卡托普利对缺氧复氧乳鼠心室肌细胞游离钙和钠钙交换电流的影响

 目的观察卡托普利预处理对缺氧复氧乳鼠心室肌细胞游离钙和钠钙交换电流(Na⁺/Ca²⁺exchange current,I_Na-Ca)的影响。方法建立培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。Flou-3/AM负载染色,应用流式细胞分析技术,测定细胞内钙离子浓度([Ca²⁺]_i);利用全细胞膜片钳技术,观察I_Na-Ca的变化。结果与正常对照组比较,缺氧复氧可显著增加[Ca²⁺]_i和I_Na-Ca。与缺氧复氧组比较,卡托普利呈浓度依赖性抑制缺氧复氧时[Ca²⁺]_i增加,减少I_Na-Ca的增加。但[Ca²⁺]_i和I_Na-Ca仍高于正常对照组。结论心肌细胞缺氧复氧可引起[Ca²⁺]_i的异常升高,与I_Na-Ca的异常增加有关;卡托普利预处理可能通过轻度增加I_Na-Ca及其[Ca²⁺]_i而触发心脏延迟保护作用,抑制后续缺氧复氧引起的I_Na-Ca及其[Ca²⁺]_i的异常增加。     

氧化苦参碱对豚鼠单个心室肌细胞胞浆[Ca2+]i的影响

 目的 观察氧化苦参碱对急性分离的豚鼠单个心室肌细胞内游离钙离子浓度([Ca²⁺]_i)的影响。方法 采用酶解法分离豚鼠单个心肌细胞,用钙敏感的荧光指示剂Fluo-3/AM染色,以荧光强度(FI)来代表[Ca²⁺]_i,应用激光扫描共聚焦显微技术动态监测FI的变化。结果 在静息状态下,10μmol·L^-1氧化苦参碱对[Ca²⁺]_i无明显影响;但10μmol·L^-1氧化苦参碱对60mmol·L^-1KCl介导的外钙内流却有明显抑制作用(P<0.05)。结论 氧化苦参碱对电压依赖性钙通道(VDC)具有明显抑制作用,这可能是其抗心律失常作用机制之一。     

双苯氟嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后胞浆[Ca2+]i的影响

 目的研究双苯氟嗪(Dip)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑神经细胞胞浆Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i)变化的影响。方法将400pmol的内皮素-1(ET-1)灌注到大鼠大脑中动脉附近制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,以Fura-2/AM作为钙荧光指示剂,双波长荧光分光光度法检测灌注ET-1后不同时间大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i的变化及Dip对灌注ET-1后4h胞浆[Ca²⁺]_i变化的影响,并采用TYC染色法观察了Dip对灌注ET-1后24h脑梗死范围的影响。结果灌注400pmolET-1诱发大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后,大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i明显升高,并于灌注EF-1后4h达峰值,随着再灌注时间的延长,胞浆[Ca²⁺]_i逐渐降低;Dip20,40mg·kg^-1可以明显降低灌注ET-1后4h大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i的升高(P<0.01),Dip10mg·kg^-1组虽表现出一定的降低胞浆[Ca²⁺]_i的作用,但与溶剂组比较,差异无显著性(P>0.05);对脑梗死范围的测定结果显示,Dip可以缩小脑梗死范围,其作用呈现明显的剂量依赖关系(r=0.9797,P<0.01)。结论Dip对抗脑缺血再灌注损伤后胞浆[Ca²⁺]_i升高可能是其产生神经保护作用的重要机制。     

神经节苷脂对染砷人脑皮层神经元的保护作用

 目的研究神经节苷脂对As2O3体外干预的皮质神经元的保护作用及可能机制。方法将人原代脑皮质神经细胞分为 5组,空白对照组、5 μmol·L^-1 As₂O₃干预组和5μmol·L^-1 As₂O₃加神经节苷脂50,100,200 μg·L^-1组,Fluo-3/AM荧光探针标记皮质神经元胞浆钙([Ca²⁺]i),激光共聚焦显微镜实时测定[Ca²⁺]_i的变化。磷基转移法测定细胞膜和胞浆的蛋白激酶C(PKC) 的活性。流式细胞仪检测细胞凋亡百分比。结果 5 μol·L^-1的As₂O₃,作用3 min,[Ca²⁺]_i开始升高,并随时间延长逐渐明显,As₂O₃加神经节苷脂200 μg·L^-1,作用9 min,[Ca²⁺]i才开始升高,且程度远没有As2O3组明显。5 μmol·L^-1的As₂O₃组的 PKC活化程度明显高于As₂O₃加神经节苷脂组,以细胞膜相明显。24 h凋亡率分别为:As₂O₃组78.5%,As₂O₃加神经节苷脂 200μg·L^-1组13.5%。结论神经节苷脂抑制As₂O₃引起的皮质神经元的[Ca²⁺]i升高和PKC活化,抑制细胞凋亡。并通过对细胞膜靶点的保护来实现对神经细胞的保护作用,这进一步证明砷剂最初的作用靶点是细胞膜。     

JAK,PTPs抑制剂钙拮抗剂对As2O3引起的[Ca2+]i变化的影响

 目的　研究蛋白酪氨酸激酶 (JAK)、蛋白酪氨酸磷酸酶 (PTPs)抑制剂和Ca²⁺通道阻滞剂对As₂O₃致人脑皮层神经元和白血病细胞的胞浆 [Ca²⁺]_i变化的影响。方法　Fluo-3/AM荧光探针标记胞浆游离Ca²⁺,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As₂O₃干预后胞浆[Ca²⁺]_i 的变化及JAK PTPs抑制剂和Ca²⁺通道阻滞剂对As₂O₃引起的胞浆[Ca²⁺]_i 变化的影响。结果　As₂O₃升高胞浆[Ca²⁺]_i,并被Ca²⁺通道阻滞剂不完全抑制。1μmol·L^-1的As₂O₃使NB4胞浆[Ca²⁺]_i明显增高,而对神经元胞浆[Ca²⁺]_i 影响不明显。JAK抑制剂genistein能浓度依赖性抑制As₂O₃触发的[Ca²⁺]_i 升高。给药后 280s的总抑制率均值分别为NB4:(6.7± 2.9)%,(25.6±2.5) %和(52.2±3.5)%;皮层神经元:(7.8±3.1)%,(18.1± 2.8) %和(51.3±3.3)%。结论　As₂O₃对不同细胞的胞浆[Ca²⁺]_i 升高程度不同。JAK,PTPs参与As₂O₃触发的钙池操纵性Ca²⁺内流。Ca²⁺通道阻滞剂参与了As₂O₃触发的电压门控性Ca²⁺内流。     

双参通冠方药物血清抗缺氧复氧损伤心肌细胞Ca2+超载的机制研究

目的:探讨双参通冠方药物血清对培养心肌细胞缺氧复氧损伤Ca²⁺超载的影响及其机制。方法:培养心肌细胞,建立缺氧复氧损伤模型。运用血清药理学方法研究双参通冠方药物血清对缺氧复氧损伤心肌Ca²⁺超载的影响。荧光分光光度法测定心肌细胞胞浆[Ca²⁺]i,激光扫描共聚焦显微法观察高K+及Thapsigargin诱导的细胞内Ca²⁺变化。结果:正常心肌细胞[Ca²⁺]i值较低,缺氧复氧后显著增高,高K⁺及Thapsigargin可诱导细胞内Ca²⁺的快速增多,双参通冠方药物血清能降低缺氧复氧心肌细胞Ca²⁺升高,并能抑制高K⁺及Thapsigargin所致的细胞内Ca²⁺荧光升高。结论:缺氧复氧损伤、高K⁺及Thapsigargin均可导致心肌细胞Ca²⁺增高,双参通冠方药物血清可抗心肌细胞Ca²⁺超载,其机制可能与其抑制细胞外Ca²⁺内流和促进内Ca²⁺吸收有关。     

环维黄杨星D对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用和对心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的:研究环维黄杨星D(CVB-D)对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用和对急性分离大鼠心肌细胞内游离Ca²⁺浓度的影响。方法:采用培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,测定心肌细胞搏动频率、细胞存活率、肌酸激酶(CK)的含量;应用特异性荧光指示剂Fluo-3/AM负载急性分离的大鼠心肌细胞,用激光共聚焦显微镜检测胞内游离钙的变化。结果:缺氧/复氧损伤+环维黄杨星D组(H/R+CVB-D)乳鼠心肌细胞搏动频率、细胞存活率与缺氧/复氧损伤组比较明显升高,CK含量与缺氧/复氧损伤组比较明显下降。对急性分离大鼠心肌细胞内[Ca²⁺]i逐步升高,并呈剂量依赖性;在有外钙和无外钙时,CVB-D对胞内钙的升高有显著差异(P<0.05);在无外钙并加入内罗啶孵育后,CVB-D引起的胞内[Ca²⁺]i轻度升高,但与无钙组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:环维黄杨星D对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤有保护作用,对急性分离大鼠有升高心肌细胞内游离钙离子浓度的作用,[Ca²⁺]的升高既源于内钙释放又源于外钙内流。     

小檗碱对DHF大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度的影响

目的:观察小檗碱(Ber)对舒张性心力衰竭(diastole heart failure,DHF)大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度[Ca²⁺]_i的影响。方法:Wistar大鼠腹主动脉缩窄法建立DHF模型;术后4周,模型大鼠随机分为DHF模型组,Ber高、中、低剂量组(63,42,21mg·kg^-1.d^-1)4组(n=10),另有假手术组10只。连续给药4周后,应用十六导生理记录仪测定血流动力学指标;用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)扫描用Fluo-3AM负载好的心肌细胞内的荧光强度(FI)来表示[Ca²⁺]_i。结果:模型组与假手术组比,左心室收缩压(LVSP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_max)无显著变化,左心室舒张末期内压(LVEDP)显著升高(P<0.01),左室内压最大下降速率(-dp/dt_max)显著降低(P<0.01),左室松弛时间常数(T)数值显著延长(P<0.01);心肌细胞内[Ca²⁺]_i明显增高(P<0.05)。与模型组比较,Ber高剂量组比中剂量组低剂量组更显著降低LVEDP,显著升高-dp/dt_max(P<0.01),显著缩短T(P<0.01),显著降低心肌细胞内[Ca²⁺]_i(P<0.01)。结论:Ber高剂量组可以明显改善DHF大鼠血流动力学和降低心肌细胞内[Ca²⁺]_i。     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的线粒体通路研究

 目的观察龙葵碱诱导HepG₂细胞凋亡与线粒体通路的关系。方法MTT法测定龙葵碱对HepG₂细胞的细胞毒作用;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG₂细胞形态学的影响;TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca²⁺]_i的变化。结果龙葵碱对HepG₂细胞有细胞毒作用;龙葵碱诱导HepG₂细胞形态出现凋亡形态时TMRE和Fluo-3/AM双染观察表明,龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca²⁺]_i浓度。结论龙葵碱降低膜电位,开放细胞膜PT通道,使细胞内Ca²⁺顺浓度梯度转运,从而升高细胞内Ca²⁺浓度启动细胞凋亡机制。     

蚓激酶对活化血小板[Ca2+]i、JNK1和P-选择素表达的影响

 目的 研究蚓激酶(lumbrokinase, LK对大鼠血小板内钙离子浓度（intracellular calcium concentration, [Ca²⁺]_i、c-Jun氨基末端激酶-1 (c-Jun N-terminal kinase-1, JNK1以及人血小板P-选择素(P-selection, Ps表达水平的影响,阐明LK抗血小板活化的部分机制。方法 用荧光分光光度计测定LK对大鼠血小板活化过程中胞浆[Ca²⁺]_i的影响;免疫蛋白印记方法检测LK对大鼠血小板JNK1磷酸化水平的影响;流式细胞仪测定LK对人血小板活化过程中Ps表达水平的影响。结果 LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1大鼠血小板[Ca²⁺]_i分别为（425.49±37.4 nmol·L^-1和（509.65±35.67 nmol·L^-1,与诱导组血小板[Ca²⁺]_i （555.59±39.71 nmol·L^-1相比显著降低（P<0.01,P<0.05;LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1大鼠血小板JNK1磷酸化水平分别为（0.60±0.069和（0.79±0.048,与诱导组血小板JNK1磷酸化水平（0.87±0.037相比显著降低（P<0.01,P<0.05;LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1人血小板Ps水平为（42.99±2.69和（44.72±2.09,与诱导组（49.99±3.81相比显著降低（P<0.01,P<0.05。结论 体外实验表明LK能够抑制大鼠血小板胞浆[Ca²⁺]_i升高和JNK1的磷酸化,同时也能抑制人血小板Ps的表达水平的升高,从而起到抗血小板活化作用。     

环维黄杨星D对培养的心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的研究环维黄杨星D(CVB-D)对新生大鼠心肌细胞内游离Ca     

Effect of astragalosides on intracellular calcium overload in cultured cardiac myocytes of neonatal rats

Astragalosides were the main active components from a native Chinese herb Astragalus membranaceus. Recent studies have shown that Astragalosides have a protective effect on myocardial injury in rats. The present study was designed to investigate the effect of Astragalosides on intracellular calcium overload and sarcoplasmic reticulum calcium load (SR Ca2+ load) in cultured cardiac myocytes from neonatal rats. Astragalosides (100 microg/ml) were incubated in the presence of isoproterenol (ISO) (10(-5) M) for 72 hours in cardiomyocytes. Metoprorol (10(-6) M), a beta1-selective antagonist, was cultured in the same condition as Astragalosides. The result showed that intracellular calcium concentration ([Ca2+]i) and SR Ca2+ load increased in ISO-treated cardiac myocytes as compared to control (P < 0.01). Astragalosides prevented ISO-induced increase in [Ca2+]i and SR Ca2+ load. Metoprolol also inhibited those increase. The mRNA expression and activity of sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase (SERCA) were enhanced following ISO treatment in cardiac myocytes, and these increases were inhibited by Astragalosides or metoprolol (P < 0.05). The decrease of superoxide dismutase (SOD) activity and the elevation of intracellular maleic dialdehyde (MDA) were observed after ISO treatment in cardiac myocytes. Both Astragalosides and metoprolol restored the SOD activity and reduced the level of MDA. We conclude that Astragalosides have the effects on reducing [Ca2+]i and SR Ca2+ load, enhancing free radical removal and decreasing lipid peroxidation in ISO-treated cardiomyocytes, which might account for their protective effect on myocardial injury.     

三七总皂苷对AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的影响

目的:研究三七总皂苷对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌细胞凋亡的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,通过MTT法观察三七总皂苷对培养心肌细胞活力的影响;AO荧光染色观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡,Fluo3荧光探针标记测定钙离子荧光强度。结果:AngⅡ(10^-7mol·L^-1)孵育48h后心肌细胞凋亡明显多于对照组;三七总皂苷(25,50,100mg·L^-1)组心肌细胞活力显著高于AngⅡ组;三七总皂苷(50mg·L^-1)组AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡率明显低于AngⅡ组;三七总皂苷(50mg·L^-1)组心肌细胞内钙超载明显轻于AngⅡ组。结论:三七总皂苷对AngⅡ诱导的细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制心肌细胞内钙超载有关。     

Protective effects of effective ingredients of Danshen(Radix Salviae Miltiorrhizae) and Honghua(Flos Carthami) compatibility after rat hippocampal neurons induced by hypoxia injury

OBJECTIVE: To investigate the effective ingredients of Danshen(Radix Salviae Miltiorrhizae) and Honghua(Flos Carthami)(Danhong) on protective properties towards neonatal rat hippocampal neurons under hypoxia condition.METHODS: Primary culture of neonatal rat hippocampal neurons was used to model hypoxia damage on the hippocampus. Methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) assay and preliminary experiments were conducted to identify the four effective ingredients of Danhong, along with the injection of positive drug onto hippocampal neurons at a non-toxic dosage level. The cultured cells were randomly divided into 12 groups: the normal group, model group,positive drug control group and nine compatibility groups of the four effective ingredients. Different test methods were applied to determine lactate dehydrogenasein(LDH), total superoxide dismutase(T-SOD), malondialdehyde(MDA), 6-keto prostaglandin F_(la)(6-keto-PGF_(1 a)), thromboxane B_2(TXB_2),mitochondrial membrane potential(MMP), free calcium ions concentration([Ca~(2 +)]i) and early onsetcell apoptosis.RESULTS: Different compatibility groups could inhibit the content of LDH and intracellular calcium overload, increase activity in T-SOD, decrease level of MDA and TXB2, improve level of 6-keto-PGF1 aand MMP, and prevent the early onset cell apoptosis.CONCLUSION: The compatibility of four effective ingredients of Danhong had protective effect toward hippocampi hypoxia. The mechanism might be related to inhibit oxidative stress damage and cell apoptosis, resist thrombosis, and reduce the intracellular calcium ion of overload.     

芳香新塔花黄酮抗氧化活性及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的 探讨芳香新塔花黄酮(ZCF)的抗氧化活性,以及对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响.方法 采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH自由基)清除法测定ZCF的自由基捕获清除能力.体外培养原代SD乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧-复氧损伤模型,用MTT法测定药物对心肌细胞存活率的影响,测定给药后丙二醛(MDA)的变化.结果...     

丹参酚酸B抑制TLR4-NFκB-TNFα炎症损伤通路防治心肌细胞的缺氧损伤

目的:探讨TLR4-NFκB-TNFα损伤通路和HSP70在体外缺氧培养心肌细胞中的变化规律以及丹参酚酸B的调节作用。方法:分离纯化出生1～3天Wistar乳鼠心肌细胞并复制体外缺氧培养心肌细胞模型。丹参酚酸B(SalB)大、中、小剂量浓度分别为10-5mol.L-1、10-6mol.L-1和10-7mol.L-1并在缺氧培养前6h进行干预。细胞爬片免疫组化法检测tool样受体4(TLR4)和核因子κB(NFκB)蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)和热休克蛋白70(HSP70)的浓度,分光光度计法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果:与正常组比较,缺氧培养6h后心肌细胞上清液中MDA、LDH、TNFα含量均显著升高(3.71±0.84)VS(1.78±0.56)(,561.41±129.31)VS(36.80±10.22)(,89.39±21.65)VS(49.42±4.16),P<0.055或P<0.051);心肌细胞TLR4和NFκB蛋白的表达量也显著升高(P<0.055或P<0.051)。与单纯缺氧培养组比较,丹参酚酸B大剂量组MDA含量显著下降(1.94±0.49)VS(3.71±0.84),P<0.051;大、中、小剂量组LDH含量均显著下降(P<0.051);大、中剂量组TNFα含量显著下降(P<0.055);丹参酚酸B大、中、小剂量组NFκB及TLR4蛋白的表达面积或强度均有明显的下降(P<0.055或P<0.051)。结论:TLR4-NFκB-TNFα炎症通路在缺氧培养6h后即明显激活,该通路的激活在缺氧损伤初期(6h内)是不依赖HSP70存在的。丹参酚酸B预防给药对缺氧培养的体外心肌细胞炎症损伤有明显的保护作用。该作用可能与抑制TLR4-NFκB-TNFα炎症通路有关。     

红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用

目的 :以SH-SY5Y细胞缺氧 /缺糖损伤为模型 ,观察红景天苷对神经细胞保护的作用。方法 :流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率 ,用试剂盒显色法测定LDH的含量。结果 :缺氧 /缺糖损伤 2h可诱导神经细胞凋亡和坏死 ,分别为 18.5 9% (P<0.01)和 4 .94 % (P<0.01)。形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚 ,核碎裂 ,凋亡小体产生 ,并显著增加细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度和LDH的释放 ,分别为 8.46nmol·L^-1(PP<0.01)和 16 .5 9% (P<0.01) ,并随缺氧 /缺糖损伤时间的延长而明显增高 ;红景天苷 (1～ 3μmol·L^-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,减少LDH的释放 ,其作用随剂量增加而作用增强。结论 :红景天苷具有抑制SH-SY5Y细胞凋亡的作用 ,可对神经细胞起到保护作用 ,这种作用可能与其降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度有关。     

冬凌草甲素注射剂诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制研究

目的研究冬凌草甲素注射剂诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及与细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的关系。方法 MTT法检测冬凌草甲素注射剂对SGC-7901细胞的细胞毒活性;倒置显微镜观察冬凌草甲素注射剂对细胞形态学的影响;流式细胞术测定细胞凋亡率;激光共聚焦显微术检测SGC-7901细胞[Ca2+]i的变化;JC-1单染,激光共聚焦显微术检测SGC-7901细胞中线粒体膜电位的变化。结果冬凌草甲素注射剂对SGC-7901细胞的IC50为21.74μmol/L;作用48 h后,细胞生长密度变疏,细胞皱缩,其中冬凌草甲素注射剂高浓度组大部分细胞破碎。冬凌草甲素注射剂5.5、11、22μmol/L作用24 h后SGC-7901细胞凋亡率分别为7.07%、18.57%、22.96%;钙离子荧光强度高于对照组;线粒体膜电位荧光强度显著低于对照组。结论冬凌草甲素注射剂通过升高SGC-7901细胞[Ca2+]i诱导细胞凋亡。