人卵巢腺癌多药耐药细胞株OVCAR/DDP的建立及生物学特性评价

目的:建立人卵巢腺癌多药耐药细胞株OVCAR/DDP,并评价其生物学特性。方法:采用顺铂(DDP)浓度梯度递增法,建立人卵巢腺癌OVCAR细胞株的多药耐药细胞株OVCAR/DDP,通过细胞生长曲线和群体倍增时间测定、四甲基偶氮唑盐法检测多药耐药性,蛋白印迹法检测细胞膜中P-糖蛋白表达水平,评价OVCAR/DDP的生物学特性。结果:成功建立OVCAR/DDP多药耐药细胞株。与亲本细胞OVCAR相比,OVCAR/DDP生长速度减慢,倍增期延长,其对DDP的耐药指数是OVCAR细胞的19.80倍,且对多柔比星、氟尿嘧啶、紫杉醇有交叉耐药。OVCAR/DDP细胞的细胞膜P-糖蛋白表达水平明显高于亲本细胞OVCAR(P<0.01)。结论:OVCAR/DDP细胞对DDP耐药性稳定,并呈现一定的多药耐药特性。     

人胃癌耐药细胞的建立方法及意义

目的 建立人胃癌耐药细胞,为研究人胃癌耐药细胞的耐药机制以及为耐药肿瘤细胞的治疗提供耐药肿瘤细胞模型.方法 体外培养人胃癌细胞SGC-7901,用50μmol/L顺铂多次反复冲击,对冲击4次和6次的SGC-7901分别检测对顺铂的抑制率和多药耐药基因(MDR)及多药耐药特异基因片段的表达,并计算药物对细胞的半数抑制浓度...     

姜黄素增强卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP对顺铂敏感性的研究

目的:探讨姜黄素的使用与卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP对顺铂化疗敏感性的关系。方法:采用MTT法和TUNEL法检测姜黄素、顺铂单独和联合作用时对COC1/DDP细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Smac的表达。结果:顺铂的浓度在1.25～5μg/mL时与姜黄素合用后耐药细胞生存率下降明显(P<0.05),尤以2.5μg/mL顺铂和20μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;顺铂与姜黄素联合用药与单独用药相比,凋亡率明显增加(P<0.05);联合用药与单独用药相比Bcl-2 mRNA的表达明显降低(P<0.05),Smac mRNA的表达明显增高(P<0.05)。结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,机制可能与降低Bcl-2基因的表达,增加Smac基因的表达有关。     

miR-205对人胃癌细胞株SGC7901增殖的抑制作用

摘要：目的：观察miR-205对人胃癌细胞株SGC7901增殖的影响及可能的机制。 方法：miR-205 mimics转染SGC7901细胞后,观察其增殖能力;SYBR Green I实时荧光定量PCR检测miR205的表达水平;RT-PCR检测细胞ZEB1和ZEB2的基因表达水平。 结果：与空白对照组miR-205表达的相对水平（0.000 619±0.000）及阴性片段对照组（0.001 064±0.001）相比,miR-205 mimics处理组(0.027 33±0.014)miR205表达水平明显增高（q分别为5.77和5.67,P均<0.01）,而SGC7901细胞的克隆形成能力明显下降,ZEB1和ZEB2 mRNA明显下调。 结论：miR-205可抑制胃癌细胞增殖,其机制可能与下调ZEB1和ZEB2基因表达有关,对研究胃癌分子诊断与治疗具有重要意义。     

多药耐药基因产物在胃癌中的表达及其临床意义

多药耐药(multidrug resistance，MDR)是指抗某种细胞毒药物的耐药细胞对许多结构上无关和作用机制上不同的其他细胞毒药物产生交叉抗药性，MDR基因的过表达或扩增往往导致肿瘤患者化疗失败。本文回顾分析90例胃癌的P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(glu-tathione-S-transferase-π，GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPoiso-     

ERCC1 siRNA对鼻咽癌细胞HNE-1/DDP顺铂耐药的影响及机制

目的:研究切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complement 1,ERCC1)siRNA对鼻咽癌细胞HNE-1/顺铂(cisplatin,DDP)耐药的影响及机制。方法:以qRT-PCR和Western印迹法测定人鼻咽癌细胞HNE-1/DDP和HNE-1细胞中ERCC1表达水平。人鼻咽癌细胞HNE-1/DDP转染ERCC1siRNA重组慢病毒载体和阴性对照载体,以qRT-PCR和Western印迹法测定干扰效果。用DDP处理转染ERCC1 siRNA的HNE-1/DDP细胞,MTT检测细胞增殖变化,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western印迹法检测细胞中激活型caspase-3(C-caspase-3)、激活型caspase-9(C-caspase-9)蛋白水平,同时用Western印迹法检测细胞质和线粒体中细胞色素C(cy tochromeC)蛋白水平。结果:HNE-1/DDP细胞中ERCC1表达水平高于HNE-1细胞。ERCC1siRNA可明显下调HNE-1/DDP细胞中ERCC1的表达和转录。DDP和ERCC1siRNA可以降低HNE-1/DDP细胞增殖能力和克隆形成能力,提高细胞凋亡率,促进细胞中C-caspase-3,C-caspase-9蛋白表达,提高细胞质中cytochrome C蛋白水平,降低线粒体中cytochrome C蛋白水平。DDP处理转染ERCC1 siRNA的HNE-1/DDP细胞,细胞的增殖和克隆能力下降更多,细胞凋亡率升高更多,细胞中C-caspase-3,C-caspase-9蛋白水平更高,细胞质中cytochrome C蛋白水平也更高,线粒体中cytochromeC蛋白水平下降更多。结论:ERCC1siRNA能够逆转鼻咽癌细胞HNE-1/DDP对DDP耐药,作用机制可能与激活线粒体凋亡途径有关。     

胃癌多药耐药的研究进展

胃癌为我国最常见的恶性肿瘤之一,早期发现率低,多数为进展期胃癌,单纯手术常难以根治,化疗在综合治疗中发挥了重要作用,成为治疗胃癌的主要方法之一。但化疗的效果还远不够理想,原发性或获得性多药耐药（MDR）成为阻碍化疗效果提高的主要素之一。多药耐药（MDR）是指肿瘤细胞接触一种化疗药物并产生耐药性,同时对其他多种结构和作用机制不同的化疗药物也产生耐药。因此胃癌多药耐药的机制、临床意义及耐药逆转成为肿瘤研究中的热点之一。     

SYK基因激活对人胃癌SGC7901细胞株VEGF表达的影响

目的利用去甲基化酶5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-CDR）对脾酪氨酸激酶（Syk）基因激活的作用,观察Syk基因的激活对人胃癌SGC-7901细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,从而研究Syk基因的激活对人胃癌SGC-7901细胞生长和转移的影响。方法检测用5-aza-CDR处理后的人胃癌SGC7901细胞株的生长情况、SYK基因的表达水平及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达水平,与未接触5-aza-CDR的对照组进行对比。结果经5-aza-CDR处理过的人胃癌SGC-7901细胞株的生长明显受抑;该细胞株SYK基因的表达水平较对照组明显升高,血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达水平较对照组明显减弱（P〈0.05）。结论 Syk基因的表达能够抑制人胃癌SGC-7901细胞株生长,抑制该细胞株VEGF的表达。血管内皮生长因子（VEGF）的表达抑制可能是SYK基因的激活,从而抑制该细胞株的生长和转移的机制之一。     

一个新qnr基因亚型的克隆表达及其多重耐药机制的研究

目的研究1株临床分离产酸克雷伯菌中qnr基因新亚型的生物学特性及其多重耐药机制。方法克隆表达qnr新亚型基因，并用聚合酶链反应（PCR）检测β内酰胺酶基因和Ⅰ类整合酶基因的存在情况。结果qnr基因转化子对常见氟喹诺酮类抗菌药物的敏感性较受体菌下降3—25倍，但耐药水平低于临床分离菌株4—256倍。在产酸克雷伯菌中同时检出KLUC-1型超广谱β内酰胺酶（ESBLs）、TEM-1型和OXA-30型广谱β内酰胺酶基因。结论qnr基因可以轻度增加氟喹诺酮类药物的耐药性。携带qnr基因的临床菌株同时携带多种耐药基因。     

胃癌多药耐药基因研究的现状

2．4 Topo-Ⅱ除长春新碱外对许多天然药物呈耐药，对阿霉素等亦有一定耐药，它是上述抗肿瘤药物的靶分子，使TopoⅡ减少或活性降低产生多药耐药。而对顺铂、卡铂、氟尿嘧啶、丝裂霉素无交叉耐药。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合SAHA对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/DDP的逆转作用及其机制

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对耐顺铂(DDP)的人肺腺癌细胞系A549/DDP的逆转作用及其可能的机制.方法:以A549、A549/DDP细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选出5-Aza-CdR和SAHA对A549/DDP细胞的无毒浓度(即对细胞抑制率＜10％的药物浓度),并检测出顺铂与无毒浓度5-Aza-CdR和(或)SAHA联合对耐药细胞株的半数抑制浓度(IC50)和耐药指数;采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测48 h后各组细胞耐药相关基因MDR1、LRP mRNA的表达;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况.结果:5-Aza-CdR和SAHA对A549/DDP细胞的无毒浓度分别为5μmol/L和1μmol/L,两者均可使A549/DDP细胞对顺铂的IC50值下降,单独或联合应用时逆转倍数分别为1.6、1.8和4.6倍;经5-Aza-CdR和SAHA处理后各组细胞MDR1、LRP mRNA表达均明显减弱,凋亡明显增强,且两者联合具有协同作用(均P＜0.05).结论:5-Aza-CdR和SAHA可以逆转A549/DDP细胞的DDP耐药,且两者联合具有协同作用,其作用机制可能与下调耐药相关基因MDR1、LRPmRNA的表达,减弱肺癌细胞对化疗药物的外排作用有关.     

肺耐药相关蛋白及其介导的多药耐药研究进展

肺耐药相关蛋白是一种人类主要穹窿蛋白,现已认识到,其在非Ｐ－ｇｐ介导的肿瘤细胞多药耐药中发挥重要作用,本文对肺耐药相关蛋白的分子生物学特征和生理功能及其在肿瘤细胞中过度表达所产生的临床意义作一综述。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷联合SAHA对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/DDP的逆转作用及其机制

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对耐顺铂(DDP)的人肺腺癌细胞系A549/DDP的逆转作用及其可能的机制。方法:以A549、A549/DDP细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选出5-Aza-CdR和SAHA对A549/DDP细胞的无毒浓度(即对细胞抑制率<10%的药物浓度),并检测出顺铂与无毒浓度5-Aza-CdR和(或)SAHA联合对耐药细胞株的半数抑制浓度(IC50)和耐药指数;采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测48h后各组细胞耐药相关基因MDRl、LRP mRNA的表达;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果:5-Aza-CdR和SAHA对A549/DDP细胞的无毒浓度分别为5μmol/L和1μmol/L,两者均可使A549/DDP细胞对顺铂的IC50值下降,单独或联合应用时逆转倍数分别为1.6、1.8和4.6倍;经5-Aza-CdR和SAHA处理后各组细胞MDRl、LRP mRNA表达均明显减弱,凋亡明显增强,且两者联合具有协同作用(均P<0.05)。结论:5-Aza-CdR和SAHA可以逆转A549/DDP细胞的DDP耐药,且两者联合具有协同作用,其作用机制可能与下调耐药相关基因MDR1、LRPmRNA的表达,减弱肺癌细胞对化疗药物的外排作用有关。     

A549/DDP耐药肺癌细胞系的建立及其与SP细胞的关系

目的:建立耐顺铂(DDP)人肺癌耐药细胞系A549/DDP,初步探讨耐药细胞与肿瘤SP(side population cell)细胞的关系.方法:以DDP为诱导剂,采用高浓度反复间歇诱导法诱导建立人肺癌耐药细胞系A549/DDP,用MTT法测定药物敏感性,最后将耐药细胞和亲本细胞分别行Hoechst33342染色,用流式细胞仪检测SP细胞含量.结果:成功建立DDP耐药细胞系A549/DDP,对DDP的耐药指数为5.957;耐药谱分析表明其是一个多药耐药细胞系;Hoechst33342染色分析显示:A549和A549/DDP中SP细胞含量分别为1.09%和0.31%.结论:建立了稳定的人肺癌多药耐药耐药细胞系A549/DDP,耐药细胞中SP细胞含量无明显变化.     

Wnt/β-catenin信号通路在肝癌耐药中的作用研究

目的 建立肝癌顺铂耐药细胞系,探讨Wnt/β-catenin信号通路在肝癌顺铂耐药中的作用.方法 使用顺铂逐步增加剂量法诱导人肝癌HepG-2细胞,以建立其多药耐药细胞株HepG-2/DDP;MTT细胞毒实验检测顺铂对HepG-2和HepG-2/DDP细胞的生长抑制作用;荧光定量-PCR检测β-catenin 基因的表达;基因转染双链SiRNA干扰β-catenin基因的表达;Western blot实验检测目的蛋白的表达改变.结果 成功建立了人肝癌HepG-2顺铂耐药细胞株;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对HepG-2和HepG-2/DDP细胞的IC50值分别为(2.29±0.14) μmol/L和(20.51±0.84)μmol/L(t=95.68,P＜0.01),与HepG-2细胞比较,HepG-2/DDP细胞对顺铂耐药8.96倍.荧光定量PCR结果显示:HepG-2和HepG-2/DDP细胞中β-catenin基因表达的2-△Ct值分别为0.323±0.065和0.674±0.097(P＜0.01),Western blot检测也显示β-catenin蛋白的表达在HepG-2/DDP细胞也显著高于HepG-2细胞.化学合成的靶向SiRNA可以显著下调β-catenin的表达,顺铂对照组、SiRNA靶向干扰组、SiRNA阴性干扰组HepG-2/DDP细胞的IC50值分别为(21.02±1.64)、(6.23±0.68)、(20.44±1.26) μmol/L,对照组和SiRNA靶向干扰组之间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 顺铂耐药细胞HepG-2/DDP出现了Wnt/β-catenin信号通路的激活,SiRNA干扰β-catenin基因表达可显著提高顺铂耐药细胞HepG-2/DDP对顺铂的敏感性,为克服肝癌顺铂新靶点的寻找提供了理论依据.     

耐药基因在胃癌化疗中的研究进展

胃癌是临床常见的恶性肿瘤之一，术后复发率仍然比较高（30％左右），故以化疗为主的综合治疗是预防胃癌术后复发的主要手段，但因多药耐药（MDR）的产生往往使化疗失败，MDR是恶性肿瘤细胞免受化疗药物攻击的最重要的细胞防御机制，其中有三种耐药基因P-gp、TopoⅡ、GST-π等表达在胃癌化疗中发挥重要作用。近年来的研究表明，传统化疗药物包括5-氟尿嘧啶（5-FU）、     

肺耐药相关蛋白及其介导的多药耐药研究进展

肺耐药相关蛋白是一种人类主要穹隆蛋白,现已认识到,其在非P-gp介导的肿瘤细胞多药耐药中发挥重要作用。本文对肺耐药相关蛋白的分子生物学特征和生理功能及其在肿瘤细胞中过度表达所产生的临床意义作一综述。     

MiR-520a对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭、迁移以及顺铂药物敏感性的影响

目的:探讨miR-520a在胃癌中的表达以及对胃癌细胞生物学功能的影响。方法:通过real-time PCR检测miR-520a在胃癌组织和胃癌细胞中的表达。采用慢病毒在胃癌细胞SGC7901中过表达miR-520a,在体外观察miR-520a对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移以及对顺铂(DDP)敏感性的影响。并通过异种移植瘤实验观察过表达miR-520a对胃癌细胞在裸鼠体内生长的影响。结果:与癌旁正常组织相比,miR-520a在胃癌组织中的表达明显降低。与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-520a在胃癌SGC7901细胞中的表达明显降低,且在顺铂耐药SGC7901/DDP细胞中的表达更低。miR-520a过表达能够促进SGC7901细胞凋亡,抑制细胞增殖、侵袭和迁移。miR-520a过表达促进SGC7901细胞对DDP的药物敏感性增加。异种移植瘤实验发现miR-520a过表达的细胞在裸鼠体内形成的肿瘤生长速度减慢。结论:miR-520a可抑制胃癌发生与发展,提高胃癌细胞对顺铂的敏感性。     

胃癌多药耐药基因研究的现状

胃癌为临床最常见肿瘤之一，在我国发病率及死亡率占所有恶性肿瘤之首，其化疗效果也不尽人意，主要原因是由于胃癌细胞的耐药，影响疗效。胃癌细胞的耐药性可分为灭然性耐药（Initial resistance）和继发性耐药（Secondry resistance），亦称获得性耐药（Acquired resistance）；前指胃癌细胞未接触到相关化疗药物具有耐药性，后指接触化疗药物后才产生耐药性，其中又可分为原药耐药和多药耐药两种。