MicroRNA-199a通过缺氧诱导因子1α抑制胃癌细胞上皮间充质转化

目的 探讨微小RNA-199a(miR-199a)调节缺氧诱导因子-1a(HIF-1α)表达对缺氧状态下胃癌细胞上皮间充质转化(EMT)的影响及可能的机制.方法 低氧处理胃癌细胞24 h,通过转染si-HIF-1α和miR-199a mimic,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-199a的表达水平,蛋白质印迹法(Western blotting)检测HIF-1α及相关EMT蛋白的变化,镜下观察胃癌细胞形态.结果 低氧处理后,能下调miR-199a mRNA表达,上调HIF-1α和间叶细胞标志蛋白表达,下调E-钙黏隶(E-cad-herin)蛋白表达.转染miR-199a mimic后能抑制HIF-1α的蛋白表达,转染si-HIF-1α和miR-199a mimic后能部分逆转低氧的作用,抑制EMT过程的发展.结论 miR-199a可能通过降低HIF-1a的表达抑制缺氧状态下胃癌细胞的EMT过程的发生.     

MiR-34a介导mTOR/4E-BPmir信号通路对食管癌细胞凋亡作用机制研究

目的:探究MiR-34a介导mTOR/4E-BP1信号通路对食管癌细胞凋亡作用机制研究。方法:在ATCC细胞库购买食管癌细胞株,随机分为3组,第一组,miR-34a组(miR-34a组):通过转染方法将miR-34a mimics转染到食管癌细胞中;第二组,食管癌组(EC组):单纯食管癌细胞株不做其他处理,正常培养;第三组,空转组(ID组):将miR-34a阴性对照转染到食管癌细胞株中。通过qRT-PCR法、TUNEL法、cck-8法、Westernblot法检测食管癌细胞中miR-34a mRNA的表达含量、凋亡情况、增殖情况、mTOR/4E-BP1的蛋白含量的差异性来探究MiR-34a介导mTOR/4E-BP1信号通路对食管癌细胞凋亡作用机制研究。结果:qRT-PCR检测结果显示,EC组食管癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最低,miR-34a组食管癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最高,miR-34a组与ID组、EC组相比较miR-34a mRNA含量显著上升,说明转染成功(P<0.05)。TUNEL检测结果显示EC组食管癌细胞凋亡数量最少,miR-34a组食管癌细胞大量凋亡,miR-34a组与EC组、ID组相比较细胞凋亡率显著升高(P<0.05),EC组与ID组细胞凋亡无显著差异。ID组、EC组细胞增殖OD值比miR-34a组高,组间比较具有明显差异(P<0.05),EC组食管癌细胞的增殖数量最多,miR-34a组食管癌细胞的增殖数量最少,ID组食管癌细胞的增殖情况比EC组相比无明显差异(P>0.05)。通过Western blot法,对EC组、ID组、miR-34a组食管癌细胞内的mTOR/4E-BP1蛋白进行免疫印迹,灰度显示,EC组的mTOR/4E-BP1蛋白含量最高,EC组与ID组相比较,蛋白含量相近,无显著性(P>0.05),miR-34a组蛋白含量最低,miR-34a组和EC组、ID组相比较,食管癌细胞中蛋白含量降低(P<0.05)。结论:MiR-34a可能通过抑制mTOR/4E-BP1信号通路的表达来促进食管癌细胞的凋亡。     

miR-34a对脐血间充质干细胞增殖和分化的影响

目的：探讨miR-34a对脐血间充质干细胞（MSCs）增殖和分化的影响,以及作用机制。方法将miR-34a或anti-miR-34a转染分离得到的MSCs,用notch抑制剂DAPT处理miR-34a沉默的细胞;MTT分析对细胞增殖的影响;免疫组化法分析对细胞分化的影响;RT-PCR和western检测Notch1、Hes1的表达。结果 miR-34a过表达明显抑制MSCs增殖,而沉默后细胞增殖能力明显升高（P<0.05）;此外,miR-34a过表达促进细胞NeuN阳性比率,而沉默后细胞促分化能力降低（P<0.05）。 miR-34a抑制细胞中Notch1、Hes1的表达,加入DAPT后miR-34a沉默诱导的细胞增殖能力明显下降,同时细胞分化能力增加。结论 miR-34a可通过Notch1通路来抑制脐血MSCs的增殖及促分化,提示其将成为颅脑损伤治疗中的潜在靶标。     

miR-34a在膀胱癌细胞中的表达及对细胞的增殖、迁移的影响

目的:探究在膀胱癌细胞中miR-34a的表达及对细胞的增殖、迁移的影响。方法:在ATCC细胞库购买膀胱癌细胞株,随机分为3组,miR-34a组通过转染方法将miR-34a mimics转染到膀胱癌细胞中;膀胱癌组(BC组)单纯膀胱癌细胞株不做其他处理,正常培养;抑制组(IN组)将miR-34a inhibitor转染到膀胱癌细胞株中。通过TUNEL法、CCK-8法、克隆实验、Transwell分析3组膀胱癌细胞凋亡、增殖、迁移、侵袭情况的差异性来探究在膀胱癌细胞中miR-34a的表达及对细胞的增殖的影响。结果:结果显示,IN组癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最低,miR-34a组癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最高,IN组和BC组、miR-34a组相比较miR-34a mRNA含量下降,说明转染成功(P<0.05)。IN组癌细胞凋亡数量最少,miR-34a组癌细胞大量凋亡,IN组和BC组、miR-34a组相比较癌细胞分布明显稀疏,数量明显减少(P<0.05)。组间两两比较发现IN组和miR-34a组之间OD值具有明显差异,IN组癌细胞的增殖数量最多,miR-34a组癌细胞的增殖数量最少,IN组显著高于BC组,BC组癌细胞的生长情况显著高于miR-34a组(P<0.05)。对3组癌细胞进行克隆迁移实验。由结果明显可知,IN组癌细胞迁移能力强,显微镜下细胞数量多(P<0.05),IN组和BC组、miR-34a组相比较整体迁移能力明显增强,癌细胞数量明显增多(P<0.05)。由结果明显可知,IN组膀胱癌细胞侵袭能力强,miR-34a组膀胱癌细胞显微镜下细胞数量少,侵袭能力弱(P<0.05),IN组和CO组、miR-34a组相比较,数量显著上升,整体侵袭能力增强(P<0.05)。结论:在膀胱癌细胞中,过表达的miR-34a能够抑制癌细胞生长,降低miR-34a的水平含量可以促进膀胱癌细胞的增殖。     

miRNA-376c-3p调控CASP-7表达抑制人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞生长和迁移

目的:探讨miRNA-376c-3p(miR-376c-3p)对人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞迁移、增殖和凋亡的影响及其可能的调控机制。方法:qRT-PCR法检测13例胃间质瘤患者肿瘤和癌旁对照组织中miR-376c-3p表达;将miR-376c-3p类似物(mimic)、抑制物(inhibitor)和各自阴性对照分别转染GIST-T1细胞,另设空白对照组;qRT-PCR检测转染细胞miR-376c-3p表达;然后用CCK8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移能力;通过Western Blot及qRT-PCR法检测miR-376c-3p对CASP-7(Caspase-7)表达量的影响。结果:在胃间质瘤患者癌组织中,miR-376c-3p表达水平显著降低,为癌旁对照组织的58.7%(P<0.01);qRT-PCR显示:转染miR-376c-3p mimic后,GIST-T1细胞miR-376c-3p表达明显上调(P<0.01),而转染miR-376c-3p inhibitor后表达受抑制(P<0.01);miR-376c-3p mimic转染组细胞增殖活性、迁移能力明显抑制(P<0.01),凋亡率增强(P<0.05);另外miR-376c-3p过表达后CASP-7mRNA和蛋白水平出现上调,相反地,miR-376c-3p抑制却导致CASP-7mRNA和蛋白水平下调(P<0.05)。结论:在人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞中miR-376c-3p可以间接调控CASP-7的表达,抑制细胞增殖、迁移能力,促进细胞凋亡。     

MiR-361-3p下调STC2抑制头颈部鳞状细胞癌的作用研究

目的: 探讨STC2调控HNSCC进展的作用机制。方法: HNSCC相关mRNA和miRNA通过对The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库分析整理获取。随后,通过MTT法、集落形成实验、流式细胞检测和迁移侵袭法,验证STC2下调后,对HNSCC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。再利用生物信息学数据库,预测潜在靶向STC2的miRNA。通过qRT-PCR和荧光素酶报告基因实验,对预测获取的miR-361-3p干扰STC2的表达能力进行验证。最后,通过动物移植瘤模型验证了miR-361-3p通过下调STC2对HNSCC肿瘤发挥抑制作用。结果:STC2在HSNCC细胞中高表达。在体外,下调STC2抑制HSNCC细胞的增殖、迁移和侵袭,促进HSNCC细胞的凋亡。荧光素酶报告基因实验证实miR-361-3p可能是STC2的上游调控因子。过表达miR-361-3p下调STC2,可以抑制HNSCC细胞增殖、迁移和侵袭,促进HNSCC细胞的凋亡。结论:STC2在HNSCC细胞中呈高表达。miR-361-3p负调控STC2,进而改变HNSCC的相关细胞进展。     

MicroRNA-34a通过靶基因c-Met抑制施万细胞增殖

目的:探讨坐骨神经横断后,microRNA-34a(miR-34a)对c-Met(肝细胞生长因子受体)的调控作用及对施万细胞增殖的影响。方法:采用Real-time PCR检测miR-34a和c-Met在坐骨神经横断后近侧端的表达变化;Edu染色法检测miR-34a对原代培养的施万细胞增殖能力的影响;双荧光素酶报告基因系统检测miR-34a对c-Met 3’UTR的直接靶向作用。结果:miR-34a与c-Met在坐骨神经横断后近侧端的表达呈负相关,能够抑制原代培养的施万细胞的增殖,并可直接作用于c-Met基因的3’UTR。结论:miR-34a可以直接靶向c-Met的3’UTR,从而通过下调靶基因c-Met的表达抑制施万细胞的增殖。     

miR-98靶向EZH2调控下咽癌细胞转移及其上皮-间充质转化的作用机制研究

目的 探讨miR-98在下咽癌Fadu细胞中的表达及其调控癌细胞转移及其上皮-间充质转化（EMT）的作用机制。方法 收集我院2016年10月~2021年1月临床确诊下咽癌患者的35例下咽癌组织及其28例癌旁正常组织,利用实时荧光定量PCR检测miR-98、EZH2其mRNA表达。通过转染技术下调miR-98表达,分别利用CCK-8法、Transwell和Western blot实验检测人下咽癌Fadu细胞的增殖、侵袭和上皮-间质质转化能力。通过生物信息学软件TargetScan分析miR-98的下游调控靶点,双荧光素酶报告基因实验进一步检测miR-98和EZH2之间的关系。通过转染技术下调EZH2表达,分析下调EZH2对Fadu细胞增殖、侵袭和EMT的影响。同时上调miR-98与EZH2表达,检测过表达miR-98通过EZH2对Fadu细胞转移及EMT的影响。下调或过表达EZH2后,Western blot检测Fadu细胞内JAK、p-JAK、STAT3和p-STAT3蛋白表达量。利用抑制剂AG490作用Fadu细胞,通过转染技术上调EZH2表达,检测Fadu细胞增殖、侵袭和EMT能力。结果 与癌旁正常组织相比,下咽癌组织中miR-98表达明显降低（P<0.01）,EZH2表达明显上升（P<0.01）。下调miR-98促进了Fadu细胞的增殖、侵袭与EMT;miR-98靶向EZH2,和EZH2具有负调控关系;上调miR-98通过EZH2抑制了Fadu细胞的增殖、侵袭与EMT;下调EZH2抑制了Fadu细胞转移和EMT;上调EZH2激活了Fadu细胞内JAK/STAT3通路,且抑制剂AG490作用Fadu细胞能明显抑制过表达EZH2对Fadu细胞增殖、侵袭和EMT的上调作用。结论 miR-98靶向EZH2激活JAK/STAT3通路调控下咽癌细胞转移及其上皮-间充质转化。     

红景天苷改善血管内皮舒缩功能实验研究

目的:研究低氧环境下红景天苷对血管内皮细胞舒缩功能的影响及其机制。方法:空白对照组内皮细胞暴露正常氧环境,低氧组、低氧和红景天苷干预组血管内皮细胞暴露于低氧环境,检测血管内皮细胞HIF-1α、内皮素-1、血管内皮NO合成酶基因的表达变化。同时检测采用siRNA干扰HIF-1α后内皮舒缩因子表达变化。结果:与空白对照组比较,低氧组血管内皮细胞HIF-1α、内皮素-1表达显著增加(P<0.05),而血管内皮NO合成酶表达下降(P<0.05);与低氧组比较,低氧及红景天苷干预组血管内皮细胞内皮细胞HIF-1α、内皮素-1表达受抑制(P<0.05),而血管内皮NO合成酶表达增加(P<0.05)。siRNA干扰HIF-1α显示,红景天苷通过调控HIF-1α调节内皮细胞舒缩功能(P<0.05)。结论:红景天苷通过抑制HIF-1α基因表达,抑制血管内皮收缩因子表达及促进血管内皮舒张因子表达,从而改善血管内皮舒缩功能。     

miR-34a在低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

【目的】观察miR-34a在低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用并探讨其可能的机制。【方法】原代分离和培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）,并给予3%低氧处理后,用Real-time PCR法检测miR-34a和Notch1mRNA在大鼠PASMC中的表达;低氧条件下用细胞转染法过表达和抑制miR-34a、沉默Notch1基因的表达后用EDU法观察细胞增殖情况,并用Real-time PCR和Western blot法检测细胞核增殖抗原PCNA的表达。【结果】分离和培养大鼠PASMC并给予3%低氧处理后,大鼠PASMC中miR-34a表达明显降低,且低氧48h降低较明显,组间差异有统计学意义（P<0.05）。而Notch1的表达明显增高,且48h增高较明显,组间差异有统计学意义（P<0.05）。此外,过表达miR-34a和沉默Notch1后会显著抑制低氧引起的细胞增殖,抑制miR-34a的表达后则会促进细胞增殖,且组间差异有统计学意义（P<0.05）。【结论】在低氧诱导的PASMC细胞增殖过程中miR-34a参与了PASMC的增殖过程,且可能是通过上调Notch1引起了细胞增殖。