人类肿瘤细胞分化中细胞周期素的表达规律及作用机制

目的：探讨诱导人类肿瘤细胞分化过程中，细胞周期素（Cyclin）的变化在细胞周期调控机制中的作用。方法：应用全反式维甲酸（ATRA）处理HL－60细胞，流式细胞仪行细胞周期分析，应用十二烷基磺酰钠－聚丙烯胺凝胶电泳（SDS－PAGE）及Western Blot检测细胞周期素D1、E的蛋白表达量改变，使用流式细胞仪检测细胞周期素D1、E、A的表达量变化及细胞周期素B的时相性改变。结果：HL－60细胞ATRA诱导后，80％左右的细胞被祖滞在G0／G1期，S期细胞减少到2．81％，WesternBlot显示，诱导后，CyclinD1表达量明显降低，CyclinE表量高。流式细胞仪检测CyclinD1、CyclinE蛋白表达变化与WesternBlot结果相同，CyclinA表达量升高，CyclinB表达特征由经放导前的非时相性表达转为诱导分化后的时相性表达。结论：细胞周期素D1、E、A、B与肿瘤细胞分化的细胞周期调控有着密切的关系。     

细胞周期素D1与甲状旁腺肿瘤

细胞周期素D1(Cyclin-D1)是与甲状旁腺肿瘤发生有关的重要分子之一。Cyclin-D1基因表达与调控在甲状旁腺肿瘤的发生中起重要作用。Cyclin-D1的表达与调控有转录水平与转录后水平两种,其影响甲状旁腺肿瘤发生的具体机制一直是研究的热点。Cyclin-D1基因的研究对甲状旁腺肿瘤的诊断治疗和提示预后有重要意义     

细胞周期素H和细胞周期素依赖性激酶7在人乳腺癌组织中的表达及其意义

目的研究人乳腺癌组织中细胞周期素H(cyclinH)和细胞周期素依赖性激酶 7(CDK7)蛋白表达以及术前化疗对其表达的影响。方法应用固定化蛋白质印迹法检测 40例乳腺癌及相应正常乳腺组织cyclinH和CDK7蛋白表达。结果乳腺癌组织cyclinH和CDK7表达水平明显高于正常乳腺组织 (t值分别为 9 5 2 4和 2 984,P <0 0 1)。Ⅲ期乳腺癌与Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌相比 ,差异有显著性 (t值分别为 6 0 3和 4 6 9,P <0 0 5 ) ;直径大于 5cm的乳腺癌cyclinH表达水平高于直径小于 2cm者 (t=4 49,P <0 0 5 )。术前行化疗的乳腺癌cyclinH蛋白表达水平明显下降 (t =6 .5 2 ,P <0 0 5 )。结论　cyclinH和CDK7在乳腺癌中呈过度表达 ,术前化疗可抑制乳腺癌cyclinH及CDK7蛋白表达     

原发性胆囊癌细胞增殖与细胞周期素E表达的关系

目的 探讨原发性胆囊癌细胞增殖与细胞周期素Ｅ表达的关系。方法 ４１例原发性胆咒０便胆囊腺瘤和１５例慢性胆囊炎石蜡包埋标本,用ＳＰ免疫组织化学方法测定ｃｙｃｌｉｎＥ和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果 ｃｙｃｌｉｎＥ在原发性胆囊癌、胆囊腺瘤和慢性胆囊炎中的阳性表达率分别为４６．３％￣１０．０％和０,原发性胆囊癌ｃｙｃｌｉｎＥ阳性率显著高于胆囊良性病变。ｃｙｃｌｉｎＥ在胆囊癌的表达与ＰＣＮＡ指数相     

细胞周期素H及细胞周期素依赖性激酶-7在皮肤血管瘤组织中的表达及意义

目的 探讨细胞周期素H(cyclin H)、细胞周期素依赖性激酶-7(CDK-7)在人皮肤血管瘤组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学方法分别检测皮肤血管瘤组织中增牛期、退化期及正常皮肤组织中cyclin H和CDK-7蛋白的表达.并结合第Ⅷ因子相关抗原的免疫组织化学染色证实表达cyclin H和CDK-7蛋白的细胞是血管内皮细胞.利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织cyclin H和CDK-7表达的平均吸光度A值和平均阳性面积.结果 增生期血管瘤内皮细胞cyclin H和CDK-7的表达水平明显高于退化期及正常皮肤组织,差异有统计学意义(P<0.01);退化期与正常皮肤组织血管内皮细胞cyclin H和CDK-7表达水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 CDK7和cyclin H在增生期血管瘤组织中促使内皮细胞大量增生,使血管瘤不断生长,提示CDK7和cyclin H在血管瘤的发生、发展中起了重要作用.     

细胞周期素E及细胞周期素依赖性激酶2在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨胃癌组织中细胞周期素E(cyclinE)及细胞周期素依赖性激酶2(CDK     

甲状旁腺组织中细胞周期素D1过度表达与Rb肿瘤抑制基因的表达和临床意义

目的探讨甲状旁腺组织中细胞周期素D1(cyclin-D1)及视网膜母细胞瘤易感基因(Rb)的表达及临床意义。方法应用免疫组化技术对36例甲状旁腺腺瘤,10例正常甲状旁腺组织及10例甲状旁腺增生中cyclin-D1及Rb肿瘤抑制基因的表达进行检测。结果腺瘤组cyclin-D1的表达明显高于正常组及增生组(P<0.05),正常组同增生组比较差异无显著性(P>0.05)。Rb的表达正常组、增生组和腺瘤组三者之间比较差异均无显著性(P>0.05)。cyclin-D1过度表达和Rb表达与肿瘤大小、血清钙水平及甲状旁腺素(PTH)水平无关。结论cyclin-D1的过度表达在甲状旁腺腺瘤发生中起重要作用。cyclin-D1过度表达导致Rb磷酸化或表达下调而失去细胞抑制效应可能为甲状旁腺腺瘤发生的机制之一。     

肝癌中p27、细胞周期素D1和细胞周期素E的表达及其意义

本研究采用免疫组织化学方法分别检测肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织中p2 7、细胞周期素D1和细胞周期素E蛋白的表达 ,并进而探讨这些蛋白与肿瘤临床病理特征的关系。一、材料与方法1.临床资料 :选取重庆医科大学附属第一医院普外科 1997年 10月～ 2 0 0 0年 10月间经手术治疗的肝癌患者 5 0例 ,其中男 40例 ,女 10例 ,年龄 2 6～ 74岁 ,平均年龄 49岁。 2 2例癌旁组织取自肝癌患者术后标本 ,要求距癌块边缘至少 5cm ,9例正常肝组织来源于肝血管瘤术后标本。所有患者术前均未接收放疗和化疗 ,肿瘤部位、大小、大体类型等情况按手术时记录。…     

细胞周期素G在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨胃癌组织中细胞周期素G1(cyclinG1)和cyclinG2基因的表达及其意义。方法采用逆转录聚合酶链反应检测了55例胃癌组织、正常胃组织中的cyclinG1和cyclinG2基因的mRNA表达,流式细胞术检测cyclinG1蛋白的细胞周期分布和表达水平,对cyclinG基因进行测序分析。结果胃癌组织中cyclinG1mRNA表达的阳性率为58%,明显高于正常胃组织(18%,P<0.05),cyclinG1mRNA与蛋白表达之间有正相关性(r=0.456,P=0.000);胃癌组织的cyclinG1蛋白表达阳性率为74.3%,正常胃组织为2.3%,二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。CyclinG1蛋白表达于G0/G1期开始出现,在G2/M期达到高峰,有高峰延迟现象。CyclinG2mRNA在胃癌组织中的表达水平为0.5±0.5,正常胃组织中为2.0±0.4,两者之间差异有统计学意义(P<0.01)。CyclinG1与cyclinG2之间表达无相关性(r=-0.217,P=0.063)。CyclinG基因测序结果与genebank中cDNA序列完全一致,没有发现突变点、缺失点或移位点。结论CyclinG的异常表达可能与胃癌的恶性程度和发生发展有关。     

膀胱癌中CDK4和细胞周期素D1表达的意义

我们采用免疫组织化学方法检测细胞周期依赖性激酶 (ＣＤＫ) 4和细胞周期素 (ｃｙｃｌｉｎ)Ｄ1在正常膀胱粘膜和膀胱癌组织中的表达并探讨其与细胞增殖之间关系及其临床意义 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.组织标本 :膀胱移行细胞癌病人72例 ,年龄 2 9～ 78岁。其中男 5 6例 ,女 16例。 6 4例行肿瘤切除或膀胱部分切除 ,8例行全膀胱切除。按ＷＨＯ分级标准 :Ⅰ级 2 0例 ,Ⅱ级 31例 ,Ⅲ级2 1例。按国际联合抗癌协会分期 :Ｔ0～Ｔ1期 46例、Ｔ2 ～Ｔ4 期 2 6例。 6 1例获随访 1年以上 ,复发 15例。 16例正常膀胱粘膜作为对照 ,其中 12例…     

结直肠癌细胞主要Cyclins(D1、E、A、B1)表达类型与其生物学行为的关系

目的 观察人类主要细胞周期素(Cyclin D1、E、A、B1)在结直肠癌中非时相表达特征,探讨主要细胞周期素表达分型与结直肠癌生物学行为的关系.方法 用流式细胞术(FCM)双参数法半定量检测83例结直肠癌手术切除标本细胞中Cyclin D1、E、A、B1表达.根据不同Cyclin在细胞周期中的作用及其异常表达特征,将其表达分为不同类型及亚型结合临床病理学资料进行分析.结果 结直肠癌细胞Cyclin(D1、E、A、B1)异常表达大致可归为5种类型:Ⅰ型Cyclin(D1、E、A、B1)均高表达;Ⅱ型Cyclin D1低表达,Cyclin(E、A、B1)均不同形式高表达;Ⅲ型Cyclin D1不表达,Cyclin(E、A、B1)均不同形式高表达;Ⅳ型Cyclin D1不表达,Cyclin(E、A、B1)不同形式低表达;Ⅴ型Cyclin(D1、E、A、B1)均不表达;Ⅱ型→Ⅳ型根据不同周期内Cyclin的优势表达分为相应不同的亚型.a亚型:Cyclin(E、B1)表达为主;b亚型:Cyclin E表达为主;c亚型:Cyclin B1表达为主;d亚型:Cyclin(E、A、B1)表达为主.主要Cyclins表达类型与结直肠癌淋巴结转移率、转移程度、浸润程度明显相关(P＜0.01).主要Cyclins表达类型Ⅰ→Ⅴ型结直肠癌淋巴结转移率、转移程度、浸润程度呈上升趋势.结直肠癌的生长方式和细胞分化程度与主要Cyclins表达类型的亚型明显相关(P＜0.01).结论 主要Cyclins(D1、E、A、B1)表达类型与结直肠癌生物学行为有关,可以作为一种体现结直肠癌生物学行为较为客观的分类方法.     

空、结肠黏膜细胞增殖过程中主要细胞周期蛋白表达规律的研究

目的研究正常空、结肠黏膜细胞增殖过程中的人类主要细胞周期蛋白Cyclins表达特征和变化规律。方法应用细胞免疫组织化学流式细胞术检测30例正常空、结肠黏膜不同层面、不同增殖阶段细胞主要细胞周期蛋白CyclinD1、E、A、B1及Ki-67的表达,以共聚焦显微镜观察证实检测结果。结果不同增殖阶段肠黏膜细胞Cyclins表达阳性率及相对表达水平不同,从底部→中间层→表层肠黏膜细胞增殖活性(以Ki-67为增殖指标)呈下降趋势,Cyclins(CyclinE、B1为主)表达阳性率及水平呈高→低→无的变化,差异有统计学意义(P<0.01);Cyclins表达与肠黏膜细胞增殖活性呈正相关(P<0.05);CyclinD1、A仅表达于底层增殖细胞,表层完全分化细胞不表达Cy-clins。结论正常空、结肠黏膜细胞增殖分化过程中Cyclins(以CyclinE、B1为主)呈高→低→无的规律性变化,参与细胞增殖的调控,其表达呈衰减变化与肠黏膜细胞有限增殖和定向分化有关。     

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目的　研究在乳腺肿瘤增殖过程中端粒酶活性与细胞周期素D1(CyclinD1)表达的相互关系。 方法　10 0例乳腺癌和 5 6例良性乳腺肿瘤 ,采用TRAP银染法检测端粒酶活性 ,以流式细胞术检测CyclinD1水平。 结果　正常乳腺组织中无端粒酶活性表达 ,CyclinD1水平仅为 (1 5 8± 0 4 5 ) ,恶性肿瘤组织中有较高活性的端粒酶表达和较高水平的CyclinD1表达。端粒酶活性随乳腺癌恶性程度的增加而逐渐增高 ,同时CyclinD1水平也随之而逐渐增高。无论是良性乳腺肿瘤还是恶性乳腺肿瘤 ,端粒酶表达阳性组的CyclinD1水平皆显著高于端粒酶表达阴性组。结论　乳腺肿瘤端粒酶的活性与CyclinD1水平相关 ,乳腺肿瘤端粒酶的激活可能与CyclinD1高表达相关。     

不同剂量X射线对细胞周期检测点和细胞凋亡的影响

目的 比较G1期检测点和G2期检测点两种检测点的放射敏感性及细胞凋亡发生规律。方法 野生型p53功能正常的人类急性淋巴细胞性白血病(MOLT-4)细胞株在体外对数生长期给予不同剂量(2、5、10、20GY)的x射线照射后，继续培养0、3、6、9h，随后分成两组：一组细胞收获并固定，用Cyclins／DNA流式细胞术对Cyclin E，Cyclin A和Cyclin B1分别进行标记，Cellquest软件分析；另一组同步采用膜联蛋白V／碘化丙锭(API技术)和Annexin-V／PI技术分析细胞凋亡。结果 小剂量X射线(2、5GY)照射后，MOLT-4细胞G2期检测点被激活，表现为：照射后3～9h，G2期Cyclins(Cyclin A和Cyclin B1)迅速升高并累积于G2期，G1期Cyclins(Cyclin E)含量逐渐减少；9h时G2期细胞出现明显凋亡(凋亡率为9．5％)。大剂量X射线(10、20GY)照射后，细胞G1期检测点被激活，表现为：照射后3～9h，G1期Cyclins(Cyclin E)持续性升高并累积于G1期，G2期Cydirs(Cyclin A和Cyclin B1)含量下降；且3h时G1期细胞便出现明显凋亡(凋亡率为10．28％)。结论不同剂量X射线可激活不同的细胞周期检测点，并诱导相应周期时相内的细胞凋亡，细胞凋亡率的高低及诱导速度呈现剂量依赖性。     

流式细胞术的亚G_1峰法分析细胞凋亡的重新评价

目的重新评价亚G1峰 (Sub G1)在细胞凋亡研究中的应用 ,解决应用中存在的问题。方法采用Sub G1法荧光参数线性放大和对数放大法对 3种具有不同细胞周期特异性的细胞凋亡模式进行检测分析。结果 3种不同周期特异性细胞凋亡模式在经培养 3、6h的对数放大法分析 ,Sub G1峰均出现在 10 2 荧光道数处 ,且 6h较 3h明显增高。荧光参数对数放大法可避免Sub G1法中Sub G1峰与碎片峰两峰重叠 ,当TdT法清楚地显示凋亡细胞在细胞周期中的时相位置时 ,PC缓冲液的应用则可避免Sub G1峰与G1期峰重叠。结论流式细胞术分析典型细胞凋亡时 ,Sub G1法作定量分析应与对数放大法同步进行 ,才能有效地避免碎片峰与Sub G1峰重叠 ,而PC缓冲液的应用则避免Sub G1峰与G1峰重叠 ,更有效分析细胞凋亡。Sub G1峰应为对称的“高氏分布”图形 ,而不应为“针”形的均一倍性峰。     

三磷酸腺苷对小鼠肌源性干细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨三磷酸腺苷（ATP）对体外培养的小鼠肌源性干细胞（MDSC）增殖和细胞周期的影响。方法 根据细胞贴壁能力的差异。采用差速贴壁法分离培养MDSC，应用MTT比色测定法和流式细胞仪（FCM）分析检测实验组和对照组细胞的增殖情况和细胞周期的变化。结果 经ATP作用后。A490波长的光吸收值明显升高，处于S期的MDSC数量（S％）明显升高，G1％降低，增殖指数PrI值（S＋G2M）％增高。结论 ATP能促进小鼠MDSC增殖。这一作用可能是通过促进MDSC从G1期进入S期来实现的。     

大鼠肝切除后肝再生期间细胞周期调控下细胞增殖与凋亡的关系

目的探讨正常组织增生过程中,细胞周期调控下细胞增殖与凋亡之间的关系。方法以大鼠肝切除后肝再生为模型,以Ｋｉ６７抗原的检测和ＳｕｂＧ１法分别为细胞增殖与细胞凋亡的定量分析方法。结果肝切除术后３６小时,Ｋｉ６７阳性细胞比例（Ｋｉ）达峰值;术后２４小时,凋亡细胞比例（Ａｐ）达峰值;各实验组的Ａｐ／Ｋｉ比值与对照组相比差异有显著性（Ｐ＜０．０１）,其峰值位于术后１２小时。结论（１）正常组织增生中,细胞凋亡不但存在,而且和细胞增殖一样重要。机体通过细胞周期,以细胞凋亡形式,调控着组织增生的速度和规模;（２）应以Ａｐ／Ｋｉ衡量细胞凋亡在各时期所具作用之重要性;（３）细胞凋亡所具作用相对最大时,是在组织增生开始后的早期,先于细胞增殖最活跃期,表明机体对组织增生的反应谨慎而严格。     

蛋白激酶A活性对膀胱癌细胞株T24增殖的影响

目的探讨蛋白激酶A(PKA)活性增高对膀胱癌细胞株T24增殖的影响及其机制。方法用PKA信号传导通路的激动剂forskolin诱导T24细胞后,用放免法检测forskolin作用下T24细胞中PKA活性的变化;用噻唑蓝(MTT)比色法检测forskolin作用下T24细胞活力的变化;用流式细胞仪检测forskolin作用下细胞周期分布的变化;用Western blot检测forskolin作用下T24细胞中Cyclin D1表达的变化。结果forskolin能够使T24细胞中的PKA活性增高,并显著降低细胞活力。在20μmol/L forskolin作用24 h后,流式细胞仪检测可见T24细胞增殖受到抑制,G_1期细胞74.46%,显著高于对照组50.21%(P<0.01),S期和G_2/M期细胞分别占7.63%和14.13%,显著低于对照组的22.25%和24.37%(S期P<0.01,G_2/M期P<0.05)。用20μmol/L forskolin诱导T24细胞后,Cyclin D1表达呈下降趋势。结论forskolin能够显著上调T24细胞中PKA的活性,PKA活性增高使T24细胞处于G_1期静止,抑制其增殖,并显著降低细胞活力。PKA活性增高所致的G_1期静止可能与Cyclin D1的表达下降有关。     

p16ink4a/hRb1对骨肉瘤细胞周期协同的调控作用

目的 观察外源性p16ink4a／hRb1基因联合导入骨肉瘤细胞后，对其细胞周期的协同调控作用。方法 利用本室构建的pIRES-p16ink4a-hRb1、pIRES-p16ink4a与pIRES-hRb1质粒，脂质体介导转染p16缺失，hRb1表达阳性的骨肉瘤细胞株MG63，G418筛选获得抗性克隆，通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot半定量分析外源基因表达；SubG1法流式细胞术分析细胞周期特异性和凋亡率，噻唑蓝（MTT）比色法与细胞生长曲线观察细胞增殖情况。结果 外源基因在靶细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达。与对照组比，所有外源性基因导入组细胞周期均显著阻滞在G1期（P〈0．01）并存在凋亡，且双基因导入组凋亡率分别比单基因组高4．04和6．94倍（P〈0．01）；所有外源性基因导入组各时间点细胞生长抑制率均显著上升，且双基因导入组细胞高于单基因组（P〈0．01）。结论 p16ink4a／hRb1联合导入骨肉瘤细胞后，干扰了p16ink4a-CyclinD1／CDK-hRb1负反馈循环，比单基因导入更能抑制肿瘤细胞生长和杀灭肿瘤细胞。