染色体涂染技术及其在染色体病诊断中的应用

染色体涂染（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｐａｉｎｔｉｎｇ）技术是用染色体特异性或染色体区带特异性ＤＮＡ文库作为探针池，与中期分裂相染色体（或间期核）进行荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）和染色体原位抑制（...     

荧光标记探针原位杂交技术

荧光标记探针原位杂交技术钟梅，吕亚利，张杰，陈乐真（北京解放军总医院病理科．北京１００８５３）荧光标记原位杂交技术（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ），国外曾多用于染色体异常的研究，近年来开始应用于实体肿瘤基因分...     

荧光原位杂交检测人淋巴细胞染色体数目的方法

荧光原位杂交检测人淋巴细胞染色体数目的方法顾峥张杰黄靖香陈乐真在肿瘤细胞遗传学领域中，荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓ－ｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）技术有广泛的应用价值［３］。由于人体外周血淋巴细胞染色体数目相对恒定，故在应...     

荧光原位杂交法发现一例子宫平滑肌瘤新的染色体畸变

荧光原位杂交法发现一例子宫平滑肌瘤新的染色体畸变黄浩杰，张锡然，薛妹朗，陈宜峰，许争峰，王迅美近年来荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）技术发展迅速。尤其在肿瘤细胞遗传学研究中，ＦＩＳＨ技术克服了以...     

荧光原位杂交（FISH）技术

荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｃｅｎｅｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法，探针首先与某种介导分子（ｒｅｐｏｒｔｅｒｍｏｌｅｃｕｌｅ）结合，杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料。ＦＩＳＨ具有敏感、快速、能同时显示多种颜色等优点，不但能显示于中期分裂相中，还能显示于间期核中。目前ＦＩＳＨ经不断丰富和完善。已衍生成一个技术系列，包括原位杂交显带（ＩＳＨＢ）；ＦＩＳＨ基因定位（ＦＩＳＨｍａｐｐｉｎｇ）；染色体原位抑制性杂交（ＣＩＳＳ）；染色体涂色（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｐａｉｎｔｉｎｇ）；全Ｃｏｓｍｉｄ和ＹＡＣ的ＣＩＳＳ；以及反向染色体涂色（ｒｅｖｅｒｓｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｐａｉｎｔｉｎｇ）等。本文着重叙述在这方面的进展，对ＦＩＳＨ在细胞遗传学，基因定位和基因诊断三个方面的应用情况也作了简要说明。     

荧光原位杂交检测慢性粒细胞白血病的染色体畸变

目的 检测费城染色体（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，Ｐｈ染色体）阴性，变异型Ｐｈ染色体及伴有其它染色体异常的慢性粒细胞白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ，ＣＭＬ）的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因。方法 双色荧光原位杂交技术，检测伴有８种不同的骨髓细胞染色体畸变ＣＭＬ患者的ｂｃｌ／ａｂｌ融合基因。结果 ３例变异型Ｐｈ和７例有标准型Ｐｈ的ＣＭＬ患者均为ｂｃｒ／ａｂｌ融合     

染色质纤维荧光原位杂交

染色质纤维荧光原位杂交曾赵非非苏光高春生邹颖刘国仰黄尚志杨焕明荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｅｎｅｃｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）是目前最重要的基因物理定位方法之一。但是其分辨率受到分裂期染色体高度凝聚的限制，最高分辨率约为１Ｍｂ［...     

Her-2/neu基因扩增及其蛋白表达与乳腺癌分化和转移的关系

Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ基因扩增及其蛋白表达与乳腺癌分化和转移的关系张杰陈乐真吕亚莉钟梅荧光标记原位杂交技术（ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕＨｙ－ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）曾多用于染色体异常的研究。近年，粘粒（Ｃｏｓｍｉｄ）单考贝基因探针开始...     

未培养外周血间期分子细胞遗传学研究

近年来，随着分子生物学技术的发展及制备探针技术的提高，荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎ－ｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）技术已被广泛应用于遗传学及其它相应学科中。本文选用Ｄ２１Ｚ１／Ｄ１３Ｚ１ＤｘＺ１探针与未培养的外周血间期白细胞进行荧光原位杂交来检测染色体非整倍体。结果表明：通过统计间期核中的杂交信号，能准确检出２１三体及Ｔｕｒｎｅｒ＇ｓ综合征，与常规细胞遗传学结果相符，该法省去了复杂的细胞培养过程和周期，不仅使常规的细胞遗传学得以简化，而且为产前诊断染色体非整倍体及肿瘤病因学的研究提供了捷径     

G显带染色体脱色FISH技术在识别胃癌标记染色体中的应用

目的 应用一种能快速、准确识别胃癌标记染色体来源的技术,以提高对胃癌细胞复杂染色体畸变辨认的能力。方法 采用改良的Ｇ显带染色体标本脱色后进行荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）,分别对胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１的两条标记染色体（Ｍ１和Ｍ２）和一例原发性胃癌的标记染色体（Ｍ３）进行分析。结果 显示了Ｍ１、Ｍ２和Ｍ３有复杂的染色体结构畸变：ｄｅ     

同时显示杂交信号和荧光R带的FISH技术

目的建立直接将ＤＮＡ探针定位于显示Ｒ带染色体上的简便方法。方法正常人外周血淋巴细胞培养６７小时，同时加入Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８和ＢＵｄＲ继续培养５～６小时，常规方法制片。标本浸于２×ＳＳＣ中，在距其１０ｃＭ的２０Ｗ紫外灯下７５℃照射２０分钟。此标本以生物素标记的ｃｏｓｍｉｄ和ＹＡＣ克隆以及ｐＢａｍＸ７进行原位杂交，Ａｖｉｄｉｎ－ＦＩＴＣ和Ａｎｔｉａｖｉｄｉｎ进行信号的检测与放大，ＰＩ复染。于Ｏ１ｙｍｐｕｓＢＸ６０型荧光显微镜下，通过ＷＩＢ滤光镜同时观察显示Ｒ带的染色体和杂交信号。结果在显微镜下，黄绿色杂交信号直接定位于红色并显示Ｒ带的染色体上。结论该方法可用于快速并准确地进行ＤＮＡ片段的染色体定位     

医学细胞遗传学检验的质量控制

随着医学科学的飞速发展 ,医学遗传学检验在临床诊断中的作用显得日益重要。而细胞遗传学检验是医学遗传学检验的基础 ,尤其是在细胞遗传学基础上发展起来的细胞 -分子遗传学技术比如 :荧光原位杂交 (ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉ ｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ) ,染色体涂抹 (ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｐａｉｎｉｔｉｎｇ ,ＣＰ) ,引物介导的原位标记 (ｐｒｉｍｅｄｉｎｓｉｔｕｌａｂｅｌｌｉｎｇ ,ＰＲＩＮＳ) ,比较基因组杂交 (ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ,ＣＧＨ)等均需要获得质量优…     

应用荧光原位杂交技术测定不同的染色体畸变

应用荧光原位杂交技术测定不同的染色体畸变王明荣，王秀琴，吴旻ＢｅｒｎａｒｄＰｅｒｉｓｓｅｌＰａｕｌＭａｌｅｔ染色体分析已成为产前诊断、先天性畸形诊断及癌症诊断的主要方法之一。传统的核型分析一直采用染色体显带的手段，但用单纯的显带法常难确定标记染色体、...     

用简并寡核苷酸引物构建人类染色体区带特异性探针池的技术

目的建立快速有效构建人类染色体区带特异性探针池及其文库的技术。方法显微切割人类染色体３ｐ２３－ｐ２６，３ｑ２１－ｑ２２，４ｐ１２－ｐ１６区带，用简并寡核苷酸引物－ＰＣＲ（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｅｄｐｒｉｍｅｒｅｄ－ＰＣＲ，ＤＯＰ－ＰＣＲ）扩增，并用荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）检测扩增产物来源，再将区带特异性扩增产物克隆于ｐＵＣ１９载体构建区带特异性文库，以及用α－３２ＰＡＴＰ标记的ｇＤＮＡ行菌落原位杂交。结果经ＦＩＳＨ证实，３ｐ２３－ｐ２６，３ｑ２１－ｑ２２，４ｐ１２－ｐ１６探针池均在切割相应区带出现特异性信号。其中３ｑ２１－ｑ２２获得的１．２×１０４个阳性克隆。随机分析３０个含插入片段的白色菌落，其插入片段平均约４２０ｂｐ。２２０个白色克隆菌落原位杂交示单拷贝和低度重复序列占８１％（１７８／２２０）。结论改进的显微切割结合ＤＯＰ－ＰＣＲ为人类染色体探针池及文库构建建立了一个简易、高效的方法，这将有助于基因克隆和人类基因的全序列分析。     

荧光原位杂交技术检测乳腺癌Her－2／neu基因

荧光原位杂交技术检测乳腺癌Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ基因邓永江，皋岚湘，丁华野，田玉旺，吴霞，黄晓南，谈敏我们应用荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙ－ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）技术检测了乳腺癌组织中Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ基因表达情况，...     

用荧光原位杂交技术检测乳腺癌细胞系第6号染色体长臂缺失

目的 研究１０例乳腺癌细胞系的６号染色体第臂缺失。方法 运用荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）技术,并采用３７个分布于６ｑ１２－６ｑ２７的ＹＡＣ探针和６号染色体着丝粒特异性探针,检测了１０例乳腺癌细胞系的６号染色体长臂。结果 在５例细胞系中发现６ｑ１２－６ｑ２７的大段缺失,１例发现有６ｑ２５－ｑ２７的小段缺失。在含有多个细胞亚群的两侧细胞     

肺癌胸水间期细胞遗传学异常变化的研究

目的 探讨肺癌胸水肿瘤细胞的间期细胞遗传学改变,并将其结果与传统细胞学结果进行比较。方法 用７号、１１号、１７号、Ｘ染色体着丝粒特异的ＤＮＡ探针,以２６例肺癌胸水标本进行双色荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ）结果 在１９例肺癌阳性胸水标本中,７号、Ｘ、１７号、１１号染色体出现超二倍体的病例分别为１６例（８４．２％）、１４例（７３．７％）、     

21三体患者及其双亲染色体着丝粒点研究

２１三体患者及其双亲染色体着丝粒点研究王应雄，翁亚光，吴春英，何俊琳，郑增淳染色体着丝粒点（ｋｉｎｅｔｏｃｈｏｒｅ或ｃｅｎｔｒｏｍｅｒｉｃｄｏｔｓ，Ｃｄ）位于染色体着丝粒区、并能被特殊方法染色的一对球形结构，由蛋白质和少量ＤＮＡ组成，它是细胞分裂中纺...     

脑膜瘤细胞和分子遗传学研究进展

脑膜瘤是中枢神经系统常见肿瘤，细胞遗传学研究已证实２２号染色体丢失为脑膜瘤克隆演化过程中最恒定的染色体异常，其它染色体丢失或重排的核型演化，可能与临床浸润过程有关。分子遗传学研究主要集中于２２号染色体长臂，推测２２ｑ１１－ｑ１２和ｑ１２．３－ｑｔｅｒ区域存在肿瘤抑制基因，其丢失或突变可能与脑膜瘤病因学相关。同时，癌基因ｃ－ｓｉｓ、ｃ－ｍｙｃ的过度表达可能参与诱发脑膜瘤。     

脑膜癌细胞和分子遗传学研究进展

脑膜瘤是中枢神经系统常见肿瘤，细胞遗传学研究已证实２２号染色体丢失为脑膜瘤克隆演化过程中最恒定的染色体异常，其它染色体丢失或重排的核型演化，可能与临床浸润过程有关。分子遗传学研究主要集中于２２号染色体长臂，推测２２ｑ１１－ｑ１２和ｑ１２．３－ｑｔｅｒ区域存在肿瘤抑制基因，其丢失或突变可能与脑膜瘤病因学相关。同时，癌基因ｃ－ｓｉｓ、ｃ－ｍｙｃ的过度表达可能参与诱发脑膜瘤。