串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨

目的：构建高迁移率族蛋白B1（HMGB1）中细胞因子诱导片段1（CIF1）与串联亲和纯化（TAP）系统中纯化标签链霉亲和素结合肽（SBP）和钙调蛋白结合肽（CBP）序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核／巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础。方法：采用PCR方法分别扩增出cBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b／CBPSBP—CIF。利用Ni—NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85％以上。采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核／巨噬细胞白血病细胞RAW264．7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264．7细胞释放TNF-a的水平变化。结果：表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好。当蛋白浓度大于0．5ng／μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性（P〈0．05）,并且在CIF1蛋白浓度O～2．5ng／μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系。结论：原核表达纯化了His—CBP—SBP—CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF—α的分泌表达。     

CUG结合蛋白1在非小细胞肺癌中的表达及与预后的关系

目的探讨非小细胞型肺癌组织中CUG结合蛋白1（CUGBP1）mRNA及蛋白的表达以及与预后的关系。方法选取2009年7月至2011年4月在青岛大学附属医院胸外科接受手术治疗的57例非小细胞型肺癌患者,男32例,女25例;年龄43～74（60．6±8．9）岁。通过半定量逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组织化学技术检测癌组织及周围正常组织CUGBP1的基因和蛋白表达情况。所有患者术后每2个月电话随访1次,采用肿瘤进展时间（TTP）作为观察评估指标,分析CUGBP1 mRNA及临床病理各指标与预后的关系。采用χ^2检验对CUGBP1 mRNA及蛋白的表达进行统计分析,采用COX单因素及多因素分析CUGBP1 mRNA对于肺癌预后的意义。结果CUGBP1 mRNA及CUGBP1蛋白在肺癌组织中高表达,并且与TNM分期及分化密切相关。通过单因素及多因素分析,CUGBP1 mRNA[P=0．0074,HR=3．701,95％CI（1．420,9．648）]、TNM分期[P〈0．0001,HR=4．043,95％CI（2．098,7．794）]及年龄（P=0．0018,HR=3．207,95％CI（1．544,6．664）]可以作为非小细胞肺癌患者的独立预后因素。结论CUGBP1 mRNA及蛋白在肺癌组织中高表达。作为非小细胞肺癌患者的独立预后因素,CUGBP1 mRNA高表达患者预后较差。     

非小细胞肺癌组织中磷酸化4E结合蛋白1表达及其与根治术后复发的关系

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中磷酸化4E结合蛋白1(p-4EBP1)表达及其与根治术后复发的关系。方法：选取本院2020年1月—2021年1月收治的111例行根治术的NSCLC患者,收集患者手术切除的肺癌组织和癌旁组织,采用免疫组化法检测肺癌组织及癌旁组织中p-4EBP1蛋白表达,比较不同临床病理特征NSCLC患者肺癌组织p-4EBP1蛋白表达情况。随访统计NSCLC患者术后1年复发情况,对比复发组（20例）和未复发组（91例）肺癌组织p-4EBP1蛋白表达,并采用多因素Cox回归模型分析NSCLC根治术后复发的影响因素。结果：肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率高于癌旁组织（70.27%vs 16.22%,P <0.05）;临床分期Ⅲa期、低分化、淋巴结转移患者肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率分别高于临床分期Ⅰ/Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移患者（P <0.05）;术后1年,111例患者的复发率为18.02%(20/111),复发组肺癌组织p-4EBP1蛋白阳性表达率高于未复发组（90.00%vs 65.93%,P <0.05）;复发组有吸烟史、临床分...     

血管内皮生长因子、p53蛋白表达对术前化疗的Ⅲa期非小细胞肺癌患者生存率的影响

血管内皮生长因子（VEGF）、p53蛋白表达是非小细胞肺癌重要的不良预后因素，而且与其化学治疗（化疗）疗效相关。本研究应用免疫组织化学（组化）方法检测化疗前非小细胞肺癌组织VEGF、p53蛋白的表达，探讨其对术前化疗的Ⅲa期非小细胞肺癌患者生存率的影响。     

肺癌磷酸酯酶蛋白与端粒酶逆转录酶表达的相关性研究

目的探讨10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶蛋白（PTEN）和人端粒酶逆转录酶（hTERT）与肺癌发生发展中的关系。方法采用SP法检测80例肺癌、癌旁组织和正常肺组织标本中PTEN和hTERT的表达。结果80例肺癌组织中PTEN表达的阳性率为40％，癌旁组织为95％，正常肺组织为100％。PTEN的水平与肺癌的分化程度、淋巴结转移和肿瘤大小相关。肺癌组织中hTERT表达的阳性率为90．0％，癌旁组织为18．75％，正常肺组织为0。hTERT表达的水平与肺癌的分化程度、淋巴结转移和肿瘤大小无明显的相关。肺癌PTEN的表达与hTERT呈明显的负相关。结论PTEN和hTERT在肺癌中的表达密切相关，两者在肿瘤形成中可能存在着基因水平的内在联系。     

骨形态发生蛋白信号通路在肺癌进展及骨转移中的作用研究进展

肺癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一,肺癌骨转移是肺癌患者病程中常见的重要问题。骨形态发生蛋白（BMP）信号通路在肺癌生长、局部进展和骨转移中发挥的重要作用逐步被揭示。本文对BMP信号通路在肺癌局部进展及肺癌骨转移过程中的关键作用进行综述,以期明确BMP信号通路在肺癌骨转移中的作用机制,为肺癌的靶向治疗提供新的思路和方法。     

肺癌组织中hMLH1基因的表达及其临床意义

目的 了解错配修复基因hMLH1蛋白在肺癌组织中的表达情况。方法 应用免疫组织化学SP法对60例肺癌组织中hMLH1蛋白的表达进行检测。结果 60例肺癌组织中35例hMLH1蛋白表达阳性（58．3％）。伴有淋巴结转移者肺癌组织中hMLH1的阳性率（31．8％）低于无淋巴结转移者（P＜0．05）;临床Ⅲ～Ⅳ期肺癌组织中hMLH1的阳性率（34．8％）低于Ⅰ-Ⅱ期（P＜0．05）;肺鳞癌hMLH1的阳性率（46．2％）低于肺腺癌（P＜0．05）;hMLH1基因的表达在肺癌组织不同病理分化程度者间差别无显著性意义。结论 hMLH1基因可能参与了肺癌的发生和发展过程,尤其在肺鳞癌的发生和发展中可能起更为重要的作用。hMLH1的表达多发生于晚期肺癌及伴有淋巴结转移的病例,hMLH1蛋白的检测有助于肺癌的辅助诊断及估计预后。     

多脏器功能障碍综合征患者连续性血液净化的效果

目的 探讨连续性血液净化（CBP）用于多脏器功能障碍综合征（MODS）患者的效果。方法 MODS患者20例，男性13例，女性7例，年龄40—87岁，ASA分级Ⅱ级7例、Ⅲ级13例，均符合MODS和急性呼吸窘迫综合征的诊断标准。经右侧股静脉置管，使用持续性肾脏替代治疗机以高容量连续性静脉．静脉血液滤过（HV—CVVH）模式治疗。于第1次CBP前、CBP开始后2、4、6h及CBP停止后6h测定心率（HR）、平均动脉压（MAP）、中心静脉压（CVP）、pH、动脉血氧分压（PaO2）、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）、氧合指数（PaO2／FiO2）、肺动态顺应性（Cdyn）、气道阻力（Raw），同时抽取静脉血2ml测定血液BUN、Scr、Glu、Na^＋、K^＋、Cl^-的浓度。结果 与第1次CBP前比较，pH、PaCO2、Na^＋、Cl^-、G1u差异无统计学意义（P〉0．05）；PaO2、PaO2／FiO2和Cdyn在CBP开始后2、4、6h时明显升高（P〈0．05）；Raw、BUN、Scr和K^＋明显降低（P〈0．05）；HR于CBP开始后2、4、6h以及CBP停止后6h时降低（P〈0．05）。结论 CBP能促进MODS患者的氧合功能，改善血液生化指标，维持内环境稳定，对血液动力学无明显影响。     

手术切除小细胞肺癌P53蛋白表达及意义

目的研究手术切除小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）Ｐ５３蛋白表达，探讨其临床意义。方法取根治术后＞５年，术前未放疗、化疗标本３２例；石蜡切片，ＡＢＣ染色。结果Ｐ５３蛋白表达总阳性率８１．３％（２６／３２）；Ｐ５３蛋白表达与性别、吸烟、ＰＴＮＭ分期、淋巴结转移、原发病灶大小相关不显著（Ｐ＞０．０５）。术后２年内死亡组Ｐ５３阳性率１００％（１４／１４），＞５年死亡组４２．９％（３／７）（Ｐ＜０．０１）。前者死亡风险比后者高２倍。脑转移者Ｐ５３阳性率８５．７％（６／７）。结论Ｐ５３蛋白在ＳＣＬＣ中有高表达，它与ＳＣＬＣ术后的近期死亡及脑转移有关，对判断预后有帮助     

异氟烷和异丙酚对体外循环心内直视手术患者围术期脑氧代谢和脑损伤影响的研究

目的：观察异氟烷和异丙酚麻醉对体外循环（CPB）心内直视手术患者围术期脑氧供需平衡及脑损伤标记物S100β和神经元性烯醇化酶（NSE）蛋白浓度的影响。方法：将30例择期行体外循环瓣膜置换手术病人随机分为异氟烷麻醉组和异丙酚麻醉组。分别于CBP开始前（T1）、鼻咽温降至稳定期（L）．复温至36℃（T3）,CBP结束后30m;n（T4）．CPB结束后6h（T5）和CPB结束后24h（T6）抽取桡动脉血和颈静脉球部血样检测血气并测定颈内静脉血S-100B和NSE蛋白的浓度。结果：CPB前两组患者颈内静脉球氧饱和度（Sjv02）,动脉一颈内静脉血氧含量差（Da—jv02）及氧摄取率（CERO2）和脑损害标记物s100B及NSE蛋白浓度差异无统计学意义（P〉0．05）;随着降温逐渐加深两组Sjv02明显升高．Da—jvO2和CERO2明显降低．复温开始后两组SjvO2较CPB前明显降低,而Da—jvO2．CERO2则明显升高（P〈0．05）;CPB开始后两组血浆s100β和NSE蛋白浓度逐渐升高。复温期达到峰值．s100β蛋白浓度在停机24h后恢复至基础水平,NsE蛋白浓度仍略高于CPB前水平;两组各指标比较．异丙酚组的变化幅度要明显低于异氟烷组。结论：两种麻醉方式均可满足CPB下瓣膜置换手术的需要,与异氟烷组比较．异丙酚麻醉更有利于CBP下患者脑氧代谢的改善和脑损伤的保护。     

连续性血液净化治疗危重症患者的临床研究

目的观察连续性血液净化（CBP）对危重症患者的疗效及治疗前后血浆中分子总量的变化。方法选取入住急诊重症监护病房并行CBP治疗的危重症患者36例，测量CBP治疗前后血浆中分子总量变化，并对患者治疗前后行急性生理和慢性健康状况Ⅱ（APACHEⅡ）和多器官功能障碍综合征（MODS）评分。结果CBP治疗前后血浆中分子总量、APACHEⅡ评分、MODS评分分别为（499．26±26．23）mg／L、（29．28±3．47）分、（16．21±2．67）分和（223．86±18．47）mg／L、（24．12±4．89）分、（12．86±2．83）分，两者比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论CBP治疗能有效降低危重症患者体内中分子水平，对疾病转归有积极作用。中分子总量可作为临床CBP开机指标之一。     

Distribution of secretory inhibitor of platelet microbicidal protein among urethral isolates with its correlation with prostatitis

Aim： To report the detection in vitro of secretory inhibitor of platelet microbicidal protein （SIPMP） phenotypes of urethral isolates along with a comparisonwith isolates from patients with or without chronic bacterial prostatitis （CBP）. Methods： Urethral isolates of Staphylococcus spp. （n = 64）, diphtheroids （n = 28）, micrococci （n = 15）, streptococci （n = 21）, Enterobacteriaceae （n = 9） and Enterococcusfaecalis （n = 19） from patients with or without CBP were tested. SIPMP production was tested by inhibition of platelet microbicidal protein （PMP） bioactivity against Bacillus subtilis and was expressed as percentage of inhibition of PMP bactericidal activity. Results： A significantly higher proportion of CBP-strains （57.78% vs. 16.67%） reduced PMP-induced killing of Bacillus subtilis than non- CBP strains did （P 〈 0.01）. SIPMP levels of staphylococci and Enterococcusfaecalis from the CBP group were significantly higher than those of the control group. Conclusion： These results suggest that SIPMP production is associated with the CBP source. Data from the present study might have significant implications for the understanding of the pathogenesis of CBP. （Asian J Androl 2008 Mar; 10： 189-192）.     

早期应用连续性血液净化治疗危重型肾病综合征出血热的临床分析

目的探讨连续性血液净化（continuous blood purification,CBP）在危重型肾病综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS）的临床治疗效果。方法回顾分析解放军第三医院肾脏内科近2年收治的24例危重型HFRS患者在治疗原发病的基础上,均给予CBP治疗,采用连续性静脉一静脉血液滤过（continuous veno-venous hemofiltration,CVVH）或连续性静脉一静脉血液透析滤过（continuous veno-venous hemodiafiltration,CVVHDF）,持续治疗时间不少于24h。比较患者治疗前后血白细胞（WBC）、血小板（PLT）,动脉血气分析、二氧化碳结合力（C02CP）,C反应蛋白（CRP）,血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）、血清丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基转氨酶（AST）、部分活化凝血活酶时间（APTT）的变化。结果24例危重型HFRS患者经CBP治疗后12～48h的PLT、动脉血气pH值、C02CP显著提高（P〈0．05）,WBC、CRP、BUN、SCr、ALT、AST、部分活化凝血活酶时间降低（P〈0．01）。结论对于危重型HFRS患者给予早期积极CBP干预治疗可稳定血流动力学、迅速改善内皮细胞功能紊乱的全身炎症状态,为补液、营养支持及后续的药物治疗创造条件,能获得满意疗效。     

连续性血液净化对多脏器功能障碍综合征患者细胞因子和人类白细胞抗原表达的影响

目的探讨连续性血液净化（CBP）对多脏器功能障碍综合征（MODS）患者细胞因子和人类白细胞抗原（HLA—DR）表达的影响。方法20例MODS患者，均符合MODS的诊断标准。经右侧股静脉置管，使用Diapact CRRT机以HV—CV—VH模式治疗。于CBP前、CBP后第一、三、五、七日晨分别应用ELISA法测定细胞因子，包括TNF-α、IL-1β、IL-2R、IL-6、IL-8、IL-4、IL-10；采用流式细胞仪测定单核细胞人类白细胞抗原-DR位点（HLA—DR）的表达。结果存活组在CBP治疗后血浆TNF-α、IL-1β、IL-2R及IL-8水平均逐渐降低（P〈0．05或P〈0．01），血浆IL-6、IL-4、IL-10水平在CBP治疗前后均无统计学差异（P〉0．05）；外周血单核细胞计数和单核细胞HIA—DR表达均呈升高趋势（P〈0．05或P〈0．01）。死亡组在CBP治疗前后血浆TNF-α、IL-1β、IL-2R、IL-8、IL-6、IL-4水平均无统计学变化，而IL-10在CBP 1d略有下降，后逐渐升高；外周血单核细胞计数早期呈升高趋势，后有所下降，与CBP前相比无统计学差异（P〉0．05）；单核细胞HLA—DR表达在CBP治疗前后无统计学变化。结论CBP可清除多种细胞因子，提高单核细胞HLA—DR的表达，从而改善MODS患者的免疫功能。     

脑胶质瘤中p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白的表达及其意义

目的 探讨p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白在脑胶质瘤发生、发展中的作用。方法 应用免疫组织化学技术检测60例脑胶质瘤中p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白的表达。结果 p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白在脑胶质瘤和正常脑组织中的阳性表达率分别为43.3％和90％（P＜0.05）；36.7%和80％（P＜0.05）；41.7%和0（P＜0.05）。脑胶质瘤中p16蛋白及nm23蛋白缺失率在死亡组和生存组分别为73.7%和31.8%（P＜0.05）；84.2%和36.3%（P＜0.05）；c-erbB－2蛋白过度表达率在死亡组和生存组为68.4%和27.2%（P＜0.05）。结论 p16蛋白、nm23蛋白及c-erbB-2蛋白过度表达与脑胶质瘤发生、发展密切相关。     

肿瘤微环境的旁分泌型低丰度蛋白组检测的新液质联用方法

目的 建立一种新液质联用方法检测肿瘤微环境中旁分泌型低丰度蛋白。方法 用丙酮提取C57/B6小鼠皮下脂肪原代细胞培养基中的蛋白质,通过四维-高场非对称波形离子迁移谱-静电场轨道阱线性离子阱模式（4D-Faims-OTIT）,电子转移裂解-静电场轨道阱线性离子阱模式（ETD-OTIT）和静电场轨道阱线性离子阱模式（OTIT）三种液质联用模式分析。结果 S1样本4D-Faims-OTIT,OTIT和ETD的蛋白鉴定数分别为1040±21,428±4和274±6,S2样本分别为851±31,290±10和192±14。S1中修饰位点分别为138±12,105±1和75±14,S2中分别为122±15,66±15和42±7。4D-Faims-OTIT在S1中鉴定到分泌型蛋白为结肠癌（GDF15）、肺癌（CXCL12）、胰腺癌（Cathepsin D/B）、卵巢癌（Insulin-like growth factor）、肝癌（Apolipoprotein E/Cystatin C）。结论 4D-Faims-OTIT可显著提高肿瘤微环境中脂肪细胞分泌型蛋白组的检测灵敏度,有助于结直肠癌、肺癌和卵巢...     

连续性血液净化治疗热射病合并多器官功能障碍的临床疗效

目的 探讨连续性血液净化（CBP）技术对热射病合并多器官功能障碍综合征（MODS）的临床疗效.方法 选择热射病合并MODS患者12例,观察CBP治疗前后体温、心率、平均动脉压（MAP）、血肌酐、尿素氮、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-Mb）的变化,计算急性生理学及慢性健康状况Ⅱ（APACHEⅡ）评分,检测CBP治疗前后血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的含量变化.结果 12例患者全部抢救成功,与治疗前比较,经CBP治疗12、24和48 h后,所有患者体温、心率、MAP均明显改善,APACHEⅡ评分均明显降低（均P＜0.05）;血肌酐、尿素氮、ALT、AST、CK、CK-Mb明显低于治疗前（均P＜0.05）;血清TNF-α和IL-1β水平也低于治疗前（均P＜0.05）.治疗中未出现任何不良反应.结论 CBP治疗能明显改善热射病合并MODS患者的肝肾功能,减轻心肌和骨骼肌损伤,清除体内炎症因子,稳定机体内环境,改善预后.     

非小细胞肺癌患者肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白表达与预后的关系

肺癌耐药性形成机制，已成为肺癌分子生物学研究热点。肿瘤细胞对抗肿瘤药物的耐药的原因较多，肺癌耐药机制复杂。肺耐药蛋白(lung resistance protein，LRP)、多药耐药蛋白(multidrug resistance-associated protein，MBP)是近年发现的肿瘤耐药相关基因，在肺癌耐药中起着一定的作用。本实验应用免疫组化方法检测LRP、MRP在非小细胞肺癌     

人垂体瘤转化基因在非小细胞肺癌组织中的表达

目的 从mRNA和蛋白质水平探讨人垂体瘤转化基因（hPTTG）表达和非小细胞肺癌（NSCLC）的关系，为肺癌基因诊断和基因治疗的研究提供理论依据。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测38例肺癌组织和癌旁正常肺组织中hPTTG mRNA的表达，再应用免疫组织化学方法和Western blot检测肺癌组织中hPTTG蛋白的表达，同时对实验对象进行随访资料生存分析，绘制生存率曲线，探讨与肺癌患者生存时间的关系。结果 RT-PCR显示肺癌组织中hPTTG mRNA表达明显高于癌旁正常肺组织（P〈0．05），不同类型和不同分化程度肺癌组织中hPTTG mRNA水平差异有统计学意义（P〈0．05），Ⅲ期肺癌组织中hPTTG mRNA表达明显高于Ⅰ期＋Ⅱ期（P〈0．05）；免疫组织化学显示肺癌组织中hPTTG蛋白表达明显高于癌旁正常肺组织（P〈0．05）；腺癌组织中hPTTG蛋白表达高于鳞癌组织；Western blot显示肺癌组织中hPTTG蛋白表达明显高于癌旁正常肺组织；生存分析方法显示hPTTG mRNA高表达者生存时间短于低／无表达者（P〈0．05，n=36）；用噻唑蓝（MTT）比色法观察生长曲线检测数据表明hPTTG的反义RNA表达载体转染组细胞的增殖明显比对照组细胞和空载体转染组细胞缓慢。结论 hPTTG表达增加与NSCLC发生、发展、浸润及转移有关，可作为判断NSCLC生物学行为的参考指标；hPTTG的反义RNA表达载体对SPC-A1肺癌细胞株的生长具有一定的抑制作用。     

连续性血液净化在非肾脏领域的应用

连续性血液净化（continuous bloodpurification，CBP）在非肾脏病领域中的应用近年发展较快，国外CBP治疗肾脏病与非肾脏病的比例已达到1：10，与机械通气和营养支持同样重要。2004年第九届连续性肾脏替代治疗（CRRT）会议上，Dr Ronco教授将其扩展为多器官支持疗法（multiple organ support therapy MOST）。现将CBP在非肾脏病领域中的应用作一简述。