IGF—Ⅰ和TGF—β1对幼年及成年兔关节软骨细胞增殖和代谢的作用

目的 观察IGF－I和TGF－β1对幼年及成年兔关节软骨细胞增殖和代谢的作用。方法 采用体外培养兔关节软骨细胞的方法。利用^3H-TdR和^35S-Na2SO4掺入分别反映软骨细胞增殖和骨质蛋白多糖的合成,应用TUNEL法检测软骨细胞的凋亡,结果 随年龄增加、关节软骨细胞凋亡增加,同时增殖和蛋白多糖的合成能力下降,而且对IGF－I和TGF－β1反应性亦呈年龄相关下降。但是IGF－I和TGF－β1均可能在一定程度上以剂量依赖方式促进软骨细胞^3H-TdR和^35S-Na2SO4掺入增加。结论 外源性TGF－I和TGF－β1在体外可促进不同年龄兔关节软骨细胞增殖和基质合成,提示外源性生长因子在骨关节炎的防治上可能有一定意义。     

生长因子(IGF-I、TGF-β1和BMP-2)对兔关节软骨细胞体外增殖的作用

目的观察IGF-Ⅰ、TGF-β1和BMP-2对培养兔关节软骨细胞增殖的作用.方法采用体外培养兔关节软骨细胞的方法,利用3H-TdR掺入反映软骨细胞增殖.结果 IGF-Ⅰ和TGF-β1均可促进软骨细胞3H-TdR掺入增加,并有一定的协同作用.而BMP-2对软骨细胞3H-TdR掺入无显著影响,但与TGF-β1和IGF-Ⅰ合用时却有抑制3H-TdR掺入的作用.结论生长因子之间的不同组合可以协同或拮抗方式影响软骨细胞的增殖,提示生长因子在关节软骨退变和防治上可能有重要的意义.     

IGF-I和TGF-β1对幼年及成年兔关节软骨细胞增殖和代谢的作用

目的观察IGF-I和TGF-β1对幼年及成年兔关节软骨细胞增殖和代谢的作用。方法采用体外培养兔关节软骨细胞的方法,利用3H-TdR和35S-Na2SO4掺入分别反映软骨细胞增殖和基质蛋白多糖的合成,应用TUNEL法检测软骨细胞的凋亡。结果随年龄增加,关节软骨细胞凋亡增加,同时增殖和蛋白多糖的合成能力下降,而且对IGF-I和TGF-β1的反应性亦呈年龄相关下降。但是IGF-I和TGF-β1均可能在一定程度上以剂量依赖方式促进软骨细胞3H-TdR和35S-Na2SO4掺入增加。结论外源性IGF-I和TGF-β1在体外可促进不同年龄兔关节软骨细胞增殖和基质合成,提示外源性生长因子在骨关节炎的防治上可能有一定意义。     

离心管技术构建的组织工程软骨细胞生物学特性的研究

目的 观察离心管技术构建的组织工程化软骨的细胞生物学特点，探讨该技术构建组织工程化软骨的可行性。方法 取3周龄兔关节软骨的表层软骨，经酶消化获得大量的软骨细胞，用离心管技术构建软骨组织，对培养3周的组织工程软骨进行组织学，免疫组织化学，透射电镜，^3H-TdR掺入量等检查。结果 组织学显示软骨细胞位于陷窝，基质异染，Ⅱ型胶原免疫组化阳性，细胞内富含高尔基体，分泌囊泡和糖原颗粒，^3H-TdR掺入量显示软骨细胞DNA较正常软骨细胞明显增强。结论 离心管内软骨细胞的增殖较正常关节软骨增强，离心管技术可用于组织工程软骨的构建。     

BMP-2和TGFβ1对培养兔关节软骨细胞代谢的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白－２（ＢＭＰ－２）和转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）对体个培养兔关节软骨细胞代谢的影响，从而了解其在关节软骨损伤修复中的作用。方法 利用荧光光度计，７２１－型分光光度计，＾３５Ｓ－Ｎａ２ＳＯ４同位素掺入法等测定兔原代及反分化关节软骨细胞羟脯氨酸和蛋白多糖（ＰＧ）的变化。结果 ＢＭＰ－２既能促进反分化关节软骨细胞ＤＮＡ合成又能增加原代、反分化关节软骨细胞羟脯氨酸的含量和＾３５Ｓ－Ｎａ２ＳＯ４掺入，而ＴＧＦβ１显著增加原代软骨细胞羟脯氨酸的合成和＾３５Ｓ－Ｎａ２ＳＯ４掺入。结论 ＴＧＦβ１不能阻止关节软骨细胞反分化，而ＢＭＰ－２能促进软骨细胞的增殖和维持其表型，还可使已丢失软骨表型的反分化软骨细胞有向恢复软骨表型方向分化的可能。     

TGF-β1与IGF-Ⅰ对体外培养兔软骨细胞增殖的影响

目的探讨转化生长因子-β 1(TGF-β 1)与胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)联合作用对关节软骨细胞增殖行为的影响.方法采用兔关节软骨细胞体外单层培养方法,将TGF-β 1与IGF-Ⅰ作用于软骨细胞,并用MTT比色分析法对其增殖行为进行分析,探讨多因子对关节软骨细胞增殖行为的影响.结果(1)TGF-β 1组的最佳效应浓度为5 μg/L,IGF-Ⅰ组的最佳效应浓度为50 μg/L.(2)TGF-β 1组(5 μg/L)、IGF-Ⅰ组(50 μg/L)以及两因子联合使用组软骨细胞增殖均较对照组高(P＜0.01),联合使用组促增殖作用最强,优于单一的TGF-β 1最佳效应浓度组和IGF-Ⅰ最佳效应浓度组(P＜0.05).结论TGF-β 1与IGF-Ⅰ联合运用早期促软骨细胞增殖作用优于单一的TGF-β 1或IGF-Ⅰ,在软骨细胞增殖过程中TGF-β 1和IGF-Ⅰ有良好的协同作用.     

IGF1对体外兔关节软骨细胞的生物学效应

目的了解胰岛素样生长因子-1(IGF1)对体外生长的兔关节软骨细胞的生物学效应,为组织工程构件软骨提供理论基础. 方法取第3代兔关节软骨细胞体外单层培养,培养液DMEM中以终浓度分别为1, 10, 100 μg*L-1的IGF1各作用细胞2,4及6 d,以MTT法检测细胞的增殖情况,并在100 μg*L-1 IGF1作用下,采用流式细胞技术进行细胞周期亚时相分析. 同时,检测基质中糖醛酸的变化反映蛋白多糖含量的变化. 结果结果显示在1～100 μg*L-1浓度下IGF1能明显促进培养软骨细胞的增殖,且以100 μg*L-1作用4 d刺激效果最明显;并能显著影响细胞外基质中糖醛酸的含量. 结论 IGF1对培养软骨细胞以剂量时间依赖性方式刺激其增殖及功能代谢.     

组织工程化关节软骨细胞凋亡的研究

目的 观察离心管构建的组织工程骨细胞亡及细胞增殖情况。方法 对离心管构建3周的组织工程骨进行透射电镜，流式细胞仪检测和^3H-TdR掺入测定，与3周龄兔关节软骨对照。结果 透射电镜检查组织工程软骨在5％左右的细胞凋亡，正常关节软骨未见明显的细胞凋亡；流式细胞仪显示软骨细胞有8．5％左右的亚二倍体细胞，正常关节软骨在2．4％左右的亚二倍体细胞。^3H-TdR掺入测定显示细胞增殖能力较正常关节软骨明显增强。结论 培养3周的组织工程软骨细胞凋亡与细胞增殖均较正常软骨增强。     

转化生长因子—β对骺软骨细胞增殖和PCNA表达的影响

采用１４天鸡胚股骨无血清培养、５－溴尿嘧啶核苷（ＢｒｄＵ）掺入标记和细胞核增殖抗原（ＰＣＮＡ）免疫染色方法，研究转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对骺软骨细胞增殖的作用。结果显示：ＢｒｄＵ阳性软骨细胞数目与分布都位于ＴＧＦ－β作用剂量和时间密切相关，ＴＧＦ－β可以促进骺板成熟区和肥大区软骨细胞增殖，与ＢｒｄＵ标记相比，ＰＣＮＡ阳性细胞分布区域和数目远多于前者，根据染色情况可以将ＰＣＮＡ阳性细胞分为Ｓ期和Ｓ期细胞两种。结论：ＴＧＦ－β参与和调节骺软骨各部位软骨细胞增殖活动，并能诱导非增殖软骨细胞表达ＰＣＮＡ，用ＰＣＮＡ作为细胞增殖的指标是不适宜的。     

IGF—1在成骨样细胞增殖中的作用及与钾离子通道的关系

目的：研究胰岛素样生长因子－1（IGF－1）促大鼠成骨样肉瘤细胞（UMR106）增殖作用及钾离子通道活动的关系。方法：采用磺基罗丹明（SRB）染色法观察细胞增殖并用膜片钳技术记录细胞膜钾离子通道电流的变化。同时用3H－TdR掺入测定DNA合成的改变。结果：IGF－1可以明显地促进UMR106细胞的增殖，且使3H－TdR掺入率增加93．57％，在含有生长因子IGF－1（10^-8M)的培养液中培养12h后，钾通道电流比对照有明显增加，而且用钾通道阻断剂后，3H－TdR掺入率下降。结论：IGF－1可促进大鼠成骨样肉瘤的DNA合成和细胞增殖，且细胞膜钾通道的活动与此促增殖活动密切相关。     

生长因子诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化的研究

目的 建立一种体外分离兔骨髓间充质干细胞（MSCs)的方法，诱导其表达软骨细胞表型。方法 抽取兔骨髓，经密度梯度离心和粘附分离得到MSCs。用生长因子诱导，观察细胞的增殖情况和软骨特异性基质的表达水平。结果 ①纤维粘连蛋白促进MSCs贴壁，可提高细胞分离率；②TGF－β1，IGF－I和维生素C结合可促进MSCs增殖，表达软骨特异性的Ⅱ型前胶原mRNA和基质蛋白多糖成分。结论 ①密度梯度离心结合粘附分离可提高MSCs的分离效率。②TGF－β，IGF－I和维生素C结合诱导可促进MSCs增殖，表达软骨细胞表型。     

IGF-1对成兔关节软骨细胞体外增殖的影响

目的研究单独应用胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成兔的关节软骨细胞体外增殖的促进作用,为成人关节软骨的体外培养扩增的理论提供新思路。方法通过细胞形态学,细胞计数、细胞计量检测成兔关节软骨细胞的存活及增殖。结果成兔关节软骨细胞增殖活跃。结论在IGF-1的单独作用下成兔关节软骨细胞在体外增殖能力明显增强。     

β-磷酸三钙-脱细胞软骨支架复合兔BMSCs修复膝关节软骨缺损的实验研究

目的观察纳米磷酸三钙人工骨(β-TCP)、转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、脱细胞耳软骨(DC)复合软骨细胞修复关节软骨缺损的效果。方法获取新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),培养并体外诱导成软骨细胞,取异体兔耳软骨进行脱细胞处理,与β-TCP形成复合支架作为载体接种软骨细胞,加入TGF-β和IGF-I修复膝关节软骨缺损。实验动物(n=18)分为3组,实验组(n=8)复合支架加入TGF-β和IGF-I,对照组(n=6)仅以复合支架修复缺损,空白组(n=4)不加入任何修复材料。结果 BMSCs在体外生长稳定,增殖能力强,可被诱导为软骨细胞。软骨支架脱细胞完整,软骨陷窝排列有序,复合物植入缺损后第20周,实验组缺损内充填白色半透明新生软骨组织,色泽与正常软骨相似,与周围正常软骨连接良好。结论β-TCP-DC复合支架有较多的孔隙结构,降解速度快,组织相容性及细胞黏附性好,是组织工程修复关节软骨理想的种子细胞载体。     

转化生长因子-β对骺软骨细胞增殖和PCNA表达的影响

采用14天鸡胚股骨无血清培养、5-溴尿嘧啶核苷(BrdU)掺入标记和细胞核增殖抗原(PCNA)免疫染色方法,研究转化生长因子-β(TGF-β)对骺软骨细胞增殖的作用.结果显示:BrdU阳性软骨细胞数目与分布部位与TGF-β作用剂量和时间密切相关,TGF-β可以促进骺板成熟区和肥大区软骨细胞增殖,与BrdU标记相比,PCNA阳性细胞分布区域和数目远多于前者,根据染色情况可以将PCNA阳性细胞分为S期和非S期细胞两种.结论:TGF-β参与和调节骺软骨各部位软骨细胞增殖活动,并能诱导非增殖软骨细胞表达PCNA,用PCNA作为细胞增殖的指标是不适宜的.     

人骨髓间充质干细胞体外成软骨诱导研究

目的:研究人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外培养过程中的增殖和成软骨分化现象和规律。方法:以密度梯度离心法分离健康成人髂骨MSCs,观察体外培养过程中细胞形态、生长和增殖现象。取第三代细胞给予地塞米松,维生素C和不同剂量转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)行成软骨细胞诱导。3周后行阿利新蓝及甲苯胺蓝染色蛋白多糖,免疫荧光检测II型胶原,阿利新蓝比色法检测葡萄糖氨基聚糖。结果:体外培养条件下MSCs生长旺盛。在TGF-β1作用下MSCs向软骨骨细胞分化,TGF-β110μg/L组软骨细胞标志物表达最强。结论:MSCs有旺盛的增殖能力。MSCs在一定诱导条件下可以向软骨细胞分化,转化生长因子β1(TGF-β1)是诱导MSCs向软骨分化的关键性因素,10μg/L是其最佳诱导剂量。     

FGF对关节软骨细胞基质及其TGFβ1表达的作用

目的:观察成纤维细胞生长因子(FGF)对培养兔关节软骨细胞基质及转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响.方法:培养1月龄新西兰兔关节软骨细胞,在每次换液时加入FGF 100 ng/ml,铺满后收集细胞,作关节软骨细胞TGFβ1检测及电镜免疫组织化学观察.采用氯胺T法和Antonopoulos法,作细胞基质的胶原和蛋白多糖含量测定.结果:FGF能明显促进胶原和蛋白多糖的合成,并且与剂量、时间呈正相关(P＜0.01).光镜下实验组细胞明显呈棕色,电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒粘附.结论:FGF能促进关节软骨细胞TGFβ1的表达及基质合成,推迟了关节软骨细胞的成熟,维持细胞的软骨表现型,这些作用有利于关节软骨损伤后的修复,可能具有一定的临床意义.     

肝细胞生长因子对兔关节软骨细胞培养影响的实验研究

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对兔关节体外培养软骨细胞的作用.方法取10只大耳白兔的关节软骨制成软骨细胞悬液,接种到DMEM培养基中培养,细胞传至第3代后,加入不同浓度的HGF继续培养.通过MTT比色法及流式细胞仪技术检测培养细胞增殖情况.结果 HGF使软骨细胞增殖明显加快(P<0.05),HGF的作用存在剂量效应关系.不同浓度的HGF对关节软骨细胞增殖的促进作用不同,1 ng/ml时对细胞分裂增殖效应有作用,5～10 ng/ml作用效果最明显,加大HGF浓度,并未见促增殖效应加强.结论HGF对关节软骨细胞有明显促增殖作用.     

参麦注射液对体外培养软骨细胞增殖的影响

目的 探讨参麦注射液对软骨细胞增殖的影响。方法 运用关节软骨体外培养方法，设立空白对照与IGF—Ⅰ药物对照组，采用MTF比色法观察不同浓度参麦注射液对软骨细胞增殖情况。结果 参麦注射液与生长因子IGF—Ⅰ均可促进软骨细胞增殖，同空白对照组相比差异有非常显著性（P〈0．01），其中5％参麦液组同浓度为5ng／ml的IGF—Ⅰ组作用效果相当（P〉0．05）。结论 参麦注射液可促进软骨细胞的合成代谢，减少其分解代谢，从而减轻关节软骨的退变，延缓OA的进展。     

胰岛素样生长因子Ⅰ对软骨细胞复合物体外成软骨能力的影响

目的 :探讨一种修复关节软骨的有效途径。方法 :自制藻酸钙载体复合软骨细胞置入DMEM培养基中 ,实验组加入胰岛素样生长因子Ⅰ (insulin likegrowthfactor Ⅰ ,IGF Ⅰ ) ,体外培养 4周。 结果 :两周内开始出现软骨样物质 ,以后体积增大 ,数量增多 ,质地变硬 ,实验组与对照组差别显著。结论 :藻酸钙与软骨细胞具有良好的相容性 ,软骨细胞在藻酸钙载体中保持了原有特性和成软骨能力 ,IGF Ⅰ能够促进软骨细胞的分化增殖 ,并维持软骨细胞的原有表型。     

氚-标记胸腺嘧啶核苷掺入法测定转化生长因子β1对视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的：：用氚-标记胸腺嘧啶核苷(3 H-TdR )掺入法观察转化生长因子β1( TGF-β1)对人视网膜色素上皮细胞( retinal pigment epithelium cells,RPE)增殖的影响,探讨TGF-β1和RPE细胞在增殖性玻璃体视网膜病变发病机制中的作用。方法：RPE细胞体外培养,用不同浓度的TGF-β10.1、1.0、5.0、10.0和100.0μg/L对细胞进行处理,3 H-TdR掺入法测定细胞放射性强度。结果：TGF-β10.1、1.0、5.0、10.0μg/L 作用后 RPE 活细胞数增加,细胞3H-TdR 摄入量均较对照组显著增加,TGF-β1100.0μg/L对RPE作用相反,细胞3H-TdR摄入量明显低于对照组(P<0.01)。结论：TGF-β1对人RPE细胞增殖有双相调节性,其不同作用的发挥依赖TGF-β1的浓度,其中TGF-β1促RPE细胞增殖作用是诱导增殖性玻璃体视网膜病变发生的可能机制之一。