右美托咪定对脓毒症小鼠肺泡上皮细胞的保护作用

目的 探讨右美托咪定（DEX）在脓毒症小鼠肺泡上皮细胞炎性反应中的作用。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为盲肠结扎穿孔（CLP）组和CLP+DEX组,每组36只。CLP组小鼠在CLP术前15 min腹腔注射1 mL无菌生理盐水,CLP+DEX组小鼠在CLP术前15 min腹腔注射50 μg/kg DEX。记录小鼠CLP术后24 h内的存活率,在CLP术后0、6、12、24 h时取小鼠血清和肺泡灌洗液,用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清和肺泡灌洗液中白细胞介素（IL）-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的水平。体外培养小鼠肺泡上皮细胞MLE12,分为脂多糖（LPS）组（1 μg/mL LPS）和LPS+DEX组（1 μg/mL LPS+0.2 μg/mL DEX）,处理0、6、12、24 h后用ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平,蛋白质印迹法检测细胞外信号调节激酶（ERK）1/2和c-Jun氨基末端激酶（JNK）的磷酸化水平。结果 CLP+DEX组小鼠CLP术后24 h内的存活率高于CLP组（P<0.05）,6、12、24 h时小鼠血清和肺泡灌洗液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平均低于CLP组（P<0.05,P<0.01）。6、12、24 h时LPS+DEX组MLE12细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平和ERK1/2磷酸化水平均低于LPS组（P<0.05,P<0.01）,6、12 h时JNK的磷酸化水平也低于LPS组（P<0.05,P<0.01）。结论 DEX能减少脓毒症小鼠血清和肺泡灌洗液中炎性因子的产生,提高脓毒症小鼠存活率,其机制可能与抑制ERK1/2和JNK信号通路的激活有关。     

左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病小鼠的肾脏保护作用及基于Rho/ROCK信号通路改善足细胞损伤的影响

【立论依据】 观察左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病(DN)小鼠血糖、血肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白及Rho、ROCK蛋白表达的影响研究左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病小鼠的肾脏保护作用及基于Rho/ROCK信号通路改善足细胞损伤的影响。 【设计思路】 MKR转基因2型糖尿病小鼠给予高脂饮食联合右侧肾切除建立糖尿病肾病模型。观察左归降糖益肾方对DN小鼠血糖、肾功能及Rho、ROCK蛋白表达等的影响研究其是否具有保护DN肾脏的作用及是否通过抑制Rho／ROCK信号通路改善足细胞损伤。 【实验内容】 8周龄MKR小鼠50只随机分为5组,空白组(A组)、DN组(B组)、DN＋左归降糖益肾方组(C组)、DN＋Rho/ROCK信号通路抑制剂Y-27632组(D组)、DN＋糖适平＋贝那普利组(E组)。B、C、D、E组给予高脂饮食联合右侧肾切除造模。手术后2周开始给药。C组小鼠给予中药提取液灌胃治疗30 d。D组小鼠给予Y-27632腹腔注射15 d(隔天注射)。E组给予糖适平＋贝那普利灌胃治疗30 d。A、B组则以等体积蒸馏水灌胃。30 d后处死小鼠。电化学法检测小鼠空腹血糖,全自动生化仪检测尿素氮、血肌酐,ELISA法测定尿微量白蛋白,免疫组化及蛋白质印迹法测定肾脏组织Rho、ROCK蛋白表达,光镜观察肾小球形态结构,电镜观观察足细胞形态结构。 【材料】 MKR小鼠、左归降糖益肾方、贝那普利、糖适平、Y-27632、高脂饲料等。 【可行性】 课题组前期研究表明高脂饮食联合右侧肾切除的MKR转基因2型糖尿病小鼠是良好的糖尿病肾病模型;左归降糖益肾方具有改善糖尿病肾病的作用。国内外研究中均表明抑制Rho／ROCK信号通路具有保护糖尿病肾脏的作用。故本实验基于Rho／ROCK信号通路研究左归降糖益肾方对糖尿病肾病的作用机制具有可行性。 【创新性】 (1)MKR转基因2型糖尿病小鼠给予高脂饮食联合右侧肾切除建立糖尿病肾病模型。(2)近年来研究发现Rho／ROCK信号通路在糖尿病肾病发生发展过程中起重要作用。本实验基于Rho／ROCK信号通路探讨左归降糖益肾方对糖尿病肾病足细胞损伤的影响。     

NADPH氧化酶Nox-4在DSS诱导的小鼠肠炎中的表达及作用

目的 研究Nox-4及抗氧化物在葡聚糖硫酸钠（dextran sulphate sodium,DSS）诱导的小鼠炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）模型中的表达水平,探讨氧化应激及NADPH氧化酶在IBD发病机制中的作用。方法 将16只SPF级雄昆明小鼠随机分为正常组和DSS组,每组8只,正常组正常饮水,DSS组饮用2.5% DSS溶液,7天建立小鼠肠炎模型。通过结肠长度、HE染色组织病理学评分、疾病活动指数（disease activity index,DAI）评估肠道炎症程度;免疫组织化学法检测结肠组织中Nox4蛋白含量,并分别采用实时定量PCR与生化方法检测组织中Nox-4的mRNA表达水平及血清浓度,评价机体氧化应激程度;利用实时定量PCR法分析小鼠肠道组织中Mn-SOD、GSH和CAT mRNA的表达情况,评价机体抗氧化功能;实时定量PCR法检测结肠组织中MCP-1、IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平、ELISA法检测上述3种炎性因子血清浓度以反应机体炎症程度。结果 与正常组相比,DSS组小鼠体质量明显下降（P<0.01）,DAI评分明显增高（P=0.000）,结肠长度明显缩短（P<0.01）,肠道呈现中至重度炎症状态; DSS组结肠组织中Nox-4蛋白表达明显上调,Nox-4 mRNA含量显著升高（P=0.000）,血清Nox-4浓度在DSS组较正常组更高（P<0.01）;结肠组织中抗氧化物Mn-SOD、GSH和CAT mRNA的表达在DSS组中均明显增高（P=0.000）;比较机体炎症指标,DSS组小鼠血清中MCP-1、IL-1β、TNF-α浓度较正常组均呈不同程度上升（P均=0.000）,结肠组织中3种炎性因子的mRNA相对表达量较正常组显著升高（P均=0.000）。结论 Nox-4通过氧化应激途径参与了肠道黏膜炎性反应的进程,并可能在IBD的转归中发挥着更为重要的作用。     

法舒地尔对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨法舒地尔通过RhoA/ROCK（ Rho激酶）通路是否能减轻脂多糖（ LPS）诱导的大鼠急性肺损伤（ ALI）。方法：18只Wistar健康大鼠随机分为对照组（ NS组）、脂多糖组（ LPS组）及法舒地尔干预组（ FAS组）各6只;LPS组和FAS组采用小剂量LPS 1 mg/kg腹腔注射16 h后,气管内滴注LPS 3 mg/kg建立ALI模型。 FAS组在腹腔注射LPS前30 min和气管滴注LPS后1 h给予腹腔注射法舒地尔10 mg/kg。于气管滴注LPS造模后,观察3 h后处死大鼠,通过HE染色观察各组肺组织形态学改变,测肺组织湿/干重比、丙二醛含量、髓过氧化物酶活性,反转录-聚合酶链反应及Western blot法检测肺组织匀浆中ROCK2（Rho激酶2）mRNA及蛋白的表达情况。结果：与NS组比较,LPS组肺组织病理形态学改变明显,FAS组较LPS组相比明显减轻;LPS组肺湿/干重比、丙二醛含量和髓过氧化物酶活性均较NS组明显增高（P〈0.01）,而FAS组较LPS组均有不同程度降低（P〈0.05-P〈0.01）;LPS组ROCK2 mRNA 表达较NS组明显增高（P〈0.01）,而FAS组与LPS组差异无统计学意义（P〉0.05）;LPS组ROCK2蛋白表达较NS组明显增高（P〈0.01）,而FAS组较LPS组表达水平降低（P〈0.05）。结论：法舒地尔通过RhoA/Rho激酶信号通路能够减轻LPS诱导的大鼠ALI。     

Exendin-4调控烧伤小鼠炎性反应及多器官损害的交感神经机制

目的 探讨胰高血糖素样肽（GLP-1）的长效类似物Exendin-4（Ex-4）对烫伤小鼠生存率、炎性反应和器官损伤的影响及其交感神经调控机制。方法 BALB/C小鼠随机分为烫伤组和假伤组,分别行93℃ 15%总体表面积（TBSA）的Ⅲ度烫伤和37℃假伤。烫伤前30min腹腔注射β₂肾上腺素能受体阻断剂普萘诺尔（prop,30mg/kg）,伤后30min立即腹腔注射Ex-4（2.4nmol/kg）。24h后处死动物留取肺脏和血清,生化法检测肝肾功能,ELISA法检测外周血及肺部炎性因子TNF-α、MCP-1和IL-10水平;分离脾脏单个核细胞,观察核蛋白NF-κB p65蛋白表达;此外,烫伤小鼠随机分组观察Ex-4对动物72h存活情况的影响。结果 Ex-4处理的烫伤小鼠病死率有增加趋势。Ex-4对假伤组肺组织炎性细胞因子没有显著影响,但可显著增加烫伤动物肺脏TNF-α、MCP-1和IL-10水平,且此效应可被prop阻断。Ex-4可抑制假伤小鼠血清TNF-α、IL-10水平,而促进烫伤组血清TNF-α、MCP-1、IL-10水平（P<0.05）,且烫伤组prop干预后,反而增强了Ex-4的促细胞因子分泌作用。Ex-4可显著增加烫伤小鼠肝肾功能损伤指标AST/ALT和UR/Cr （P<0.05）,并能被prop阻断;而对假伤组无明显影响。Ex-4能显著上调烫伤小鼠脾脏细胞核NF-κB p65蛋白表达（P<0.05）,且此效应可被prop阻断。结论 Ex-4可通过交感神经机制促进局部组织器官的炎性反应以及器官损伤,Ex-4和激活的肾上腺素能受体共同激活cAMP-PKA-NF-κB信号转导途径,进而调节全身炎性反应。     

NF-κB对病毒性心肌炎小鼠心肌中促炎细胞因子的调控

目的 探讨核因子-κB （NF-κB）对A型流感病毒（IAV）性心肌炎小鼠心肌中促炎细胞因子的调控作用。方法 30只8周龄雄性BALB/c小鼠随机分3组：1正常对照组（C组）：经鼻吸入15μl生理盐水;2感染对照组（I组）：经鼻吸入40空斑形成单位（pfu） IAV;3PDTC组（P组）：经鼻吸入40pfu IAV,腹腔注射NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸（PDTC）（10mg/kg）,每天1次。感染后第9天处死小鼠,切取心脏组织进行病理及生化检查。结果 IAV感染可诱导心肌中促炎细胞因子白介素（IL）-1β、IL-6及肿瘤坏死因子（TNF）α显著上调（P<0.01,P<0.05）,引发心肌急性炎性反应,部分心肌组织坏死。PDTC显著抑制促炎细胞因子在心肌中表达（P<0.01）,有效抑制IAV病毒复制（P<0.01）,减轻心肌炎性反应。结论 IAV感染心肌组织后可能通过NF-κB信号通路诱导心肌中促炎细胞因子表达上调,抑制NF-κB激活可能为预防和治疗流感病毒性心肌炎提供新的思路。     

脑膜淋巴管转运功能障碍加重脂多糖诱导的小鼠中枢炎症

目的：探讨脑膜淋巴管（meningeal lymphatic vessel,mLV）转运功能障碍对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的小鼠中枢神经系统炎症的影响。方法：①16只C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,Control组腹腔注射生理盐水,LPS组分别腹腔注射LPS（2 mg/kg）12、24、72 h,而后观察小鼠mLV转运功能、海马区小胶质细胞（microglial,MG）活化、白介素（interleukin,IL）-6 和IL-1β水平。②将8只小鼠随机分为2组,分别为Control组和VEGFR3抑制剂MAZ51组,观察MAZ51对mLV转运功能的影响。③将24只小鼠分为4组,分别为Control组、MAZ51组、LPS组、LPS+MAZ51组,对MAZ51组和LPS+MAZ51组预先腹腔注射 MAZ51（10 mg/kg）,每周5 d,共30 d,6周后对LPS组和LPS+MAZ51组注射LPS,1 d后行为学实验评估小鼠的逃避恐惧能力;免疫组化检测MG 活化情况;ELISA 法检测IL-6、IL-1β的表达量。结果：小鼠腹腔注射LPS 24 h后脑膜LYVE-1面积和颈深淋巴结内OVA-647面积明显减少（P < 0.01）,72 h内均低于基础水平（P < 0.01）,24 h后海马MG活化、IL-6和IL-1β均明显增加 （P < 0.01）。与Control组相比,MAZ51组OVA-647荧光面积显著减少（P < 0.01）。LPS组小鼠海马区MG活化和IL-6、IL-1β的表达相对Control组均明显增加（P < 0.01）且小鼠僵直时间明显降低（P < 0.01）;与LPS组相比,LPS+MAZ51组小鼠海马区MG 活化和炎症因子的表达均增加（P < 0.01）且僵直时间明显减少（P < 0.01）。结论：mLV转运障碍通过增加炎性介质聚积,活化 MG,加重LPS诱导的小鼠中枢炎症和认知功能障碍。     

苦参碱对对乙酰氨基苯酚诱导的小鼠药物性肝损伤的保护作用及机制

目的 探讨苦参碱（KSJ）对对乙酰氨基苯酚（APAP）诱导的小鼠药物性肝损伤的保护作用及机制。方法 雄性C57BL/6小鼠40只,随机分为空白对照组、APAP组、KSJ大剂量组［2.8 mg/（kg·d）］、KSJ中剂量组［1.4 mg/（kg·d）］和KSJ小剂量组［0.7 mg/（kg·d）］,每组8只。空白对照组和APAP组小鼠尾静脉注射10%葡萄糖溶液10 ml/（kg·d）;KSJ大剂量组、KSJ中剂量组和KSJ小剂量组分别注射相应浓度的KSJ葡萄糖溶液10 ml/（kg·d）,连续给药7 d。末次给药后1 h,除空白对照组外其他各组小鼠腹腔注射APAP 400 mg/kg,复制急性药物性肝损伤模型,空白对照组小鼠予以等量无菌生理盐水进行一次性腹腔注射,模型复制结束后禁食不禁水24 h。24 h后,小鼠眼球采血,检测天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测IL-6、TNF-α水平;取肝脏组织行苏木精-伊红（HE）染色,观察小鼠肝脏病理学改变。结果 与APAP组比较,KSJ对APAP诱导的小鼠药物性肝损伤具有一定的保护作用,包括降低血清AST和ALT水平（P <0.05）,提高SOD活力,降低MDA含量（P <0.05）,以及减轻肝脏病理损伤程度和肝细胞凋亡程度。同时KSJ对APAP刺激诱导产生的TNF-α和IL-6具有抑制作用（P <0.05）,并且呈剂量依赖性。结论 KSJ对APAP诱导的小鼠药物性肝损伤具有保护作用,其机制与降低炎症因子水平,降低氧化应激,提高抗氧化能力有关。     

β1受体阻滞剂上调肠道上皮细胞HO-1对脓毒症大鼠肠道功能的保护作用

目的 探讨β₁受体阻滞剂艾司洛尔（Esmolol）能否上调血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）起到对脓毒症大鼠肠道功能的保护作用。方法 本实验于哈尔滨医科大学附属第一医院外科中心实验室完成。40只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为4组：假手术组（sham组,n=10）、脓毒症组（CLP组,n=10）、艾司洛尔干预组（Esmolol+CLP组,n=10）、HO-1抑制剂组（Esmolol+ZnPP+CLP组,n=10）。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症大鼠模型,Esmolol组通过静脉输注艾司洛尔注射液,速度为15mg/（kg·h）,Esmolol+ZnPP+CLP组术前1h腹腔内注射ZnPP溶液（40μmol/kg）,术后同速静脉输注艾司洛尔注射液。其余各组大鼠腹腔注射等体积生理盐水,并且静脉输注等渗盐水,速度2ml/（kg·h）。术后12h处死大鼠,ELISA法检测各组血清肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素（IL-1β）水平,采用蛋白印迹法及免疫组化法检测大鼠肠组织HO-1表达水平,光学显微镜观察大鼠肠组织病理变化情况。结果 与Sham组相比,CLP组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平均明显升高（43.71±6.24pg/ml vs 2742.69±221.71pg/ml,52.69±14.15pg/ml vs 482.73±125.49pg/ml,P<0.05）;肠组织中HO-1水平表达升高（P<0.05）;肠组织病理损伤明显。与CLP组相比,Esmolol+CLP组血清TNF-α、IL-1β水平均明显下降（2742.69±221.71pg/ml vs 968.81±99.46pg/ml,482.73±125.49pg/ml vs 156.15±38.29pg/ml,P<0.05）;肠组织HO-1水平表达明显升高（P<0.05）;肠组织病理损伤程度减轻。与CLP组相比,Esmolol+ZnPP+CLP组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平无明显差异（2742.69±221.71pg/ml vs 2545.18±173.74pg/ml,482.73±125.49pg/ml vs 474.43±113.98pg/ml,P>0.05）;肠组织病理损伤程度无明显差异。结论 Esmolol能改善脓毒症诱发的肠道损伤,其可能是通过上调HO-1通路来减轻肠组织炎性反应,继而减轻肠道损伤。     

鼠神经生长因子、亚低温联合甲强龙在急性脊髓损伤中的应用及对氧化应激水平的影响

目的 探讨鼠神经生长因子、亚低温联合甲强龙治疗急性脊髓损伤的临床疗效及对氧化应激水平的影响。方法 选取2016年5月—2018年6月延安大学附属医院收治的急性脊髓损伤患者132例作为研究对象。按随机数字表法分为对照组和观察组,每组66例。对照组静脉滴注甲强龙,初始剂量为30 mg/kg,随后以5.4 mg/（kg·h）的速度持续静脉滴注23 h,同时给予亚低温治疗,降温同时给予静脉滴注冬眠合剂维持24 h;观察组在对照组的基础上,肌内注射鼠神经生长因子30 g/d,持续给药2个月。观察两组患者脊髓功能恢复情况,包括：ADL、运动、触觉及针刺觉检查评分;观察血清GSH-Px和SOD的变化,追踪两组患者的并发症。结果 两组患者治疗后ADL、运动、触觉及针刺觉检查评分较治疗前升高（P <0.05）;观察组的评分高于对照组（P <0.05）;两组患者治疗后血清GSH-Px和SOD水平较治疗前升高（P <0.05）;观察组的氧化应激水平高于对照组（P <0.05）;两组患者并发症发生率差异无统计学意义（P >0.05）。结论 在甲强龙背景治疗下,鼠神经生长因子联合亚低温能促进急性脊髓损伤患者的神经功能恢复,提高患者的生活质量。     

A Rho-kinase inhibitor,fasudil, attenuates progressive glomerulosclerosis induced by daunorubicin in rats

Accumulating evidence suggests that the small G protein Rho and its downstream effec-tor Rho kinase may play important roles in kidney biology. The present study examined the effects of a Rho-kinase inhibitor, fasudil, on daunorubicin-induced progressive glomerulosclerosis and explored the underlying mechanism by which fasudil ameliorates glomerulosclerosis. Thirty-six male SD rats were randomly allocated into sham-operation group （sham group, n=12）, unilateral nephrectomy （UNX）＋daunorubicin （DRB） group （model group, n=12）, UNX＋DRB＋Fasudil group （treatment group, n=12）. Two to four weeks after the establishment of the animal model, 6 rats in each group were taken randomly for the detection of 24-h urine protein excretion. Kidney sections were exam-ined by HE and PAS staining, immunohistochemistry and transmission electric microscopy （TEM）. The expression of Rho-kinase mRNA and P27 mRNA in kidney were detected by RT-PCR. It was found that the 24-h urine protein excretion in model group was increased significantly as compared with sham group （P〈0.01）. But this increase was significantly suppressed by fasudil （P〈0.05）. At 4 week, the foot process effacement in podocytes, mesangial proliferation and ECM accumulation were observed in model group, presenting as focal segmental glomerulosclerosis. But in the treatment group, the fasudil alleviated glomerular injury, with proliferating cell nuclear antigen （PCNA）-positive cell infiltration ameliorated and the expression of P27 increased. The expression of Rho-kinase mRNA was significantly enhanced in model group and was suppressed in treatment group. Moreover, fasudil up-regulated the mRNA expression of P27. Our study demonstrated that the glomerulosclerosis was substantially ameliorated by inhibiting the expression of Rho-kinase. It is suggested that Rho-kinase pathway is involved in the renal injury and the inhibition of Rho-kinase may constitute a therapeutic strategy for the treatment of renal injury.     

盐酸法舒地尔对NF200在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中表达的影响

目的：利用新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）动物模型,检测HIBD脑组织中神经丝蛋白-200 （Neurofilaments Protein-200,NF200）表达的动态变化,观察盐酸法舒地尔（Fasudil Hydrochloride Injection）对大鼠NF200表达的影响及对神经损伤后的保护与修复作用.方法：将新生7d龄Wistar大鼠120只,随机分为假手术组（Sham 组,40只）,缺氧缺血作用（HIBD组,40只）,法舒地尔治疗组40只,每组再分为6h、12h、24h、72h、7d,5个亚组.Sham组只做左颈总动脉分离.HIBD组,法舒地尔组做左侧颈总动脉永久性结扎及缺氧处理后,分别腹腔注射生理盐水和法舒地尔（10mg/kg）.采用免疫组化法检测海马区NF200的表达.结果：Sham组：可见NF200有微量表达,各组间无统计学意义.HIBD组：NF200阳性细胞在造模6h出现表达,12h开始下降,24h降到最低,此后逐渐升高.与Sham组NF200阳性细胞数比较差异有统计学意义（P＜0.01）.法舒地尔治疗组各时间点NF200的表达均高于HIBD组,差异有统计学意义（P＜0.01）.HIBD组和法舒地尔组阳性细胞数明显多于Sham组,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论：法舒地尔可能通过抑制Rho/Rock通路促进轴突再生和修复进而使NF200的表达增加.     

法舒地尔对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:观察法舒地尔对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响,探讨其作用机制.方法:用0.1%的Ⅰ型胶原酶消化分离HUVECs,加入内皮细胞完全培养基中培养,采用胰蛋白酶进行消化传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态并进行免疫组织化学鉴定.将HUVECs随机分为对照组(内皮细胞培养基培养)、LPS组(内皮细胞培养基+0.1 μg/mL LPS)和法舒地尔组(内皮细胞培养基+0.1 μg/mL LPS+3.275 μg/mL法舒地尔),Western blot法检测RhoA、ROCK2、p-ERM蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测RhoA、ROCK2和p-ERM mRNA表达量.结果:原代培养的内皮细胞在接种后24 h后完全贴壁生长,第3天融合呈铺路石样镶嵌排列,免疫组织化学检测可见第Ⅷ因子相关抗原阳性反应,证实为内皮细胞.LPS组RhoA、ROCK2和p-ERM蛋白及基因表达水平均显著高于对照组(P<0.01);而法舒地尔组ROCK2和p-ERM蛋白及基因表达均低于LPS组(P<0.05~P<0.01),但2组RhoA蛋白和基因表达水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论:Rho/ROCK/ERM通路在LPS诱导的HUVECs细胞骨架改变中起重要作用,法舒地尔可拮抗LPS诱导的骨架蛋白重排等HUVECs损伤,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路活化有关.     

压力负荷心力衰竭大鼠心肌细胞内Rho/Rho激酶的表达及药物干预

目的探讨升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭大鼠心肌细胞内Rho／Rho激酶的表达及法舒地尔(fasudil)——Rho／Rho激酶拮抗剂对心力衰竭的影响。方法制备升主动脉缩窄大鼠心力衰竭及假手术组(S组)模型。将升主动脉缩窄术后Wistar雌性大鼠随机分为2组，一组为心力衰竭组(H组)，给予生理盐水0．1ml。腹腔注射，每日2次：一组为fasudil治疗组(F组)，治疗组给予fasudil 5mg／Kg，腹腔注射，每日2次；治疗4周。H组、F组及S组每组各10只大鼠。观察各组大鼠各项指标变化。结果H组鼠心肌细胞RhoA，Rho激酶mRNA表达显著增高，F组心肌细胞RhoA mRNA，Rho激酶mRNA表达下降。结论心肌细胞RhoA、Rho激酶表达与充血性心力衰竭密切相关，法舒地尔可有效降低心肌细胞内RhoA mRNA，Rho激酶mRNA表达，缓解心力衰竭症状，可能为一种新的、有效的治疗心力衰竭的血管扩张剂。     

法舒地尔对心肌急性梗死大鼠心肌组织Bc1-2和Bax表达及血流动力学功能影响

目的探讨法舒地尔对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌组织Bc1-2、Bax表达及血流动力学功能影响。方法选取雄性Wistar大鼠,结扎其左前降支制作AMI模型,将术后24h存活的大鼠随机分为治疗组和AMI组。另随机选取10只大鼠作为假手术组,只在其左前降支下穿线不结扎。治疗组给予法舒地尔5mg/kg腹腔注射,每日2次;AMI组和假手术组给予等量生理盐水。4周后分别测其血流动力学指标左心室收缩压(LVSP),左心室舒张末压(LVEDP),左心室内压最大上升和下降速率(+dp/dtmax、-dp/dtmax);RT-PCR法测定Rho激酶mRNA的表达;免疫组织化学方法测定凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达的变化。结果AMI组大鼠血流动力学指标、心肌组织Rho激酶mRNA、凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达与假手术组相比,差异均有显著性(F=14.79～178.79,q=4.85～24.95,P<0.01)。与AMI组相比,治疗组大鼠血流动力学指标改善,心肌组织Rho激酶mRNA表达减少,凋亡相关蛋白Bcl-2表达增加,Bax表达减少,差异均有显著性(q=3.20～15.11,P<0.05、0.01)。结论Rho激酶参与了AMI后心肌细胞凋亡及心力衰竭的进展,法舒地尔通过抑制Rho激酶的表达减少细胞凋亡,保护缺血心肌,延缓心力衰竭进程。     

法舒地尔对高糖培养肾小管上皮细胞增殖和纤维化的影响#br#

目的：探讨法舒地尔（Fasudil）对高糖培养的肾小管上皮细胞（HK-2）增殖和纤维化的影响。方法：将HK-2细胞分为正常对照组（NG组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L）、高张组（HM组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L+甘露醇54.5 mmol/L）、高糖组（HG组,葡萄糖浓度60 mmol/L）、高糖+小剂量法舒地尔干预组[FA（5）组,D-葡萄糖60 mmol/L+法舒地尔5μmol/L]、高糖+中剂量法舒地尔干预组[FA（10）组,D-葡萄糖60 mmol/L+法舒地尔10μmol/L];⑥高糖+大剂量法舒地尔干预组[FA（20）组,D-葡萄糖60 mmol/L+法舒地尔20μmol/L]。四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定HK-2细胞增殖;免疫共沉淀法检测p-MYPT1-Thr853;Western印迹法检测结缔组织生长因子（CTGF）的表达;ELISA法检测细胞培养上清液转化生长因子β1（TGF-β1）和纤维连接蛋白（Fn）的含量。结果：与NG组比,HG组HK-2细胞出现增殖增加,p-MYPT1-Thr853、TGF-β1、CTGF和Fn的表达增加。与HG组比,FA（5）组、FA（10）组、FA（20）组均抑制了HK-2细胞的过度增殖,p-MYPT1-Thr853、TGF-β1、CTGF和Fn的表达均减少。结论：法舒地尔可能通过抑制Rho激酶活性抑制高糖培养的肾小管上皮细胞增殖和纤维化。     

Rho激酶和自噬在法舒地尔抗心肌缺血/再灌注损伤中的作用

目的探讨自噬在法舒地尔（Fasudil）抑制Rho激酶心肌保护中的变化,并分析其作用及可能机制。方法离体大鼠心脏 Langendorff装置灌流,结扎冠状动脉左前降支30 min模拟局部心肌缺血,松开结扎线恢复灌流120 min复制心肌缺血/再灌注 （ischemia/reperfusion, I/R）模型。实验分3组：I/R组、法舒地尔（Fasudil）组、和Fasudil+自噬抑制剂渥曼青霉素（Wort）组。连续 记录左心室动力学变化,收集再灌注5、10 min冠脉流出液测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）含量;RT-PCR检测自噬 相关基因Atg5、Beclin1和凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA表达的变化,Western blotting检测caspase 3的表达变化。结果与I/ R组比,Fasudil使左心室发展压、左心室内压最大上升及下降速率、左心室做功明显得到改善,降低复灌期冠脉流出液中LDH 的释放,Atg5、Beclin1 mRNA表达增加,Bcl-2/Bax mRNA升高,caspase 3蛋白表达降低。自噬抑制剂Wort减弱了法舒地尔的 保护作用,抑制了心室动力学指标的恢复,LDH释放增多,Atg5和Beclin1 mRNA表达降低,Bcl-2/Bax降低,caspase 3蛋白表达 升高。结论抑制Rho激酶心肌保护作用中诱导了自噬的发生,且自噬起到保护心肌的作用,可能与减少细胞凋亡有关。     

法舒地尔对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的影响

目的 观察特异性Rho激酶抑制剂法舒地尔对载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠动脉粥样硬化斑块进展的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 8周龄ApoE-/-小鼠高脂饲料喂养12周后给予法舒地尔干预,12周后结束实验。将ApoE-/-小鼠随机分为三组（n=10）：对照组（饮用水）、法舒地尔低剂量组（30 mg•kg-1•d-1）和法舒地尔高剂量组（100 mg•kg-1•d-1）。在实验结束时,测量小鼠体质量、血压及血脂水平;对头臂干动脉粥样硬化病变进行病理学检查;化学发光法及组织荧光法检测小鼠胸主动脉超氧阴离子和活性氧（ROS）。结果 法舒地尔干预对ApoE-/-小鼠体质量、收缩压及血脂水平均无明显影响。与对照组相比,法舒地尔高剂量组头臂干动脉粥样硬化斑块面积和动脉内—中膜厚度（IMT）分别减少54%（P<0.01）和42%（P<0.05）。法舒地尔干预使ApoE-/-小鼠胸主动脉原位ROS的生成较对照组明显减少（P<0.01）;法舒地尔高剂量组胸主动脉的超氧阴离子产量低于对照组（P<0.05）。结论 阻断Rho激酶可抑制ApoE-/-小鼠头臂干动脉粥样硬化斑块的进展,其作用独立于血压和血脂水平,可能与抗氧化应激有关。     

法舒地尔对急性氧化乐果中毒大鼠心肌损害的保护作用

目的研究法舒地尔对急性氧化乐果中毒大鼠心肌损害的保护作用。方法将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、阿托品组和法舒地尔组（每组n=10）,采用腹腔注射氧化乐果制备急性有机磷农药中毒模型,染毒后给予阿托品或阿托品＋法舒地尔的不同治疗,观察各组大鼠存活状况、心肌病理学变化和心肌细胞凋亡情况。结果与对照组比较,阿托品组和法舒地尔组大鼠心肌病理损害明显,心肌细胞凋亡显著增加（P〈0.01）;但与阿托品组比较,法舒地尔组存活率较高;心肌病理损害较轻,心肌细胞凋亡显著减少（P〈0.01）。结论法舒地尔对急性氧化乐果中毒大鼠的心肌损害有保护作用。