增殖细胞核抗原表达与结直肠癌预后关系的研究

目的 探索增殖细胞核抗原（PCNA）与结直肠癌的组织学类型、临床分期及预后的关系。方法 收集外科手术切除的96例结直肠癌石蜡标本,采用LSAB免疫组织化学染色法检测PCNA;按阳性细胞所占比例分为1-4级,1、2级为PCNA弱级,3、4级为PCNA强级,结果 （1）PCNA在肠癌细胞中的表达明显增多,并与肿瘤的分化程度有关,分化差的肿瘤细胞PCNA表达增多;（2）PCNA表达与Dukes分期及淋巴结转移有关。DukesC期及有淋巴结转移,PCNA表达明显增多;（3）PCNA表达与患的性别、年龄、肿瘤部位、组织类型等因素无关;（4）PCNA表达与术后复发率及死亡率有关,PCNA强级术后复发率及死亡率均显高于弱级,结论 PCNA在常规的病理切片上能反映细胞的增殖活性。是判断结直肠癌患预后及指导临床治疗的一个较为理想的参考指标。     

增殖细胞核抗原

有关细胞增殖周期与细胞增生的研究是目前细胞基础研究的一个重要内容，其中以与细胞增殖周期相关的周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ），周期蛋白依赖激酶（ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎ ｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ，Ｃｄｋｓ）、ｐ１６蛋白、ｐ５３蛋白等的研究发展较快。其中，增殖细胞核...     

靶向RNA干扰Survivin对结肠癌细胞HT-29增殖凋亡的影响

目的探讨肿瘤增殖型腺病毒（Ad-delE1b55KD-shRNA／Survivin-EGFP）介导的以人Survivin为靶标的RNA干扰对结肠癌细胞株HT-29中Survivin mRNA和蛋白表达及对HT-29增殖凋亡的影响。方法用Ad-delE1b55KD-shRNA／Survivin-EGFP转染结肠癌细胞株HT-29（以携带相同shRNA的增殖缺陷型腺病毒和脂质体载体为对照），用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测转染后的HT-29细胞中Survivin mRNA和蛋白表达的变化，用噻唑蓝（MTT）法、吖啶橙／溴乙锭荧光染色法、Annexin V-PE／7-AAD联合染色法检测细胞死亡率及凋亡率。结果与复制缺陷型腺病毒载体和脂质体载体比较，转染Ad-delE1b55KD-shRNA／Survivin-EGFP后，HT-29细胞中Survivin mRNA拷贝数及蛋白表达显著降低，其细胞死亡率和凋亡率显著提高（P〈0．05）。结论Ad-deIE1b55KD-shRNA／Survivin-EGFP介导的RNA干扰较之增殖缺陷型腺病毒载体和脂质体载体具有更高的干扰效率，且能高效地诱导结肠癌细胞凋亡并抑制其增殖。     

小干扰RNA对肾癌细胞Ki67基因表达及其增殖的抑制作用

目的探讨小干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞增殖基因Ki67表达及其增殖、凋亡的影响。方法将Ki67 siRNA(100 nmol/L)转染人肾癌786-0细胞。采用RT-PCR、免疫印迹、免疫组化技术检测Ki67 mRNA及蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。结果Ki67 siRNA处理组786-0细胞Ki67 mRNA表达(37．6±1．9)%、Ki67蛋白表达(46．4±0．9)%、免疫组化Ki67表达吸光度(A)值52．5±2．3,阴性siRNA对照组分别为(97．3±0．9)%、(95．3±0．9)%、114．5±4．9,2组比较差异均有统计学意义(P＜0．01)。Ki67 siRNA处理组细胞增殖抑制率(63．6±1．6)%、凋亡细胞阳性率(41．7±0．6)%,阴性siRNA对照组分别为(2．8±0．2)%、(10．3±1．4)%,2组比较差异有统计学意义(P＜0．01)。结论肿瘤增殖基因Ki67 siRNA能抑制人肾癌786-0细胞Ki67基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡,有望成为肾癌基因治疗的有效工具。     

小干扰RNA对肾癌786-O细胞Survivin表达及其增殖的抑制作用

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞Survivin基因表达及其增殖、凋亡的影响.方法 设计、合成1对Survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染人肾癌786-O细胞,分不同浓度组(10、50、100 nmol/L),采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫组织化学TUNEL法榆测细胞凋亡.结果 Survivin siRNA能有效下调Survivin基因表达水平,抑制了细胞生长,促进其凋亡.并呈剂量依赖性(3组的mRNA 88.3%、62.4%、43.8%,蛋白87.7%、62.4%、46.5%,增殖抑制率11.6%、41.2%、57.5%,凋亡率14.2%、29.4%、38.1%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Survivin基因siRNA能抑制人肾癌786-O细胞Survivin基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡.     

小干扰RNA对肾癌786-O细胞Survivin表达及其增殖的抑制作用

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞Survivin基因表达及其增殖、凋亡的影响.方法 设计、合成1对Survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染人肾癌786-O细胞,分不同浓度组(10、50、100 nmol/L),采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫组织化学TUNEL法榆测细胞凋亡.结果 Survivin siRNA能有效下调Survivin基因表达水平,抑制了细胞生长,促进其凋亡.并呈剂量依赖性(3组的mRNA 88.3%、62.4%、43.8%,蛋白87.7%、62.4%、46.5%,增殖抑制率11.6%、41.2%、57.5%,凋亡率14.2%、29.4%、38.1%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Survivin基因siRNA能抑制人肾癌786-O细胞Survivin基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡.     

小干扰RNA对肾癌786-O细胞Survivin表达及其增殖的抑制作用

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞Survivin基因表达及其增殖、凋亡的影响.方法 设计、合成1对Survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染人肾癌786-O细胞,分不同浓度组(10、50、100 nmol/L),采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫组织化学TUNEL法榆测细胞凋亡.结果 Survivin siRNA能有效下调Survivin基因表达水平,抑制了细胞生长,促进其凋亡.并呈剂量依赖性(3组的mRNA 88.3%、62.4%、43.8%,蛋白87.7%、62.4%、46.5%,增殖抑制率11.6%、41.2%、57.5%,凋亡率14.2%、29.4%、38.1%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Survivin基因siRNA能抑制人肾癌786-O细胞Survivin基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡.     

泌尿系肿瘤增殖细胞核抗原研究进展

肿瘤细胞增生活性与肿瘤生物学行为有关．增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ　ｃｅｌｌ　ｎｕｃｌｅａｒ　ａｎｔｉｇｅｎ　，ＰＣＮＡ）是第一个可大规模用于常规石蜡包埋组织检测肿瘤细胞增生活性的生物标记物，本文对ＰＣＮＡ分子生物学，ＰＣＮＡ作为生物标记物的可行性，优越性及其在泌尿系肿瘤物，本文对ＰＣＮＡ分子生物学，ＰＣＮＡ作为生物标记物的可行性，优越性及其在泌尿系肿瘤中的意义作一综述。     

泌尿系肿瘤增殖细胞核抗原研究进展

肿瘤细胞增生活性与肿瘤生物学行为有关。增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）是第一个可大规模用于常规石蜡包埋组织检测肿瘤细胞增生活性的生物标记物，本文对ＰＣＮＡ分子生物学，ＰＣＮＡ作为生物标记物的可行性，优越性及其在泌尿系肿瘤中的意义作一综述。     

增殖细胞核抗原在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨增殖细胞核抗原(PCNA)在肝细胞肝癌的发生发展中的作用及作用机制.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测PCNA在肝细胞癌、相应癌旁组织和正常肝组织中mRNA和蛋白质的表达,正常肝组织、癌旁组织、肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为20.0％、46.2％和85.7％;结合患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移等临床病理学资料进行统计学分析,其表达与组织分化程度和淋巴结转移呈明显相关(P＜0.05).结果 PCNA在正常肝组织、癌旁组织、肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为20.0％、46.2％和85.7％,在肝细胞癌中的阳性表达率显著高于正常肝组织和癌旁肝组织(P＜0.05);RT-PCR检测结果也证实PCNA mRNA在肝细胞癌中的表达明显高于正常肝组织和癌旁肝组织(P＜0.05).PCNA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小等因素无明显相关(P＞0.05),与组织分化程度和淋巴结转移呈明显相关(P＜0.05).结论 PCNA在肝细胞癌组织中的表达高于正常肝组织和癌旁肝组织,并且与肿瘤的恶性程度密切相关.     

去甲斑蝥素对人原发性胆囊癌GBC-SD细胞系增殖及相关基因的干预效应

目的　研究去甲斑蝥素 (NCTD)对人原发性胆囊癌GBC SD细胞系增殖及相关基因的干预效应。方法　实验分NCTD组 (7个浓度梯度组 ,每组 6孔 )和对照组 (n =6) ,分别应用四唑盐比色法和链霉素亲合生物素复合物法测定NCTD对体外培养GBC SD细胞的体外杀伤效应和对增殖细胞核抗原 (PCNA)、Ki 67表达的影响。结果　NCTD分别在浓度 10mg/L、时间 6h时 ,即对GBC SD细胞增殖有抑制作用 ,且随浓度升高、时间延长作用增强 ,呈剂量 时间效应关系 ;实验组PCNA和Ki 67表达的棕褐染色细胞数和阳性指数 (PCNA :0 .93 2± 0 .0 3 1vs 0 .3 18± 0 .0 2 3 ;Ki 67:0 .964± 0 .0 92vs 0 .2 97± 0 .0 18;n =10 )与对照组比较均显著减少 (P <0 .0 5 )。结论　NCTD能抑制人原发性胆囊癌GBC SD细胞的生长和PCNA、Ki 67增殖相关基因蛋白的表达。     

增殖细胞核抗原在原发性胆囊癌中的表达及意义

目的:探讨PCNA在原发性胆囊癌的表达及意义。方法:34例原发性胆囊癌,8例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎石蜡包埋标本,用SP免疫组织化学方法测定。结果:PCNA在原发性胆囊癌、胆囊腺瘤和慢性胆囊炎中的阳性表达指数分别为43．75±21．73％、7．98±5．19％和4．31±2．15％,原发性胆囊癌PCNA指数显著高于胆囊良性病变（P<0．01）。低分化腺癌PCNA指数显著高于高、中分化者（P<0．01）。结论:原发性胆囊癌的发生发展与细胞的异常增殖有关,PCNA可作为胆囊癌预后的重要指标。     

增殖细胞核抗原在脑胶质瘤中的表达

目的　探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)在不同类型胶质瘤细胞中的表达 ,以及与复发、预后的关系。方法　应用抗 PCNA单克隆抗体 (小鼠IgGza型 ) ,对 61例脑胶质瘤患者病理切片行免疫组织化学染色 ,不同类型胶质瘤PCNA标记指数进行差异分析。结果　不同类型胶质瘤的PCNA标记指数 (LI)不同 ,随着胶质瘤恶性程度增高而增大 ,两者呈显著正相关 (r =0 .895 ,P <0 .0 1) ,各级别间LI的差异非常有显著性 (P <0 .0 1) ;死亡组与存活组间LI差异有显著性 ;肿瘤首发与否、性别、年龄组间差异无显著性 ;恶性程度、PCNA标记指数和放疗与否与预后相关 (P <0 .0 5 )。结论　PCNA可以作为提示胶质瘤预后的指标 ,对确定胶质瘤的生物学特性和肿瘤的分级有指导作用。不同恶性程度胶质瘤间LI差异有显著性 ,与恶性程度正相关 ,与胶质瘤的预后关系密切 ,PCNA的过度表达提示肿瘤恶性程度高 ,预后差。     

PCNA反义寡核苷酸抑制人膀胱癌EJ细胞增殖活性的实验研究

目的 探讨全硫代修饰型ＰＣＮＡ反义寡核苷酸（ＡＳＯ）对人膀胱癌ＥＪ细胞体外增殖活性及裸鼠体内致瘤性的影响。方法 ＰＣＮＡ－ＡＳＯ在脂质体介导下转染ＥＪ细胞后,运用细胞计数,ＭＴＴ法,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验,流式细胞术（ＦＣＭ）,克隆形成率（ＣＦ）,ＳＡＢＣ免疫组化,建立裸鼠动物模型等方法分析其体内外抗瘤活性及机制。结果 在脂质体介导下,０．４－２．０μｍｏｌ／Ｌ ＰＣＮＡ－ＡＳＯ对人膀胱癌ＥＪ细胞     

PCNA反义寡核苷酸对人不同恶性肿瘤细胞体外增殖活性的影响

目的：探讨增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡核苷酸(ASO)对人不同恶性肿瘤细胞体外生长的影响。方法：PCNA—ASO在脂质体(1ipofectin)介导下转染膀胱癌EJ细胞、结肠癌HCT—8细胞、肺癌GLC—82细胞及恶性胶质瘤BT—325细胞，运用细胞计数、MTT、流式细胞术、克隆形成及免疫组织化学方法分析其抗瘤活性及机制。结果：PCNA—ASO对上述4种肿瘤细胞的体外生长均有明显抑制作用；不同细胞敏感性差异较大，其中以GLC—82细胞最敏感，HCT—8细胞最不敏感；4种细胞生长均受阻于Gl期。结论：PCNA在恶性肿瘤细胞的增殖中是必需的。PCNA—ASO体外对不同肿瘤细胞具有抗瘤活性。     

反义寡核苷酸防治移植物动脉硬化的作用

目的　探讨防治移植物动脉硬化的途径。方法　通过大鼠胸腹主动脉移植简化模型 ,用各种增殖细胞核抗原 (PCNA)寡核苷酸在脂质体介导下转染大鼠胸主动脉后 ,移植到大鼠腹主动脉 ,于术后 15、3 0和 60d取移植动脉作病理学检查及PCNA逆转录PCR检测。结果　病理学结果示 ,在 3个时相点 ,反义寡核苷酸组移植动脉再狭窄率 (8.3 %、12 .4%、19.5 % )均显著低于对照组 (P <0 .0 5 )。逆转录PCR结果显示 ,在 3个时相点 ,反义寡核苷酸组PCNAmRNA的表达(5 9.2 4、80 .16、18.5 8)均明显低于对照组 (P >0 .0 5 )。结论　PCNA反义寡核苷酸可明显抑制移植动脉PCNA蛋白的表达 ,抑制动脉内膜增生 ,防治移植物动脉硬化。     

The prognostic value of proliferating cell nuclear antigen,Ki-67 and nucleolar organizer region in transitional cell carcinoma of the bladder

Objectives: To investigate the value of proliferating cell nuclear antigen(PCNA), Ki-67 antigen labelling indices and nucleolar organizer region(NOR) score in relation to histological grade, stage, recurrence andprogression of the bladder tumor.Materials and methods: Tissue specimens from 77 bladder cancer patients(43 superficial, 34 invasive) were immunostained with PCNA and Ki-67 andstained with AgNOR. Thirteen specimens of normal bladder mucosa servedas controls.Results: In comparison to normal bladder mucosa the values of the threeindicators were significantly greater (p < 0.001). There was a significantrelationship between PCNA, Ki-67 indices, AgNOR scores and grade andstage of the tumor (p < 0.001). All indicators also correlated with each other(p < 0.001). The Kaplan-Meier curves for recurrence-progression freesurvival revealed that patients with a PCNA labelling index >36.22%, Ki-67labelling index >29.68% and AgNOR score > 3.34 had a worse prognosis thanthose with <36.22%, <29.68% and <3.34, respectively.Conclusions: PCNA, Ki-67 indices and AgNOR scores correlated with eachother and with tumor grade and stage. These proliferation markers maygive objective and accurate information about the biological behavior ofbladder transitional cell carcinoma.