噻莱昔布(celecoxib)对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的:研究环氧化酶2(cyclooxygenase2,COX2)抑制剂celecoxib对人骨肉瘤细胞MG63抑制增殖及诱导凋亡的作用。方法:MTT比色观察celecoxib的细胞毒性作用及其浓度依赖性;Hoechst33258荧光染色、透射电子显微镜和TUNEL观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及其时间依赖性。结果:celecoxib分别以10、20、40、80μmol/L作用后,细胞生长受到不同程度抑制;荧光显微镜、电镜和TUNEL观察到细胞胞浆浓缩、核凝聚、核碎裂和凋亡小体形成。流式细胞仪显示celecoxib40μmol/L作用24、48、72h后,细胞凋亡率分别与对照组比较有非常显著性差异(P<0.01)。结论:celecoxib能抑制人MG63细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡诱导作用

[目的]探讨人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡诱导作用及其具体作用机制。[方法]MG-63细胞分为空白对照组和CK药物处理组。采用MTT法检测细胞活性及增殖能力,倒置显微镜下观察细胞凋亡形态。细胞凋亡形态检测、Hoechst细胞核染色及Annexin V/PI细胞凋亡实验检测药物CK对细胞的诱导凋亡作用;Western blotting检测凋亡相关蛋白Caspase-9、Bcl-2及BAX的表达,研究其具体凋亡机制。[结果]CK能够显著降低MG-63的体外活性及生存率(P<0.05);细胞凋亡形态检测、Hoechst细胞核染色及Annexin V/PI细胞凋亡实验证明CK可诱导MG-63凋亡(P<0.05);CK处理后MG-63细胞表达的Caspase-9及BAX表达上调,相反Bcl-2表达下调(P<0.05)。[结论]人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞MG-63具有凋亡诱导作用,而以Caspase-9为关键因素的线粒体凋亡途径在此凋亡中起着决定性作用。     

不同转移特性人成骨肉瘤MG-63细胞亚系的建立及特征

目的：建立高低不同转移特性人成骨肉瘤MG-63细胞亚系并研究其生物学特性。方法：通过体外克隆技术和体内移植，筛选并建立了6个细胞亚系，测量其细胞电泳率，细胞增殖率，利用琼脂克隆形成实验和裸鼠体内成瘤实验，比较各细胞亚系的转移特性。结果：A2、A3、A16亚系的细胞电泳率、细胞增殖率、琼脂克隆形成能力和肺转移灶形成率均明显高于A1、A6、A20亚系。结论：通过体外克隆技术和体内移植的方法可建立不同转移特性的MG-63细胞亚系，有助于骨瘤转移机理的进一步研究。     

直接原位RT-PCR检测人成骨肉瘤MG-63细胞株雌激素受体亚型表达

目的观察人成骨肉瘤MG63细胞株雌激素受体亚型mRNA表达特征。方法用直接原位RTPCR及激光共聚焦显微镜观察MG63细胞株在培养第6及第9天ERα、ERβmRNA表达。结果各检测点均见一定量的荧光弥散于细胞内。阳性对照点荧光较其他两点强,阴性对照点荧光明显减弱,仅见少量背景荧光。ERα的荧光强度强于ERβ。结论(1)MG63细胞株作为成骨细胞模型,存在ERα和ERβ基因的mRNA表达。(2)骨基质成熟早期阶段MG63细胞株的ERα表达比ERβ丰富,这表明两者在功能上存在差异。     

不同转移特性人成骨肉瘤MG-63细胞亚系的建立及特征

目的:建立高低不同转移特性人成骨肉瘤MG-63细胞亚系并研究其生物学特性.方法:通过体外克隆技术和体内移植,筛选并建立了6个细胞亚系,测量其细胞电泳率、细胞增殖率,利用琼脂克隆形成实验和裸鼠体内成瘤实验,比较各细胞亚系的转移特性.结果:A2、A3、A16亚系的细胞电泳率、细胞增殖率、琼脂克隆形成能力和肺转移灶形成率均明显高于A1、A6、A20亚系.结论:通过体外克隆技术和体内移植的方法可建立不同转移特性的MG-63细胞亚系,有助于骨肉瘤转移机理的进一步研究.     

成人成骨细胞和MG-63细胞株孕激素受体的表达

目的 观察成人成骨细胞和MG-63细胞株孕激素受体(progesterone receptor，PR)亚型表达的情况。方法 用改良胶原酶消化法从正常成人松质骨中分离成骨细胞，观察细胞形态，钙钴法行碱性磷酸酶染色，Van Gieson法行Ⅰ型胶原染色，茜素红行矿化结节染色；半定量RT-PCR检测骨钙素和PR亚型mRNA表达；Western blot测定PR蛋白质表达。结果 所分离培养的细胞具有成骨细胞的形态特征，保持了其在体内的功能；人成骨细胞和MG-63细胞株均表达PRA、PRB mRNA和蛋白质。结论 人成骨细胞和MG-63细胞株可能受孕激素的影响。     

Survivin基因干扰RNA对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响

[目的]观察Survivin基因siRNA表达载体对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。[方法]体外构建Survivin shRNA表达载体pSilence2．1-neo-Survivin，转染骨肉瘤细胞系MG-63，筛选稳定表达的克隆，倒置显微镜观察各组细胞形态学变化，RT-PCR、Weston-blot方法检测转染后Survivin mRNA及蛋白的表达，噻唑蓝（MTT）法、克隆形成实验检测细胞的增殖情况，吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡情况。[结果]转染后MG-63细胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表达显著下降，其抑制率分别为85．08％和81．14％；细胞增殖受到显著抑制，培养48h后与空白组比较，抑制率达63．4l％；吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变，转染组凋亡率为24．54％。[结论]靶向Survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖，促进细胞凋亡。     

siRNA下调THBS4对人骨肉瘤MG63增殖的影响

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制血小板反应蛋白4(thrombospondin 4,THBS4)基因的表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其分子机制。方法将合成的THBS4 siRNA转染到人成骨细胞株MG63,CCK-8法观察对细胞增殖的影响,荧光定量PCR检测THBS4及TGF-beta1的mRNA表达,Western-blotting检测THBS4及TGF-beta1的蛋白表达。结果 Thbs4 siRNA转染后实验组48 h,72 h OD值高于阴性对照组(P0.05),差异具有显著性;Thbs4 mRNA和蛋白的表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P0.01);Thbs4 siRNA转染后MG63细胞中TGF-beta1 mRNA及蛋白的表达水平提高(P0.01)。结论 THBS4 siRNA转染MG63后能够促进细胞增殖,其机制可能是激活TGF-beta1信号通路。     

高低不同分化特性人成骨肉瘤MG-63克隆细胞株的建立

目的：建立分化程度高低不同的骨肉瘤细胞株。方法：用有限稀释法将人成骨肉瘤MG-63细胞系单克隆化，并作如下鉴定：(1)细胞增殖；(2)细胞形态学；(3)软琼脂克隆形成率；(4)染色体分析；(5)细胞周期时相分析；(6)碱性磷酸酶的活性；(7)细胞运动能力；(8)裸鼠成瘤实验。结果：共得到23个克隆，命名为MG-63-1～MG-63-23。其中的5、18号细胞株具有明显差异，18号为大核长梭形细胞，无接触抑制，克隆形成率高，体内成瘤时间短，代表低分化的骨肉瘤细胞株。5号以短梭形为主，核质比例变小，有一定的接触抑制，致瘤能力较低，为高分化的骨肉瘤细胞株。结论：通过对骨肉瘤细胞系MG-63的单克隆化，建立了具有高、低不同分化程度的两个人骨肉瘤细胞株。     

降钙素基因相关肽/细胞外调节激酶信号通路对人MG-63细胞增殖的实验研究

目的 研究外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对人MG-63细胞增殖的影响及其可能涉及的信号通路.方法 采用甲基噻唑基四唑(MTT)法和细胞计数法观察对比不同浓度外源性CGRP及其受体拮抗剂CGRP8-37与细胞外调解激酶(ERK)抑制剂PD98059对体外培养的人MG-63细胞增殖的影响.根据不同分组将体外培养的人MG-63细胞用CGRP、CGRP8-37及PD98059作用24 h后,通过免疫细胞化学方法观察细胞骨保护蛋白(OPG)、护骨素配体(RANKL)、ERK表达强度的变化.结果 不同浓度CGRP均可促进MG-63细胞的增殖,促进作用随浓度增高而增强,CGRP8-37、PD98059可减弱此作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).CGRP呈剂量依赖性的上调成骨细胞OPG和ERK的表达,同时下调RANKL的表达,CGRP-37和PD98059可减弱此作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 CGRP可通过ERK信号通路改变OPG/RANKL的比值来调控成骨细胞增殖.

Abstract：

Objective To explore the effect of calcitonin gene-related peptide (CGRP) on proliferation and differentiation of MG-63 cells through extracellular signal-regulated kinase (ERK) pathway in vitro. Methods To study the effects of ERK inhibitor PD98059 and CGRP inhibitor CGRP8-37, 2 groups of MG-63 cells were treated with PD98059 and CGRP8-37 for one hour prior to serum treatment. The other 4 groups were cultured with serum of different doses (high, middle, low and blank). Proliferation and apoptosis of MG-63 cells were observed by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) method and cell-counting.Expressions of osteoprotegerin (OPG), receptor activator of nuclear factor kappaβ ligand (RANKL) and ERK were observed through immunocytochemical and image analysis. Results MTT showed that CGRP promoted proliferation of MG-63 cells and expressions of OPG and ERK but not expression of RANKL The effect was dose-dependent, and significantly inhibited by either CGRP 8-37 or PD98059 (P <0.05) . Conclusion CGRP can stimulate proliferation of MG-63 cells via CGRP receptor and ERK pathway to regulate the ratio of OPG/RANKL.     

新型钌(Ⅱ)配合物抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖并诱导其凋亡

目的 通过体外实验探讨新型钌(Ⅱ)多吡啶配合物△-[Ru(phen)2MCMIP]2+(△-1)对人骨肉瘤细胞MG-63株增殖及凋亡作用. 方法 CCK-8法检测经0.00、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00 μmol/L△-1作用24、48、72 h后,MG-63细胞的增殖情况;流式细胞术检测经0.00、25.00、50.00、100.00 μmol/L△-1作用24h后,MG-63细胞的凋亡及周期变化. 结果 △-1可明显抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖,并呈明显剂量和时间依赖性;24、48、72 h IC5o分别为57.80 μmol/L、45.27 μmol/L、32.51 μmol/L;流式细胞术检测得不同浓度△-1作用24h后,细胞早期凋亡比例从(1.06±0.12)％上升至(37.10±1.25)％,细胞周期被阻滞在Go/G1期. 结论 △-1能抑制MG-63细胞增殖,诱导细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在Go/G1期.     

Notch1 siRNA对乏氧环境骨肉瘤细胞MG-63增殖及周期的影响

[目的]探讨Notch1 siRNA对乏氧环境人骨肉瘤细胞MG-63细胞增殖和周期的影响。[方法]将骨肉瘤细胞株MG-63细胞置于乏氧(37℃、1%O2、5%CO2)环境下培养作为实验组,以正常氧环境(37℃、21%O2、5%CO2)下培养作为对照组,培养72 h,应用MTT方法检测不同时间乏氧培养对MG-63细胞增殖的影响;采用Notch siRNA转染乏氧环境中的MG-63细胞,MTT方法检测细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞周期的变化;Western blot检测细胞HIF-1a、Notch1蛋白表达变化。[结果]乏氧培养可促进MG-63细胞增殖,48 h常氧及乏氧对细胞增殖的作用可见明显差异(2.164±0.075 vs 1.421±0.086)(P<0.01)。流式细胞分析显示实验组、对照组MG-63细胞培养48 h G1/G2期细胞比例分别为(41.79±3.25)%和(53.87±2.31)%(P<0.05),乏氧可以促进细胞周期进展,Notch1 siRNA有效下调乏氧MG-63细胞Notch1蛋白表达,Notchl siRNA作用48 h后乏氧环境MG-63细胞周期阻滞于G1/G2期。Western-blot结果显示乏氧环境下MG-63细胞HIF-1a、Notch1蛋白表达增高。[结论]乏氧环境能通过促进MG-63细胞周期进展,从而明显促进细胞增殖,阻断Notch可逆转乏氧对MG-63细胞促增殖作用,提示Notchl是治疗骨肉瘤的有效分子靶点。     

三氧化二砷联合顺铂抗人骨肉瘤细胞株MG-63的实验分析

目的:探讨三氧化二砷(Arsenic Trioxide,As2O3)对人成骨肉瘤细胞株MG-63的抑制作用及机制.方法:将MG-63细胞于37℃,5％ CO2等实验条件下传代培养,等细胞进入对数生长期后再进行操作.采用方法:MTT法检测AsaO3、CDP对MG-63细胞的IC50及两药联合时的抑制率.结果:计算得As2O3和CDP对MG-63细胞的IC50分别为2.15μmol/ml和1.13μg/ml.IC50浓度的As2O3、IC50浓度的CDP、1/2IC50(CDP)+ 1/2IC50(As2O3)对MG-63细胞的抑制率分别为(52.20±019)％,(57.11±0.64)％,(71.10±0.25)‰结论:说明低浓度的As2O3与CDP联合应用时,抑制率均较单用其中一种IC50浓度的药物时有明显提高,差异有显著性.     

三氧化二砷抗人骨肉瘤细胞株MG-63的实验分析

目的:探讨三氧化二砷(Arsenic Trioxide,As2O3)对人成骨肉瘤细胞株MG-63的抑制作用及机制.方法:将MG-63细胞于37℃,5％ CO2等实验条件下传代培养,等细胞进入对数生长期后再进行操作.采用以下实验方法:MTT检测:将MG-63细胞接种于96孔板,测定As2O3对MG-63细胞的半数抑制浓度(IC50),然后测定药物终浓度分别为0、As2O3的IC50、对MG-63细胞的抑制率.结果:MTT法测定As2O3对MG-63细胞的IC50为2.15μmol/ml,IC50浓度的As2O3MG-63细胞的抑制率分别为(52.20±0.19)％结论:低浓度的As2O3抑制骨肉瘤细胞增殖和诱导凋亡的能力均有明显增强.     

维甲酸对人骨肉瘤细胞抑制增殖和诱导分化的影响

目的探讨维甲酸对人骨肉瘤（HOS）细胞抑制增殖和诱导分化的影响。方法不同浓度的维甲酸作用HOS细胞,采用噻唑蓝法、倒置相差显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞生长曲线;软琼脂集落形成实验观察细胞生长和侵袭能力的变化;流式细胞仪测定细胞周期变化。结果维甲酸可明显抑制HOS细胞增殖,并呈现剂量和时间的依赖性;细胞形态呈明显的良性分化,瘤细胞的软琼脂集落形成率明显降低;维甲酸能够延缓细胞周期G1～S进程,阻滞细胞于G1期。细胞周期测定结果显示：未经诱导物处理的对照组细胞处于G0/G1期的细胞比例为31.19%;经维甲酸处理之后,实验组细胞G0/G1期的细胞比例上升为57.94%。结论维甲酸对HOS细胞有明显的抑制增殖和诱导分化作用。     

GLP-1受体激动剂艾塞那肽对MG-63细胞增殖及成骨分化的影响

目的探讨GLP-1受体激动剂艾塞那肽(Exenatide)对人成骨肉瘤MG-63细胞株增殖及成骨分化的作用。方法将MG-63细胞制成单细胞悬液,接种于细胞培养板,分别用不同浓度的艾塞那肽(0 mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L)处理细胞,24 h后采用CCK-8比色法检测MG-63细胞增殖率,并将艾塞那肽处理后的细胞裂解并取上清,使用碱性磷酸酶测定试剂盒测定AKP活力。结果 (1)艾塞那肽可促进MG-63细胞增殖(P0.05),但随着GLP-1受体激动剂浓度升高,细胞增殖程度降低(P0.05),低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)促增殖能力最强。(2)艾塞那肽不同浓度处理后各组AKP活力增加(P0.05),而且低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)升高AKP活力最明显(P0.05)。结论艾塞那肽能促进人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖及成骨分化,且低浓度的艾塞那肽(10-9mol/L)促增殖分化能力最强。     

基于ERK5通路探讨蟾酥抑制人骨肉瘤MG-63细胞的作用机制

目的：研究蟾酥对人骨肉瘤细胞MG-63的作用效应及作用机制。方法：体外培养人骨肉瘤细胞MG-63,采用不同浓度的蟾酥含药血清（0%、2.5%、5%）进行干预,采用qPCR法检测各组c-myc、caspase-9的mRNA表达量,采用免疫荧光法检测各组整合素α4的含量并采用Western Blot法检测MEK5、Nur77的表达情况。分别采用ERK5抑制剂XMD8-92、XMD8-92联合5%蟾酥含药血清、MEK5过表达腺病毒干预人骨肉瘤细胞MG-63,采用Western Blot法检测c-myc、caspase-9及整合素α4的表达量。结果：相较于空白对照组（%）,2.5%、5%蟾酥含药血清干预后的c-myc及整合素α4表达下降,caspase-9表达上升（P<0.05）,且蟾酥含药血清干预后MEK5、Nur77表达下降（P <0.05）,与干预浓度呈负相关;相较于5%蟾酥含药血清干预组,XMD8-92联合5%蟾酥含药血清组c-myc及整合素α4表达下降、caspase-9表达上升（P <0.05）,而过表达MEK5联合5%蟾酥含药血清组的表达情况相反（P <0...     

miR-181a-5p通过HOXB4抑制骨肉瘤细胞HOS增殖和迁移

目的：研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法 ：采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中（分别为过表达组和抑制剂组）,并设置miR阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果：与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达（P<0.05）,而HOXB4在骨肉瘤中高表达（P<0.05）。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞...     

肺癌抑癌基因1对人骨肉瘤细胞株MG63生长和增殖的影响

目的 观察肺癌抑癌基因1(TSLC1)对人骨肉瘤细胞株MG63的生长和增殖能力的影响.方法 将稳定表达TSLC1的人骨肉瘤MG63细胞株M8T设为研究对象,转染空载体的骨肉瘤MG63细胞株M8P设为对照组,人骨肉瘤细胞株MG63设为空白组.噻唑蓝(MTT)法检测M8T细胞增殖;FACSort流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡;将2×107个瘤细胞皮下注射裸鼠,观察体内成瘤的影响.结果 稳定转染TSLCl的实验组M8T细胞株与对照组及空白组细胞比较,其细胞增殖能力下降,生长速度明显受到抑制;M8T细胞G0-G1期细胞数为(63.76 ±2.78)％,生长周期出现了G0～G1期阻滞,细胞凋亡总数为(28.45 ±0.65)个,显著增加(P＜0.01);裸鼠皮下成瘤于皮下注射后3周开始形成.结论 TSLC1能明显抑制骨肉瘤MG63细胞的生长和增殖.     

PARP-1抑制剂对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨PARP-1抑制剂3-aminobenzamide(3-AB)对骨肉瘤U2OS细胞增殖及凋亡的影响.方法 常规培养骨肉瘤U2OS细胞,采用CCK-8法检测U2OS细胞的增殖和流式细胞术检测细胞凋亡,并用caspase-3活性测定试剂盒检测caspase-3活性和Western-blot技术检测Bcl-2、Ba...