原位大鼠膀胱肿瘤热休克蛋白70-肽复合物的纯化及其体内抗肿瘤效应

我们用改良液相色谱法纯化热休克蛋白70-多肽复合物（HSP 70-PC）,观察HSP 70-PC对原位大鼠膀胱肿瘤的治疗效应.现报告如下.     

热休克蛋白70疫苗在消化道肿瘤研究中的进展

目的综述热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)疫苗在消化道肿瘤中的研究进展。方法对近年来的相关文献进行分析。结果HSP70能与肿瘤特异性抗原结合,形成HSP70-多肽复合物;它作为"分子伴侣"参与肿瘤免疫作用,激活机体特异和非特异免疫反应。结论HSP70的应用在消化道肿瘤的预防和治疗中显示出诱人的前景。     

应用热休克蛋白/肽复合物疫苗防治肿瘤

肿瘤手术切除后能否根治 ,最关键的是防止复发和转移 ,目前所用的化疗或放疗往往不仅杀死了肿瘤细胞 ,也摧毁了机体的免疫功能 ,最终难以根治。如何调动机体的免疫功能来杀伤肿瘤细胞是人们长期以来的设想 ,这方面的研究持续了百年的历史 ,仅在近 10余年来 ,随着免疫学和分子生物学等基础医学的突破性进展 ,开始展现了调动机体特异性免疫功能杀伤肿瘤细胞 (肿瘤疫苗 )的可喜的苗头。机体能识别和杀灭非我的外来微生物 ,而不能消灭自身的肿瘤 ,这一现象归结为肿瘤细胞逃逸了机体的免疫监视。因此 ,长期以来人们从事于两个方面的研究 ,一是肿…     

创伤性休克患者血浆热休克蛋白70表达及其意义

目的　　检测创　伤性休克患者外周血中热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）的表达水平并探讨其与创伤性休克发生发展　的关系。方法　　采用Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ法分别测定３６例创伤性休克患者　（观察组）及３０例正常人（对照组）血浆ＨＳＰ７０表达水平。结果　　ＨＳ　Ｐ７０在创伤性休克组为（４　３０１．３±１　１５５．３），与正常对照组（６　０９２．３±１　２３３．５）比较，差异　有高度显著性（Ｐ＜０．０１）；２２例休克得到控制者ＨＳＰ７０为（６　１０２．２±１　２９１．６）较入院时　（４　２７３．６±１　０９９．３）明显升高，差异有极显著意义（Ｐ＜０．０１）。结论　　创伤性休克患者血浆ＨＳＰ７０表达水平明显下降，可能是创伤后休克发生发展的一个　重要因素，而且与预后有密切关系。     

缺血缺氧性脑损伤中热休克蛋白70的表达及其意义

缺血缺氧可引起多种生化改变，最终结果是导致蛋白质的变性。在细胞内变性和异常蛋白质增加的同时，热休克蛋白70（HSP70）的表达也相应增加。HSP70的特殊改变在缺血缺氧性脑损伤的病理生理过程中发挥着重要作用。     

次声作用后脑皮层组织热休克蛋白70的表达及其意义

次声是频率低于 2 0Ｈｚ的声波。近年来 ,次声作为工业、交通及住宅环境等污染因素已逐渐引起人们的关注[1] 。次声作用于机体最为首要的是引起脑的损害。次声作用后中枢神经系统的功能紊乱 ,尤其是思维及记忆功能障碍[2 ] 是否与次声影响了额、颞叶脑皮层功能与结构有关 ?这是我们拟探讨的问题。一、材料与方法1.分组与模型制作 :上海产雄性成年ＳＤ大鼠 40只 ,体重 (2 0 0± 15 ) ｇ。随机分为正常对照、次声作用 1次、7次及14次组 ,每组各 10只。采用本校次声压力仓。实验用 8Ｈｚ 12 0ｄＢ的次声 ,除对照组每日按规定次数在次声压力仓内…     

丙氨酰-谷氨酰胺双肽对肿瘤术后患者热休克蛋白70及肿瘤坏死因子的影响

目的 观察丙氨酰-谷氨酰胺双肽对肿瘤手术患者热休克蛋白、炎症反应及免疫状态的影响。方法 接受胸、腹部肿瘤切除手术患者116例进入研究，采用双盲设计，研究组58例接受丙氨酰-谷氨酰胺双肽补充的全胃肠外营养，对照组58例接受一般全胃肠外营养。7d后观察热休克蛋白（HSP）-70、肿瘤坏死因子（TNF）-α及CIM／CD8变化。结果 两组患者研究期间均未出现死亡及过敏等副反应，丙氨酰-谷氨酰胺组7d后TNF—α明显降低，CIM／CD8比率明显增多，HSP-70表达明显增高，差异有统计学意义（P〈0．05）；而对照组7d前后无明显变化。结论 肿瘤手术患者术后使用丙氨酰-谷氨酰胺能增加HSP-70表达，减轻患者炎症反应，并改善患者免疫功能状态，对患者恢复有益。     

热休克蛋白70在大鼠胰腺移植后急性排斥反应诊断中的意义

目的　探讨热休克蛋白 (HSP) 70在大鼠胰腺移植急性排斥反应诊断中的意义。方法　建立大鼠全胰、十二指肠移植模型 ,用免疫组织化学及WesternBlotting法定量检测移植胰腺组织中HSP70的表达 ,并观察其与病理学检查的相关性。结果　同基因移植组移植胰腺HSP70的表达水平在术后无明显变化 (P >0 .0 5) ;异基因移植组移植胰腺HSP70的表达水平在术后第 3、5和 7d逐渐升高 (P <0 .0 1 ) ,而且与病理学评分之间存在着明显的正相关 (P <0 .0 1 ,r =0 .934)。结论　检测HSP70在移植胰中的表达对急性排斥反应的早期诊断有一定价值     

小鼠移植性S180肉瘤模型的建立及温和加热对热休克蛋白70表达的影响

目的 :研究NH小鼠S180肉瘤细胞移植后肿瘤模型生长特点 ,以及热休克蛋白 (heatshockproteinsHSPs)70在温和加热 (4 2℃ )不同时段表达变化。方法 :不同剂量S180肉瘤细胞于NH小鼠背部皮下接种 ,观察肿瘤组织生长规律 ,取部分肉瘤细胞进行热休克处理 2、 4、 6、 8、 10、 12h后 ,进行HSP 70免疫组化观察 ,结果 :肿瘤发生率10 0 % ,不同剂量组的肿瘤生存期限差异有显著意义 ,肿瘤生长大小无显著差异 ;对HSPs的免疫组化观察表明 :热休克处理后HSP 70阳性增强 ,以 6h后最明显 ;8h后细胞发生皱缩、溶解。结论 :此模型是HSPs/肽复合物提取、纯化中稳定的动物肿瘤疫苗治疗模型 ;分离、纯化HSP 70时将肿瘤组织热休克处理 (4 2℃ ) 6h即可。     

缺血缺氧性脑损伤中热休克蛋白70的表达及其意义

缺血缺氧可引起多种生化改变,最终结果是导致蛋白质的变性。在细胞内变性和异常蛋白质增加的同时,热休克蛋白70(HSP70)的表达也相应增加。HSP70的特殊改变在缺血缺氧性脑损伤的病理生理过程中发挥着重要作用。     

亚高温盆腔区域热疗对原位膀胱肿瘤大鼠免疫状态影响的研究

目的 研究亚高温盆腔区域热疗致原位膀胱肿瘤大鼠发生热休克反应后机体免疫状态的改变.方法 经尿道膀胱灌注N-甲基亚硝基脲(MNU)制备大鼠膀胱肿瘤动物模型35只,随机分入短期组,包括肿瘤对照组(A组)、单次热疗组(B组)、间隔24 h再次热疗组(C组)、间隔72 h再次热疗组(D组)和长期组,包括肿瘤对照组(E组)、间隔24 h再次热疗组(F组)、间隔72 h再次热疗组(G组).用内生场热疗系统从体外加热大鼠盆腔至41 ℃.热疗后对肿瘤、引流淋巴结、脾脏中免疫细胞的变化进行病理研究,检测血清鼠 IFN-γ含量.结果 透射电镜观察到B、C、D组肿瘤组织中有较多中性粒细胞、巨噬细胞;F、G组中性粒细胞聚集,巨噬细胞吞噬凋亡小体.短期组中B、C、D组膀胱肿瘤组织、淋巴结及脾脏中S-100蛋白阳性细胞率均高于A组(P<0.01).膀胱肿瘤组织及脾脏中CD8阳性细胞率、血清鼠 IFN-γ含量A、B、C、D组间差异均无统计学意义(P=0.657、0.440、0.523).长期组中F、G组的各项数据均高于E组(P<0.01).结论 随着亚高温盆腔区域热疗次数的增加肿瘤鼠的免疫细胞重新分布,有利于肿瘤抗原提呈及效应细胞攻击肿瘤.     

亚高温盆腔区域热疗诱导原位的大鼠浸润性膀胱肿瘤HSP70表达的研究

目的 研究亚高温盆腔区域热疗能否诱导原位的大鼠浸润性膀胱肿瘤热休克蛋白70(HSP70)表达增加.方法 制备原位的大鼠浸润性膀胱肿瘤动物模型,分为对照组(A组)、单次热疗组(B组)、间隔24 h再次热疗组(C组)、间隔72 h再次热疗组(D组).从体外加热大鼠盆腔至41℃,持续1 h.用胶体金免疫电镜、免疫组化、蛋白芯片检测肿瘤细胞HSP70表达.结果 A组HSP70定位于肿瘤细胞质,B、C、D组HSP70均定位于肿瘤细胞核、线粒体和细胞质.B、C、D组HSP70阳性表达率均高于A组,差异有统计学意义(P(0.01),但B、C、D组组间差异无统计学意义(P=0.101).B、C、D组HSP70表达量高于A组,差异有统计学意义(P＜0.01);C、D组HSP70表达量均高于B组,差异有统计学意义(P＜0.01);C组HSP70表达量高于D组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 不同方案的亚高温盆腔区域热疗均能诱导原位的大鼠浸润性膀胱肿瘤发生热休克反应,上调HSP70表达;亚高温盆腔区域热疗是一种温和的加热方法,它不能使全部肿瘤细胞发生热休克反应;HSP70表达率与热疗次数无关,但表达量与热疗次数呈正相关;间隔24 h再次热疗的HSP70表达量最高.     

热休克蛋白70 mRNA在膀胱癌中的表达及与细胞凋亡的关系

目的　探讨热休克蛋白 70 (HSP 70 )mRNA在膀胱移行细胞癌中的表达及与细胞凋亡的关系。　方法　应用原位杂交法对 6 0例膀胱癌组织中HSP 70mRNA进行检测 ,原位DNA末端标记法 (TUNEL)检测细胞凋亡情况。　结果　 6 0例标本中 ,HSP 70mRNA阳性表达率为 5 6 .7% (34/ 6 0 )。HSP 70mRNA表达随肿瘤分级增高而增加 (P <0 .0 5 ) ;G1,G2 和G3 各级间两两比较 ,HSP 70mRNA表达差异也有显著性意义 (P <0 .0 5 )。随着肿瘤分期增高 ,HSP 70mRNA表达随之增加 (P <0 .0 5 ) ;Ⅰ ,Ⅱ和Ⅲ各期间两两比较 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。肿瘤细胞凋亡指数 (AIs)随恶性程度的增高显著降低 (P <0 .0 5 ) ;HSP 70mRNA表达率和AIs呈负相关 (rs=- 0 .6 85 ,P <0 .0 5 )。　结论　HSP 70mRNA表达随膀胱癌恶性程度增加显著增高 ,细胞凋亡则显著降低 ,提示HSP 70表达能够抑制膀胱癌细胞的凋亡。     

氯胺酮诱导的热休克蛋白70在大鼠脑组织中不同区域的表达

目的 研究氯胺酮诱导的热休克蛋白70(HSP70)在大鼠脑组织中不同区域的表达.方法 SD大鼠20只,随机均分为氯胺酮组(K组)和生理盐水组(N组),分别在腹腔注射氯胺酮80mg/kg和生理盐水3ml.24h后取鼠脑,应用HSP70单克隆抗体免疫组化染色检测胼胝体压部后皮质、海马、大鼠后扣带回和枕叶皮质中HSP70的表达,并用MIAS-2000图文分析系统分析上述区域HSP70阳性细胞百分率、阳性细胞密度(个/mm2)和阳性产物灰度值.结果 氯胺酮可诱导大鼠大脑特定区域表达HSP70;大脑各区域HSP70表达不同.结论 氯胺酮诱导HSP70在大脑特定区域的表达,提示可能产生神经细胞损害;氯胺酮对大脑特定区域产生损害.     

氯胺酮-咪唑安定对感染性休克大鼠心肌HSP70表达的影响

目的 探讨氯胺酮（KTM）-咪唑安定（M）在感染性休克中的心肌保护作用及可能的作用机制。方法 选择健康成年SD大鼠112只,随机分入对照组（NS组、E组）和试验组（EM组、EK组、EKM组）。NS组为正常对照组,E组给予LPS 20mg/kg ip,EK组、EKM组、EM组在同E组处理前分别给予KTM 80mg/kg ip,KTM 80mg/kg M 0.5mg/kg ip,M 0.5mg/kg ip,1h后追加半剂。在LPS处理2h后及E组大鼠临终时取心肌用免疫组化方法测HSP70的表达,并观察各组大鼠存活时间。结果 E组HSP70表达强于NS组,EK、EKM组HSP70 表达强于E组,存活率也高于E组,且随时间延长HSP 70表达呈增强趋势;E组、EM组和HSP 70表达及存活率无明显差异。结论 氯胺酮可增强感染性休克时大鼠心肌HSP 70的表达,可能是氨胺酮保护感染心肌的机制之一;咪唑安定-氯胺酮复合应用不影响氨胺酮保护感染心肌的作用。     

热休克大鼠缺血肾脏诱导型热休克蛋白的表达

目的研究在热休克预处理大鼠整体后,大鼠肾脏在冷缺血环境下诱导型HSP70的表达.方法用热休克方法和药物川芎嗪分别对动物整体进行预处理后,通过组织切片和免疫组化方法观察诱导型HSP70的表达情况,利用计算机图像灰度分析法测定不同缺血时间下大鼠肾脏组织的灰度值,以间接量化反映诱导型HSP70的表达.结果在非缺血状态下处理组的灰度值较对照组有明显增强(P<0.001);在不同的缺血时间下,肾脏诱导型HSP70的表达有一定规律性对照组在缺血30min时表达最高;热休克两组表达更高,时间持续到60min;川芎嗪组较热休克组次之,但高于对照组.结论热休克、缺血和川芎嗪均可以诱导肾脏组织诱导型HSP70的表达,并且在时间和量上有一定规律性.     

乳腺癌细胞抗原肽修饰树突状细胞的抗肿瘤作用

目的探讨经重组乳腺癌热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)抗原肽复合物修饰后的树突状细胞(dendritic cell,DC)的抗肿瘤作用。方法冻融法获取BALB/C小鼠4T1乳腺癌细胞抗原肽,体外重组HSP70-4T1抗原肽复合物。检测BALB/C小鼠DC经该复合物修饰成熟后IL-12和TNFa的分泌。检测修饰后成熟的DC对BALB/C小鼠脾淋巴细胞的增殖作用及增殖后淋巴细胞对4T1细胞的杀伤功能。BALB/C小鼠注射修饰成熟DC,观察该方法对4T1乳腺癌株的抑制作用。结果0.75μg抗原肽与HSP70结合,可使1×10~6DC成熟;成熟后的5×10~3DC可激活2×10~6小鼠脾淋巴细胞。与直接用HSP70-4T1复合物刺激脾细胞比较,DC途径抗原肽的用量减少40倍。增殖后淋巴细胞对4T1细胞杀伤率为(60.24±6.23)%。接种该DC能有效地抑制肿瘤的生长。结论重组乳腺癌热休克蛋白70-抗原肽复合物能够诱导DC成熟,成熟后的DC能激活淋巴细胞并抑制肿瘤生长。该途径能有效降低肿瘤免疫治疗时抗原肽的使用剂量。     

热休克蛋白70对大鼠离体心脏细胞凋亡的影响

目的 观察热休克蛋白70(HSP70)对离体大鼠供心心肌细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax表达的影响.方法 Wistar大鼠18只,分为2组:对照组(C,n=9),腹腔注射生理盐水0.5 ml,24 h后取离体心脏灌注HTK心脏保护液,4 ℃保存3 h后建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注KH液2 h;实验组(E,n=9)腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素(溶于生理盐水中)3.1 μmol/kg(0.53 mg/kg),腹腔注射24 h后取离体心脏,处理方法旧C组.运用免疫组织化学SP法测定心肌HSP70含量、bcl-2、bax蛋白的含量并做统计学处理比较.结果 HSPT0含量E组(17.78±1.82)较C组(5.22±1.05)明显增高(P＜0.01),bel-2的表达E组(41.88±5.09)较C组(31.36±3.27)明显增多(P＜0.01),bax的表达E组(22.61±3.49)较C组(40.52±4.17)明显减少(P＜0.01),bel-2/bax比值E组(1.86±0.11)较C组(0.77±0.01)明显增高(P＜0.05).结论 心肌HSP70高表达能促进心肌抗凋亡蛋白bcl-2的表达,减少促凋亡蛋白bax表达,增加bel-2/bax比率,抑制心肌细胞凋亡.