原子力显微镜对泌尿系结石超微结构的研究

目的 研究和观察泌尿系结石的超微结构。方法 10枚结石分别做超薄切片(厚度小于3mm),打磨抛光处理,并收集粉末。先行原子力显微镜观察,再做成电镜标本观察分析。结石粉末均行X-线衍射检测。结果 得到肾盂结石和膀胱结石超微结构的AFM图像和电镜扫描图像,X-线衍射检测有7枚是草酸钙结石,3枚是磷酸钙结石。测得草酸钙结石和磷酸钙结石的微小晶粒尺寸。分析AFM的反转片信息,获得结石基质的空间构架图像。结论 应用原子力显微镜技术可以实现对泌尿系结石超微结构直接实时的观察分析。尿结石的超微结构形态与结石所处部位无关,而取决于结石晶体类型。草酸钙结石的晶体和基质的AFM图像与磷酸钙结石不尽相同,晶体尺寸有差异(P<0.05)。结石基质的空间构架为晶体的聚集提供了可能性。     

聚维酮联合阿霉素对人膀胱癌T24细胞株的作用

聚维酮（PVP）作为阿霉素（ADM）溶剂行膀胱灌注具有黏膜黏附和免疫增强作用。但PVP是否具有抗人膀胱癌及促进化疗药疗效的作用报道尚少。对此我们观察了PVP联合ADM对人膀胱癌T24细胞的作用，报道如下。     

蛇葡萄素对人膀胱癌细胞株T24的作用

目的 观察蛇葡萄素对体外人膀胱癌细胞株T24的增殖抑制作用.方法 以浓度为20、10、5、320、160、80、40 mg/L的蛇葡萄素作用于体外培养的人膀胱癌细胞株T24应用噻唑蓝(MTT)的培养检测增殖抑制方法.结果 浓度为20、10、5 mg/L的蛇葡萄素对体外人膀胱癌细胞株T24的增殖抑制率明显高于浓度为320、160、80、40 mg/L的蛇葡萄素.结论 蛇葡萄素对体外人膀胱癌细胞株T24的增殖有抑制作用,而且增殖抑制率与蛇葡萄素的浓度剂量不成正比例,在一定范围内的浓度达到最大的抑制率,不会因浓度增加而抑制率增加.浓度为20、10、5 mg/L更能有效的抑制人膀胱癌细胞株T24的增殖.     

丝裂霉素联合雷帕霉素对人膀胱癌T24细胞抑制作用的比较研究

目的:观察丝裂霉素(MMC)联合雷帕霉素(RAPA)对体外培养的人膀胱癌T24细胞抑制作用是否比单药大。方法:体外培养人膀胱癌T24细胞,通过MTT实验及相关公式计算,得出MMC和RAPA的IC50值,以此值及相关药量应用于膀胱癌T24细胞,经24、48h,比较两种药物单用及联合用药(全量及半量)对癌细胞的抑制率,得出抑制率最高的药物(两种单药或联合用药)。采用方差分析、SNK-q检验分析得出结果。结果:MMC、RAPA的IC50值分别为12μg/ml、125μg/L(最后实验所用)。两种药物单用及联合用药的24h抑制率最高的是MMC联合RAPA,全量及半量联合的抑制率差异无统计学意义,两者抑制率分别为63.64%及73.68%;MMC联合RAPA比单药的抑制率高,差异有统计学意义;与单药48h抑制率比较,MMC联合RAPA的抑制率差异无统计学意义(其中MMC联合RAPA全量联合的抑制率最大,为98.53%),但是高于RAPA的抑制率,差异有统计学意义。结论:MMC联合RAPA对体外培养的人膀胱癌T24细胞抑制作用比单药大。     

hepaCAM基因对人膀胱癌T24细胞黏附性影响及其机制

目的 探讨转染外源性野生型hepaCAM基因对人类膀胱移行细胞癌T24细胞黏附性的影响及其机制.方法 用脂质体介导的基因转染技术,将pEGFP-N2-hepaCAM质粒转染人人膀胱癌T24细胞,用潮霉素G418(400 ms/L)筛选出阳性克隆.Western blot检测hepaCAM蛋白表达;T24细胞与血管内皮细胞黏附实验了解hepaCAM基因对T24细胞黏附力的影响;激光共聚焦显微镜观察T24细胞肌动蛋白细胞骨架的形态学变化;流式细胞仪检测T24细胞肌动蛋白的含量变化.结果 获得稳定表达hepaCAM基因的T24细胞克隆;Western blot证实hepaCAM蛋白的表达;T24细胞与血管内皮细胞黏附实验表明实验组细胞的黏附能力(0.182±0.012)%明显高于空白组(0.110±0.002)%及阴性对照组(0.105±0.004)%(P<0.05);实验组纤维状肌动蛋白荧光增强,亮度增加,按细胞极性方向排列紧密规则,空白组及阴性对照组纤维状肌动蛋白荧光弥散,亮度降低,极性消失,排列疏松不规则;流式细胞分析仪检测证明实验组纤维状肌动蛋白含量(60.71±8.25)%明显高于空白组(7.00±1.01)%及阴性对照组(8.50±1.26)%(P<0.05).结论 hepaCAM基因可显著增强肿瘤细胞的黏附力,其原因可能是通过重组人类膀胱移行细胞癌T24细胞肌动蛋白骨架而影响肿瘤细胞的侵袭与转移.     

膀胱癌细胞株T24中侧群细胞的分离和功能鉴定

目的 观察膀胱癌细胞株T24中是否存在侧群(SP)细胞及其比例,并鉴定其功能.方法 利用双波长流氏细胞仪(FACS)检测T24中SP细胞的比例,并证实这些SP细胞是否具有癌干细胞的特点.结果 T24中SP细胞占34.7%;与非侧群(NSP)细胞比较,SP细胞有更强的生长增殖能力和克隆形成能力(P＜0.05),表达更高的ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)和干性基因,对放化疗有更强的抵抗能力,有更多的细胞处于G_0/G_1期(87.4%比63.3%,P＜0.05);分选后的sP和NSP细胞经过约10 d的常规培养,SP细胞中NSP的比例占76.2%,而NSP细胞中SP的比例只占2.6%.结论 膀胱癌细胞株T24中存在很高比例的SP细胞,而且这些SP细胞有癌干细胞的特点.     

原子力显微镜对角质形成细胞与黑素细胞共培养模型的观察研究

目的：用原子力显微镜观察人表皮黑素细胞（MC）、角质形成细胞（KC）单独培养和共培养的表面形态以及α-促黑素（α-MSH）对细胞表面形态的影响。方法：分别纯化培养来自人包皮的表皮MC和KC,MC以自配的添加MC生长物质的MCDB153培养基培养,KC以KC无血清培养基（K-SFM）常规培养。传第2代后以1：10的比例将两细胞接种到3Cm×3Cm的小培养皿中,以K-SFM培养基继续培养,单独或混合培养的细胞经添加含或不含100nMα-MSH的培养基干预3天后,0．5％戊二醛固定10min,原子力显微镜常温常压下,触摸式扫描。结果：正常人表皮MC有3个树突,每个树突有明显的二级分枝,除主干和分支见到膨出的颗粒物质,我们在树突的侧缘底侧和顶端还发现有丝状伪足结构,经α-MSH刺激后树突明显变长、变细,主干和分支表面膨出颗粒物质更为密集,许多已脱离枝干,丝状伪足则未有明显变化。表皮KC表面可见许多片状或钩状突起。共培养后,KC与MC接触部位可见明显的丝状伪足样结构,未连接部位则未见到丝状伪足样结构,添加α-MSH后,两细胞连接处的丝状伪足样结构明显增多。结论：通过胞吐和丝状伪足输送可能是黑素小体从MC向KC传递的两种主要方式,α-MSH可能通过促进这两种结构的发生而发挥促黑素传递的作用。     

赫赛汀联合丝裂霉素C对人膀胱癌T24细胞生长的抑制作用

目的 探讨赫赛汀(Herceptin,HER)联合丝裂霉素C(MMC)对HER-2/neu基因高表达人膀胱癌细胞株生长的抑制作用.方法 应用免疫细胞化学法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测膀胱癌T24细胞株HER-2/neu的表达;采用噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度HER(10、20、40、80、160μg/L)、MMC(4、8、16、32、64μg/L)及联合用药对人膀胱癌T24细胞株体外生长的抑制率并进行比较.结果 应用免疫细胞化学方法及RT-PCR法检测证实HER-2/neu在膀胱尿路上皮癌T24细胞株高表达;单用HER于72 h出现细胞抑制(72 h时各浓度组分别与48 h时比较,均P<0.05);HER和MMC联用在24、48、72 h基本上均表现为协同作用(q值1.264～3.473),在96 h呈相加作用(q值0.913～1.138).结论 HER-2/neu在膀胱尿路上皮癌T24细胞株高表达;HER单药对T24细胞有轻度抑制作用,且起效慢(72 h);与MMC联合应用能协同抑制T24细胞生长.     

原子力显微镜新应用:单细胞诊断肝癌

目的 运用原子力显微镜(AFM)分析正常肝细胞、肝硬化细胞、肝癌细胞膜表面微细结构;绘出细胞膜表面蛋白变化图,并以此图作为诊断肝癌的标准.方法 选取正常肝细胞、肝硬化细胞、肝癌细胞各40组,利用AFM对标本扫描,将细胞膜表面扫描图用分析软件进行分析.结果 正常肝细胞、肝硬化细胞、肝癌细胞的细胞膜表面结构存在明显的差异,从正常肝细胞到肝硬化细胞再到肝癌细胞是一个渐进的过程.每个细胞膜表面的蛋白微细结构分布并不均匀,从膜表面蛋白分析数据中可看到它们存在差异.结论 依据细胞膜表面分析数据做出三组图形,我们可以以此为肝癌的诊断标准,只要获得一个细胞,即可做出肝癌的诊断.根据细胞膜表面蛋白分布的不同,将细胞膜表面分为功能活跃区和功能不活跃区.     

吡柔比星与丝裂霉素C对膀胱癌T24细胞株抑制作用的实验研究

目的探讨吡柔比星（THP）与丝裂霉素C（MMC）对膀胱癌T24细胞株的抑制作用。方法将膀胱癌T24细胞株分为4组,分别给予THP、MMC、THP＋MMC和MMC＋THP。用MTT法测定T24细胞的增殖抑制率,用TuNEL法检测T24细胞的凋亡情况。结果THP、MMC、THP＋MMC和MMC＋THP四组的增殖抑制率（％）分别为54．3±6．4,48．9±7．2,62．3±5．9,69．1±6．2;凋亡指数（％）分别为6．2±2．5,4．4±2．7,6．7±3．0,7．4±3．2。联合用药组对T24细胞的抑制作用优于单药THP和MMC对肿瘤细胞的抑制作用（P〈0．05）。在联合用药组中,MMC＋THP组对T24细胞的抑制作用优于THP＋MMC组对肿瘤细胞的抑制作用（P〈O．05）。结论THP和MMC均可抑制膀胱癌T24细胞株的增殖并诱导凋亡,两药序贯联合用于膀胱灌注化疗可能具有合理性。     

膀胱癌细胞凋亡检测方法的比较研究

目的 比较几种检测羟基喜树碱（ＨＰＴ）诱导的膀胱癌细胞凋亡的方法。方法 通过流式细胞分析观察ＨＰＴ诱导Ｔ２４膀胱癌细胞凋亡的量效关系;通过荧光染色对凋亡细胞的形态特征进行分析;直接使用苏木素染色进行细胞凋亡的检测;应用ＤＮＡ分析进行ＤＮＡｌａｄｄｅｒ检测。结果 （０．０１￣１０）μｇ／ｍｌ的ＨＰＴ在体外能够诱导Ｔ２４细胞凋亡,其最佳诱导时间在３小时以后。流式细胞（０．０１￣１０）μｇ／ｍｌ的ＨＰ     

TRPM7在膀胱癌细胞增殖与凋亡中的调控作用

目的 探讨薄荷醇受体7（transient receptorpotential melastatin 7,TRPM7）在膀胱癌细胞株T24细胞增殖与凋亡中的调控作用及分子机制.方法 采用RT-PCR及Western blot检测T24细胞株中TRPM7 mRNA及蛋白的表达;分别采用通道阻滞剂及基因沉默的方法阻断TRPM7离子通道的功能,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡率,Western blot检测Cdk4、Cdk6及Cyto C的表达.结果 RT-PCR及Western blot证实T24细胞株中存在TRPM7 mRNA及蛋白的表达;采用基因沉默及通道阻滞剂阻断TRPM7的功能后,T24细胞存活率分别下降了56.48％和54.87％,处于G0/G1期的细胞随阻滞剂浓度增加而显著增加,细胞凋亡率亦随之增加并呈浓度依赖性,与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）.Western blot显示阻断TRPM7后,T24细胞Cdk4、Cdk6的表达减少,而Cyto C的表达增加.结论 TRPM7可促进T24细胞增殖,抑制细胞凋亡.这一过程可能通过调节Cdk4、Cdk6及Cyto C的表达来实现.阻断TRPM7的功能,能够抑制T24细胞增殖,促进细胞凋亡,可能为临床治疗膀胱癌提供新的靶点.     

羟基喜树碱对膀胱癌细胞自分泌的影响

目的 检测膀胱癌细胞自分泌因子并探讨羟基喜树碱对自分泌的影响。方法 采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,在无血清培养情况下检测膀胱癌Ｔ２４细胞株自分泌因子ＩＧＦ－１、ＩＧＦ－２、ＩＧＦ－１受体、白细胞介素（ＩＬ）－６受体、ＩＬ－６受体表达情况,并进一步用半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法观察膀胱灌流药物羟基喜树碱分别在０．００５、０．０１０、０．０２０ｍｇ／Ｌ浓度时对前述指标的影响。结果 经羟基喜树碱（０．０１０ｍｇ／Ｌ）处理后,ＩＧＦ－１、ＩＧＦ－２、ＩＧＦ－１受体、ＩＬ－６、ＩＬ－６受体分别下降下４４．８％,５９．７％,３９．３％,５１．５％及４６．２％,同未痉基喜树碱处理组相比差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。结论 膀胱癌细胞可自分泌ＩＬ－６、ＩＧＦ－１、ＩＧＦ－２等自分泌因子,羟基喜树碱对膀胱肿瘤自分泌表达的     

Cytokine production by the human bladder carcinoma cell line T24 in the presence of bacillus Calmette-Guerin (BCG)

Summary The study was initiated as an in vitro approach to the situation existing during intravesical bacillus Calmette-Guerin (BCG) instillation in patients with superficial bladder cancer. Cytokine secretion of a human bladder carcinoma cell line T24 treated with BCG was investigated. A 24-h treatment of T24 cells with BCG resulted in a tenfold higher secretion of interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor alpha (TNF) when compared with T24 cells treated with Escherichia coli, Streptococcus faecalis or a cell wall preparation of Nocardia rubra (N-CWS). No secretion of IL-1 and IL-2 was detected. Pre-exposing T24 cells to BCG for various periods of time indicated that a minimum exposure time of 0.5–1 h was required to upregulate IL-6 and TNF production. Extending the BCG pre-exposure time to 2 and 3 h further increased the rate of cytokine production. No significant difference was found, however, between the rate of secretion initiated after a 2-h or 3-h pre-exposure period. The amounts of these cytokines secreted in the presence of BCG-conditioned medium did not differ significantly from the constitutively secreted amounts, excluding an effect of products possibly secreted by BCG on the upregulation of IL-6 and TNF. In addition, upregulation of cytokine production appeared to be dependent on the concentration of BCG. The results suggest that cytokines may be produced by urothelial tumor cells after intravesical instillation in patients with superficial bladder cancer, which may play a role in the mode of action of BCG.     

全反式维甲酸诱导人膀胱癌细胞T24凋亡的研究

目的　探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ） 诱导人膀胱癌细胞Ｔ２４ 凋亡的可能性。方法　应用细胞和分子生物学技术检测不同浓度ＡＴＲＡ 对Ｔ２４ 细胞生长和凋亡的影响。结果　３ ×１０－５ ～３ ×１０－ ７ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ可显著抑制Ｔ２４ 细胞增殖。用３×１０－５ ｍｏｌ／Ｌ和３×１０－ ６ ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ 作用细胞６ 天,可出现典型凋亡特征;３ ×１０－５ 、３×１０－ ６ ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ 组及对照组的细胞凋亡率分别为２０ ．１６ ％ 、１５ ．３１％和１ ．４９ ％ ;ＤＮＡ 琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡特征性的ＤＮＡ 梯形带。结论　ＡＴＲＡ对人膀胱癌细胞Ｔ２４ 有剂量生长抑制作用,且可成功地诱导人膀胱癌细胞Ｔ２４ 发生凋亡。     

自稳定反义IGF1R基因片段对膀胱癌细胞的影响

目的　探讨针对胰岛素样生长因子 1受体 (IGF1R )基因的自稳定反义脱氧寡核苷酸(ODN)对膀胱癌细胞的影响。　方法　采用RT -PCR、Westernblot、MTT试验、流式细胞仪对经反义ODN作用后的T2 4膀胱癌细胞进行动态分析。　结果　自稳定反义ODN在血清培养基中 2 4h内均保持稳定状态 ,而硫代反义ODN 4h后基本降解。自稳定反义ODN可有效降低T2 4膀胱癌细胞IGF1R基因及蛋白表达 ,增强膀胱癌细胞对丝裂霉素的敏感性及凋亡易感性。　结论　IGF1R基因的自稳定反义ODN可能是一种治疗膀胱肿瘤的新途径     

端粒酶反义RNA转染促进膀胱癌T24细胞凋亡的研究

目的　探讨端粒酶反义RNA对膀胱癌T2 4细胞恶性表型的抑制及促进其凋亡的作用。　方法　采用脂质体转染法将转录出端粒酶反义RNA质粒导入膀胱癌T2 4细胞。应用PCR ELISA法测定转染后T2 4细胞的端粒酶活性 ;光镜、电镜、MTT及流式细胞术 (FCM )等方法观察端粒酶反义RNA对T2 4细胞生长及凋亡的影响。　结果　端粒酶反义RNA能显著抑制T2 4细胞的端粒酶活性 ,转染T2 4细胞后使其生长受到抑制。形态学观察 ,转染后T2 4细胞出现典型的凋亡现象。FCM检测发现G1期前出现凋亡峰。　结论　转染端粒酶反义RNA能抑制膀胱癌T2 4细胞的恶性表型 ,促进其凋亡