Caspases在视黄酸诱导pRARE4-IFNα转染肿瘤细胞凋亡中的作用

目的探讨视黄酸(RA)及其诱导的外源性α-干扰素(IFNα)抗肿瘤作用与半胱氨酸蛋白酶(caspase)的关系。方法含视黄酸反应元件(RARE)的IFNα表达载体(pRARE4-IFNα)，转染肿瘤细胞并证实外源性IFNα基因的表达受RA的诱导后，分析了细胞增殖功能、细胞DNA梯形带，caspase-1、3基因表达，caspase-3活性以及caspase-3特异性抑制剂(DEVD-CHO)对RA和／或IFNα诱导细胞凋亡的抑制作用。结果对RA敏感的HL60细胞和caspase-3基因缺失的MCF-7细胞经RA处理后，增殖能力减弱，出现明显的DNA梯形带，caspase-1基因表达上调节，HL-60细胞caspase-3基因表达上调节，活性升高，DEVDCHO可拮抗RA引起的HL-60细胞caspase-3活性升高，并部分削弱RA引起的细胞增殖抑制和凋亡。结论Caspase-3在RA诱导的细胞凋亡中有重要作用，同时，RA可能通过其它途径诱导caspase-3基因缺失细胞的凋亡。     

二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞增殖与分化功能的影响

目的研究二十碳五烯酸 ( eicosapentaenoic acid,EPA)及其联合视黄酸 ( retinoic acid,RA)对白血病细胞增殖与分化功能的影响。方法采用 MTT法测定细胞增殖功能 ,NBT还原实验鉴定细胞分化 ,高效液相色谱法分析细胞内 RA代谢。结果与对照组相比 ,EPA组细胞增殖抑制率为 2 4 .3 8% ,RA组为 3 5 .74 % ,EPA+ RA组为 4 2 .75 % ;NBT还原实验 ,EPA+ RA组 OD值约为对照组的 5 .9倍 ,而 RA组为 2 .6倍 ,EPA组为 1.3倍 ;分析 HL- 60细胞及其培养介质中 RA含量 ,发现 EPA+ RA组高于 RA组。结论 EPA可抑制 HL- 60细胞增殖和诱导其分化 ,与 RA联合应用能明显增强 HL- 60细胞的增殖抑制及诱导分化效应 ,这种联合效应可能与 EPA减缓 HL - 60细胞内 RA的代谢相关。     

二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞增殖与

目的研究二十碳五烯酸(eicosapentaenoicacid,EPA)及其联合视黄酸(retinoicacid,RA)对白血病细胞增殖与分化功能的影响.方法采用MTT法测定细胞增殖功能,NBT还原实验鉴定细胞分化,高效液相色谱法分析细胞内RA代谢.结果与对照组相比,EPA组细胞增殖抑制率为24.38%,RA组为35.74%,EPA+RA组为42.75%;NBT还原实验,EPA+RA组OD值约为对照组的5.9倍,而RA组为2.6倍,EPA组为1.3倍;分析HL-60细胞及其培养介质中RA含量,发现EPA+RA组高于RA组.结论EPA可抑制HL-60细胞增殖和诱导其分化,与RA联合应用能明显增强HL-60细胞的增殖抑制及诱导分化效应,这种联合效应可能与EPA减缓HL-60细胞内RA的代谢相关.     

二十碳五烯酸联合视花酸对HL—60细胞增殖与分化功能的影响

目的 研究二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）及其联合视黄酸（retinoic acid,RA）对白血病细胞增殖与分化功能的影响。方法 采用MTT法测定细胞增殖功能,NBT还原实验鉴定细胞分化,高效液相色谱法分析细胞内RA代谢。结果 与对照组相比,EPA组细胞增殖抑制率为24.38%,RA组为35.74%,EPA RA组为42.75%;NBT还原实验,EPA RA组OD值约为对照组的5.9倍,而RA组为2.6倍,EPA组为1.3倍;分析HL-60细胞及其培养介质中RA含量,发现EPA PA组高于RA组。结论 EPA可抑制HL-60细胞增殖和诱导其分化,与RA联合应用能明显增强HL-60细胞的增殖抑制及诱导分化效应,这种联合效应可能与EPA减缓HL-60细胞内RA的代谢相关。     

SU11248对白血病细胞HL-60增殖及凋亡作用的实验研究

目的:探讨新型抗肿瘤药物苹果酸舒尼替尼(SU11248)对白血病细胞HL-60的生物学效应的影响及其作用机制。方法:应用MTT法检测SU11248对HL-60细胞增殖能力的影响;用AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;用流式细胞技术分析细胞的DNA倍体及细胞周期变化;用凝胶电泳分析DNA片段化;以Western blot法检测2.0μg/ml SU11248作用HL-60后bcl-2、bax、caspase-3蛋白水平的变化。结果:SU11248可明显抑制HL-60细胞增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为2.00μg/ml。SU11248可促进细胞凋亡,并呈剂量依赖性;能将HL-60细胞阻滞于G0/G1期,并呈时间依赖性;诱导HL-60细胞呈典型的DNA梯带;SU11248作用后bcl-2蛋白表达随时间依赖性降低,caspase-3蛋白表达升高,bax蛋白表达无明显变化。结论:SU11248能抑制HL-60细胞增殖,诱导其凋亡,调节bcl-2家族蛋白的表达,并裂解caspase-3是其可能作用机制之一。     

Caspase-3 mRNA反义核酸对γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡及caspase-3表达的抑制

为进一步研究caspase-3在γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡中的作用，探索细胞凋亡过度疾病基因治疗的新途径，本实验将我们初选的两条caspase-3 mRNA反义寡核苷酸(ASODN-1，针对5′-非编码区；ASODN-2，针对翻译起始区)用脂质体转染入HL-60细胞，10Gy γ-射线照射诱导细胞凋亡，     

视黄酸依赖Fas/RARα融合基因转染HL-60细胞启动的凋亡效应研究

目的：检测视黄酸依赖Fas／RARα表达载体转染HL-60细胞启动的凋亡效应。方法：成功构建视黄酸依赖Fas／RARα表达载体，用脂质体转染HL-60白血病细胞，经四甲基偶氮唑盐[3-(4，5-dimethylthiaol-2-yl)-2，5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]、流式细胞、DNA梯形带和透射电镜等方法观测视黄酸处理后细胞凋亡效应的发生。结果：以一定剂量的视黄酸处理HL-60后，细胞增殖受抑，呈凋亡性变。结论：视黄酸及其依赖的融合基因表达可协同诱导HL-60细胞发生凋亡效应。     

视黄酸依赖反义cyclin D1对HL-60细胞分化效应研究

目的 检测视黄酸(Retinoic acid，RA)依赖反义cyclin D1表达载体转染HL-60细胞后启动的诱导分化效应，并探讨其分子机制。方法 成功构建视黄酸依赖反义cyclin D1表达载体，以脂质体转染HL-60白血病细胞，经NBT还原实验、免疫荧光检测CD14表面抗原表达、RT-PCR以及Western blot等方法观测视黄酸处理后细胞分化效应的发生以及Rb基因的mRNA和蛋白表达水平的改变。结果 反义eyelin D1转染和未转染的HL-60细胞经RA处理后，NBT还原能力明显增强、CD14表面抗原表达显著增加，Rb基因的mRNA和蛋白表达水平均有所降低，其中，以反义cyclin D1转染细胞经RA处理后变化更为明显。结论 RA及其诱导的反义cyclin D1可协同诱导HL-60细胞分化成熟，下调Rb基因表达可能是其分子机制之一。     

香菇多糖在体外对白血病HL-60细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:研究香菇多糖在体外对人白血病HL-60细胞凋亡的调节作用及其对PI3K/AKT信号通路的影响。方法:分别用浓度为0 mg/L、15 mg/L、30 mg/L和45 mg/L的香菇多糖作用于体外培养至对数期的HL-60细胞,24 h、48 h和72 h后用MTT法检测香菇多糖对HL-60细胞活力的抑制作用。用流式细胞术检测香菇多糖对HL-60细胞凋亡的影响,Western blot检测cleaved PARP、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8、cytochrome C、PI3K、AKT和p-AKT的蛋白水平。用浓度为5 mg/L的PI3K抑制剂LY294002处理HL-60细胞72 h后,检测细胞的凋亡情况。结果:香菇多糖(15 mg/L、30 mg/L和45 mg/L)作用24 h、48 h和72 h后,HL-60细胞的活力受到抑制(P0.05),且具有浓度依赖性和时间依赖性。香菇多糖(15 mg/L、30 mg/L和45 mg/L)作用72 h后,以浓度依赖性的方式促进HL-60细胞的凋亡(P0.05)。30 mg/L香菇多糖诱导HL-60细胞凋亡过程中,cleaved PARP、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3及胞浆cytochrome C的蛋白水平随着处理时间的延长而明显升高,而caspase-8没有变化(P0.05);PI3K、AKT和p-AKT的蛋白水平随着香菇多糖浓度的增加而明显降低(P0.05)。PI3K通路抑制剂LY294002处理HL-60细胞与香菇多糖处理产生类似的凋亡效果(P0.05)。结论:香菇多糖可通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导白血病HL-60细胞凋亡。     

硫化砷诱导HL-60细胞凋亡中端粒酶活性和hTERT mRNA表达的改变

目的：探讨硫化砷在诱导急性非淋巴细胞白血病(APL)细胞株HL-60凋亡的同时，对端粒酶活性的影响及作用机制。方法：采用PCR—ELISA法测定端粒酶活性；半定量RT—PCR检测hTERT mRNA的表达；流式细胞仪分析细胞周期、细胞凋亡及CD11b表达。结果：用0．3～0．6mg/L的硫化砷作用72h，不能诱导HL-60细胞凋亡，将剂量增至1．5～3．0mg/L时，凋亡细胞的比率逐渐增高，同时伴随HL-60细胞端粒酶活性和hTERT mRNA表达受抑。随着硫化砷浓度的增高，HL—60细胞在G2／M期的比率渐增高。3．0mg/L的硫化砷作用72h，HL-60细胞CD11b的表达由1．27％升至6．07％，结论：硫化砷在诱导HL-60细胞凋亡的同时，下调其端粒酶活性。G2／M期细胞比率的增高可能与端粒酶活性降低相关。高浓度硫化砷72h可轻度诱导HL—60细胞分化。     

蝌蚪提取液对HL—60细胞相关癌基因表达的影响

目的：研究蝌蚪提取液（T871－3）对白血病细胞的作用机制。方法：利用细胞形态学观察,细胞化学、TUNEL法等技术,并采用原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术,观察T871－3诱导HL－60细胞分化和凋亡过程中c-myc,c-myb,bcl-2癌基因表达的变化。结果：1．T871－3能抑制TH－60细胞分裂增殖。2．T871－3在低浓度时诱导HL－60细胞向单核／巨噬样细胞方向分化,高浓度时诱导细胞凋亡。3．T871－3诱导HL－60细胞分化的过程中伴随着c-myc,c-myb癌基因表达的下调,诱导HL－60细胞凋亡的过程伴随着c-myc,bcl-2癌基因的表达的下调,结论：T871－3可能通过调节癌基因的表达发挥其诱导HL－60细胞分化和调亡的作用。     

The loss of IAP expression during HL-60 cell differentiation is caspase-independent

Human promyelocytic leukaemia cells (HL-60) differentiate into neutrophil-like cells that die spontaneously by apoptosis when treated with retinoic acid (RA). Inhibitors of apoptosis proteins (IAP) bind to and inhibit caspases 3, 7, and 9 activity and the induction of apoptosis. In this study, we demonstrate that undifferentiated HL-60 cells express IAP. During their differentiation, IAP expression is decreased at the mRNA and protein levels. In addition, we show that there is a corresponding increase in the expression and functional activity of active caspases 3 and 9. This activity was associated with the cleavage of XIAP, NAIP, and cIAP-2. Most importantly, we demonstrate that blocking caspase activity does not alter the decrease in IAP protein expression during differentiation but prevents caspase activation, IAP cleavage, and the induction of apoptosis. This result shows that the loss of IAP expression is independent of the induction of apoptosis and is solely related to the differentiation process. However, IAP cleavage is caspase-dependent. Terminal differentiation results in an altered apoptotic phenotype that is associated with the induction of HL-60 cell apoptosis.     

Changes in susceptibility to Fas-mediated apoptosis during differentiation of HL-60 cells

The Fas-mediated pathway has been implicated as an important cellular pathway mediating apoptosis in diverse cell types. We conducted studies to examine the susceptibility to Fas-mediated apoptosis of HL-60 cells treated with differentiation-inducing factors such as dimethyl sulfoxide (DMSO), retinoic acid (RA), and 1alpha, 25 dihydroxyvitamin D3 (VD3). Although the expression of Fas antigen (Ag) and its mRNA showed a marked increase in HL-60 cells with cell differentiation, that of Bcl-2 protein and its mRNA revealed the reverse. The expression of caspase proteins such as caspases-3 and -8 was also enhanced during cell differentiation. DNA fragmentation, annexin V binding, and caspase activities increased in differentiated HL-60 cells with the addition of anti-Fas Ag antibody. These findings were more clearly demonstrated in DMSO- or RA-induced neutrophil-like cells than in VD3-induced monocyte-like cells. Therefore, susceptibility to Fas-mediated apoptosis showed an increase with differentiation of HL-60 cells, especially in the neutrophil lineage. These results suggest that the difference of susceptibility to Fas-mediated apoptosis among cell populations depends on the expression of Fas Ag, Bcl-2, and caspases. Cell maturation and susceptibility to Fas-mediated apoptosis may be linked in hematopoietic cells.     

介导RA538与反义c-myc腺病毒对肿瘤细胞的作用及其分子机理

目的　比较全反式维甲酸诱导基因 RA5 38及反义 c- myc对人胃癌细胞的生物学特性 ,并探讨其作用的分子机理。方法　采用细胞生长曲线、DNA梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪、逆转录 -聚合酶链反应、蛋白质印迹分析、裸鼠致瘤性、裸鼠皮下移植瘤模型实验等方法 ,对 RA5 38、反义 c- myc重组腺病毒在人胃癌细胞系 (SGC790 1)中的生物学作用及其分子机理进行体内外研究。结果　 RA5 38及反义 c- myc重组体腺病毒 (Ad- RA5 38及 Ad- ASc- myc)对 SGC790 1细胞生长抑制率分别为 76 .3%和 44 .1%。 DNA梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪显示 Ad- RA5 38及 Ad- ASc- myc诱导 SGC790 1细胞凋亡。它们均能抑制SGC790 1细胞 c- myc、bcl- 2、cyclin D1基因表达 ,并刺激 bax基因表达 ,对 p5 3、p16、TGase、ras基因的表达没有影响。经 Ad- RA5 38及 Ad- ASc- myc处理的 SGC790 1细胞致瘤性消失。Ad- RA5 38及 Ad- ASc- myc对裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射能有效降低肿瘤的生长速度 ,生长抑制率分别为 6 0 .7%和 6 8.9%。结论　 Ad-RA5 38、Ad- ASc- myc对胃癌细胞具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用。其作用是 c- myc、bcl- 2、bax、cyclin D1等一系列基因表达变化及其相互作用的结果 ,与 p5 3、p16、TGa     

Taxol对宫颈癌U14细胞增殖、凋亡及α2,6-SA和ST6Gal mRNA表达的影响

目的:研究泰素(Taxol)对小鼠宫颈癌U14细胞株增殖、凋亡以及α2,6-唾液酸(SA)和α2,6-唾液酸转移酶(ST6Gal)mRNA表达的影响,为进一步探讨宫颈癌Taxol化疗机制提供新思路。方法:Taxol处理U14细胞后,MTT检测Taxol对U14细胞的IC_(50)值。流式细胞术检测细胞α2,6-SA、细胞凋亡相关因子(Bcl-2、Bax、caspase8和caspase 3)、凋亡率和细胞周期改变。qPCR检测ST6Gal1和ST6Gal2 mRNA的表达。结果:与对照组相比,Taxol对U14细胞有明显的抑制作用,减弱α2,6-SA荧光强度,上调Bax表达,下调Bcl-2表达,降低Bcl-2/Bax比值,并增强caspase 8和caspase 3活性;Taxol处理显著增加U14细胞凋亡率及S期细胞和G2/M期细胞比率,此外还下调ST6Gal1 mRNA表达。结论:α2,6-SA和ST6Gal可能参与了Taxol对U14细胞细胞周期和凋亡调控的多重作用。     

视黄酸依赖反义cyclinD1 RNA表达载体的构建与鉴定

目的 构建人细胞周期素D1(CyclinD1)基因的视黄酸(Retinoic acid，RA)依赖反义RNA表达载体，为进一步在细胞内应用视黄酸诱导其表达从而发挥效应的肿瘤基因治疗奠定基础。方法 运用DNA重组技术构建含有RARE3-TK启动子的反义cyclin D1 RNA真核表达载体(pCI-neo／RARE3-TK／AScyclin D1)，经酶切、PCR以及DNA测序确认后，用脂质体方法转染HL-60细胞(人早幼粒白血病细胞系)，RA处理后，利用免疫组织化学方法检测细胞内靶基因cyclin D1的表达情况。结果 成功构建重组反义cyclin D1 RNA表达载体，与预期设计路线相符；检测DNA序列与原始片段互补，且方向相反。ATRA处理转染和未转染HL-60细胞后，cyclin D1的表达均有所下降，其中转染组细胞的表达量要明显低于未转染组。结论 本实验成功构建了视黄酸依赖反义cyclin D1 RNA表达载体；转染HL-60细胞后，反义cyclin D1的表达可受到RA的诱导调控。     

米托蒽醌对HL-60细胞的促凋亡效应

目的 :探索米托蒽醌 (MTN)促HL 6 0细胞凋亡效应及其机理。方法 :取对数生长期HL 6 0细胞 ,不同浓度MTN作用不同时间后 ,利用MTT法、透射电镜、DNA电泳、流式细胞术观察MTN对HL 6 0细胞的抑制效应、促凋亡效应及凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达情况。结果 :(1)毫微克级的MTN对HL 6 0细胞有明显的抑制效应 ,且效应具有时间、剂量依赖关系。(2 )MTN作用后的HL 6 0细胞透射电镜观察胞膜完整、出现核碎裂、凋亡小体等形态学特征。DNA电泳出现 2 0 0bp左右的梯形条带。 (3)Bcl 2、Bax蛋白表达 :MTN作用于HL 6 0细胞相同时间 ,Bcl 2蛋白及Bcl 2蛋白与Bax蛋白比值 (Bcl 2 Bax)随MTN作用时间延长而下降。结论 :MTN具有诱导HL 6 0细胞凋亡作用 ,此过程中伴Bcl 2下调和Bcl 2 Bax的降低。提示MTN可能通过Bcl 2途径诱导HL 6 0细胞凋亡     

CpG-ODN诱导白血病HL60细胞分化和凋亡的研究

目的:研究含CpG基序的寡核苷酸对白血病HL60细胞的作用。方法:设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)、不含CpG基序的寡核苷酸(nonCpG-ODN)和含甲基化CpG基序的寡核苷酸(ZpG-ODN)分别作用于白血病HL60细胞,MTT法测定HL60细胞抑制效应,硝基四氮唑蓝还原实验和细胞表面CD14分子表达状况分析HL60细胞诱导分化结果,流式细胞仪和透射电镜观察HL60细胞的凋亡现象,免疫组化检测HL60细胞后caspase3、Bcl-2和Bax的表达状况。结果:CpG-ODN对白血病HL60细胞有诱导分化和诱导凋亡作用,nonCpG-ODN和ZpG-ODN无此作用。结论:CpG-ODN可直接诱导白血病HL60细胞分化和凋亡,此为白血病免疫治疗提供了新的途径。