组织因子途径抑制物2抑制胰腺癌血管生成的研究

目的研究组织因子途径抑制物2（TFPI-2）对胰腺癌血管生成的影响，探讨其抑制胰腺癌生长及侵袭、转移的机制。方法建立裸鼠角膜微囊移植模型，将3组细胞Pane-1TFPI-2、Pane-1-P和Pane-1-V分别接种裸鼠角膜微囊，观察角膜新生血管的形成；再将上述3组细胞接种于裸鼠皮下，观察裸鼠皮下肿瘤生长及转移情况，并采用抗CD34抗体进行血管免疫组织化学染色检测皮下肿瘤的微血管密度（MVD）。Pane-1-TFPI-2组为实验组，Panc-1-P和Pane-1-V组作为对照组。结果实验组角膜新生血管积分比对照组明显减少（P〈0．05），实验组和对照组裸鼠皮下均成瘤，实验组肿瘤体积（438．0±69．8）mm^3，对照组分别为（852．0±102．9）mm^3和（831．0±78．1）mm^3（P〈0．05）；同对照组比较，实验组未见明显远处转移，其肿瘤微血管密度（9．68±1．12），对照组分别为（18．69±2．51）和（20．32±2．08），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论组织因子途径抑制物2能抑制肿瘤血管的形成，抑制胰腺癌生长。     

胰腺癌中TFPI-2基因的表达及其意义

目的 探讨人胰腺癌中TFPI-2基因表达及其意义.方法 采用RT-PCR及Westernblot技术,检测TFPI-2基因在50例胰腺癌、35例转移灶、8例正常胰腺组织中的表达,同时用Boy-den小室及裸鼠皮下种植瘤模型检测胰腺癌细胞系Panc-1体内、体外侵袭及转移能力.结果 胰腺癌组织及转移灶中TFPI-2 mRNA及相应蛋白表达水平均低于正常胰腺组织(P<0.05).TFPI-2的表达水平与性别、年龄、肿瘤大小及组织学分级无关,而与临床分期、尤其是有无远处转移及神经侵犯有关.Ⅲ、Ⅳ期胰腺癌组织中TFPI-2表达水平低于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05);无远处转移、无神经侵犯的胰腺癌组织中TFPI-2表达水平高于有远处转移、有神经侵犯的胰腺癌组织(P<0.05).转染基因胰腺癌细胞系Pane-1-TFPI-2体外侵袭能力下降,无明显肌层浸润及肝、肺转移现象.结论 TFPI-2基因表达的降低与胰腺癌侵袭和转移有关,可能参与胰腺癌的侵袭和转移调控.     

RNAi沉默STAT3基因对人前列腺癌PC3细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨pSilencer1．0-U6-siRNA-STAT3重组质粒对人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 采用裸鼠前列腺癌模型模拟siRNA—STAT3基因治疗实验，观察siRNA—STAT3重组质粒的抗瘤疗效，Western blot法检测重组质粒对STAT3基因表达的影响，HE及Tunel染色方法观察肿瘤组织形态及细胞凋亡情况。结果 肿瘤接种后第49天重组质粒组肿瘤体积为（391±56）mm^3，盐水对照组为（1111±182）mm^3，空质粒对照组为（981±169）mm^3，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；重组质粒抑制瘤体内STAT3及pTyr-STAT3基因表达率分别为77％及68％，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。HE染色证实重组质粒组出现大片细胞核固缩、破碎等凋亡征象，Tunel染色显示癌组织出现大量细胞凋亡。结论 pSilencer1．0-U6-siRNA-STAT3重组质粒能明显抑制人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤的生长，具有良好的应用前景。     

hTERT基因短发夹状RNA表达载体对肾癌细胞生长的抑制作用

目的观察针对hTERT基因的短发夹状RNA（shRNA）表达载体pSilencer-hTERT对人肾癌细胞及移植瘤生长的抑制作用。方法（1）pSilencer-hTERT转染人肾癌Kerr-3细胞，1、3、5、7d后逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白印迹技术检测hTERTmRNA、蛋白表达，MTT法检测细胞增殖，原位末端标记法检测凋亡。（2）BALB／C-nu裸鼠接种Ketr-3细胞成瘤，瘤内分别注射pSilencer-hTERT（50μg）、空质粒pSilencer1．0-U6（50μg）及等体积（100μg）生理盐水，隔日1次，共7次。治疗结束后第3天处死小鼠，取瘤组织检测肿瘤体积，免疫组织化学染色检测hTERT表达。结果（1）pSilencer-hTERT转染3d后Ketr-3细胞hTERTmRNA表达（43．2±4．4）％、蛋白表达（42．6±5．6）％最低，细胞增殖抑制率（37．3±6．6）％、凋亡细胞阳性率（30．5±4．7）％最高，分别与空质粒对照组[（98．8±4．7）％、（98．0±3．7）％、（3．3±0．9）％、（10．4±2．4）％]比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（2）pSilencer-hTERT处理组小鼠肿瘤体积（62．4±36．5）mm^3减小，hTERT表达率（65．7±4．7）％降低，分别与空质粒对照组（83．2±38．7）、（90．7±4．2）％比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论pSilencer-hTERT能有效、持续抑制人肾癌Ketr-3细胞及裸鼠肾癌移植瘤生长。     

3.0 T MR弥散加权成像对鉴别胰腺癌与慢性肿块型胰腺炎的价值

目的探讨在3．0T磁共振（MR）平台上应用弥散加权成像（diffusion—weighted imaging，DWI）鉴别诊断胰腺癌与慢性肿块型胰腺炎的价值。方法纳入经手术病理和临床随访证实的胰腺癌患者13例、慢性肿块型胰腺炎患者7例和健康志愿者14例，在行上腹部常规MR扫描后进行胰腺DWI检查。采用自旋回波回波平面成像技术和空间敏感性编码技术，分别取弥散梯度b值=400、600、800和1000s／mm^2获得相应的DWI图像，测量感兴趣区（ROI）的ADC值，并进行统计学分析。结果①健康志愿者胰腺DWI呈中等信号。②胰腺癌患者癌组织在DWI上呈均匀高信号，边界较清楚；各b值（400、600、800和1000s／mm^2）下，测得ADC值分别为（1．63&#177;0．235）、（1．42&#177;0．126）、（1．36&#177;0．170）及（1．26&#177;0．178）&#215;10^-3mm^2／s，明显低于癌周胰腺组织[（2．11&#177;0．444）、（1．83&#177;0．230）、（1．81&#177;0．426）及（1．60&#177;0．230）&#215;10^-3mm^2／s]及健康志愿者胰腺的ADC值[（1．85&#177;0．350）、（1．69&#177;0．290）、（1．67&#177;0．268）及（1．42&#177;0．221）&#215;10^-3mm^2／s]，P〈0．05。③慢性肿块型胰腺炎在DWI上呈不均匀稍高信号，边界不清；各b值下测得ADC值分别为（1．69&#177;0．150）、（1．56&#177;0．119）、（1．59&#177;0．172）及（1．35&#177;0．080）&#215;10^-3mm^2／s，均高于胰腺癌组织的ADC值，但仅当b值-800s／mm^2时，与胰腺癌组织间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DWI可以清楚显示胰腺肿瘤病灶及范围，结合ADC的测量值能够为鉴别胰腺癌与慢性肿块型胰腺炎提供一定的信息。     

人端粒酶逆转录启动子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗裸鼠胰腺移植瘤的安全性研究

目的 探讨人端粒酶逆转录（hTERT）启动子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因治疗裸鼠胰腺癌的安全性。方法 应用细菌内同源重组法构建hTERT启动子和常规巨细胞病毒（CMV）启动子驱动的HSV-TK基因真核表达载体PDC312-TP—TK，PSU-CMV-TK。制备腺病毒液，检测病毒滴度为1．9×10^10pfu／ml和1．4×10^10pfu／ml。建立裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型，分别以两种方法治疗后观察皮下移植瘤消退、HSV-TK基因表达情况、肝脏苏木素-伊红（HE）染色切片、肝功能。结果 PDC312-TP-TK组与PSU-CMV-TK组对肿瘤的抑瘤率分别为58．3％和65．6％，治疗组间差异无统计学意义（P〉0．05），杀伤方面具有一样的高效性；但其对肝脏的毒副作用远小于PSU-CMV-TK组，PDC312-TP-TK组血清中ALT，AST，ALP分别为（54．00±1．97）、（147．00±12．67）、（33．00±2．59）U／L而PSU-CMV-TK组中为（334．00±9．81）、（511．00±11．24）、（98．00±3．12）。差异有统计学意义（P〈0．01）。裸鼠肝脏苏木素-伊红（HE）染色中，仅PSU-CMV-TK组有肝脏坏死改变。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）中也仅PSU-CMV-TK组检测到1143bp的TK基因片段。结论 hTERT启动子驱动的HSV-TK基因是一种新的靶向治疗方法，在具有治疗高效性的同时，更具有安全性。     

纳米磁靶向性药囊对胆管癌移植瘤生长的影响

目的应用磁性纳米材料包封化疗药物的药囊，注入荷瘤裸鼠体内，探讨其对人胆管癌的生长抑制作用。方法建立人胆管癌细胞QBC939的荷瘤裸鼠模型。在接种后20d将裸鼠随机分7组，其中B、D、F组为肿瘤内置磁化丝，从尾静脉分别注射高、中、低剂量组的纳米磁性药囊，其他各组分别给予其他干预手段。于治疗后第35天计算各组裸鼠肿瘤体积、抑瘤率和肿瘤生长曲线。处死裸鼠将肿瘤组织和其他器官送病检，并将肿瘤组织送电境检查。结果治疗35d后B、D两组肿瘤体积分别为（1392．2±189．4）mm^3和（1933．7±189．5）mm^3与对照组肿瘤体积（2256．0±267．1）mm^3比较差异有统计学意义（P〈0．05）。B、D两组抑瘤率分别为39．6％和14．6％。结论纳米磁靶向性药囊对胆管癌裸鼠移植瘤生长有抑制作用。     

裸鼠原位高转移胰腺癌模型的建立

目的 研究一种成功率高、转移率高的人胰腺癌原位动物造模方法.方法 将MIAPaCa-2细胞接种到裸鼠的皮下,待其成瘤后,再将皮下瘤块无菌条件下取出,原位种植到30只裸鼠胰腺尾部,于4、6、8周分批处死裸鼠,进行大体及组织学观察和分析.结果 本研究裸鼠胰腺原位成瘤率达100％,苏木素-伊红(HE)染色观察发现4、6、8周裸鼠原位成瘤的胰腺癌细胞形态学上无明显差异,均为低分化胰腺癌细胞.镜下证实原位植瘤后4周裸鼠远处转移率为0％,原位移植瘤后8周远处转移率为100％,包括腹腔淋巴结转移及远处脏器转移,两者差异有统计学意义(P＜0.05).肝转移仅为1例,占10％.结论 裸鼠4周成瘤属于胰腺癌的早期,肿瘤未发生转移;8周成瘤属于胰腺癌晚期,肿瘤发生了淋巴结及远处转移,且利用该种建模方法成功率高、转移率高、肝转移率低.     

联合反义存活素、血管内皮生长因子治疗裸鼠骨肉瘤

目的探讨存活素（Survivin，SVV）、血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸（ASODN）联合治疗裸鼠骨肉瘤。方法构建荷骨肉瘤裸鼠模型，采用瘤内注射给药方式（5mg,／kg体重），以反义SVV、反义VEGF对瘤鼠进行联合干预治疗1周，并与各单药组和空白对照组进行比较，观测各组裸鼠肿瘤生长情况、评估瘤体病理形态，免疫组织化学法检测移植瘤组织SVV、VEGF蛋白表达，DNA末端原位标记法（TUNEL法）检测肿瘤细胞凋亡水平。结果与对照组比较，各治疗组肿瘤生长均不同程度受抑，以联合组最为显著，瘤重仅为（0．52±0．01）g，抑瘤率IR为（42．80±0．88）％；各治疗组肿瘤细胞中SVV、VEGF蛋白表达有所减低，肿瘤细胞出现凋亡坏死改变，其中联合组细胞凋亡指数AI[（27．90±3．66）％]显著高于对照组[（7．10±2．05）％，Χ^2=46．27，P〈0．01]。结论联合应用SVV与VEGFASODN将对裸鼠荷骨肉瘤发挥更强的抗瘤效应。     

MAT2A siRNA对荷瘤鼠肝癌细胞生长的影响

目的探讨MAT2A小干扰RNA对荷瘤鼠肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法采用脂质体转染法将MAT2A小干扰RNA质粒表达载体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞，建立持续转录小干扰RNA的细胞系，并将该细胞系皮下接种裸鼠，观察肿瘤生长情况；为进一步观察裸鼠体内抑瘤性，将皮下接种稳定表达小干扰RNA的Bel-7402细胞系的裸鼠分为三组：A、盐水对照组，B、空质粒对照组，C、siRNA治疗组；于接种后第12天，每组动物行纯化质粒DNA瘤内注射，观察肿瘤大小；治疗后2周，处死所有动物，取肿瘤，测量大小；部分石蜡包埋切片、HE染色，部分进行凋亡检测。结果得到稳定转染siRNA载体、并能持续表达siRNA的Bel-7402细胞系，将稳定建系的细胞传代，持续表达siRNA细胞系肿瘤细胞生长明显缓慢。皮下接种建系的Bel-7402细胞建立荷瘤鼠模型，可以观察到siRNA组肿瘤生长缓慢，平均第13天才长出皮下可及、但肉眼看不到的肿瘤，而接种control siRNA组，平均第9天可长出肉眼可见的肿瘤；用裸鼠肿瘤模型观察siRNA的体内抑瘤效果，质粒DNA注射后，对照组瘤体10．93mm^3，空质粒对照组为11．13mm^3，而siRNA质粒转染组为4．26mm^3（P〈0.01）；HE染色显示，对照组和空质粒组质粒DNA注射后，病灶充满肿瘤细胞；而siRNA组质粒DNA注射后，病灶内有大量炎性细胞浸润，坏死明显，仅见少量肿瘤细胞；且siRNA明显诱导荷瘤鼠肝癌细胞凋亡，其凋亡指数为（28．79±2．13）％，较盐水对照组（9．54±1．89）％和空质粒治疗组（10．24±2．06）％明显升高（t=15．41，P〈0．01）。结论靶向MAT2A基因的siRNA诱导荷瘤鼠肝癌细胞凋亡，抑制肝癌细胞生长。     

成纤维细胞生长因子5对胰腺癌细胞生长和肝转移能力的影响

目的:观察成纤维细胞生长因子5 (FGF5)对人胰腺癌细胞生长和肝转移能力的影响。方法:利用高表达FGF5的人胰腺癌PANC-1细胞系(北京大学第一医院外科大肠癌实验室提供),通过短发卡RNA(shRNA)稳定转染技术,构建FGF5低表达细胞系PANC-1-FGF5 -,并以未转染质粒和转染对照粒的PANC...     

稳定表达荧光的高转移人肝癌裸鼠模型的建立

目的 建立稳定表达红色或绿色荧光的人肝癌裸鼠转移模型.方法 用带红色或绿色荧光蛋白基因的假慢病毒感染人高转移潜能肝癌细胞HCCLM3,获得稳定表达红色或绿色荧光的新细胞系HCCLM3-R和HCCLM3-G.1×107细胞皮下接种、2 mm3组织块原位移植裸鼠,建立稳定表达荧光的人肝癌裸鼠转移模型.结果 皮下接种5只裸鼠和肝脏原位移植10只裸鼠肿瘤全部生长,经180 d裸鼠体内连续6次传代肿瘤荧光表达稳定,肝内播散、肺转移和腹腔转移检出率分别为100%、100%和90%.结论 采用HCCLM3-R、HCCLM3-G细胞所建立的荧光表达人肝癌裸鼠转移模型,是一个较理想的研究肝癌生长和转移的动物模型.     

大鼠肝癌自发肺转移裸鼠模型的建立

目的　建立大鼠肝癌细胞系自发性肺转移裸鼠模型。方法　大鼠肝癌细胞系C5F皮下接种 4周龄雄性和 7周龄雌性BALB/CA裸鼠 ,观察皮下成瘤及肺部和腹腔脏器的大体转移灶形成情况 ,取可能转移的器官作组织学检查 ,肺组织连续切片并计数镜下转移灶。结果　裸鼠皮下成瘤率 10 /10 ,雌性裸鼠中肺表面肉眼可见明显转移灶 ,转移率为 6/6,肺表面大体转移灶中位数45 ,镜下转移灶中位数 75 5个 /裸鼠 ,腹腔及其脏器均未见转移灶。雄性裸鼠未见大体和镜下转移灶。结论　该细胞系在雌性BALB/cA裸鼠中能充分表达自发转移潜能 ,肺脏是其优势转移器官。成功建立的大鼠肝癌细胞自发肺转移裸鼠模型为肝癌转移抑制基因的染色体功能定位研究提供了适宜的动物模型。     

红色荧光蛋白标记的胰腺癌裸鼠原位移植瘤转移模型的建立

目的 建立稳定、高表达红色荧光蛋白(RFP)标记的胰腺癌裸鼠原位移植瘤自发转移模型.方法 将稳定、高表达RFP的人胰腺癌细胞株SW1990-RFP注射至裸鼠皮下,建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型.通过外科手术原位移植裸鼠皮下荧光肿瘤组织小块,建立人胰腺癌裸鼠原位移植瘤自发转移模型.应用整体荧光成像系统评价人胰腺癌裸鼠原位移植瘤模型肿瘤转移及微转移的发生情况.结果 成功建立12只人胰腺癌裸鼠原位移植瘤自发转移模型,建模成功率为100%.应用整体荧光成像系统可以实时监测原发肿瘤的牛长状况以及在肿瘤生长早期即可检测到各脏器微小转移的发生.结论 本实验所建立的RFP标记的胰腺癌裸鼠原位移植瘤自发转移模型稳定、可靠,可以在体外无创性动态观察肿瘤的发生、发展,具较强的灵敏性及特异性.     

3TSR对胰腺癌生长及转移抑制的实验研究

目的 研究血管生成抑制因子3TSR对胰腺癌生长和转移的抑制作用. 方法 采用人胰腺腺癌细胞株MIAPa Ca-2,建立类似于临床的胰腺癌原位转移裸鼠模型.分别自腹腔注射3TSR、键择(Gemcitabine,Gem)和3TSR+Gem,注射3周后处死动物,测量原位肿瘤体积、抑瘤率,观察肿瘤细胞肝、腹膜转移及腹水情况. 结果 体内实验时3TSR组、Gem组和3TSR+Gem组肿瘤体积较对照组明显减少,抑瘤率分别为71.9%,80.1%和85.8%,但该3组间平均肿瘤体积差异无统计学意义(P>0.05);对照组、3TSR组、Gem组和3TSR+Gem组肝转移率分别为66.7%,22.2%,44.4%和11.1%;腹膜转移率分别为100%,66.7%,66.7%和22.2%;腹水发生率分别为77.8%,55.6%,22.2%和11.1%.与对照组相比,3TSR组胰腺癌肝转移率显著降低(P<0.05),而腹膜转移及腹水发生率差异无统计学意义.3TSR联合Gem后,胰腺癌的腹膜、肝转移及腹水形成均受到显著抑制(P<0.05). 结论 3TSR对体内胰腺癌生长和肝转移具有一定的抑制作用,与传统化疗药物Gem联用后对胰腺癌肝和腹膜转移均起到抑制作用,并可抑制腹水形成.     

转单链鼠白介素12基因前列腺癌RM-1细胞的致瘤性观察

目的：探讨前列腺癌的免疫基因治疗。方法：将mIL-12基因体外转染鼠前列腺癌RM－1细胞，接种C57BL／6小鼠，观察其致瘤性。结果：转基因RM－1细胞大部分丧失致瘤性；一侧接种转AdmIL-12的RM－1细胞，引起对侧接种野生型RM－1细胞成瘤延迟、肿瘤生长减缓。结论：IL－12可诱发抗肿瘤免疫反应。     

组织因子对大肠癌细胞肝转移能力的作用

目的探讨组织因子（TF）表达对大肠癌细胞血行转移能力的影响。方法利用构建有正义／反义组织因子cDNA（TFcDNA）的真核表达载体pcDNA3．1／Zeo，以脂质体法转染LoVo细胞。经验证转染成功的LoVo细胞采用Western blot检测组织因子的蛋白表达水平，再将24只裸鼠（BALB／C nu／nu）随机分成3组，分别将转染了正义／反义TFcDNA的LoVo细胞及未转染的LoVo细胞通过脾接种至裸鼠体内。6周后观察裸鼠发生肝表面转移灶的数目，以肝表面转移灶的数目反映LoVo细胞的转移能力。结果与LoVo细胞相比，转染了正义TFcDNA的LoVo细胞的TF表达水平升高，而转染了反义TFcDNA的LoVo细胞的TF表达水平则降低（F=33．9，P〈0．01），转染了正义TFcDNA的LoVo细胞组比LoVo组的肝转移灶的数目多，而转染了反义TFcDNA的LoVo细胞组则比LoVo组的肝转移灶的数目少（F=52．1，P〈0．01）。结论组织因子可以增加人类大肠癌细胞的体内血行转移能力。     

人肝癌转移抑制基因存在的功能研究

目的 寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据.方法 前期通过微细胞介导的染色体转移方法(MMCT),将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Ne08/C5F-1～10和大鼠肝癌细胞株CSF,分别被接种到6～7周龄雌性BALB/CA裸鼠皮下进行自发转移实验,观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况,肺组织连续切片并计数镜下转移灶,结果进行单因素方差分析.结果 所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤,微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制(P<0.05),其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制.结论 人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株CSF的成功导入改变了CSF的转移表型,提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据.