研究旨在鉴定肺癌细胞分泌蛋白,为肺癌血清标志物筛选提供实验依据。方法:用含胎牛血清的RPMI-1640培养液培养非小细胞肺癌细胞系A549细胞,收集A549细胞培养液中的蛋白及胎牛血清培养液中的蛋白(对照)进行蛋白双向电泳,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)及生物信息学鉴定A549凝胶上特有的蛋白质点。筛选出人属的蛋白质点后,应用RT-PCR方法检测其在肺癌组织及配对远处肺组织中的表达差异;并检测培养液及血清中锰-超氧化物歧化酶(manganesesuperoxidedismutase,Mn-SOD)水平。结果:鉴定出人属的蛋白质点14个,包括肌动蛋白、!烯醇酶(alphaenolase,ENO1)、Mn-SOD、谷胱苷肽S转移酶P(glutathioneS-transferaseP,GSTP1-1)、二氢二醇脱氢酶(dihydrodioldehydrogenase,DDH)、磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglyceratemutase1,PGAM1)、葡萄糖依赖性胰岛素释放肽受体(glucose-dependentinsulinotropicproteinreceptor,GIPR)、肽基脯氨基顺反异构酶(peptidyl-prolylcis-transisomeraseA,PPIA)、磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolaminebindingprotein,PEBP)、蛋白基因产物9.5(ubiquitincarboxyl-terminalhydrolaseisozymeL1,PGP9.5)、peroxiredoxin1(PDX1)、galectin-1及专利蛋白WO0222660等。RT-PCR检测示ENO1、DDH、PEBP、PGP9.5、PDX1、PGAM1、PPIA在肺癌组织中高表达。酶活性检测发现A549培养液中存在Mn-SOD,且发现非小细胞肺癌患者血清中有高水平的Mn-SOD。结论:本研究首次对非小细胞肺癌细胞的分泌蛋白进行了鉴定;发现多种高表达的非小细胞肺癌分泌蛋白基因,其中首次发现ENO1及PEBP基因在非小细胞肺癌中高表达;Mn-SOD是非小细胞肺癌的分泌型血清标志物。该研究为非小细胞肺癌血清标志物的筛选提供了新的方法和候选分子。     

非小细胞肺癌组织中高表达的miR-1269 对肺癌细胞A549 生物学行为的影响

目的:探讨miR-1269 在非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer, NSCLC）组织中的表达和对人NSCLC A549 细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法：选取2017 年1 月至2018 年1 月在河北医科大学第四医院胸外科进行首次手术切除的34例新鲜NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织,应用qRT-PCR 检测NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织中miR-1269 的表达水平。将miR-1269 mimics 和mimics NC转染至A549 细胞后,应用MTS实验、细胞划痕实验和Transwell 实验检测A549 细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞周期的变化。生物信息学软件预测miR-1269 的靶基因,并通过Western blotting 和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269 对靶基因的调控作用。采用Western blotting 检测已转染的A549 细胞的细胞周期依赖性激酶抑制剂p21、细胞周期蛋白D2 以及上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白ZEB2 和E-cadherin 的表达情况。结果：NSCLC癌组织中miR-1269 的表达水平显著高于对应的癌旁组织（2.81±2.27 vs 1.61±1.36,P<0.05）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著高于空白对照组和mimics NC转染组（均P<0.01）。转染miR-1269-mimics 的A549 细胞S期细胞比例明显高于mimics NC转染组[ （46.54±1.57）% vs（23.32±3.15）%,P<0.01]。miR-1269 可与FOXO1 基因3’端非翻译区的结合位点相结合,且过表达miR-1269 后,A549 细胞中FOXO1 的表达水平及荧光素酶报告基因的活性均明显降低（均P<0.01）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞中p21、E-cadherin 蛋白表达水平降低（均P<0.05）,而CyclinD2、ZEB2 蛋白表达水平升高（均P<0.05）。结论：miR-1269 在NSCLC组织中表达上调,并且能够促进A549 细胞的增殖、迁移、侵袭能力和影响细胞周期进程;其作用机制可能与靶向调控抑癌基因FOXO1 的表达有关。     

肺腺癌药物耐受蛋白ABCG2表达细胞系的功能研究

目的:通过观察A549-ABCG2细胞系生物学特性变化,验证ABCG2蛋白过表达肺癌细胞对各种化疗药物的耐药性及其相关性,为谨慎选择化疗药物及制定临床试验方案提供依据.方法:MTT法检测ABCG2高表达细胞的药物敏感性,检测ABCG2 蛋白ATP激酶活性,分析其与耐药之间的相关性. 结果:A549-ABCG2细胞药物敏感性较A549细胞明显降低,而其ATP激酶活性明显升高.结论:可以通过研究ABCG2高表达细胞系A549-ABCG2来筛选化疗药物为临床治疗服务.     

肺腺癌药物耐受蛋白ABCG2表达细胞系的功能研究

目的：通过观察A549-ABCG2细胞系生物学特性变化,验证ABCG2蛋白过表达肺癌细胞对各种化疗药物的耐药性及其相关性,为谨慎选择化疗药物及制定临床试验方案提供依据。方法：MTT法检测ABCG2高表达细胞的药物敏感性,检测ABCG2蛋白ATP激酶活性,分秽淇与耐药之间的相关性。结果：A549-ABCG2细胞药物敏感性较A549细胞明显降低,而其ATP激酶活性明显升高。结论：可以通过研究ABCG2高表达细胞系A549-ABCG2来筛选化疗药物为临床治疗服务。     

连环素在非小细胞肺癌患者中的表达及相关研究

连环素（ｃａｔｅｎｉｎｓ,ｃａｔ）是近年发现的一种胞浆蛋白,包括α－、β－、γ－ｃａｔ三个亚型,它们以一定的比例和上皮细胞粘附分子（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ,Ｅ－ＣＤ）结合形成上皮细胞粘附分子复合物（Ｅ－ＣＤ／ｃａｔ）。它们通过维持Ｅ－ＣＤ正常功能,促进上皮组织形成和维持组织结构完整。目前ｃａｔｅｎｉｎｓ在肺癌中的表达情况尚不清楚,为探讨α－、β－ｃａｔ在肺癌进展中的作用,我们用免疫组化技术检测了非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中α－、β－ｃａｔ表达情况,旨在探讨其与非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者临床病理…     

外源性S100A9通过TLR4诱导非小细胞肺癌细胞侵袭的实验研究

目的:探讨外源性钙结合蛋白S100A9通过Toll样受体4（TLR4）诱导对非小细胞肺癌细胞H1650侵袭及迁移的影响。方法:收集非小细胞肺癌组织及癌旁组织,实验组:培养基添加1 μg/ml S100A9培养的H1650细胞,对照组:不添加任何血清蛋白培养的H1650细胞。RT-PCR和Western blot分别检测S100A9 mRNA和蛋白水平。RT-PCR检测转染后细胞中S100A9 mRNA的表达。采用划痕、黏附和平板克隆实验分别检测S100A9对H1650细胞生物学行为的影响,同时运用Western blot检测H1650细胞中TLR4蛋白,以观测其表达情况。结果:非小细胞肺癌组织中S100A9 mRNA和蛋白表达水平都高于癌旁组织,S100A9在非小细胞肺癌组织中过度表达(P<0.01)。S100A9小干扰RNA能够成功抑制非小细胞肺癌细胞中S100A9 mRNA水平(P<0.01)。与对照组相比,实验组加入S100A9蛋白后1 h,H1650细胞中TLR4的累积明显上调,S100A9起促进H1650细胞迁移(P<0.05或P<0.01)、基质黏附(P<0.01)和平板克隆(P<0.01)的作用。结论:TLR4在经过添加S100A9蛋白后NSCLC细胞株H1650细胞中的表达明显高于未添加S100A9蛋白的H1650细胞,有关实验中TLR4在肺癌中呈现为高表达,因此S100A9对肿瘤侵袭及迁移有着不可分割的联系,将成为肿瘤诊治的新靶点。     

蛞蝓对人肺鳞癌、肺腺癌细胞抑癌作用初探

 在对肺鳞癌、乳腺癌、原发性肝癌、直肠癌手术切除标本和肺腺癌胸膜侵犯胸水中的癌细胞进行双层琼脂克隆培养和药敏试验的同时, 进行3H－胸腺嘧啶掺入试验(3H-TdR), 结果显示蛞蝓对肺鳞癌、肺腺癌细胞有明显的抑制作用:对肺鳞癌细胞的3H－TdR摄入抑制率93.08%, 与顺铂(93.33%相当；对肺腺癌克隆集落抑制率65.24%, 3H-TdR摄入抑制率46.21%, 比顺铂的34.77%和15.23%显著增高, 这一结果, 为今后进一步研究蛞蝓的抗癌作用提供了体外抑瘤的实验依据。     

非小细胞肺癌放化综合治疗的前瞻性随机研究

目的 对比观察非小细胞肺癌单纯放疗和放化综合治疗的疗效。方法 从１９９５年１月 到１９９７年１２月,将符合入组条件的８２例非小细胞肺癌患者随机分为放疗组和化放疗综合治疗组。其中完成治疗计划的有７４例,３５例属单纯放疗组,３９例属化放疗综合治疗组。综合治疗组中２１例为增敏化疗（氟脲嘧啶、顺铂）,在放疗的第１、４周给药;１８例为联合方案化疗,在放疗前、中、后进行,最少两周期,药物为卡铂、顺铂、足叶乙甙     

Role of pemetrexed in non-small cell lung cancer

Pemetrexed was approved for the treatment of relapsed or chemotherapy refractory non-small cell lung cancer patients, as it produced similar response and survival outcomes and less toxicity as compared to taxotere. Pemetrexed in combination with platinum analogs or with gemcitabine or vinorelbine, produce equivalent responses and overall survival results compared to combinations of platinum analogs with other drugs. The role of bevacizumab and the inhibitors of epithelial growth factor receptor also should be evaluated in selected patients with NSCLC treated with pemetrexed combinations. Further increases in drug dose may be possible using transfer of drug resistance genes in hematopoietic stem cells.     

Stellettin B对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨Stellettin B 对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度（01、1、10、100μmol／L）Stellettin B处理A549细胞和NCI-H1299细胞24、48、72和92h的增殖抑制率;采用Hoechst染色检测处理A549细胞24、48h后的凋亡指数;流式细胞术Annexin-FITC／PI双染法和PI染色法分别检测处理A549细胞48h后的凋亡率和细胞周期分布情况;采用Western blotting检测处理48h后A549细胞周期相关蛋白（Cyclin A、CDK2及p21CIP1）的表达水平。结果 不同浓度Stellettin B可显著增强对A549细胞的增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）。不同浓度Stellettin B处理24、48h后,A549细胞的凋亡指数、凋亡率均升高且呈剂量依赖性（P＜0.05）。随着Stellettin B浓度的增加,G0／G1期细胞比例及p21CIP1蛋白的表达水平逐渐升高,S和G2／M期细胞比例及Cyclin A和CDK2蛋白的表达水平逐渐降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 Stellettin B 可抑制A549细胞增殖并诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,可能与其对细胞周期相关蛋白表达的调控有关。     

TELOMERASE ACTIVITY OF FIBROBRONCHOSCOPIC BRUSHING CELLS IN NON－SMALL CELL LUNG CANCER

Telomerase is a ribonucleoprotein enzyme that uses its own integral RNA as a template for synthesis of the telomeric DNA. The cells containing thisenzyme can escape from natural telomeric shortening and acquire infinite growth potentiality. Findings in recent studies showed that telomerase was activated in almost all malignant tumor tissues which suggests that the activation of telomerase is the critical procedure in oncogenesis. We studied telomerase activity in bronchial exfoliated cells f…     

Current treatment landscape for oligometastatic non-small cell lung cancer

The management of patients with advanced non-small cell lung carcinoma (NSCLC) has undergone major changes in recent years. On the one hand, improved sensitivity of diagnostic tests, both radiological and endoscopic, has altered the way patients are staged. On the other hand, the arrival of new drugs with antitumoral activity, such as targeted therapies or immunotherapy, has changed the prognosis of patients, improving disease control and prolonging survival. Finally, the development of radiotherapy and surgical and interventional radiology techniques means that radical ablative treatments can be performed on metastases in any location in the body. All of these advances have impacted the treatment of patients with advanced lung cancer, especially in a subgroup of these patients in which all of these treatment modalities converge. This poses a challenge for physicians who must decide upon the best treatment strategy for each patient, without solid evidence for one optimal mode of treatment in this patient population. The aim of this article is to review, from a practical and multidisciplinary perspective, published evidence on the management of oligometastatic NSCLC patients. We evaluate the different alternatives for radical ablative treatments, the role of primary tumor resection or radiation, the impact of systemic treatments, and the therapeutic sequence. In short, the present document aims to provide clinicians with a practical guide for the treatment of oligometastatic patients in routine clinical practice.     

毒黄素对非小细胞肺癌A549细胞株作用的实验研究

目的 研究毒黄素不同浓度和不同作用时间对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 分别取0.5、0.375、0.25和0.125 μmol／L毒黄素作用于A549细胞（实验组）,以不加毒黄素为对照组,分别培养24 h和48 h。采用CCK-8试剂盒、Annexin V-FITC／PI凋亡试剂盒检测A549细胞增殖抑制率和凋亡率。划痕实验对比0.125 μmol／L毒黄素组和对照组（0 μmol／L毒黄素）在12、24和48 h细胞迁移率。结果 0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组24 h细胞增殖抑制率分别为（93.51±3.69）％、（40.38±3.08）％、（23.54±2.58）％和（13.07±2.37）％,48 h为（90.53±3.58）％、（53.72±3.02）％、（34.44±3.10）％和（24.78±2.43）％。0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组24 h细胞凋亡率分别为（78.68±2.22）％、（43.66±2.53）％、（20.81±2.59）％和（6.25±0.96）％,高于对照组的（1.57±0.52）％;0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组48 h细胞凋亡率分别为（88.66±3.16）％、（59.86±2.81）％、（27.89±3.48）％和（9.91±1.33）％,高于对照组的（1.59±0.55）％。0.125 μmol／L毒黄素组12、24和48 h细胞迁移率分别为7％、11％和16％,低于对照组相应的14％、26％和39％。结论 毒黄素对A549细胞有明显增殖抑制和促凋亡作用,并呈时间和剂量依赖性,且可抑制A549细胞迁移活性。     

培美曲塞治疗晚期非小细胞肺癌近期疗效分析

目的　观察培美曲塞治疗５０例晚期非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者的疗效和毒副反应。方法　收集２００６年６月至２０１０年４月接受培美曲塞化疗的５０例ＮＳＣＬＣ患者,分为单药组１３例和联合组３７例。单药组：培美曲塞５００ｍｇ／ｍ２ｄ１,ｑ３ｗ。联合组：培美曲塞５００ｍｇ／ｍ２ｄ１,卡铂（ＡＵＣ＝５）ｄ１,或顺铂２５ｍｇ／ｍ２ｄ１～ｄ３,或奈达铂８０ｍｇ／ｍ２ｄ１,ｑ３ｗ。所有患者接受至少２个周期化疗。近期疗效评价采用ＲＥＣＩＳＴ１.０标准,毒副反应评价按照ＷＨＯ毒性评定标准。生活质量评价参照孙燕提出的生活质量（ＱＯＬ）评分表。结果　５０例患者均可评价疗效,完全缓解（ＣＲ）２例,部分缓解（ＰＲ）７例,稳定（ＳＤ）２２例,进展（ＰＤ）１９例,有效率（ＲＲ）１８.０％,疾病控制率（ＤＣＲ）６２.０％。生活质量改善率达５８.０％。主要毒性反应为１～２级骨髓抑制和胃肠道反应,经对症处理后不影响化疗进行。结论　以培美曲塞为主的化疗方案治疗晚期ＮＳＣＬＣ疗效较好,可明显改善患者生活质量,且毒性反应轻,易于耐受。     

人参皂苷Rd抑制人非小细胞肺癌A549细胞的生长及作用机制

目的 探讨人参皂苷Rd(GS-Rd)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549细胞增殖、凋亡、侵袭和周期的影响及可能机制.方法 采用MTT法,观察不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)GS-Rd体外作用NSCLC细胞系A549不同时间后对其细胞活力的影响;利用高内涵分析软件,观察不同浓度、不同时间作用于...     

State of the art in therapy for non-small cell lung cancer

The treatment of lung cancer has changed rapidly over the last few years and now more than ever a multi-disciplinary approach is vital to patient care. Surgical resection remains the mainstay of treatment for patients with operable disease. Recent studies have clearly demonstrated the survival benefits of adjuvant chemotherapy and this is now considered the standard of care. Despite efforts to improve early detection the majority of patients present with advanced lung cancer. The combination of radiation and chemotherapy should be considered for patients with locally advanced disease. Chemotherapy and the newer generation of molecularly targeted agents, provide quality of life benefits and modest gains in survival for patients with metastatic disease. Though there is room for improvement there is no justification for the therapeutic nihilism once surrounding the treatment of lung cancer.