骨髓基质干细胞治疗脊髓损伤的体外诱导分化及相关蛋白表达

目的 探讨模拟脊髓细胞环境下骨髓基质干细胞(BMSCs)的分化及蛋白差异表达.方法 分离培养Wistar大鼠骨髓的BMSCs和脊髓的神经细胞,设立BMSCs自然分化组、与神经细胞共培养组和双层培养组,8 d后对各组BMSCs进行神经特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光检测.应用表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛选双层培养组BMSCs变化明显的蛋白进行分析.结果 BMSCs与神经细胞共培养和双层培养8 d后,BMSCs呈神经细胞形态.NSE和GFAP检测结果 ,BMSCs与神经细胞共培养组明显高于BMSCs与神经细胞双层培养组(P＜0.05),而BMSCs和神经细胞双层培养组又明显高于BMSCs自然分化组(P＜0.05).SELDI-TOF-MS检测到TIP39_RAT和CALC-RAT增加到原来的5.360和2.807倍,INSL6-RAT、PNOC_RAT和PCSK1_RAT减少到原来的38.0%、49.9%和43.8%.结论 在脊髓神经细胞微环境下体外培养BMSCs能诱导其分化成神经细胞,而且接触培养分化率高;BMSCs在向神经细胞分化机制中与TIP39_RAT、CALC_RAT、INSL6_RAT、PNOC_RAT和PCSK1_RAT密切相关.     

热损伤诱导的丝裂原活化蛋白激酶对活化蛋白-1的影响及其意义

目的 观察成纤维细胞热烫伤后丝裂原活化蛋白激酶以及活化蛋白-1的表达。方法 将培养的人成纤维细胞分成4组：(1)单纯热损伤刺激组；(2)热损伤刺激 碱性成纤维细胞生长因子处理组(10μg／L)；(3)预先加入PD98059(10μmoL/L)，再行热损伤 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)刺激；(4)预先加入PD98059 SB203580(各10μmol／L)阻断剂30min，再行热损伤 碱性成纤维细胞生长因子刺激。伤后0、30、60和180min检测细胞外信号调节激酶(ERK)和原癌基因c-fos蛋白。结果单纯热刺激的成纤维细胞ERK表达增加，随后消失。碱性成纤维细胞生长因子刺激ERK表达增加显著，时间延长。加入PD98059拮抗剂，ERK的表达受抑制。原癌基因c-fos的表达开始增加，随后减弱。同时阻断ERK和p38MAPK两条通路，c-fos弱阳性表达。结论 碱性成纤维细胞生长因子引起热损伤成纤维细胞ERK表达增加，原癌基因c-fos是MAPK信号通路下游重要的靶蛋白。     

NDRG1和E-cadherin蛋白表达与大肠癌侵袭转移的关系及其意义

目的：探讨NDRGl和E-cadherin蛋白在大肠癌组织中的表达、相互关系及临床意义。方法：应用免疫组织化学（SP）法检测12例正常大肠组织、58例大肠癌组织中NDRGl和E-cadherin蛋白的表达情况。应用X^2检验对两者与临床病理因素关系进行统计分析，两者表达间的相关性采用spearman等级相关检验。结果：正常大肠组织和大肠癌组织中NDRGl阳性表达率分别为75．00％（9，12）和51．72％（30／58），E-cadherin阳性表达率分别为91．67％（11/12）和55．17％（32，58）。NDRGl和E-cadherin在大肠癌组织中阳性表达率均低于正常大肠组织阳性表达率。NDRGl和E-cadherin的表达与大肠癌的Dukes分期、淋巴结转移、肝转移显著相关（P〈0．05）。E-cadherin的异常表达与肿瘤的分化程度显著相关（P〈0．05）。大肠癌组织中NDRGl和E-cadherin蛋白的表达呈正相关（P〈0．05）。结论：大肠癌组织中NDRGl和E-cadherin蛋白表达状况有助于判断大肠癌生物行为及恶性程度。NDRGl和E-cadherin联合检测，可能成为预测大肠癌肝转移的有效手段。     

Establishment of a mechanical injury model of rat hippocampal neurons in vitro

Objective： To establish a simple, reproducible, and practical mechanical injury model of hippocampal neurons of Sprague-Dawley rats in vitro. Methods ： Hippocampal neurons isolated from 1-2-day old rats were cultured in vitro. Mild, moderate and severe mechanical injuries were delivered to the neurons by syringe needle tearing, respectively. The control neurons were treated identically with the exception of trauma. Cell damage was assessed by measuring the Propidium Iodide （PI） uptaking at different time points （0.5, 1, 6, 12 and 24 hours） after injury. The concentration of neuron specific enolase was also measured at some time points. Results ： Pathological examination showed that degeneration, degradation and necrosis occurred in the injured cultured neurons. Compared with the control group, the ratio of PI-positive cells in the injured groups increased significantly after 30 minutes of injury （P 〈 0.05）. More severe the damage was, more PI-positive neurons were detected. Compared with the control group, the concentration of neuron specific enolase in the injured culture increased significantly after 1 hour of injury （ P 〈 0.05）. Conclusions： The established model of hippocampal neuron injury in vitro can be repeated easily and can simulate the damage mechanism of traumatic brain injury, which can be used in the future research of traumatic brain injury.     

Cerebral cortical neuron apoptosis after mild excitotoxic injury in vitro: different roles of mesencephalic and cortical astrocytes

OBJECTIVE: Increasing evidence supports the presence of neuronal apoptosis after ischemic or excitotoxic brain injury. Astrocytes, which exhibit significant regional differences in function, may exert a protective effect on neurons exposed to ischemic injury. We examined the effects of astrocytes derived from different regions of the central nervous system on neuronal apoptosis after mild excitotoxic injury in tissue culture. METHODS: Purified astrocyte cultures derived from P4 rat cerebral cortex or mesencephalon showed transient cell swelling but no cell death when exposed to 50 micromol/L glutamate for 5 minutes. When mixed neuronal/glial cocultures were exposed to the same glutamate dose, neuron death was observed. Necrotic and apoptotic cell death during 24 hours was examined using morphological criteria, nuclear staining, triphosphate nick end labeling, and trypan blue exclusion. RESULTS: We found that cortical neurons that elaborate a more extensive dendritic arbor when grown on homotypic astrocytes are more likely to undergo apoptosis than neurons with a limited dendritic arbor grown on heterotypic astrocytes. By contrast, a similar number of neurons undergo necrotic cell death. CONCLUSION: This finding may be associated with 1) increased vulnerability of neurons with a more elaborate dendrite structure to mild excitotoxic injury, or 2) regional differences in the ability of astrocytes to attenuate apoptosis.     

S-腺苷蛋氨酸对大鼠肝缺血再灌注损伤后清蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨S-腺苷蛋氨酸(思美泰)对大鼠肝缺血再灌注损伤后清蛋白(ALB)mRNA表达的影响。方法:将72只SD大鼠随机均分为假手术组,肝缺血再灌注组(IR组),肝缺血再灌注+腺苷蛋氨酸干预组(SAM组)。IR组和SAM组均以肝脏缺血20 min后再灌注的方式造模。SAM组于术后1 h腹腔注射思美泰100 mg/(kg.d),假手术组和IR组予以等体积生理盐水。各组分别于术后1,4,7,10 d处死6只大鼠,用实时定量PCR方法测定肝组织ALB mRNA的含量。结果:术后第1天SAM组和IR组ALB mRNA相对表达量较假手术组明显降低(均P<0.05),但两组间差异无统计学意义(P>0.05);从术后第4天开始,SAM组ALB mRNA的相对表达量明显高于IR组(P<0.05),且至术后第10天明显超过假手术组(P<0.05)。结论:腺苷蛋氨酸能提高肝缺血再灌注损伤后ALB mRNA的合成,增强肝脏的合成功能。     

硫化氢对大鼠海马神经元氧-糖缺失/恢复损伤的影响

目的研究硫化氢（H2S）对大鼠海马神经元氧-糖缺失/恢复损伤的影响。方法新生（24～48h内）Wistar大鼠断头,迅速取出海马,应用0．125%胰酶消化,海马神经元在96孔和6孔培养板上培养10d后随机分为5组：正常培养组（Ⅰ组）、氧-糖缺失/恢复组（Ⅱ组）、氧-糖缺失/恢复＋50μmol/L NaHS组（Ⅲ组）、氧-糖缺失/恢复＋100μmol/L NaHS组（Ⅳ组）和氧-糖缺失/恢复＋200μmol/L NaHS组（Ⅴ组）。Ⅱ组神经元进行氧-糖缺失45min后换回原来的培养液,然后放回原培养箱培养24 h,Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组在氧-糖缺失时加入NaHS,使其终浓度分别为50、100、200μmol/L,余处理同Ⅱ组,Ⅰ组按正常培养方法培养。检测96孔培养板神经元活力。鉴定6孔培养板的神经元纯度并进行细胞色素C水平、还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）浓度和神经元凋亡的检测。结果与Ⅰ组比较,Ⅱ组MDA浓度、细胞色素C水平和神经元凋亡率升高,GSH浓度和神经元活力降低（P＜0．05）；与Ⅱ组比较,Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组MDA浓度、细胞色素C水平和神经元凋亡率降低,GSH浓度和神经元活力升高（P＜0．05）；与Ⅲ组比较,Ⅳ组和Ⅴ组MDA浓度、细胞色素C水平和神经元凋亡率降低,GSH浓度和神经元活力升高（P＜0．05）；与Ⅳ组比较,Ⅴ组MDA浓度、细胞色素C水平和神经元凋亡率降低,GSH浓度和神经元活力升高（P＜0．05）。结论外源性H2S可减轻大鼠海马神经元氧-糖缺失/恢复损伤,其机制可能与其提高机体的抗氧化能力、减少神经元的凋亡有关。     

谷氨酸对培养大鼠皮层神经细胞损伤作用的研究

目的 探讨谷氨酸对体外培养的大鼠皮层神经细胞的损伤作用。方法 在对体外新生大鼠(0-ld)大脑皮层神经细胞进行原代培养的基础上,分组加入不同浓度的谷氨酸,作用10分钟,24小时后测定细胞死亡率、乳酸脱氢酶(LDH)活性及超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果 培养大鼠皮层神经细胞在谷氨酸50μmol／L作用10分钟后,细胞死亡率和LDH活性明显增加,SOD活性显降低,神经细胞MDA含量则明显增高。结论 谷氨酸可损伤培养大鼠皮层神经细胞,这种作用在某种程度上是由氧自由基介导的。     

Injuries in the Greek epics of Homer

Trauma and the need of medical care exist since the beginning of human history. This research is aimed to identify and analyze trauma in antiquity. After a review of bibliography, the first reports of trauma (in Europe) were found in the Greek Epics of Homer. The analysis of these texts showed that injury could be caused to any part of the human body. The main cause of trauma was primarily participation in wars (178 cases), and then participation in sports (6 cases) and other activities (6 cases). This study identified a total of 190 injuries in both Homer epics. The more serious injuries, many of which proved fatal, were observed from participation in military activities.     

转化生长因子-β1转基因联合FTY720对大鼠心脏移植物缺血-再灌注损伤的影响

目的 探讨经冠脉灌注转化生长因子(TGF)-β1基因联合FTY720对移植心脏缺血-再灌注损伤(IRI)的影响及其机制.方法 实验分为空白对照组、空载体组、FTY720组、转基因组和转基因+FTY720组.心脏移植8 h后切取移植心脏,免疫组织化学检测mTGF-β1、ICAM-1、核转录因子(NF)-κB表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mTGF-β1 mRNA转录强度;测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性.结果 mTGF-β1成功转到心肌细胞,转基因组和转基因+FIY720组mTGF-β1的表达强度分别是(1.08±0.24)和(1.16±0.22),明显高于其他3组(P<0.01);而两组ICAM-1的表达积分分别是(2.43±0.46)和(1.90±0.20),NF-κB的表达积分分别是(9.80±1.85)和(10.10±2.27),较其他3组显著下调(P<0.01);FRY720组、转基因组和转基因+FTY720组心肌细胞凋亡指数分别是(9.20±1.12)、(5.90±1.09)和(5.40±0.77),显著减少(P<0.01);FTY720组、转基因组和转基因+FTY720组SOD活性分别是(51.03±5.54)、(55.91±6.66)和(73.42±6.42)U/mg,明显升高(P<0.01),MDA含量(10.90±1.93)、(11.02±2.45)和(9.28±1.64)U/g,明显下降(P<0.01);而MPO活性分别是(4.38±1.43)、(4.63±1.04)和(3.16±0.64)U/g,亦明显下降(P<0.01);转基因和FTY720两因素对减轻心肌细胞凋亡以及对SOD、MDA和MPO的影响存在交互作用(P<0.05).结论 TGF-β1和FTY720均具有减轻移植心脏缺血-再灌注损伤的作用,机制可能与抑制心肌细胞凋亡、下调ICAM-1、NF-κB表达、增高SOD活性等因素有关;两者联合应用在减轻缺血-再灌注损伤方面有协同作用.     

Intermedin预处理大鼠肾脏缺血再灌注损伤修复过程中CyclinE和CDK2表达的变化

目的 观察Intermedin(IMD)预处理大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)修复过程中细胞周期蛋白E(cyclinE)和其依赖性激酶2(CDK2)表达的变化,IMD可能的促进肾组织再生修复的作用机制.方法 健康雄性Wistar大鼠,体重180～220g,共144只随机分为对照组、IRI组、转空质粒组、转IMD组.对照...     

异丙酚对大鼠创伤性脑损伤时DAPK mRNA表达的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠创伤性脑损伤(TBI)时死亡相关蛋白激酶(DAPK)mRNA表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠60只,月龄3～4月,体重250～300 g,随机分为6组(n=10):正常对照组(C组)、假手术组(S组)、TVI组、生理盐水组(NS组)、脂肪乳剂组(FE组)及异丙酚组(P组).采用自由落体撞击法建立大鼠创伤性脑损伤模型,于制备模型成功后以2 ml·kg-1·h-1的速率经尾静脉分别输注生理盐水、10%脂肪乳剂、1%异丙酚4 h.于模型制备成功后24 h断头处死大鼠取脑,采用细胞原位末端标记(TUNEL)法计数凋亡神经元,计算神经元凋亡率;采用RT-PCR法检测DAPK mRNA的表达水平.结果 与C组和S组比较,TBI组模型制备成功后24 h时损伤区及损伤边缘区神经元DAPK mRNA表达上调,神经元凋亡率升高(P<0.05);P组DAPK mRNA表达水平及神经元凋亡率较TBI组、NS组和FE组降低(P<0.05).结论 异丙酚可能通过抑制DAPK mRNA表达上调减少脑神经元凋亡,从而在一定程度上减轻大鼠创伤性脑损伤.     

不同浓度异氟醚对新生大鼠离体大脑皮层神经元活力的影响

目的 探讨不同浓度异氟醚对新生大鼠离体大脑皮层神经元活力的影响.方法 出生4～5 h的Wistar大鼠10只,通过分离、纯化、原代培养大脑皮层神经元12 d,随机分为4组,每组10孔.对照组(C组)、0.6%异氟醚组(I1组)、1.2%异氟醚组(I2组)和2.4%异氟醚组(I3组).I1～3组将培养板置于相应浓度异氟醚密闭箱内进行处理,C组不做任何处理.分别于处理1、2、4、8、12和24 h(T1-6)时,采用ELISA法检测上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法检测神经元活力,用显微荧光技术测定有钙和无钙条件下神经元内游离钙离子浓度([Ca2+]I).结果 与C组比较,I1组T6时LDH活性降低,神经元活力升高,I2组T5.6时和I3组T4～6时LDH活性升高,神经元活力降低(P＜0.05);有钙条件下,C组、I1～3组神经元内[Ca2+]I峰值依次升高,无钙条件下,与C组比较,I1组神经元内[Ca2+]I峰值降低,I2,3组升高,I1～3组神经元内[Ca2+]I峰值依次升高(P＜0.05).结论 0.6%异氟醚可增强原代培养新生大鼠大脑皮层神经元活力,1.2%、2.4%异氟醚可降低原代培养新生大鼠大脑皮层神经元活力,其机制可能与神经元内Ca2+浓度变化有关.