3′HVR的结构多态性及其PCR指纹分析

设计了一对与３＇ＨＶＲ（Ｄ１６Ｓ８５）中重复单位ａ以及旁侧单拷贝序列互补的寡核苷酸引物，建立了直接反映重复单位变异体排序多态性的ＰＣＲ技术，即小卫星变异重复单位ＰＣＲ（ｍｉｎｉｓａｔｅｌｌｉｔｅｖａｒｉａｂｌｅｒｅｐｅａｔＰＣＲ，ＭＶＲＰＣＲ）。对１０名无血缘关系正常个体外周血白细胞ＤＮＡ样本以及１例死胎蜡块组织ＤＮＡ进行了分析。初步证实３＇ＨＶＲ内部结构具有高度的多态性，其带型类似经典的ＤＮＡ指纹图谱。结果提示，该方法有可能代替经典的ＤＮＡ指纹技术，并具有快速、简单、不需ＤＮＡ印迹杂交而易于推广，以及可以分析微量或部分降解ＤＮＡ样本的优点，特别适于法医鉴定及遗传病基因连锁诊断。     

一种普遍提高微量DNA拷贝数的方法

聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）工作中常受标本量的制约。如胚胎移植前基因诊断的单细胞、古标本、血斑、精斑等，标本来源有限，量又少，甚至单个模板ＤＮＡ分子，最多能满足１次ＰＣＲ扩增模板量的需求。类似标本的ＤＮＡ分析中，能够扩增多个靶序列片段进行ＤＮＡ多位点遗传分析，或同一靶序列重复扩增确保结果准确性，是科研和实践中很有价值的课题。针对微量模板ＤＮＡ靶片段量少，扩增产量低的缺陷，采用套式ＰＣＲ技术，可较大地提高扩增效率。但此技术过于敏感，假阳性率高，尤其仅只…     

PCR技术检测活检组织中结核杆菌DNA

ＰＣＲ技术检测活检组织中结核杆菌ＤＮＡ赵跃武银平章刘正国郝远瑞徐纪跃党伟一作者单位：河南省人民医院病理科，郑州４５０００３多聚酶链反应（ＰＣＲ）是一项有效的体外ＤＮＡ扩增技术，尤在病原体检测方面。在一些可疑的活检石蜡切片中，有时也需要借助于该技术来协...     

尿液DNA提取方法与PCR扩增产物的比较

尿液ＤＮＡ提取方法与ＰＣＲ扩增产物的比较肖莎，郭琳琅，区士欢聚合酶链反应（ＰＣＲ）是近年来建立的一种快速、敏感、特异的体外ＤＮＡ扩增技术。能否获得完整、满意的ＤＮＡ是ＰＣＲ分析的最主要的基本步骤。我们在实际工作中对尿液中的巨细胞病毒ＤＮＡ（ＣＭＶ－Ｄ...     

应用MS32单位点小卫星DNA探针检测小儿急性淋巴细胞性白血病PCR－DNA指纹

利用单位点ＰＣＲ－ＤＮＡ指纹，检测小儿急性淋巴细胞性白血病患者外周血淋巴细胞（混有白血病细胞）和粒细胞基因组ＤＮＡ中ＤＩＳ８小卫星位点上ＶＮＴＲ，并将两者进行比较，发现混有白血病细胞的淋巴细胞ＰＣＲ－ＤＮＡ指纹图中存在带型的增多和带强度的变化，表明在此位点白血病细胞的ＶＮＴＲ发生了改变。     

微量全血提取DNA及PCR扩增HLA-DRB和DQB基因方法的探讨

微量全血提取ＤＮＡ及ＰＣＲ扩增ＨＬＡ-ＤＲＢ和ＤＱＢ基因方法的探讨余进，万军梅，李明，张锐发深圳市红十字会医院深圳５１８０２９采用外周静脉血提取ＤＮＡ的方法很多；例如酚抽提法、ＴＥ缓冲液溶细胞法等。ＰＣＲ扩增ＤＮＡ片段的最大优点之一，是对模板ＤＮＡ的?..     

染色体标本DNA再利用于基因检测

染色体标本ＤＮＡ再利用于基因检测余裕炉，张思仲遗传病诊断中，常遇到患者死亡、工作调动等原因而难以重复获取ＤＮＡ样本，导致复查或进一步深入研究较为困难。聚合酶链式反应（ＰＣＲ）及其多种衍生技术，特别是使用２对或多对嵌套式引物对ＤＮＡ样本进行连续２次或多...     

套叠式（Nested）PCR检测乳汁中HBV－DNA

本文应用Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术，检测了５２例血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性（ＰＣＲ检测）产妇和１５例血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性（ＰＣＲ检测）产妇乳汁中的ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果表明：５２例阳性产妇乳汁中ＨＢＶ－ＤＮＡ经第一次扩增后，１２例ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性。经第二次扩增后，４０例阳性（阳性率７６．９％）；１５例阴性产妇乳汁中ＨＢＶ－ＤＮＡ经两次扩增后均为阴性。作者认为，Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术是检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性产妇乳汁是否排泌ＨＢＶ的简便、灵敏、特异的方法。乳汁中含有ＨＢＶ应停止哺乳。     

应用间接法原位PCR检测石蜡切片中HPV DNA

应用间接法原位ＰＣＲ检测石蜡切片中ＨＰＶＤＮＡ王剑波王伯马福成陈万录杨莉胡沛臻聚合酶链式反应（ＰＣＲ）是一种对特定的ＤＮＡ片段在体外经酶促反应进行快速扩增的技术。它是一种极其敏感的技术。间接法原位ＰＣＲ是先将待检基因在原位进行ＰＣＲ扩增，然后再用原...     

三核苷酸重复序列PCR扩增中影子带的产生及其消除的方法

目的为了消除ＰＣＲ扩增三核苷酸重复序列时产生的影子带。方法以人类强直性肌营养不良致病基因－肌张力蛋白激酶基因（ｍｙｏｔｏｎｉｎｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｇｅｎｅ，ＭＴ－ＰＫ）３′端非翻译区中的ＣＴＧ重复序列为例，主要比较了ＰＣＲ反应中单独使用ＴａｑＤＮＡ聚合酶和使用Ｔａｑ＋Ｐｗｏ混合的ＤＮＡ聚合酶对影子带产生的影响。结果实验表明ＰＣＲ反应中单独使用ＴａｑＤＮＡ聚合酶时，其ＰＣＲ产物经ＰＡＧＥ电泳，银染显色后常有影子带形成，而向ＴａｑＤＮＡ聚合酶中加入具有３′－５′外切酶活性的ＰｗｏＤＮＡ聚合酶则可完全消除影子带。结论本实验结果表明影子带产生于ＰＣＲ过程本身，而比ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有更高加工性的组合酶则有可能消除或减弱影子带。     

双链PCR产物直接测序方法介绍

双链ＰＣＲ产物直接测序方法介绍陈虹，杜晓娟，伏瑾，陈珊对ＰＣＲ产物直接测序而不事先将待测基因片段克隆到测序载体上，使ＤＮＡ序列分析的效率大大提高，是近年来发展的检测基因突变的重要方法。最近我们以人ＳＲＹ基因ＰＣＲ扩增片段为模板，使用ＴａｑＤＮＡ聚合酶...     

肺炎患儿咽拭标本中腺病毒DNA的检测

肺炎患儿咽拭标本中腺病毒ＤＮＡ的检测史金阳，刘兰青，吕绳敏，任舒月，刘庆随着分子生物学诊断技术的发展和应用，出现了核酸杂交［１］及聚合酶链反应（ＰＣＲ）［２］技术。而ＰＣＲ技术的发展和应用大大简化了目的基因片段的制备程序。我们用ＰＣＲ技术制备地高辛标...     

原位PCR及其在肿瘤研究中的应用

原位ＰＣＲ综合了ＺＰＣ的位杂交的优点，能在细胞水平检测特定的ＤＮＡ或ＲＮＡ片段。本简述了近年来在原位ＰＣＲ方法学和用于肿瘤研究中的进展。     

定量聚合酶链反应检测肝病患者血清中乙型肝炎病毒 …

目的 了解肝病患者血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的含量，以便观察临床抗病毒治疗效果及血清ＨＢＶ ＤＮＡ水平与病情及预后的关系。方法 应用荧光素标记的半巢式引物在扩增中能量转移的定量聚合酶 链反应（ＱＰＣＲ），对６３例肝功能异常的肝病患者血清进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定，并与普通ＰＣＲ及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行比较。结果 ＱＰＣＲ阳性率为８２。５４％，普通ＰＣＲ法为７１．４３％，ＥＬＩＳＡ     

微卫星DNA序列与DMD／BMD的基因诊断

在人类基因组ＤＮＡ中，存在着大量的微卫星序列，这些微卫星ＤＮＡ序列具有高度多态性，是重要的遗传标记，在基因连锁分析中具有重要的作用。目前，在ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因５＇及３＇端及基因内部，发现了多个ＣＡ：ＴＧ重复序列，具有高度的多态性，并且均可用ＰＣＲ方法进行检测；应用这些位点进行单体型分析，将大大提高非缺失型ＤＭＤ／ＢＭＤ家系中携带者的基因诊断以及产前基因诊断的可靠性及效率。     

多聚酶链反应（PCR）检测不典型结核杆菌的DNA

本文采用ＰＣＲ技术检测结核杆菌的ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ），其中临床诊断为结核或可疑结核者９例，肿瘤６例，结节病３例，淋巴结炎４例，共２２例。病理诊断确诊为不典型结核者１４例，不能除外结核者４例，结节病２例，瘤样病变２例。所有病例经抗酸染色均未查到结核杆菌。ＰＣＲ检测结果表明，２２例中１８例呈阳性（占８１．８２％），４例呈阴性。ＰＣＲ技术敏感、特异，对于不典型结核病例检查ＴＢ－ＤＮＡ片段用于辅助诊断颇     

应用PCR技术检测血清抗双链DNA抗体

人工合成一段６２核苷酸的核苷酸序列，中间２５个核苷酸为随机合成。经ＰＣＲ扩增后提供一个含有亿万种结构变异ＤＮＡ片段库供体ＤＮＡ抗体反应。阳性病人血清沉淀的特异双链ＤＮＡ片段经ＰＣＲ扩增后出现特异的阳性扩增区带。结果表明，４０例ＳＬＥ血清经ＰＣＲ检测３２例为阳性，而Ｆａｒｒ放免法１４例为阳怀，两者之间有显著差异，４０例非ＳＬＥ结缔组织病人血清，两者阳性率分别为７．５％和２．５％，两者比较无明显差异。     

TA克隆及双链DNA：测序：介绍一种快速克隆及分析PCR产物的方法

将人酸性纤维母细胞生长因子’（ａＦＧＦ’）ｃＤＮＡ的ＰＣＲ产物以ＴＡ连接方式克隆入ｐＣＲ￣（ＴＭ）ＩＩ质粒，然后采用Ｔ７和Ｓｐ６启动子特异性引物对克隆的片段以双脱氧未端终止法进行双链ＤＮＡ测序。结果表明这项技术是一种快捷而可靠的克隆及分析ＰＣＲ产物的方法     

HIV-1感染无进展与进展者HIV DNA存在状态的研究

目的 研究人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）感染无进展与进展者ＨＩＶ ＤＮＡ存在状态的特点。方法 选用位于ＨＩＶ－１ ＤＮＡ链两端的ＬＴＲ（Ｕ５）、ＬＴＲ（Ｒ）等其他部位的不同引物,应用国际上新颖的长片段聚合酶链反应（ＬＤ－ＰＣＲ）及逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）,普通ＰＣＲ（Ｔａｑ－ＰＣＲ）、免疫转印、分子杂交等技术,对ＨＩＶ－１感染者血清ＨＩＶ ＲＮＡ、外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＨＩＶ ＤＮＡ进行检测。结果 ９．１ｋｂ为全长ＨＩＶ ＤＮＡ基因片段,１２例进展者全部存在全长ＨＩＶ基因片段,其中,９例存在不完整缺损的ＨＩＶ ＤＮＡ;在１８例无进展者中,５例既存在完整又存在不完整的ＨＩＶ ＤＮＡ,其余１３例只存在不完整、缺损的ＨＩＶ ＤＮＡ。结论 完整和缺损ＨＩＶ ＤＮＡ与临床表现类型有密切关系。     

用PCR快速筛选递次截短的DNA克隆

目的为了建立一种快速、简便而准确地筛选递次截短的ＤＮＡ克隆的技术，加速对基因全长ｃＤＮＡ或ＤＮＡ大片段的测序和鉴定。方法在载体多克隆位点两侧设计引物，直接ＰＣＲ扩增插入片段，以此为基础选择系列缺失亚克隆，并与常规酶切法作比较。结果根据ＰＣＲ产物大小排序，准确地鉴定出系列缺失亚克隆，并可将ＰＣＲ产物直接用于ＰＣＲ循环测序，比酶切法分辨率高，操作步骤简化，筛选时间短。结果所建立的ＰＣＲ快速筛选法不仅是一种行之有效的鉴定方法，而且可以显著地节省时间和实验材料。该方法也可适用于其它各种质粒载体。