散发性结直肠癌染色体4p15等位基因杂合缺失的精细定位研究

目的通过在染色体4p15精细定位高频杂合缺失区域的范围．为筛选高频杂合缺失区内存在的散发性结直肠癌相关肿瘤抑制基因提供依据。方法7个荧光标记的微卫星引物与83例散发性结直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应。微卫星之间的的平均遗传距离是1．02cM（centi—Morgon，里摩）。产物进行电泳、扫描及杂合缺失分析，并与临床、病理因素进行相关性检验。结果染色体4p15的平均杂合缺失率为21，34％，最高的是D4S3103位点（35．62％）；最低的是D4S2933位点（12．50％）。可能的肿瘤抑制基因的范围在D4S3017-D4S2933之间约1．7cM的遗传距离内，该区域内有PPARGC1A和GBA3两个基因。D4S1546位点杂合缺失与肿瘤直径显著相关（P〈0．05），其余位点与临床病理因索均无显著相关（P〉0．05）。结论染色体4p15精细定位后高频杂合缺失区域的范围限定在D4S3017-D4S2933之间约1．7cM的范围内。该区域内PPARGC1A和GBA3两个基因可能是散发性结直肠癌相关的肿瘤抑制基因。     

散发性结直肠癌4号染色体等位基因杂合缺失的研究

目的 通过在4号染色体寻找杂合缺失区域，为定位、筛选高频杂合缺失区存在的散发性结直肠癌相关肿瘤抑制基因提供依据。方法 20个荧光标记的微卫星引物与83例结、直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应。微卫星的平均遗传距离是10．4里摩（cm01）。产物进行电泳、扫描及杂合缺失分析，并与临床、病理因素进行相关性检验。结果 短臂（4p）、长臂（4q）的平均杂合缺失率为24．25％、28．56％，可见3个最小的高频缺失区域（Region）：R1：在D4S405和D4s3013（4p14—15．2）之间；R2：在D4s3000和D4s2915位点之间（4q12—21．1）；R3：在D4S407和IMS2939位点之间（4q25—31．1）。D4S1534位点与肝脏转移有关（P〈0．05），其余位点与临床病理因素均无显著相关（P〉0．05）。结论 4号染色体的3个高频杂合缺失区域4p14—15．2、4q12—21．1、4q25—31．1存在散发性结直肠癌发生、发展相关的肿瘤抑制基因。     

散发性结直肠癌1号染色体1q31.1-32.1区域等位基因杂合缺失精细定位研究

目的 对染色体1q31.1-32.1区域进行杂合缺失(LOH)精细定位分析,探讨更为精确的高频LOH区域并筛选可能与结直肠癌相关的抑癌基因.方法 在1q31.1-32.1区域选择6对微卫星引物与83例结直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应(PCR).产物在ABI Prism 377自动荧光测序仪进行电泳,以GeneScan 3.1和Genotyper 2.1软件进行扫描以及LOH分析.LOH结果与临床病理参数之间的关系比较采用χ2检验.结果 1q 31.1-32.1区域平均LOH率是22.98%.以D1S2622位点最高,为36.73%(18/49),最低是D1S412,为16.42%(11/67).结果 显示,更精确的缺失范围定位应该在D1S413和D1S2622之间(1q 31.3-32.1),约2 cM的遗传距离范围内.该区域各位点的LOH率与性别、年龄、肿瘤大小、生长方式以及肿瘤Dukes分期无明显相关.结论 将1q31.1-32.1区域高频等位基因缺失精细定位于D1S413和D1S2622位点之间,遗传学距离约2cM的区域内,提示在该区域存在与结直肠癌发生发展相关的抑癌基因.     

散发性结直肠癌患者18号染色体高频杂合缺失的研究

目的：探讨散发性结直肠癌患者18号染色体上抑癌基因相关的杂合缺失（LOH）情况，并探索新的抑癌基因位点。方法：对83例散发性结直肠癌患者基因组DNA用14个不同荧光标记的高度多态性微卫生引物，扩增相应的微卫星位点，平均距离为10厘摩（centi-morgan,cM）。用ABI PRISM377测序仪进行基因扫描，统计各位点杂合缺失率。结果：在12个获得有效数据的微卫星位点中，平均杂合缺失率为36．78％,18p中最高为D18S53（38．09％），18q中最高为D18S474（55．74％）。4位患者的18号染色体所有杂合位点都存在缺失，30位患者的杂合缺失位点不少于50％（平均6个／人）；缺失位点少于50％的有53人（平均1个／人）。结论：结直肠癌患者18号染色体存在高频的LOH，并以整体缺失为特点。存在高频LOH的区域定位有转化生长因子（TGF）信号传导相关基因、结直肠癌缺失基因（DCC）、Rb结合蛋白8(RbBP8），特别是TGF信号传导相关基因MADH2、4、转化生长因子－β1反应元件（TGF－β1）等的缺失可能对结直肠癌的发生有重要影响。18p也有存在未知抑癌基因的可能。     

散发性结直肠癌22q13区域杂合缺失的精细定位分析

目的在染色体高频杂合缺失区22q13精细定位，以筛查可能与结直肠癌相关的肿瘤抑制基因。方法荧光标记的微卫星引物与83例结直肠癌的肿瘤和正常组织进行PCR反应。产物在ABI Prism 377自动荧光测序仪进行电泳、扫描以及杂合缺失分析。其结果与临床病理因素进行相关性检验。结果8个位点平均杂合缺失率为35．6％。发现两个高频缺失区域：一个在D22S1171和D22S274之间，约2．7厘摩（cM）；另一个在D22S1160和D22S1149位点之间，约1．8cM。D22S1171位点与肿瘤发生部位显著相关（P=0．020）；D22S114位点与肝转移显著相关（P=0．008）；D22S1160位点与淋巴结转移显著相关（P=0．016）；其余位点与临床病理因素无显著相关性（P〉0．05）。筛选发现ARHGAP8基因和PPARA基因可能是肿瘤抑制基因。结论散发性结直肠癌22q13区域存在两个高频杂合缺失区，分别约2．7cM及1．8cM。ARHGAP8基因和PPARA基因可能是22q13区域与散发性结直肠癌相关的肿瘤抑制基因。     

散发性结直肠癌染色体7q21-22区杂合性缺失精细定位

目的 研究散发性结直肠癌7号染色体杂合性缺失,对7q21-22区精细定位,寻找新的结直肠癌抑癌基因.方法 采用15对微卫星DNA标记7号染色体,在高频杂合缺失区另取5对微卫星标记对83例结直肠癌病例的肿瘤和正常组织进行PCR反应.PCR产物在ABI Prism 377自动荧光测序仪进行电泳3 h,以GeneScan3.1和Genotyper 2.1软件进行基因分型.结果 在7号染色体上发现1个高频杂合缺失区即7q21-22区.对该区再用5对微卫星标记引物行精细定位,界定了1个跨越D7S657、D7S646位点精细的高频杂合缺失区域.结论 通过精细杂合缺失作图的研究,在7号染色体发现了1个跨越D7S657、D7S646位点的精细杂合缺失区,该区很可能存在1个或多个与结直肠癌相关的新的抑癌基因.     

胃癌染色体1q43区域等位基因杂合缺失精细定位研究

目的 对胃癌1号染色体1q43区域的微卫星位点进行杂合缺失(LOH)研究,为筛选此区域内可能存在的胃癌相关抑癌基因提供依据.方法 4对荧光标记的微卫星引物(D1S1594、D1S2785、D1S304、D1S321)覆盖1q43区域与96例胃癌患者的肿瘤组织及正常组织进行多重聚合酶链反应(PCR).产物经毛细管电泳后进行LOH分析.结果 该区域所测位点平均杂合缺失率17.9%,其中D1S1594位点最高,杂合缺失率为26.5%;D1S2785位点杂合缺失率最低为7.7%.1q43区域各位点的杂合缺失率与性别、年龄、肿瘤大小及TNM分期无明显相关.结论 在1q43区域内发现一个高频LOH区域,即D1S1594及D1S2785位点之间约1 cm区域,提示该区域内存在与胃癌相关的抑癌基因.     

散发性结、直肠癌APC基因杂合缺失和突变的研究

目的　研究中国人散发性结、直肠癌中APC基因的失活形式和规律。方法　应用聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP)、DNA直接测序及微卫星标记PCR LOH分析方法 ,检测分析 40例散发性结直癌APC基因的突变和杂合缺失。结果　 40例结、直肠癌中有 3 1例检测到APC基因改变 :双次打击 2 4例 (其中LOH加突变 15例 ,双突变 9例 ) ,单个突变而无LOH 5例 ,仅有LOH而无突变 2例。APC基因突变率及杂合缺失率与肿瘤部位 ,肿瘤分化程度及Duke’s分期等无关。结论　APC基因改变与中国人散发性结直肠癌的发生有关。在大多数的中国人散发性结直肠癌的发生中 ,需要APC基因的双打击致功能完全失活 ,而且LOH加突变可能是其主要形式。在肿瘤获得恶性表型后 ,其进展及预后与APC基因杂合缺失与否无关。     

中国人群1号染色体长臂散发性结直肠癌相关抑癌基因筛选

目的 筛选与中国人群的结直肠癌发生相关的抑癌基因.方法 构建包含1号染色体长臂高频杂合缺失区域的基因芯片,对19例结直肠癌标本进行表达谱分析,并与临床病理特征加以统计学分析,筛选该区域与结直肠癌相关的未知抑癌基因.结果 通过数据库检索,我们挑选了25个基因进行相关基因筛选.发现CSRP1、LMOD1、PPP1R12B和CFHL3 4个基因表达显著下调,分别在15、16、16、16例肿瘤组织中表达下调,其中下调比例超过2倍的例数分别为11、11、14、10例.统计学分析发现这4个基因表达与临床病理特征之间无相关.通过生物信息学分析,推测CSRP1基因可能是与结直肠癌发生相关的抑癌基因.结论 表达谱芯片以及生物信息学分析表明CSRP1基因可能是结直肠癌发生相关的抑癌基因.     

结直肠癌非随机性染色体异常的研究

对１８例结直肠癌患者采用实体瘤短期体外悬浮细胞培养法进行染色体分析。结果：染色体结构重排涉及１７ｑ、５ｑ、６ｑ（７８％、６１％、５０％），染色体增加频率最高的是７号、３号（７２％、６６％），丢失则最常见于１７号、５号、１８号（５０％、４４％、３３％）。大量标记染色体、双微体及超倍体核型预示肿瘤易早期复发和转移。此结果提示：１７号、５号及１８号染色体畸变与结直肠癌发生发展有密切关系。非随机性染色体异常的多样性和复杂性更表明大肠癌的发生是多基因多步骤演变的结果。     

X射线损伤修复交叉互补基因1的单核苷酸多态性与散发性结直肠癌易感性相关

目的 检测单核苷酸多态性（SNP）位点Arg399Gln在散发性结直肠癌患者和非癌对照组中的分布情况，分析其与散发性结直肠癌及其临床病理特征的相关性。方法 从178例肿瘤组织和非癌对照组的180例血样中提取DNA，采用Taqman探针技术检测Arg399Gln多态性表型，并用统计软件计算各基因型的比值比（OR）和95％可信区间（95％CI）。结果 肿瘤组与对照组就XRCC1Arg399Gln多态性的基因表型差异有统计学意义（P〈0．05）；年龄不超过60岁的患者和超过60岁的患者在该位点的基因型差异有统计学意义（P〈0．05）；以399Arg／Arg基因型为参照，在年龄超过50岁的人群中（OR=0．64，95％C10．50～0．83，P〈0．05）和男性人群中（OR=0．64，95％C10．51～0．79，P〈0．05）携带至少一个Gin等位基因可致罹患散发性结直肠癌的风险显著降低；XRCC1399SNP与患者性别及散发性结直肠癌的发生部位、Dukes分期、浸润深度、淋巴结转移以及病理分型均无显著相关性（P均〉0．05）。结论 XRCC1399SNP可能通过改变DNA的损伤修复功能，成为散发性结直肠癌的易感因素。     

中国人散发性大肠癌APC基因突变的研究

目的观察中国人大肠癌APC基因突变情况，并结合临床病理资料加以分析。方法应用常规酚、氯仿法提取48例散发性大肠癌组织及相应正常黏膜组织的DNA，聚合酶链反应（PER）扩增、单链构象多态性（SSCP）电泳和DNA直接测序，检测APC基因第15外显子MCR区段的突变情况。结果APC基因突变率为37．5％（18／48），APC基因第15外显子MCR区段突变发生在codon1306-codon1442之间，突变类型有点突变（A→G、G→T、C→A、C→T、G→A）、移码突变（-A、-C、-G、-AG、＋T、＋A、＋AACG）。结论中国人大肠癌APC基因突变率为37．5％（18／48），以体细胞的错义突变为主，codon1309∽codon1356是大肠癌APC基因突变热区，而codon1356（CCT→TCT）是突变热点。散发性大肠癌APC基因突变与患者的年龄、性别、肿瘤的位置、浸润深度、组织类型、分化程度、远处转移、Dukes’分期和5年生存无关。     

散发性结直肠癌染色体20q11-13区杂合性缺失精细定位

目的 研究散发性结直肠癌20号染色体杂合性缺失情况,并对20q11-13区进行精细定位.方法 收集1998年至1999年上海市第一人民医院83例结直肠癌患者的肿瘤组织和对应的正常黏膜组织,采用10个微卫星标记的引物对20号染色体进行杂合性缺失分析,在20q11-13区域另取10个微卫星标记的引物并对标本进行PCR分析.以Genescan 3.1和Genotyper 2.1软件进行基因分型和精确定位.结果 在20号染色体上发现一个高频杂合性缺失区即20q11-13区.进一步的精细定位,界定了两个高频杂合性缺失区:20q11.2、20q12,并在该杂合性缺失区发现了抑癌基因E2F1、PMP24和MAFB.结论 20号染色体有两个高频精细杂合性缺失区,该区很可能存在一个或多个与结直肠癌相关的新的抑癌基因.     

中国人散发性大肠癌K-ras基因突变的研究

目的 观察中国人大肠癌K-ras基因突变情况，并结合临床病理资料加以分析。方法 应用常规酚、氯仿法提取48例散发性大肠癌组织及相应正常组织的DNA，聚合酶链反应(PCR)扩增、单链构象多态性(SSCP)电泳和DNA直接测序。结果 K-ras基因突变率为43．8％(21／48)，6种K-ras基因突变类型被发现，包括12密码子(GGT→GTT、GGT→AGT、GGT→GAT、GGT→TGT)、13密码子(GGC→GAC)和61密码子(CAA→CAT)。结论 中国人大肠癌K-ras基因突变率为43．8％(21／48)。12密码子(GGT→GTT)是最常见的类型，61密码子是最少见的类型。中国人大肠癌K-ras基因突变情况与欧美相似。大肠癌K-ras基因突变与年龄、肿瘤部位、浸润深度、组织学类型、淋巴转移、远处转移、Dukes，分期及5年生存率无关。     

胃癌、结直肠癌组织中hMLH1的表达及其临床意义

目的:探讨错配修复基因hMLH1在胃癌、结直肠癌发病中的作用及其与胃癌、结直肠癌发生、组织分化、淋巴结转移及临床分期的关系.方法:应用SP免疫组织化学法,对42例胃癌、45例结直肠癌组织病理切片进行免疫组化分析.结果:结直肠癌旁正常组织hMLH1的表达阳性率为86.7%,明显高于癌组织hMLH1的表达阳性率44.4%.高、中、低分化腺癌组织中hMLH1的表达率分别为60.0%、45.5%、21.4%,存在明显差异(P＜0.05).胃癌组织与癌旁正常组织hMLH1的表达阳性率分别为47.6%、100%,存在明显差异(P＜0.05).结论:hMLH1表达水平与结直肠癌的发生、组织分化、淋巴转移及临床分期有关,与胃癌的发生和淋巴结转移有关.