联合应用CTLA-4Ig及抗ICOS单克隆抗体延长小鼠移植胰岛存活时间

目的探讨共刺激信号阻断剂细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白（CTLA-4Ig）及抗共同刺激分子ICOS单克隆抗体（ICOSmAb）对移植胰岛功能的影响。方法以BALB／c小鼠为供者，C57BL／6糖尿病小鼠为受者，进行同种胰岛细胞移植。将移植后的小鼠随机分成4组，每组10只。ICOS组：移植后1、3、5d腹腔内注射ICOSmAb 100μg／kg；CTLA4组：移植后0、2、4d腹腔内注射CTLA-4Ig50μg／kg；联合阻断组：移植后腹腔注射CTLA-4Ig和ICOSmAb，用法同CTLA4组和ICOS组；对照组：单纯胰岛移植，不注射CTLA-4Ig和ICOSmAb。观察术后移植物存活时间和移植胰岛的病理改变；逆转录聚合酶链法（RT-PCR）检测移植胰岛组织中白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素10（IL-10）mRNA的表达情况；应用流式细胞仪检测CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞表达情况。结果联合阻断组的小鼠移植胰岛存活时间较其它3组明显延长，移植胰岛的细胞形态经光镜检查接近正常。联合阻断组与其它3组比较，IL-2mRNA表达减少，差异有统计学意义（P〈0．05），IL-10mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0．05）；移植术后21d，CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞表达上调不明显。结论应用CTLA-4Ig和ICOSmAb联合阻断CD28和共同刺激分子ICOS，可以明显的抑制排斥反应，延长移植胰岛的存活时间及存活率。     

可诱导性共刺激分子单抗联合细胞毒T淋巴细胞4Ig在大鼠胰腺移植中的作用

目的 探讨可诱导性共刺激分子（ICOS）单抗、细胞毒T淋巴细胞4ig（CTLA41g）阻断共刺激通路对于异基因大鼠胰腺移植的作用及其机制。方法 建立胰腺移植模型，分A组（对照组），B组（CTLA4Ig组），C组（抗ICOS单抗组），D组（联合CTLA4Ig和抗ICOS单抗组）。术后1、4,7d监测血糖，第7天取胰腺做苏木素-伊红染色，脾脏做流式细胞检测CD3^＋CD8^＋T细胞、CD4^＋T细胞、CD4^＋CD25^＋T细胞。结果 与A组比较：B、C、D组排斥反应较A组明显减弱，显著延长了移植物的存活时间。CD3^＋CD8^＋T细胞计数B、C、D与A组比较均有减少，差异有统计学意义（P〈0．01）。CD4^＋T细胞B、D与A组的差异有统计学意义（P〈0．05）。CD4^＋CD25^＋T细胞各组间逐渐升高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 抗ICOS单抗和CTLA4Ig能有效地抑制大鼠胰腺移植排斥反应，延长移植物存活时间，且联合应用比单一应用更有效。其可能机制为诱导了CD4^＋CD25^＋T细胞的产生。     

移植抗原特异性转基因CD8+T细胞对白细胞介素2的依赖性

目的研究白细胞介素2（IL-2）在调节移植抗原特异性转基因CD8^＋T细胞介导的免疫排斥反应中的作用。方法将经荧光染科CFSE标记后的C57BL／6小鼠和2CTg小鼠（CD4敲除鼠）淋巴细胞分别植入经致死剂量γ射线照射过的两组DBA／2J小鼠体内，检测CD4^＋与CD8^＋T细胞在体内分裂增殖的时相，并用胞浆内IL-2标志染色方法测定活化后T细胞表达IL-2的能力。以Balb／c小鼠为供者，糖尿病2CTg小鼠和2C Tg-IL-2KO小鼠（IL-2敲除鼠）为受者，进行胰岛细胞移植。观察CD8^＋ T细胞在介导移植排斥中的作用。结果DBA／2J小鼠输注了C57BL／6小鼠的淋巴细胞后，CD4^＋与CD8^＋T细胞分裂增殖均非常明显，前者表达大量IL-2，后者则不表达。DBA／2J小鼠输注了2CTg小鼠的淋巴细胞后。在完全没有CD4^＋T细胞存在的情况下，CD8^＋T细胞仍明显分裂增殖并大量表达IL-2。2CTg和2CTg—IL-2KO小鼠移植胰岛细胞后，前者迅速发生排斥反应，胰岛移植物的平均存活时间仅为8d，而后者胰岛移植物的平均存活时间〉50d。结论CD8^＋T细胞在产生和利用IL-2时有很大的可塑性。CD4^＋T细胞存在时，CD8^＋T细胞能有效利用CD4^＋T细来源的IL-2进行分裂增殖，在缺乏CD4^＋T细胞时，则利用自身来源的IL-2进行分裂增殖；移植抗原特异性CD8^＋T细胞的效应功能完全依赖于IL-2，排斥反应由CD8^＋T细胞介导时，阻断IL-2／IL-2受体通路可诱导移植物长期存活。     

阻断CXC趋化因子受体3途径对同种异体胰岛移植急性排斥反应影响的实验研究

目的研究CXC趋化因子受体3（CXC chemokine receptor 3,CXCR3）反义肽核酸（peptide nucleic acid,PNA）对同种异体胰岛移植急性排斥反应的影响。方法实验模型为小鼠同种异体胰岛移植模型。分为生理盐水对照组,PNA CXCR3组和随机错配PNA组。体外T细胞增殖应答能力通过淋巴细胞增殖反应来评估。应用RT-PCR和Western blot检测CXCR3 mRNA和蛋白表达水平。应用流式细胞仪测定脾CD3^＋T细胞CXCR3表达水平。结果与生理盐水组[（6．72±1．48）d]和随机错配PNA组[（6．54±0．86）d]相比,PNA CXCR3组[（9．70±1．57）d]受体有功能胰岛移植物存活时间明显延长。移植后第7天,PNA CXCR3组CXCR3 mRNA水平（1．06±0．07）同生理盐水对照组（1．98±0．22）和随机PNA组（1．87±0．10）比较明显下调（P〈0．01）。PNA CXCR3组移植物CXCR3蛋白水平以及小鼠淋巴细胞增殖能力与另两组比较明显降低（P〈0．01）。结论PNA CXCR3通过降低T淋巴细胞活性来延长同种异体胰岛移植物存活时间,在抑制同种异体急性排斥反应中具有潜在的治疗效应。     

抗原特异性CD4+CD25+T细胞对同种异体胰岛移植影响及作用机制研究

目的:探讨抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞免疫对同种异体胰岛急性移植排斥反应的影响和机制。方法:用MACS分选供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞免疫糖尿病BALB/cByJ受体小鼠，以ICR小鼠胰岛为供体行同种异体胰岛移植。观察移植后小鼠的存活时间、移植前后外周血CD4+和CD8+T细胞亚群的变化和移植物中Th1/Th2细胞因子mRNA表达水平的变化。结果:抗原特异性Treg细胞联合胰岛移植组(C组)胰岛移植物平均生存期为(34.57±17.15)d，显著长于单纯胰岛移植组(B组)的(10.6±1.82) d (P<0.01)；移植后第3天，C组外周血CD4+/CD8+的值显著低于B组(P<0.01)；C组移植物中IL-10,TGF-β mRNA表达比B组显著增强。B组移植物中IL-1β，IL-2及IFN-γ mRNA表达明显强于C组。结论:抗原特异性CD4+CD25+ Treg细胞可通过调节Th2/Th1之间的反应平衡而延长同种异体胰岛移植物的存活时间。     

环孢素A联合供者骨髓细胞输注延长大鼠移植心脏存活时间

目的：探讨环孢素A（CsA）联合供者骨髓细胞（DBMC）输注对同种大鼠移植心脏存活时间的影响。方法：制作Lewis大鼠到BN大鼠的异位（腹部）心脏移植模型，并按对受者处理的不同分为四组，对照组不进行特别处理，CsA组术后连续7d给予CsA5mg·kg^-1·d^-1，联合处理组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC，术后连续7d给予CsA5nag·kg^-1·d^-1，DBMC组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC；另设BN大鼠间的心脏移植作为对照（BN对照组）。观察移植心脏的存活时间，观测术后第6天血清白细胞介素2（IL-2）、移植心脏组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）mRNA表达以及组织学改变，流式细胞仪检测术后第6、12、18天时受者外周血有核细胞中的供者来源细胞、CD3^＋ CD25^＋细胞、CD4^＋ CD25^＋细胞的百分比以及共刺激分子CD86表达、CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-等。结果：联合处理组移植心脏存活时间为（21．6±3．2）d，明显长于对照组和DBMC组（P〈0．05），其血清IL广2为（313±95）pg／ml，心肌组织中TNF-α mRNA的表达量为0．12±0．10，均明显低于对照组和DBMC组（P〈0．05），排斥反应程度轻于其它3个移植组。联合处理组大鼠外周血有核细胞上CD86表达受到明显抑制；术后6、12d，联合处理组的CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-比值低于对照组和DBMC组，CD3^＋ CD25^＋细胞百分比也低于对照组和DBMC组；接受DBMC输注者外周血中供者来源的有核细胞明显多于未接受DBMC者。结论：短疗程CsA联合DBMC输注能减轻大鼠心脏移植急性排斥反应程度，延长移植心脏存活时间。     

Th1/Th2类细胞因子转换对小鼠心脏移植物存活的影响

目的 探讨Th1/Th2类细胞因子转换对小鼠心脏移植物存活时间的影响。方法 采用小鼠腹部心脏移植模型，分为同种异体移植组（A组）、同种异体移植+免疫抑制处理组（B组）和同系移植组（C组），每组20对。观察移植物存活时间、供心病理改变、受鼠脾和供心内IFN-γ，IL-2，IL-4及IL-10 mRNA的表达水平。结果 A组及B组移植物平均存活时间分别为（7.8±0.77）d和（14.80±1.01）d，C组移植物存活均超过28d；3组间差异均有显著性（P<0.05）。A组与B组、C组比较，移植物的心肌细胞变性坏死严重，并有大量炎性细胞浸润。A组受鼠脾脏及供心内IFN-γ和IL-10 mRNA表达比其余两组明显增强；3组移植心组织IL-2及IL-4 mRNA均无表达；A组脾脏IL-2 mRNA表达最强；B组脾脏IL-4 mRNA表达明显强于其余两组。结论 Th1/Th2转换在延长移植物存活过程中起重要作用；IL-10也参与移植物排斥反应过程。     

他克莫司对肝移植受者外周血T淋巴细胞亚群及共刺激分子表达的影响

目的 探讨他克莫司（FK506）对肝移植受者外周血T淋巴细胞亚群及其表面共刺激分子表达的影响。方法 采用荧光标记单克隆抗体和流式细胞技术，测定术后采用FK506治疗的肝移植受者（FK506治疗组）在用FK506后1、2、3、4周时的外周血T淋巴细胞亚群及其表面共刺激分子CD28、CD152和ICOS分子的表达情况，以健康志愿者（健康对照组）和患终末期肝脏疾病拟行肝移植者（肝病对照组）为对照。结果 CD3^＋T淋巴细胞在各组间的差异均无统计学意义（P〉0．05）。经FK506治疗后，肝移植患者的CD4^＋T淋巴细胞逐渐减少，CD8^＋T淋巴细胞逐渐增加，并恢复至健康对照组水平（P〉0．05）。FK506治疗组T淋巴细胞亚群表面CD28分子和ICOS分子表达逐渐下降，并明显低于健康对照组（P〈0．05），而CD152分子表达增加，且明显高于健康对照组（P〈0．05）；其ICOS分子表达水平的下降晚于CD28分子，CD4^＋CD28^＋T淋巴细胞、CD8^＋CD28^＋T淋巴细胞和CD4^＋ICOS^＋T淋巴细胞均呈现相近的变化规律。结论 FK506能迅速纠正移植受者T淋巴细胞亚群紊乱，并抑制正性共刺激分子CD28和ICOS的表达，促进负性共刺激分子CD152的表达。     

硬膜外阻滞对妊高征大鼠子宫、胎盘组织CD4+及CD8+T淋巴细胞的影响

目的观察硬膜外阻滞对妊高征（PIH）大鼠子宫、胎盘组织CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞的影响。方法健康雌性Wistar大鼠,鼠龄3～4个月,体重230～300g,40只孕鼠于孕14d时随机分为4组（n=10）：对照组（A组）、PIH组（B组）、假手术组（C组）、治疗组（D组）。B组、C组、D组采用皮下注射甲基L-精氨酸甲酯的方法制备PIH模型,25mg/次,2次/d,连续7d；A组相同时点给予等容量生理盐水0．25ml；C组行硬膜外导管置入术；D组行硬膜外导管置入术,每天由导管注入0．125%布比卡因50μl,连续7d。孕22d时处死大鼠,测定子宫、胎盘组织CD4^＋、CD8^＋及CD4^＋mRNA、CD8^＋mRNA的表达水平。结果各组CD4^＋表达和CD4^＋mRNA表达差异无统计学意义（P＞0．05）；与A组比较,B组、C组CD8^＋表达降低（P＜0．05）；与B组和C组比较,D组CD8^＋表达和CD8^＋mRNA表达升高（P＜0．05）。结论硬膜外阻滞可增加PIH大鼠子宫、胎盘组织CD8^＋T淋巴细胞。     

RNA干扰阻断BT／CD28共刺激通路在小鼠心脏移植中的抗排斥作用

目的探讨RNA干扰（RNAi）技术阻断B7／CD28共刺激通路对小鼠异体心脏移植排斥反应的影响及其机制。方法经体外转录合成针对CD80 mRNA和CD86 mRNA序列特异性小片段干扰RNA（siRNA），转染供者骨髓来源的树突状细胞（DC），半定量逆转录聚合酶链反应、流式细胞仪检测DC转染CD80siRNA、CD86siRNA前后CD80 mRNA和CD86 mRNA的表达水平以及细胞表面CD80及CD86的表达情况。在小鼠异位心脏移植前7d，经静脉给受者输注经siRNA干扰后的DC（干扰DC组），同时设立同种异体对照组、环孢素A（CsA）治疗组（术后皮下注射CsA 5mg／d）、同系移植对照组和未干扰DC组（移植前输注未转染DC），观察各组移植心脏的存活时间，对移植物的排斥反应进行病理分级，并测定移植物组织中白细胞介素2（IL-2）、γ干扰素（IFN-γ）及IL-10的mRNA表达水平。结果siRNA转染DC后，其CD80 mRNA及CD86 mRNA的表达受到明显抑制，CD80、CD86的阳性率分别由84％和67％下降至35％和30％。与同种异体对照组和未干扰DC组比较，干扰DC组移植心脏存活时间明显延长（P〈0．01），组织排斥反应病理分级显著降低（P〈0．01），移植心脏组织中IL-2 mRNA和IFN-γ mRNA的表达水平明显降低（P〈0．01），而IL-10 mRNA的表达水平明显升高（P〈0．01）。结论利用RNAi敲减供者骨髓来源的DC表面B7分子的表达，以阻断BT／CD28共刺激通路，具有抑制小鼠心脏移植排斥反应的作用，其机理可能是通过诱导T淋巴细胞无能并使T辅助细胞分化向Tn2型方向偏移。     

Intubation with propofol augmented with intravenous lignocaine

Sixty patients of ASA grade 1 and aged 18 to 55 years were admitted to a double-blind study. Anaesthesia was induced with propofol 2.5 mg/kg after intravenous pretreatment with lignocaine 1.5 mg/kg or a similar volume of isotonic saline. The quality of subsequent tracheal intubation was graded and the pressor response to tracheal intubation assessed. There were no significant differences between treatment groups.     

510例腹腔镜联合纤维胆道镜胆总管切开取石术的临床应用

目的探讨腹腔镜联合纤维胆道镜治疗胆总管结石的可行性及临床应用价值。方法1998年～2007年对510例患者行腹腔镜胆总管切开取石(laparoscopic common duct exploration,LCDE),与同期300例开腹(opensurgery,OS)手术者比较。术前确诊者,术中直接行胆总管切开胆道镜取石;术前有黄疸史、胰腺炎史和(或)直接胆红素增高、胆系酶(AKP、GGT)增高者,或胆总管在0.8cm以上者行术中造影,明确有胆总管结石的切开胆总管胆道镜取石。405例置T管引流(留置T管组),105例行胆总管Ⅰ期缝合(I期缝合组)。结果手术均获成功,与OS组比较,手术时间、术中出血量、术后并发症发生率(胆瘘、出血)差异无统计学意义;住院日、术后镇痛药使用次数、腹腔或切口感染率、残石率明显减少。无中转开腹。30例T管引流口靠近肋弓而引起术后疼痛,2例术后2dT管才引流出胆汁。留置T管组有24例胆总管残余结石,3月后经胆道镜取石成功。留置T管组手术时间平均(110±15)min,平均术后住院8d;Ⅰ期缝合组手术时间(95±8)min,平均术后住院5d。结论LCDE是治疗胆总管结石安全、有效的方法,同样可起到创伤小、痛苦轻、恢复快、住院时间缩短等微创效果,如能在取净结石的情况下行胆总管Ⅰ期缝合,微创效果尤为明显。     

Clinical outcomes in patients with renal artery stenosis treated with stent placement with embolic protection compared with those treated with stent alone

Purpose: To compare the clinical outcomes in patients with chronic renal insufficiency (CRI) and renal artery stenosis (RAS) following renal artery (RA) stent placement with and without embolic protection device (EPD) usage. Materials and Methods: Eighteen patients who had RA stent placement with EPD were matched to control patients (RA stent only). Blood pressure, number of hypertensive medications, and estimated glomerular filtration rate (eGFR) at 3 months before the procedure and after 12 months were determined. An increase of ≥ 20% in eGFR at 12 months from baseline was defined as "improvement," decrease of ≥20% as "deterioration," and an eGFR change between those values as "stabilization" at 12 months. Results: At 12 months, stage 4 patients treated with EPD had significantly higher eGFR than controls (P = .01). There was no statistical difference in blood pressure outcomes between the 2 groups. Conclusions: Patients with stage 4 CRI did significantly better with EPD than those treated without it.     

腹腔镜与胆道镜联合取石术治疗肝内胆管结石的临床研究

目的:探讨腹腔镜联合胆道镜治疗肝内胆管结石的临床价值。方法:随机将80例肝内胆管结石患者分为2组,实验组(n=45)行腹腔镜联合胆道镜取石术,对照组(n=35)行单纯腹腔镜手术。结果:实验组45例手术均获成功,手术时间110～118 min,平均(160±15)min;术中出血量45～280 ml,平均(140±60)ml;住院6～8天,平均(7±2)天;42例结石完全取净,结石清除率93.3%,术后无一例发生胆漏、出血、脓肿等并发症。对照组手术时间130～220 min,平均(150±30)min;术中出血量80～350 ml,平均(180±75)ml;住院8～12天,平均(9±1)天;32例结石完全取净,结石清除率91.4%,术后2例发生胆漏。两组患者手术时间、术中出血量、住院时间差异有统计学意义(P<0.05),结石完全取净率及并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。术后随访所有患者3～6个月,经胆道镜复查无一例复发。结论:腹腔镜术中联合胆道镜治疗肝内胆管结石安全有效,值得推广应用。     

Variables associated with survival in patients with invasive bladder cancer with and without surgery

We recorded the survival of 141 patients assessed for radical cystectomy, which included cardiopulmonary exercise testing. The median Kaplan-Meier survival estimates were: 1540 days for the whole cohort; 2200 days after cystectomy scheduled (n = 108); and 843 days without surgery. The mortality hazard remained double that expected for a matched general population, but survival was better in patients scheduled for surgery than those who were not: the mortality hazard ratio (95%CI) after cystectomy was 0.43 (0.26–0.73) the mortality hazard without surgery, p = 0.001. The mortality hazard ratios for the three-variable Bayesian Model Averaging survival model for all 141 patients were: referral for surgery (0.5); haemoglobin concentration (0.98); and efficiency of carbon dioxide output (1.05). Efficiency of carbon dioxide output was the single variable in the postoperative model (n = 108), mortality hazard 1.08 (per unit increase). The ratio of observed to expected peak oxygen consumption associated best with mortality in 33 patients not referred for surgery, hazard ratio 0.001. Our results can inform consultations with patients with invasive bladder cancer and suggest that interventions to increase fitness and haemoglobin may improve survival in patients who do and who do not undergo radical cystectomy.