尿毒症患者和肾移植受者外周血调节性T细胞表达的意义

目的探讨尿毒症患者和肾移植受者外周血CD4^＋CD127^-调节性T细胞（CD4^＋CD127^- Treg）的表达水平及意义。方法采用流式细胞术测定13例尿毒症患者（尿毒症组）、13例肾移植受者（肾移植组）和20例健康志愿者（对照组）外周血CD4^＋CD127^- Treg和CD4^＋CD25^＋CD127^- Treg占CD4^＋T细胞的比例。结果尿毒症组和肾移植组CD4^＋细胞中CD4^＋CD127^- Treg的比例明显低于对照组（P〈0．05，P〈0．01）；肾移植组CD4^＋CD25^＋CD127^- Treg的比例明显低于对照组（P〈0．05）。结论尿毒症患者外周血CD4^＋CD127^- Treg数量降低，免疫功能紊乱。肾移植受者外周血CD4^＋CD127^- Treg和CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg数量降低，免疫反应性增强。     

Fas/FasL在强直性脊柱炎患者外周血T细胞亚群上的表达

目的检测强直性脊柱炎（As）患者外周血T细胞亚群上的Fas／FasL的表达水平，探讨Fas／FasL诱导的细胞凋亡在As免疫学发病机制中的作用。方法以临床确诊的60例As患者作为研究对象，同时选择30例正常对照，运用流式细胞仪（FCM）检测其外周血CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋T细胞亚群上的Fas／FasL表达水平。结果早、晚期AS患者外周血CD3^＋CD4^＋T细胞上的FasL的表达率分别为（0．59％、0．93％），CD3^＋CD8^＋T细胞上的FasL的表达率分别为（2．93％、4．32％），与健康对照组（0．48％、1．14％）比较，其表达率差异具有统计学意义（P〈0．05）；与健康对照组外周血CD3^＋CD4’、CD3^＋CD8’T细胞上的Fas表达率（58．25％、59．91％）比较，早期AS患者外周血CD3^＋CD4^＋T细胞上的Fas的表达率（64．75％）明显升高（P〈0．05），而CD3^＋CD8^＋T细胞上的Fas的表达率（48．64％）明显降低（P〈0．05），Fas在晚期AS患者外周血CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋T细胞上的表达率（57．63％、56．32％）无明显变化。结论Fas、FasL在外周血T细胞亚群上的表达水平与AS的病情发展阶段相关；Fas、FasL的异常表达所导致T细胞凋亡功能紊乱可能是AS发病的重要机制之一。     

结肠癌患者外周血 CD4+ CD25+调节性 T细胞检测的临床意义

目的 探讨结肠癌患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞检测的临床意义。方法采用流式细胞技术对51例结肠癌患者和30例健康体检者外周血淋巴细胞CD4及CD25进行了检测。结果（1）结肠癌组CD4^＋CD25^＋细胞明显高于正常对照组（P〈0．05），CD4^＋CD25^＋细胞则显著低于正常对照组（P〈0．05）；（2）结肠癌组手术后患者CD4^＋CD25^＋、CD4^-CD25^＋细胞与手术前相比显著下降（P〈0．05）；（3）结肠癌组淋巴结转移患者CD4^＋CD25^＋细胞明显高于未转移组（P〈0．001）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数可以反映肿瘤患者免疫系统存在抑制状态，且可能与肿瘤的免疫耐受有关，并可反映肿瘤淋巴结转移状况。     

梗阻性大肠癌患者术前外周血细胞免疫水平检测及其临床意义

为观察梗阻性因素对大肠癌患者术前外周血细胞免疫水平的影响,探讨其对一期切除吻合术式选择的影响,我们使用流式细胞仪对21例梗阻性大肠癌患者、72例非梗阻性大肠癌患者术前3d内外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤（NK）细胞活性进行检测,并选取同期15名健康志愿者作为对照,进行对比分析。结果显示,与对照组相比,梗阻性大肠癌组和非梗阻性大肠癌组外周血CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋比值及NK细胞显著减少（P〈0．01）,CD8^＋细胞增多（P〈0．01）;但梗阻性大肠癌组T细胞亚群和NK细胞与非梗阻性大肠癌组相比,差异无统计学意义（P〉0．05）。结果表明,单从细胞免疫角度进行考虑,梗阻性因素并不影响对大肠癌患者行一期切除吻合术式的选择。     

肾移植患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及临床意义

目的观察肾移植患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平的变化，探讨其在诊断移植肾急性排斥反应中的作用。方法采用流式细胞仪检测26例肾移植患者及30例正常对照组外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平。结果①慢性肾衰竭患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。②非排斥组移植后1、2、4、8周CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平明显高于移植前（P〈0．01）。③急性排斥组排斥反应主要发生在术后第7～21d，其CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平明显低于同期的非排斥组（P〈0．01）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平的测定可以作为肾移植患者移植后急性排斥反应诊断和预测预后的重要指标。     

原发性肝癌患者外周血Th17与CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达的相关性研究

目的探讨原发性肝癌患者外周血Th17和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达水平及其相关性。方法选取2008年6月—2009年5月浙江大学医学院附属第一医院30例原发性肝癌患者和25名健康人群,采血并分离其外周血单个核细胞。利用流式细胞仪分别测定Th17和CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞的表达,采用t检验分析两组的表达差异。同时,采用Spearman检验对原发性肝癌患者外周血中Th17和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达进行相关性分析。结果健康对照组外周血中Th17细胞为（2．10±0．87）％,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞为（7．10±2．32）％,原发性肝癌组外周血中Th17细胞为（3．38±1．68）％,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞为（11．78±5．62）％,两组差异具有统计学意义（t=3．640和4．162,P值均〈0．01）。原发性肝癌患者组外周血Th17细胞与CD4^＋CD25^＋Fosp3^＋调节性T细胞表达呈正相关（r=0．821,P〈0．01）。结论原发性肝癌患者外周血Th17和CD4^＋CD25^＋Fosp3^＋调节性T细胞表达水平较高,二者呈正相关。CD4^＋CD25^＋Fosp3^＋调节性T细胞可能通过促进Th17细胞分化导致肿瘤的发生与发展。     

慢性特发性荨麻疹患者外周血T及Th淋巴细胞亚群的表达

目的：探讨慢性特发性荨麻疹患者外周血T及辅助性T淋巴细胞（Th）亚群的表达及其在慢性特发性荨麻疹发病机制中的作用。方法：采用流式细胞术检测经四色荧光抗体染色的慢性特发性荨麻疹患者及正常对照外周血CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞数及CD4^＋／IFN-γ’（Th1）、CD4^＋／IL-4^＋（Th2）细胞含量。结果：慢性特发性荨麻疹组外周血CD3^＋T淋巴细胞数无明显变化、CD4^＋T淋巴细胞数、CD8^＋T淋巴细胞数均降低;CD4^＋／CD8^＋比值增高,差异有统计学意义（P〈0．01）。慢性特发性荨麻疹患者外周血Th1细胞含量、Th1／Th2比值均明显低于正常对照组（P〈0．01,P〈0．05）,Th2细胞含量高于正常对照组（P〈0．01）。结论：慢性特发性荨麻疹患者外周血存在着T及Th淋巴细胞亚群分化失衡,这可能为慢性特发性荨麻疹发病的机制之一。     

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞亚群及NK细胞的特点及意义

目的探讨慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染者外周血T细胞亚群及NK细胞的特点及临床意义。方法采用流式细胞术检测各研究组,包括慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）组33例、乙型肝炎失代偿期肝硬化（1iver cirrhosis,LC）组20例、慢性乙型重型肝炎（chronic severe hepatitis B,CSH）组17例及健康对照组（Control）20例的外周血T细胞亚群及NK细胞相对计数,并检测肝功能、HBVDNA含量及HBV血清标志物。结果按Control、CHB、LC、CSH顺序,CD3^＋T细胞、CD8^＋T细胞百分比依次升高,而CIM^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值及NK细胞百分比依次降低,且CHB、LC、CSH组与Control组及CHB组与CSH组相比,差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．008）。CHB患者的CD3^＋T细胞与血清总胆红素（total bilirubin,TB）、HBVDNA含量（log_10）呈正相关（P〈0．001;P〈0．001）;CD8^＋T细胞与HBVDNA含量（log_10）呈正相关（P=0．007）,NK细胞与HBVDNA含量（log_10）（P=0．001）呈负相关。CHB组乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性者的CD4^＋T细胞及CD4^＋／CD8^＋比值低于HBeAg阴性者（P=0．018;P〈0．001）,而HBVDNA含量（log_10）和CD8^＋T细胞高于HBeAg阴性者（P=0．012;P=0．019）。结论慢性HBV感染者外周血T细胞亚群及NK细胞相对值紊乱,且与临床类型、病情、血清HBVDNA水平及HBeAg相关。     

CD4+ CD25+ Treg细胞延长大鼠肾移植术后存活时间的量效关系分析

目的观察肾移植受者（Wistar大鼠）应用供者（SD大鼠）抗原特异性CD4^＋CD25^＋免疫调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg细胞）对移植肾存活时间的影响，为CD4^＋CD25^＋Treg细胞在体内应用提供定量分析依据。方法SD大鼠为供者，Wistar大鼠为受者，建立同种肾移植动物模型；免疫磁珠（MACS）法分选Wistar大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋T细胞，检测CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞的纯度，并诱导其对SD大鼠供者抗原的特异性表型；根据在肾移植术中经受者尾静脉注射不同数量（2×10^5、5×10^5、1×10^6、2×10^6）的供者抗原特异性CD4^＋CD25^＋T细胞分为：实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组，并以未注射组作为对照。术后观察移植肾的存活时间；监测血肌酐（cr）的水平；按照BanffSchema标准进行移植肾病理诊断，并根据Watanabe的方法进行半定量评分。结果肾移植术后实验Ⅲ组平均存活时间最长，为（31．4±4．6）d，对照组平均存活时间最短，为（11．7±6．2）d；各实验组与对照组间血Cr检测结果比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；实验Ⅲ组和Ⅳ组不同时段的移植肾病理检查半定量评分结果与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论初步证实在受者体内应用适当数量的供者抗原特异性CD4^＋CD25^＋Treg细胞，能够改善移植肾的功能，有效延长大鼠肾移植术后的存活时间。     

非小细胞肺癌患者围术期细胞免疫功能的变化及免疫治疗

目的观察围术期非小细胞肺癌患者细胞免疫功能的变化及应用胸腺肽α1后对机体免疫功能的影响,为临床应用免疫增强剂联合手术治疗非小细胞肺癌患者提供依据。方法将97例行肺叶或右全肺切除术的非小细胞肺癌患者分为两组,组1：围术期给予胸腺肽α1治疗;组2：围术期未给予胸腺肽α1治疗;对照组：另选择19例同期非肺癌而采取手术治疗的肺部疾病患者作为对照。采用间接免疫荧光法（IFCA）测定3组围术期T细胞亚群的百分率变化。结果术后第1d组1 CD4^＋T、CD4^＋T／CD8^＋T高于组2（CD4^＋T 36．92％±2．10％ vs．31．18％±7．64％;CD4^＋T／CD8^＋T 1．31±0．36 vs．1．09±0．32;P〈0．05）,术后第3d组1 CD4^＋T和CD4^＋T／CD8^＋T高于组2（CD4^＋T 45．66％±3．77％ vs．34．70％±8．42％;CD4^＋T／CD8^＋T 1．42±0．11 vs．1．14±0．20;P〈0．05）;术后第9d CD4^＋T、CD4^＋T／CD8^＋T高于组2（CD4^＋T 47．28％±1．96％ vs．39．12％±3．10％;CD4^＋T／CD8^＋T 1．46±0．14 vs．1．22±0．36;P〈0．05）;术后第16d组1 CD4^＋T、CD4^＋T／CD8^＋T与组2和对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论非小细胞肺癌患者的免疫功能低下,应用胸腺肽α1后细胞免疫功能较快恢复至正常状态,对非小细胞肺癌患者早期采用手术、化疗／放疗的综合治疗有助于提高治疗效果。     

Acceleration of apoptosis in CD4+CD8+ thymocytes by rapamycin accompanied by increased CD4+CD25+ T cells in the periphery

BACKGROUND: Rapamycin (Rapa) is an immunosuppressant that is used in patients and animal models to control allograft rejection. Its mechanisms of action are not fully understood. In this article, the authors have investigated the effects of therapeutic doses of Rapa on both thymic and peripheral T-cell populations in the adult rat. METHODS: The therapeutic dosage of Rapa was optimized using cardiac transplantation between LEW and DA rats. Thymic morphology was assessed by hematoxylin-eosin staining. Flow cytometric analysis was performed to analyze T-cell phenotype and apoptosis. T-cell receptor (TCR)-mediated T-cell responsiveness was evaluated by 3[H]-thymidine deoxyribose incorporation. RESULTS: Rapa induced atrophy in the thymus but not in peripheral lymphoid organs. Moreover, fibrosis occurred in thymus that was long-lasting after Rapa withdrawal. In animals treated with Rapa, there was a significant reduction in CD4+CD8+ thymocytes caused by accelerated apoptosis, whereas CD4-CD8-, CD4+CD8-, and CD8+CD4- populations remained unaffected. In contrast, the cellularity of the periphery lymphoid organs was not altered. Within the CD4+ thymocyte population, CD4+CD25+ thymocytes were resistant to Rapa-accelerated apoptosis, and in the periphery, the ratio of CD4+CD25+ to CD4+CD25- T cells was increased. Notably, the peripheral CD4+CD25+ T cells were hyporesponsive to TCR-mediated activation. CONCLUSIONS: The resistance of the peripheral CD4+CD25+ T cells to Rapa treatment might contribute to its immunosuppressive action. The long-term effects of Rapa on thymus atrophy and thymocyte development requires consideration with respect to its clinical application.     

血清微环境对小鼠T细胞衰老的调节作用

目的：探讨血清微环境对小鼠T细胞衰老的调节作用。方法：分别取年老（12～14月龄）及年轻（1.5～2月龄）小鼠各10只,提取其脾脏淋巴细胞及血清,实验分4组。组I为年老鼠T淋巴细胞＋10%年轻鼠血清;组II为年老鼠T淋巴细胞＋10%年老鼠血清;组III为年轻鼠T淋巴细胞＋10%年轻鼠血清;组IV为年轻鼠T淋巴细胞＋10%年老鼠血清。培养48h后,经流式细胞术研究CD8＋CD28＋共表达率差异。结果：组I和组II T细胞表面的CD8＋CD28＋共表达率分别是（10.84±0.6841）%和（3.18±0.1789）%,组III和组IV T细胞表面的CD8＋CD28＋共表达分别是（12.5±0.9445）%和（8.36±0.2074）%。各组间对比有统计学差异（P〈0.05）结论：血清微环境具有调节小鼠T细胞衰老的作用,年轻鼠血清能使年老鼠的T细胞表面的CD8＋CD28＋共表达率提高,年老鼠的血清能使年轻鼠的T细胞表面的CD8＋CD28＋共表达率降低。     

肝癌、肝硬化组织中CD3、CD57、CD20细胞数量与临床病理表现及预后的关系

目的探讨CD3、CD57、CD20细胞在原发性肝细胞癌(HCC)、癌旁、肝硬化及正常肝组织中的数量及意义.方法HCC 60例,单纯性肝硬化62例,正常肝组织23例,以免疫组化SP法进行CD3、CD57、CD20染色,对阳性细胞数进行定量分析并与临床资料进行相关探讨.结果(1)各组CD3+细胞平均数从高到低为癌旁组织、癌组织、肝硬化组织、正常肝组织(P＜0.05);各组CD57+细胞平均数从高到低为癌组织、癌旁组织、正常肝组织、肝硬化组织(P ＜0.05);各组CD20+细胞平均数从高到低为癌组织、癌旁组织、肝硬化组织、正常肝组织(P ＜0.01).(2)HCC中CD3+细胞、CD57+细胞、CD20+细胞与组织学分级均无明显关系.(3)HCC中CD57+细胞和CD20+细胞随着临床分期的发展有下降的趋势(P ＜0.05);HCC中CD3+细胞平均数与临床TNM分期无关.(4)HCC中15月内有转移组的CD57+、CD3+细胞数均少于无转移组(P＜0.01).HCC患者15月内有无转移与HCC和癌旁组织中的B细胞分布均无关.结论临床上,随着HCC患者的病情恶化,CD3+、CD57+、CD20+细胞逐渐减少.CD3+、CD57+、CD20+细胞可成为反映机体抗肿瘤特异性细胞免疫状态和生物学行为及判断患者预后的重要指标.     

CD19+CD5+ B cells in primary IgA nephropathy

The source of IgA and the mechanism for deposition of IgA in the mesangium remain unknown for primary IgA nephropathy. Because CD19(+)CD5(+) B cells are important producers of IgA and contribute to several autoimmune diseases, they may play an important role in IgA nephropathy. In this study, flow cytometry, quantitative PCR, and confocal microscopy were used to assess the frequency, distribution, Ig production, CD phenotypes, cytokine production, and sensitivity to apoptosis of CD19(+)CD5(+) B cells in the peripheral blood, peritoneal fluid, and kidney biopsies of 36 patients with primary IgA nephropathy. All patients with IgA nephropathy were significantly more likely to have CD19(+)CD5(+) B cells in the peripheral blood, peritoneal fluid, and kidney biopsies than were five control subjects and 10 patients with active systemic lupus erythematosus. The 33 patients who had IgA nephropathy and responded to treatment demonstrated a significant decrease in CD19(+)CD5(+) B cells in the peripheral blood, peritoneal fluid, and kidney (all P < 0.01). In the three patients who had IgA nephropathy and did not respond to treatment, the frequency of CD19(+)CD5(+) B cells did not change. CD19(+)CD5(+) B cells isolated from patients with untreated IgA nephropathy expressed higher levels of IgA, produced more IFN-gamma, and were more resistant to CD95L-induced apoptosis than cells isolated from control subjects and patients with lupus; these properties reversed with effective treatment of IgA nephropathy. In conclusion, these results strongly suggest that CD19(+)CD5(+) B cells play a prominent role in the pathogenesis of primary IgA nephropathy.     

Relative Resistance of Human CD4+ Memory T Cells to Suppression by CD4+CD25+ Regulatory T Cells

Successful expansion of functional CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells (T_reg) ex vivo under good manufacturing practice conditions has made T_reg‐cell therapy in clinical transplant tolerance induction a feasible possibility. In animals, T_reg cells home to both transplanted tissues and local lymph nodes and are optimally suppressive if active at both sites. Therefore, they have the opportunity to suppress both naïve and memory CD4⁺CD25^? T cells (Tresp). Clinical transplantation commonly involves depleting therapy at induction (e.g. anti‐CD25), which favors homeostatic expansion of memory T cells. Animal models suggest that T_reg cells are less suppressive on memory, compared with naïve Tresp that mediate allograft rejection. As a result, in the context of human T_reg‐cell therapy, it is important to define the effectiveness of T_reg cells in regulating naïve and memory Tresp. Therefore, we compared suppression of peripheral blood naïve and memory Tresp by fresh and ex vivo expanded T_reg cells using proliferation, cytokine production and activation marker expression (CD154) as readouts. With all readouts, naïve human Tresp were more suppressible by approximately 30% than their memory counterparts. This suggests that T_reg cells may be more efficacious if administered before or at the time of transplantation and that depleting therapy should be avoided in clinical trials of T_reg cells.