抑癌基因PLAGL1在人肝细胞癌中的表达及其意义

目的 探讨抑癌基因PLAGL1在人肝细胞癌和癌旁组织中的表达及其意义.方法 随机选取肝细胞癌(HCC)30例和远离癌组织的癌旁组织30例,免疫组织化学分析PLAGL1蛋白表达,分析其意义.培养正常肝细胞株L02和肝癌细胞株HepG2细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其PLAGL1 mRNA表达水平.探讨与肝癌细胞组织中PLAGL1蛋白表达相关性.结果 PLAGL1蛋白在癌旁组织中表达明显强于肝细胞癌组织,2例(7%)肝细胞癌组织中PLAGL1表达成阳性,27例(90%)癌旁组织中表达成阳性,两组之间PLAGL1的表达水平差异有统计学意义(χ2=38.44,P<0.05).RT-PCR结果显示PLAGL1 mRNA在L02细胞中明显高于HepG2细胞.结论 PLAGL1蛋白的表达下调可能与肝细胞癌的发生和发展相关,PLAGL1蛋白表达下降与PLAGL1 mRNA下调相平行.     

DIP在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨死亡诱导蛋白(DIP)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与肝癌临床病理特征之间的关系.方法:运用RT-PCR免疫组化分别检测DIP在40例HCC及其癌旁组织中的表达情况,并分析DIP蛋白表达与HCC临床病理特征之间的相关性;应用RT-PCR检测人正常肝细胞株LO2和HCC细胞Hep3B,HepG2,SMMC-7721中DIP mRNA的表达.结果:DIP mRNA及蛋白在肝癌组织中的表达明显高于其癌旁组织(均P＜0.05);DIP蛋白高表达与较大肿瘤体积、高Edmonson分级和高TNM分期有关(r=0.419,0.414,0.531;均P＜0.05);人HCC细胞株Hep3B,HepG2,SMMC-7721中DIP mRNA的表达均较正常肝细胞株LO2明显增高(均P＜0.05).结论:HCC组织中DIP表达上调,且这种表达上调与HCC的恶性病理特征相关.     

GPC3 mRNA在甲胎蛋白阴性肝癌中的表达及其意义

目的 探讨GPC3基因在甲胎蛋白阴性肝癌中的变化及其临床意义。方法 应用印迹法（Northern)杂交检测48例肝癌组织及其相应的癌旁肝细胞内GPC3mRNA表达的变化,其中肝细胞癌41例、肝内胆管细胞癌4例、大肠癌肝转移2例和肝局灶性结节增生1例,并结合各组织标本的病理学特点进行分析。结果 41例甲胎蛋白阴性肝细胞癌中,有30例肝癌组织可测出GPC3mRNA的表达（73.17%),而癌旁组织中均不表达。直径＞5cm的大肝癌GPC3的表达率显著高于直径≤5cm的小肝癌,低分化肝癌GPC3 的表达率显著高于高分化的肝癌。GPC3的表达与患者的年龄、性别、包膜完整性、癌栓形成、肝内转移及乙肝病毒感染状况均无明显相关性。GPC3mRNA在非肝细胞肝癌组织内均不表达。结论 GPC3mRNA在AFP阴性肝癌中特异性表达,可作为原发性肝癌的一个新的基因标志。GPC3mRNA在肝癌的发生发展中有重要作用。     

BCL7A在肝细胞癌中的表达及对患者预后、肝癌细胞侵袭、迁移的影响

目的分析B细胞淋巴瘤7A(BCL7A)在肝细胞癌中的表达以及与预后的关系, 以及BCL7A表达对肝癌细胞侵袭、迁移的影响和机制。方法前瞻性收集2017年11月至2018年3月于南通大学附属医院肝胆外科行根治性肝切除术的40例肝细胞癌患者的癌组织及癌旁组织用于提取蛋白质, 其中男性29例, 女性11例, 年龄(58.5±10.4)岁。从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载374例肝细胞癌和50例癌旁组织样本信息, 肝癌细胞系Hep3B、SMMC-7721分别转染过表达BCL7A质粒及空载体质粒(阴性对照)。Western印迹和免疫组化检测BCL7A表达, Western印迹检测上皮间质转化相关蛋白表达(神经钙黏素、上皮钙黏素、锌指转录因子)。Transwell以及细胞划痕实验检测细胞侵袭迁移能力。结果 TCGA中50例肝细胞癌患者(癌组织与癌旁组织匹配), 与癌旁组织相比, 癌组织中BCL7A的mRNA相对表达显著升高, 差异具有统计学意义(t=13.38, P<0.001)。依据BCL7A mRNA表达水平的中位数将374例患者分为BCL7A高表达组(n=187)和低表达组(n...     

乳腺癌耐药蛋白在肝癌多药耐药中的作用及其机制探讨

目的研究乳腺癌耐药蛋白(breastcancer resistance protein,BCRP)在肝癌中的表达及其意义。方法通过培养液中ADM浓度递增诱导法筛选培养,建立HepG2/ADM肝癌多药耐药细胞株;采用荧光定量PCR及免疫组织化学技术,分别在mRNA和蛋白质水平检测BCRP在正常肝细胞系L02、肝癌细胞系HepG2及HepG2/ADM与未经化疗的癌组织、多次化疗后的癌组织、癌旁组织的表达差异。结果HepG2/ADM的BCRPmRNA表达是HepG2的9倍(P<0.01);L02和HepG2中BCRPmRNA的表达无差异(P>0.05);化疗后病人癌组织BCRPmRNA平均表达是未化疗病人癌组织的4.2倍(P<0.01);化疗病人癌组织BCRPmRNA平均表达是癌旁组织的3.4倍(P<0.01);未化疗病人癌和癌旁组织间的表达无差异(P>0.05);免疫组织化学显示BCRP在胞膜表达;BCRPmRNA和蛋白表达具有一致性。结论HepG2/ADM多药耐药细胞株是一个较好的研究肝癌多药耐药的模型。BCRP基因在正常肝细胞中表达,而在多次化疗后的病人和HepG2/ADM中表达上调,提示化疗药物诱导BCRP的表达,BCRP的高表达与肝癌多药耐药有关。     

基因间长链非编码RNA?524346在肝细胞癌中的?表达及临床意义

目的检测基因间长链非编码RNA 524346(long intergenic non-coding RNA 524346,LincRNA 524346)在肝细胞癌患者组织(癌、癌旁)及细胞系(正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2和Huh7)中的表达情况,探讨LincRNA 524346与肝细胞癌临床病理特征的关系。方法应用实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测LincRNA 524346在61例肝细胞癌患者癌组织、配对癌旁组织以及肝癌细胞系的表达水平,分析其与肝细胞癌患者临床病理特征之间的相关性。用受试者工作曲线(receiver operating characteristics,ROC)评价肝细胞癌组织中LincRNA 524346的表达水平在肝细胞癌早期诊断中的效能。结果 LincRNA 524346在83.6%(51/61)肝细胞癌患者的癌组织中较配对癌旁组织表达下调,差异有统计学意义(P0.01);LincRNA 524346的表达水平与肝细胞癌患者的病理分期(P=0.021)、肿瘤数目(P=0.013)、是否合并门静脉癌栓(PVTT)(P0.01)、肝硬化(P=0.005)和微静脉浸润(MVI)(P0.001)具有显著相关性。结论 LincRNA 524346在肝细胞癌组织中表达降低,其有望作为潜在肝细胞癌早期诊断、转移的分子标志物。     

肝癌细胞NFAT2基因启动子区甲基化与其mRNA表达的关系

目的:探讨肝癌细胞中NFAT2基因启动子CpG岛甲基化状态及与其mRNA表达的关系。方法:用重硫酸盐测序法检测肝癌组织与癌旁组织及不同肝细胞系与正常肝细胞中NFAT2启动子甲基化状态,用qRT-PCR检测肝癌组织与癌旁组织NFAT2 mRNA表达,并分析肝癌组织NFAT2启动子甲基化与mRNA水平的相关性。结果:肝癌组织中NFAT2基因CpG岛甲基化率明显高于癌旁组织(33.0%vs.21.6%,P=0.003);人肝癌细胞系HuH7、HepG2、Hep3B中NFAT2基因CpG岛甲基化率分别为34.8%、40.4%、37.0%,均明显高于人正常肝细胞系L02中NFAT2基因CpG岛甲基化率(16.2%)(均P0.05)。肝癌组织NFAT2 mRNA相对表达量明显低于与癌旁组织(0.000 602 4 vs.0.001 469,P0.05),肝癌组织中NFAT2 mRNA水平与其启动子甲基化程度呈明显负相关(r=-0.661,P=0.027)。结论:肝癌细胞中NFAT2基因表达下调可能与其启动子区CpG岛高甲基化状态有关     

肝内胆管癌细胞系ICC-9810与肝细胞癌细胞系SMMC-7721蛋白质组学比较

目的 比较肝内胆管癌细胞系ICC-9810、肝细胞癌细胞系SMMC-7721及正常肝细胞系L02的蛋白质表达,筛选胆管细胞癌和肝细胞癌的标志蛋白.方法 收集体外培养的肝内胆管癌细胞系ICC-9810、肝细胞癌细胞系SMMC-7721及正常肝细胞系L02细胞,细胞裂解液处理后提取蛋白.应用表面增强激光解吸离子化(SELDI)蛋白质芯片技术同时使用IMAC3和WCX2两种芯片检测肝内胆管癌细胞系ICC-9810、肝细胞癌细胞系SMMC-7721及正常肝细胞系L02的蛋白质谱.用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,采用Proteinchip Software 3.0.2软件分析数据.结果 与L02细胞比较,有12个蛋白质在两种肝癌细胞系中均出现明显的变化,其中4个蛋白高表达,8个蛋白低表达.比较两种肝癌细胞系的蛋白质谱,发现7个蛋白在ICC-9810细胞中高表达,10个蛋白低表达;11个蛋白在SMMC-7721细胞中高表达.在L02和ICC-9810细胞中去磷酸化蛋白17 175 Da表达较多,而在SMMC-7721细胞中磷酸化蛋白17 255 Da表达较多.结论 肝内胆管癌、肝细胞癌与正常肝细胞的差异蛋白表达为寻找肝肿瘤标志物提供了重要线索.17 255 Da蛋白的磷酸化/去磷酸化可能与肝细胞癌的发生有关.     

趋化因子VCC-1在肝细胞癌中的表达及其意义

目的 研究趋化因子VCC-1在肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 采用RT-PCR法检测8种肝细胞癌细胞株、10例正常肝脏组织标本、42例肝癌组织及癌旁组织中的VCC-1的mRNA表达情况,并结合临床资料探讨VCC-1的临床意义.结果 肝细胞癌细胞株中,SUN398的VCC-1表达量最高,Hep3B和Huh7几乎不表达,SUN387、SUN449、SUN423、HepG2、PLC5的表达介于两者之间.42例肝癌患者标本中,癌组织及癌旁组织同时存在表达,癌组织高于癌旁组织26例(61％,14.9±7.6倍),癌旁组织高于癌组织16例(39％,6.9±5.4倍).癌组织表达上调(P＜0.01).VCC-1的表达水平与肿瘤分化程度、直径有关(P＜0.05).在10例正常肝脏标本中,8例无表达,2例微表达,其表达水平低于癌细胞株、肝癌组织及癌旁组织(P＜0.01),而复发的3例标本均有癌组织高表达(20.1±2.3倍).有癌栓的8例标本中,5例出现癌组织VCC-1高表达(17.3±4.5倍),3例低表达.结论 VCC-1表达升高可能与肝细胞癌的发生发展有关,并有可能成为肝细胞癌的治疗靶点.     

长链非编码RNA MALAT1在肝癌中表达及功能研究

目的:探讨长片段非编码RNA(lnc RNA)MALAT1在肝癌中的表达及其的功能。方法:用q RT-PCR方法检测80例肝癌患者手术切除的癌组织及其癌旁组织,以及不同肝癌细胞系(Hep G2、Hep3B、HCCLM3、Hu H7)与正常肝细胞系(L02)中MALAT1的表达。分别用MTT试验、划痕试验、流式细胞术检测肝癌细胞(Hep G2、Hu H7)转染MALAT1 si RNA后增殖、迁移、凋亡的变化。结果:80例配对标本中,72例(90%)肝癌组织MALAT1表达较其癌旁组织明显上调,MALAT1在不同肝癌细胞系中的表达水平均不同程度明显高于正常肝癌细胞(均P0.05);Hep G2、Hu H7转染MALAT1 si RNA后,增殖率均呈时间依赖性降低、划痕愈合能力均明显减弱(均P0.05),细胞凋亡率分别为17.0%、16.41%,而各自的对照组分别为8.89%、6.56%,差异有统计学意义(P0.05)。结论:MALAT1在肝癌中的表达上调,且可能与肝癌的恶性生物学行为密切相关,对其作用机制的进一步研究,有望为肝癌的治疗找到新的靶点。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3促进肝细胞癌侵袭和转移的初步研究

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）是否能促进肝细胞癌（HCC）侵袭、转移。 方法通过siRNA靶向沉默GPC3在人肝癌细胞Hep3B、HepG2中的表达,慢病毒介导GPC3在人肝癌细胞SMMC-7721和SK-HEP-1中过表达,用于体外细胞功能试验和建立体内裸鼠原位种植瘤模型。Western blotting、qPCR检测GPC3、上皮间质转化（EMT）相关分子N-Cadherin、E-Cadherin、SNAIL、Vimentin和基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-3、MMP-7的表达。 结果过表达GPC3的Hep3B、HepG2细胞株的迁移和侵袭能力显著大于GPC3低表达的SMMC-7721、SK-HEP-1细胞株（P<0.05）;小鼠肝脏原位癌模型显示,过表达GPC3的HCC肝脏转移发生率明显高于GPC3低表达者（P<0.05）。过表达GPC3可以降低E-Cadherin,上调N-Cadherin的表达;干扰GPC3表达后,E-Cadherin表达上调,N-Cadherin表达下调。GPC3过表达可显著上调MMP-2、MMP-3、MMP-7的表达（P<0.05）。 结论GPC3可通过诱导HCC发生EMT和分泌MMPs,促进HCC细胞迁移和侵袭。     

RNA干扰技术靶向SMYD3基因治疗肝癌的实验研究

目的 构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3（SMYD3）编码基因的短发夹状RNA（shRNA）干扰质粒,并研究其对肝癌细胞的作用。方法 应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测SMYD3mRNA在肝癌细胞系HepG2、Hep3B、SMMC7721的表达。构建重组SMYD3shRNA表达质粒Pgenesil-1-s,并采用介导转染法导入HepG2细胞,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测阻抑效应,噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞生长增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。建立人肝癌细胞HepG2皮下移植瘤裸鼠模型,注射Pgenesil-1-s,动态观察肿瘤体积并于2周后处死裸鼠称取瘤重。结果肝癌细胞株HepG2、Hep3B、SMMC7721的SMYD3mRNA表达水平显著高于正常肝细胞株L-02;Pgenesil-1-s转染HepG2细胞后,SMYD3蛋白表达明显下调,而且细胞凋亡率显著增加,细胞生长明显受抑;经重组质粒治疗14d后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相较于对照组瘤体明显缩小、瘤重明显减轻（P〈0．01）。结论 肝癌细胞高表达SMYD3,shRNA干扰特异性抑制SMYD3表达,可以促进肝癌细胞凋亡并抑制裸鼠移植瘤的生长。     

原发性肝癌中RUNX3的表达及其临床意义

目的 探讨RUNX3在原发性肝细胞癌巾的表达及其临床意义.方法 提取肝组织样本的总RNA(包括65例手术切除的肝癌组织及其对应的癌旁组织,6株肝癌细胞株及1株正常肝细胞株),应用实时荧光定量RT-PCR方法 检测标本中RUNX3 mRNA的表达水平,并经Western blot法验证.结果 (1)对照组(癌旁组织)RUNX3 mRNA表达量为肝癌组(癌组织)的4.2倍.41例(63.08%)肝癌组织中的RUNX3 mRNA表达水平比对照组织显著下调:下调8倍以上者17例,下调4倍以上者21例,下调2倍以上者3例.(2)66.67%(4/6)肝癌细胞株RUNX3 mRNA表达水平较正常肝细胞株明显下调.(3)RUNX3在蛋白水平和mRNA水平变化趋势基本一致.(4)在肝癌组织中 RUNX3的表达与患者肝硬化(P=0.028)及组织分型(P＜0.001)相关.结论 RUNX3基因的缺失或低表达可能在肝细胞癌发生、发展过程中起一定作用.     

miR-1470对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨miR-1470对人肝细胞癌增殖和凋亡的影响。 方法 采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）检测人正常肝细胞株（LO2）和人肝癌细胞株（HepG2、Hep3B、Huh7）中miR-1470的差异表达；采用慢病毒转染肝癌细胞株，过表达（HepG2细胞株，过表达组）或敲减miR-1470（Huh7细胞株，抑制组）后，qPCR检测各组细胞miR-1470的表达；CCK8法检测细胞增殖改变；流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-1470在肝癌细胞系HepG2、Hep3B和Huh7中的表达水平高于正常肝细 胞系LO2，HepG2、Hep3B、Huh7三种细胞系相对正常细胞表达量分别为：2.304±0.366、2.851±0.508、 5.768±0.445（均P＜0.05）。CCK8实验证实，过表达miR-1470组OD值在72 h显著高于对照组（P＜0.05），而抑制组显著低于对照组（P＜0.05）。流式细胞分析结果显示过表达miR-1470抑制肝癌细胞的凋亡（P＜0.05）；而miR-1470抑制组对比对照组，凋亡细胞显著增多（P＜0.05）。结论 miR-1470促进肝癌细胞增殖，抑制肝癌细胞凋亡。     

SFPQ在肝细胞癌的表达及其对细胞增殖与细胞周期的影响

目的:探讨脯氨酸、谷氨酰胺剪接因子(SFPQ)在肝细胞癌(HCC)中的表达及作用。方法:采用实时定量PCR及Western blot检测HCC患者的癌组织和对应癌旁组织SFPQ mRNA及蛋白表达。采用TCGA和GEO数据库分析正常肝组织及HCC组织中SFPQ的表达丰度差异;采用TCGA数据库分析SFPQ表达与HCC患者临床分期、病理分级以及患者生存期的关系以及与增殖基因PCNA、Ki-67和周期蛋白CCNE1、CDK2的相关性。观察敲低HCC细胞株HepG2及Hep3B中SFPQ的表达后增殖能力与细胞周期的变化。结果:组织标本分析结果显示,SFPQ mRNA及蛋白表达水平在HCC组织中明显高于癌旁组织(均P0.05)。数据库分析结果显示,HCC组织中SFPQ mRNA表达丰度明显高于正常肝组织,且患者临床分期及病理学分级越高,SFPQ mRNA水平越高,高表达SFPQ的患者的总生存率明显降低,SFPQ mRNA表达与PCNA、Ki-67、CCNE1、CDK2的表达均呈明显正相关(均P0.05)。敲低SFPQ表达后,HepG2及Hep3B细胞的增殖能力明显减弱,并出现明显G1期阻滞(均P0.05)。结论:SFPQ在HCC中表达升高,升高的SFPQ可通过调节HCC细胞周期,促进HCC细胞的增殖,加速肿瘤进展。     

长链非编码RNA LINC00313与miR-342-3p/膜联蛋白A2轴在肝细胞癌细胞中的作用与机制

背景与目的 肝细胞癌（HCC）是造成癌症相关性死亡的常见原因之一，研究表明长链非编码RNA（lncRNA）调控微小RNA（miRNA）的表达，进而通过抑制靶mRNA翻译或促进mRNA降解来参与肿瘤发生及进展过程。LINC00313作为一种具有致癌活性的lncRNA参与肿瘤发生及进展过程；膜联蛋白A2（ANXA2）在包括HCC的多种恶性肿瘤中表达上调，促进恶性表型的发生，并可能受上游miR-342-3p的调控。因此，本研究探讨LINC00313、miR-342-3p、ANXA2在HCC细胞中的表达及其相互关系。方法 用qRT-PCR与Western blot检测人肝实质细胞及HCC细胞系（Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7）中LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达。将体外培养的Li-7细胞分为空白对照组（无处理）、LINC00313 siRNA组（转染LINC00313 siRNA）、miR-342-3p模拟物组（转染miR-342-3p模拟物）、共转染阴性对照组（转染阴性siRNA序列与阴性miRNA序列）、共转染组（转染LINC00313 siRNA及miR-342-3p抑制物），用qRT-PCR与Western blot检测各组细胞LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达；MTT实验及平板集落形成实验检测各组细胞增殖；进行TUNEL染色检测各组细胞凋亡；Transwell侵袭及Western blot分别检测各组细胞侵袭数目及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白波形蛋白（vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达；免疫荧光染色检测各组细胞Bcl-2关联X蛋白（Bax）/B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）；双荧光素酶报告实验分析Li-7细胞中LINC00313对miR-342-3p、miR-342-3p对ANXA2的靶向调控。建立皮下裸鼠异种移植瘤模型，验证LINC00313沉默对Li-7细胞体内生长的影响。结果 与人肝实质细胞比较，Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7细胞的LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达均明显降低（均P<0.05）。与对照组比较，LINC00313 siRNA组、miR-342-3p模拟物组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显降低（P<0.05），miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（均P<0.05）；与LINC00313 siRNA组比较，共转染组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显降低（均P<0.05）。Li-7细胞中，LINC00313可靶向下调miR-342-3p表达，miR-342-3p可靶向下调其ANXA2表达（均P<0.05）。体内实验结果显示，与无处理的Li-7细胞移植瘤比较，LINC00313敲低的Li-7细胞移植瘤的体积与质量均明显降低，肿瘤组织中LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显降低，而miR-342-3p表达明显升高（均P<0.05）。结论 LINC00313在HCC细胞中的表达上调，LINC00313可能通过抑制miR-342-3p而增加后者靶基因ANXA2的表达，进而促进HCC细胞的恶性表型。     

肝细胞肝癌中GPC1的表达水平及临床预后意义

目的:探讨肝细胞癌(HCC)及肝癌细胞系中细磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1(GPC1)的表达水平及与患者临床预后的相关性.方法:2011年10月至2013年11月,HCC患者175例与肝血管瘤(HC)患者27例,均经病理检查并确诊,采用开腹或腹腔镜根治术进行肝癌根治性切除,随访期至2018年12月,中位随访43个月.采用荧光定...     

Effects of 5-azacytidine and butyrate on differentiation and apoptosis of hepatic cancer cell lines.

OBJECTIVE: To determine the cellular effects of 5-azacytidine (5-azaC) and sodium butyrate on two human liver cancers, HepG2 and Hep3B. SUMMARY BACKGROUND DATA: Primary liver cancer is a significant health problem; treatment options are limited and prognosis is poor. Recent studies have focused on the role that programmed cell death (i.e., apoptosis) plays in both normal and neoplastic growth: certain genes can either suppress (e.g., Bcl-2, Bcl-xL) or promote (e.g., Bik, Bax, Bak) apoptosis. The identification of novel agents targeted to specific molecular pathways may be beneficial in the treatment of this disease. METHODS: Human liver cancer cell lines HepG2 and Hep3B were treated with 5-azaC alone, butyrate alone, or 5-azaC and butyrate. Morphologic and proliferative changes were assessed by light microscopy and 5-bromo-2'-deoxyuridine staining; flow cytometry was used to determine cell cycle characteristics. Apoptosis was assessed by DNA laddering and the in situ apoptosis detection assay using the TdT-mediated dUTP nick end labeling method. In addition, total RNA and protein were analyzed by ribonuclease protection and Western blot, respectively, to assess changes in the expression of apoptosis-related genes. RESULTS: Treatment with either 5-azaC or butyrate inhibited cell growth and induced apoptosis in both HepG2 and Hep3B cells; the combination of 5-azaC and butyrate was not more effective than either agent alone. 5-azaC alone resulted in a more differentiated-appearing morphology and G2 cell cycle arrest in both cell lines. Treatment with 5-azaC or butyrate affected the expression levels of proteins of the Bcl-2 family. CONCLUSIONS: Both 5-azaC and butyrate induced apoptosis in the HepG2 and Hep3B liver cancer cells; 5-azaC treatment alone produced G2 arrest in both cell lines. Proteins of the Bcl-2 family may play a role in the cellular changes that occur with treatment, but further studies are required to define this potential role. Products of the apoptotic pathway may prove to be useful therapeutic targets in the treatment of hepatic cancers.     

人肝癌浸润淋巴细胞的分离培养及其CD8阳性亚群特性研究

目的从原发性肝癌（HCC）患者术后的肿瘤组织中提取、培养肿瘤浸润性淋巴细胞（TILs），进一步分选、扩增其CD8阳性亚群（CD8+TILs），并研究其特性。 方法标本取自38例肝癌根治术后的肿瘤组织，免疫组织化学染色观察癌巢组织和癌旁组织TILs的分布，通过机械剪碎、混合酶消化和不连续密度梯度离心法分离提取TIL前体细胞。采用重组人白介素2进行激活，抗CD3、抗CD28抗体进行共刺激扩增，用磁珠分选出CD8+TILs，CCK8法观察CD8+TILs对肝癌细胞Hep3B、HepG2生长的影响。 结果TILs富集于癌旁组织，12例成功提取TILs，6例培养并实现大量扩增，扩增17~50倍后细胞数为（1.2~2.5）×10⁸个，CD3+细胞比例为（77.53±16.37）%，CD3+CD4+比例为（27.08±21.56）%，CD3+CD8+比例（44.55±12.73）%，细胞活力为（90.5±3.0）%，CD8+TILs对肿瘤细胞系Hep3B、HepG2有较强的生长抑制作用。 结论本研究成功建立高效提取、培养CD8+TILs的方法，获得具有高抗肿瘤活性的CD8+TILs，为晚期肝癌等实体瘤的过继免疫治疗提供研究基础。