靶向MMP-2的RNAi抑制胰腺癌PANC-1细胞侵袭性的研究

目的 观察RNAi体外沉默胰腺癌PANC-1细胞MMP-2基因对胰腺癌细胞MMP-2表达及细胞侵袭能力的抑制作用.方法 设计靶向MMP-2的siRNA并构建到pGCsi-U6质粒,重组质粒通过脂质体Lipofectamine 2000转染PANC-1细胞,流式细胞仪检测质粒的转染率,RQ-PCR检测细胞MMP-2的mRNA表达水平;ELISA检测细胞MMP-2蛋白的分泌量;Transwell小室侵袭观察各组细胞侵袭能力;MTT比色法检测各组细胞增殖活性.结果 测序鉴定证实,干扰质粒构建成功,重组质粒转染率最高达82.1%.转染干扰质粒PANC-1细胞的MMP-2基因mRNA表达抑制了71.74%(P＜0.05);MMP-2蛋白分泌下降了49.82%(P＜0.05);细胞侵袭能力抑制率达33.0%(P＜0.05);细胞的增殖活性无明显变化(P＞0.05).结论 靶向MMP-2的RNAi能抑制胰腺癌PANC-1细胞的体外侵袭能力,提示MMP-2可以作为胰腺癌基因治疗的靶点,亟待RNAi能为肿瘤治疗开创崭新局面.     

赛来昔布联合吉西他滨对胰腺癌细胞侵袭转移的抑制作用及其机制

目的研究环氧合酶-2选择性抑制剂赛来昔布联合吉西他滨对胰腺癌细胞侵袭力的抑制作用及其机制。方法采用体外侵袭力测定试剂盒和鸡胚尿囊膜模型检测赛来昔布联合吉西他滨对胰腺癌细胞侵袭力的影响，应用RT-PCR方法检测赛来昔布和吉西他滨对胰腺癌细胞基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9及其组织抑制剂TIMP-1、TIMP-2mRNA表达情况，应用明胶酶谱和反式酶谱方法检测赛来昔布和吉西他滨对胰腺癌细胞分泌MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2的影响。结果吉西他滨作用24h和72h胰腺癌侵袭细胞数量较对照组无明显差异，赛来昔布作用24h即可降低穿透ECM膜的侵袭细胞数量，赛来昔布与吉西他滨联合，侵袭细胞数较对照组明显减少，但较单用赛来昔布无明显差异，随着作用时间的延长，侵袭细胞数有下降趋势。药物作用24h时，对鸡胚胰腺癌移植瘤细胞的侵袭无明显抑制作用，吉西他滨作用72h，鸡胚胰腺癌移植瘤细胞侵袭未受抑制，赛来昔布作用72h，鸡胚胰腺癌移植瘤细胞侵袭明显受抑制，两种药物联合作用72h，对鸡胚移植瘤细胞侵袭力的抑制作用与单用赛来昔布无明显差异。RT-PCR、明胶酶谱和反式明胶酶谱分析表明，赛来昔布抑制胰腺癌细胞分泌和激活MMP-2和MMP-9，但对TIMP-1和TIMP-2的分泌和激活无明显影响，联合吉西他滨前后，MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的分泌和活性无明显改变。结论COX-2选择性抑制剂赛来昔布抑制吉西他滨干预后的胰腺癌的细胞侵袭，从而间接对吉西他滨的治疗起增敏作用，其机制部分通过是抑制MMP-2和MMP-9的分泌，减少ECM的降解所致。     

钙调蛋白2调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究

目的探讨钙调蛋白2(CALM2)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法通过基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA2.0)对癌症基因组图谱(TCGA)和基因型组织表达(GTEx)数据库中的179例胰腺癌和171例癌旁组织中CALM2基因的表达使用方差分析(ANOVA)进行差异分析, 对89例高表达CALM2的胰腺癌患者和89例低表达CALM2的胰腺癌患者分别绘制Kaplan-Meier曲线, 使用log-rank检验进行预后分析。采用短发夹RNA(shRNA)慢病毒感染人源胰腺癌细胞系SW1990和ASPC1, 建立对照组和CALM2敲低组细胞系;采用慢病毒包被质粒感染人源胰腺癌细胞系BxPC-3, 建立对照组和CALM2过表达组细胞系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低或过表达CALM2后细胞内CALM2的mRNA和蛋白表达水平。采用克隆形成和皮下注射裸鼠荷瘤实验验证敲低或过表达CALM2对胰腺癌细胞增殖能力的影响, 采用划痕愈合实验和Transwell实验验证敲低或过表达CALM2对胰腺癌细胞的迁移、侵袭能力的...     

胰腺癌——胰腺癌侵袭和转移的分子生物学机制

胰腺癌是预后最差的消化系统恶性肿瘤，由于它的高侵袭性和高转移率。使近80％的患者无法获得根治性治疗。深入理解胰腺癌侵袭和转移的分子生物学机制．对于提高胰腺癌的疗效将起到重要的作用。     

P2X7受体蛋白在胰腺癌中的表达及其对侵袭迁移影响的实验研究

目的:探讨P2X7受体蛋白在胰腺癌中的表达及其与临床病理之间的关系,探讨P2X7受体蛋白表达对胰腺癌侵袭迁移的影响及机制。方法:免疫组织化学法分析人胰腺癌组织及癌旁组织中P2X7受体蛋白的表达情况,分析其与胰腺癌临床病理特点之间的关系;选取胰腺癌细胞系PANC-1细胞,分别经P2X7受体激动剂Bz ATP(200μmol/L)及抑制剂A740003(20μmol/L)处理后,Transwell实验、细胞划痕实验检测PANC-1的侵袭迁移能力变化,Western blot实验检测侵袭及迁移相关蛋白MMP2、MMP9的表达变化。结果:P2X7受体蛋白在胰腺癌组织中高表达,在癌旁组织中低表达;且P2X7受体蛋白表达水平与胰腺癌的临床肿瘤分化程度及淋巴结转移呈显著性相关(P<0.05)。P2X7受体蛋白可通过上调MMP2、MMP9蛋白的表达促进胰腺癌细胞的侵袭迁移。结论:P2X7受体蛋白在胰腺癌中高表达并参与调控胰腺癌的侵袭及迁移,可能成为胰腺癌治疗的潜在分子靶点。     

siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的影响

目的:探讨慢病毒介导的siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞株PANC-1侵袭能力的影响。方法:运用HER2基因小干扰RNA(siRNA)的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞,荧光定量RT-PCR和Western blotting观察HER2 mRNA和蛋白表达的改变,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞可显著抑制HER2 mRNA和蛋白表达;体外侵袭实验显示siRNA沉默HER2后,PANC-1细胞侵袭能力明显下降。结论:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒能有效抑制HER2的表达,抑制胰腺癌细胞体外侵袭能力。siRNA沉默HER2可能为预防和治疗胰腺癌的侵袭转移提供一种新的策略。     

微小RNA-618通过靶向羧基末端结合蛋白2抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨微小RNA(miR)-618及羧基末端结合蛋白2(CtBP2)对胰腺癌增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测胰腺癌细胞中miR-618的表达;分别转染miR-618 inhibitor和mimics后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆集落形成及Tr...     

P16基因突变在人胰腺癌中作用的研究

目的 探讨P16基因的突变在人胰癌发生及侵袭转移中的作用,为临床提供有益的帮助。方法 应用PCR、PCR－SSCP、DNA测序技术,研究P16基因的突变情况。结果 在35患者胰腺癌标本中,发现在12例在P16基因第二外显子部分存在至少522bp的纯合缺失,另有7例存在2个点突变,总突变率为54．3％,而癌旁组织无P16基因的突变,统计学分析表明P16基因的突变与人胰腺癌多种生物学及临床分期Ⅲ期有明确的关系。结论 研究结果提示P16基因的突变人胰腺癌的发生、组织分化、浸润程度、淋巴结转移及临床分期有明显的相关性,有助于判断胰腺癌的恶性程度和患者的预后。     

胰腺癌组织中Heparanase1的表达及其临床意义

目的：探讨胰腺癌组织中Heparanase1（Hpa1）表达与胰腺癌侵袭性及其临床病理之间的关系。方法：采用RT-PCR、免疫组织化学（SP法）检测37例胰腺癌组织中Hpa1表达,分析Hpa1的表达与胰腺癌侵袭性、临床病理等因素之间的相关性。结果：Hpa1在胰腺癌、癌旁组织中表达阳性率分别为64.9%（24/37）、56.8%（21/37）;原发性胰腺癌组织中Hpa1表达与胰腺癌TNM分期、累及神经和血管与否、包膜完整与否以及是否有淋巴转移有关（P〈0.05）,但与患者年龄、性别、组织学分化程度、肿瘤大小无关（P〉0.05）。结论：Hpa1与胰腺癌发生、发展密切相关,Hpa1表达与胰腺癌的侵袭性和局部浸润、临床分期、以及区域淋巴结转移呈正相关,胰腺癌组织中Hpa1过度表达可能促进胰腺癌浸润生长与转移,Hpa1有望成为抑制胰腺癌侵袭与转移能力的靶蛋白。     

赖氨酰氧化酶样蛋白-2对胰腺癌细胞的影响

目的 观察沉默赖氨酰氧化酶样蛋白-2(LOXL2)基因对胰腺癌细胞的影响.方法 利用脂质体法将构建好的LOXL2-短发卡RNA(shRNA)质粒转染到胰腺癌Panc-1细胞中,应用Western blot检测转染前后胰腺癌Panc-1细胞中LOXL2蛋白表达量的变化,Transwell侵袭实验检测胰腺癌细胞的体外侵袭力,MTT法检测胰腺癌细胞的黏附能力.结果 LOXL2-shRNA转染组Panc-1细胞中LOXL2蛋白表达水平(0.32±0.01)、体外侵袭力[(32.2±3.8)个]、黏附率[(75.4±3.2)％]较转染前[1.05±0.05、68.6±3.5、(90.3±2.1)％,P＜0.05]明显降低.结论 沉默LOXL2基因能抑制胰腺癌Panc-1细胞的侵袭能力和黏附能力.     

核转录因子κB抑制剂抑制表皮生长因子诱导胰腺癌细胞侵袭研究

表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）在胰腺癌组织中表达明显增高，核转录因子KB（nuclear factor kappaB，NF-κB）是参与调控肿瘤侵袭和转移的相关基因，二者均与肿瘤的侵袭和转移密切相关。本实验通过研究NF-κB抑制剂对EGF诱导胰腺癌细胞侵袭能力的影响，探讨抑制NF-κB信号转导通路在胰腺癌治疗中的作用。[第一段]     

TPM4对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨原肌球蛋白4(TPM4)对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)和人胰腺癌细胞系(ASPC-1、BXPC-3、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990)中TPM4 RNA表达量。采用siRNA或过表达慢病毒感染胰腺癌细胞(MIA PaCa-2、PANC-1),通过qRT-PCR、Western blotting检测各组细胞TPM4的表达,划痕实验及Transwell实验检测各组胰腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果 GEPIA数据库中胰腺癌组织TPM4表达明显高于正常胰腺组织(P<0.05),qRT-PCR分析TPM4 RNA在胰腺癌细胞系中表达均高于HPDE(P<0.0001)。与对照组相比,在MIA Paca-2和PANC-1中过表达TPM4促进了胰腺癌细胞侵袭迁移能力(均P<0.01),而敲低TPM4胰腺癌细胞侵袭迁移能力则明显减弱(均P<0.01)。结论 TPM4在胰腺癌细胞中呈现高水平表达,可能在胰腺癌中发挥着癌基因的作用,其并可促进胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。     

p14ARF基因对胰腺癌细胞侵袭力的影响

目的探讨外源性p14ARF基因导入人胰腺癌PC-3细胞株后,细胞侵袭力的变化。方法用脂质体介导法将外源性p14ARF基因导入人胰腺癌PC-3细胞株后,用细胞穿透Matrigel 胶法比较转染前后细胞侵袭力的改变,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测与侵袭转移相关基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP9表达。结果转染p14ARF基因后的PC-3细胞穿过Ma- trigel胶的能力减弱,48 h后平均穿膜细胞数从(92±12)个减少到(28±5)个,而且MMP9 mRNA 表达下降。结论 p14ARF基因能抑制胰腺癌PC-3细胞的侵袭能力。     

胰腺癌嗜神经侵袭与神经重塑的研究历史和治疗现状

胰腺癌导致的神经改变包括胰腺支配神经的侵袭性改变和非侵袭性改变,即嗜神经侵袭与神经重塑.嗜神经侵袭是指神经三层包膜(神经外膜、神经束膜、神经内膜)中任意一层被胰腺癌细胞侵犯或癌细胞在神经外周包绕超过1/3周长,是癌细胞与神经纤维的直接接触[1-2].神经重塑是指胰腺组织癌变时其支配神经出现神经肥大、密度增加以及神经炎症...     

叉头框蛋白O3在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞的影响

目的分析叉头框蛋白O3(FOXO3)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞运动和增殖的影响。方法检索LinkedOmics数据库胰腺癌患者胰腺癌和癌旁组织FOXO3表达。Western印迹和实时定量聚合酶链反应检测胰腺癌细胞系和人胰腺星状细胞HPSC中FOXO3表达。选择低表达FOXO3的PANC-1、MIAPaCa-2胰腺癌细胞, 分别转染FOXO3过表达质粒和阴性对照质粒。克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验和细胞周期检测各组胰腺癌细胞运动和增殖能力。结果 LinkedOmics数据库中, 64例胰腺癌患者癌组织中FOXO3蛋白相对表达水平明显低于癌旁组织(t=8.36, P<0.001)。PANC-1细胞过表达FOXO3后细胞克隆数为(30.0±6.6)个(40倍视野下计数), 低于阴性对照细胞的(92.7±6.7)个, 差异有统计学意义(t=11.54, P<0.001)。PANC-1和MIAPaCa-2在上调FOXO3表达后细胞划痕修复率较对照组显著下降。Transwell实验PANC-1细胞FOXO3过表达后(每个100倍视野下)穿膜数(21.0±6...     

长链非编码RNA01137在胰腺癌细胞生物学特性中的作用

目的探究Lnc01137对胰腺癌细胞生物学特性的影响。方法收集2021年6月至2021年9月贵州医科大学肝胆外科34例人胰腺癌组织及癌旁组织样本。通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Lnc01137在胰腺癌细胞系中和胰腺癌组织中的表达水平。在肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中提取胰腺癌组织与癌旁组织中Lnc01137的表达量, 提取胰腺癌患者总生存月数和无病生存月数并进行分析。RT-qPCR检测Lnc01137在细胞核和细胞质中的相对表达, 并进行RNA荧光原位杂交(FISH)定位。通过慢病毒转染在胰腺癌细胞中敲低Lnc01137的表达, 检测上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达。采用通路富集分析(GSEA)在京都基因与基因组百科全书(KEGG)中进行基因富集分析, 组间比较采用t检验, 组内两两比较采用LSD-t检验。结果 Lnc01137在胰腺癌细胞系MIA PaCa-2和PANC-1中表达较高, 在胰腺癌组织中的表达明显高于胰腺癌癌旁组织, 并在细胞质中呈现高表达状态, 另外Lnc01137高表达与患者预后不良相关。功能试验显示敲低Lnc01137显著抑制胰腺癌...     

FOXA2在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨FOXA2在胰腺癌组织中的表达,以及特异性沉默FOXA2基因表达对PANC-1细胞 增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 选取2010年1月至2013年1月在郑州市中心医院择期行手术切除的 胰腺癌患者71例,所有患者从手术时间开始进行随访,截止时间为2018年1月31日或患者死亡时间,采用免疫组化SP法检测胰腺癌和癌旁组织中FOXA2蛋白表达,生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-Rank检 验,影响患者预后的危险因素分析采用Cox比例风险回归模型。培养人胰腺癌PANC-1细胞,分为siRNAFOXA2组、siRNA-NC组和对照组,实时荧光定量PCR技术和Western blotting法检测细胞中FOXA2 mRNA和蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。结果 胰腺癌组 织中FOXA2蛋白阳性表达率（32.39%）低于癌旁组织（83.10%,P<0.001）;胰腺癌组织中FOXA2蛋白阳性 表达与TNM分期、淋巴结转移及脉管癌栓有关（P<0.05）;Kaplan-Meier生存分析结果显示,阳性组患者平 均生存时间高于阴性组,Log-Rank检验差异有统计学意义（χ2=11.135,P=0.001）;Cox比例风险回归模型 结果显示,淋巴结转移、脉管癌栓和FOXA2蛋白阴性表达是影响患者预后的风险因素（P<0.05）;siRNAFOXA2组细胞中FOXA2 mRNA和蛋白表达量低于siRNA-NC组和对照组（P<0.05）;siRNA-FOXA2组24 h、 48 h、72 h和96 h时OD值均高于siRNA-NC组和对照组（P<0.05）;siRNA-FOXA2组PANC-1和AsPC-1细胞 中迁移细胞数和侵袭细胞数均高于siRNA-NC组和对照组（P<0.05）。 结论 胰腺癌组织中FOXA2蛋白呈 低表达,是影响患者预后的风险因素;沉默FOXA2后会促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

Snail在胰腺癌中的表达及与E-cadherin的相关性分析

胰腺癌是一种高度恶性的消化系统肿瘤，由于其高侵袭性和高转移性，大部分病人都无法获得根治性治疗。深入阐明胰腺癌侵袭和转移的分子机制，对于寻找胰腺癌诊治的新靶点，提高其疗效具有重要的临床意义。E-cadhein是一种介导细胞间黏附作用的关键分子，在大多数侵袭性的肿瘤中都存在其表达的缺失。Snail是新近发现的一种抑制型转录因子，它可以通过抑制细胞之间黏附分子的表达从而增强肿瘤细胞的侵袭性。     

胰腺癌侵袭和转移的分子生物学机制

胰腺癌是预后最差的消化系统恶性肿瘤 ,由于它的高侵袭性和高转移率 ,使近 80 %的患者无法获得根治性治疗。深入理解胰腺癌侵袭和转移的分子生物学机制 ,对于提高胰腺癌的疗效将起到重要的作用。一、细胞间黏附分子在侵袭和转移中的作用研究表明 ,细胞 -细胞和细胞 -基质间的黏附分子在胰腺癌的侵袭和转移中发挥重要作用。这些黏附分子包括类似于免疫球蛋白家族成员的细胞 -细胞间黏附分子、钙依赖性的钙黏蛋白家族和整合素 ,它们向细胞传递调节信号。细胞 -细胞间的黏附分子可阻止癌细胞侵入周围的基质 ,黏附作用的破坏将提高肿瘤细胞的运…     

抑制miR-691通过调控VIM对人胰腺癌BXPC-3细胞侵袭转移的影响

目的探讨微小RNA-691(miR-691)在胰腺癌细胞系中表达状况及抑制miR-691对人胰腺癌BXPC-3细胞生物学行为的影响。方法 miR-691采用实时荧光定量PCR检测。人工化学合成抑制miR-691并转染BXPC-3细胞。流式细胞术检测细胞凋亡情况。通过Transwel~x室细胞侵袭转移实验检测BXPC-3细胞侵袭转移能力。结果人胰腺癌细胞系中BXPC-3对miR-691呈高表达;转染抑制miR-691后,BXPC-3细胞miR-691表达下降,其细胞凋亡无显著改变(P0.05);而转染抑制miR-691组中通过Transwel小室的细胞数明显高于空白组和对照组(P0.01)。结论 miR-691可有望成为人胰腺癌基因治疗的候选靶点。