淡色库蚊对溴氰菊酯抗性的分子生物学检测

目的建立一种可以早期检测蚊虫对拟除虫菊酯抗药性的方法。方法采用聚合酶链式反应（PCR）方法，用特异性引物对蚊虫的钠离子通道基因进行扩增。结果敏感品系中只检测出SS（敏感纯合子）型，抗性品系中检测出SS型、RS（杂合子）型和RR（抗性纯合子）型。结论PCR能够快速完成蚊虫对拟除虫菊酯抗药性的检测，为蚊虫对拟除虫菊酯抗药性的早期监测提供了快速可行的方法。     

聚合酶链反应技术分析家蝇抗性基因的研究

目的：家蝇对拟除虫菊酯抗药性与细胞色素Ｐ４５０的ＣＹＰ６Ｄ１基因有关,采用分子生物学的特异性基因聚合酶链反应技术分析家蝇抗药性的发生、发展规律,探讨早期预测及防治策略。方法：提取雄性家蝇腹部ＤＮＡ作为反应模板,根据ＣＹＰ６Ｄ１基因序列设计特异性基因引物,进行３０个循环扩增,电泳分析扩增产物与生物测试结果比较。结果：Ｄ－Ｒ品系扩增阳性率１００％,敏感品系扩增阳性率为０,深圳、汕头、韶关、广州、茂名品系扩增阳性率分别为５９％、５６．３％、５４％、５５％及２５％。扩增阳性率与家蝇对拟除虫菊酯抗性倍数呈正相关（ｒ＝０．８３４４,Ｐ＜０．０５）。结论：聚合酶链反应技术应用于家蝇抗性发生、发展规律分析,早期诊断及抗药性发生机理研究有重要意义。     

特异性等位基因PCR扩增技术检测家蝇击倒抗性相关钠通道的基因突变

城市家蝇（Musca domestica）的化学防制多以混配或复配拟除虫菊酯类杀虫剂为主，近10年来国内各城市均有家蝇对拟除虫菊酯产生抗药性的报道。昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性主要是击倒抗性（knockdown resistance，kdr），Farnham发现kdr在家蝇对拟除虫菊酯的抗性中具有重要作用。     

应用钠离子通道基因突变技术检测家蝇抗药性的研究

目的了解济南市家蝇抗药性现状,预测抗性发展趋势。方法生物测定法与分子检测法相结合。结果生物测定结果表明,济南市家蝇对常用的拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性已经达到中、高度水平;对济南市家蝇个体进行钠离子通道突变位点检测,发现抗性个体占种群的80.43%,然而纯合子仅为28.26%。结论将两种测定方法结果结合,清楚地表明虽然济南市家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂已经达到中、高度抗性,但种群内仍有大部分为杂合子,应及时采用合理措施,延缓家蝇抗药性的发展。     

家蝇抗溴氰菊酯的分子机制研究

目的研究家蝇抗溴氰菊酯的分子机制。方法在实验室选育家蝇抗溴氰菊酯品系,根据P450基因CYP6D1的保守序列设计合成引物;用PCR方法从敏感品系和抗性品系扩增特异性片段。结果用PCR方法从敏感品系和抗性品系个体都能扩增出一条约210bp的特异性片段,从片段大小和条带明亮程度上均未显示出二者之间的差异,初步表明抗性家蝇P450基因在DNA水平上没有明显的变化。RT-PCR结果多次重复显示抗性品系的扩增带明显比敏感品系的亮,揭示二者RNA的含量可能不同,抗性品系P450基因的反转录活性可能升高。结论家蝇对溴氰菊酯的抗性可能与其体内P450基因的反转录活性升高有关。     

北戴河部队休疗区蚊蝇抗药性检测及防治策略研究

目的掌握蚊蝇对常用卫生杀虫剂的抗药性并评估抗性风险,为制定北戴河部队休疗区科学防治策略、提高防治效率提供参考。方法分别使用成蚊接触法和家蝇药膜法测定诊断剂量下淡色库蚊或家蝇野外种群对杀虫剂的抗药性;依据抗性结果调整防治用药,变单纯使用拟除虫菊酯为换用、混用其他类型杀虫剂,增加昆虫生长调节剂烯虫酯处理孳生地等;使用媒介生物密度监测国家标准方法调查蚊蝇密度,比较防治措施调整前后密度下降率为指标,评价防治效果。应用家蝇不敏感乙酰胆碱酯酶法(Ach E)和等位基因特异性PCR(AS-PCR)法分别确定当地淡色库蚊和家蝇野外种群中不敏感胆碱酯酶个体所占比例和kdr基因突变发生频率。结果淡色库蚊和家蝇种群对拟除虫菊酯普遍产生抗药性,对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂敏感。调整防治措施后,蚊蝇防治效果得到明显提升。两个监督单位蝇类密度下降率分别为86.4%和84.9%,蚊类密度下降率也达到84.0%和80.9%,防治效果均达到部队卫生害虫综合防控技术规范要求。当地淡色库蚊和家蝇种群对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂抗性水平较低,Ach E不敏感个体不足10%;但对拟除虫菊酯抗性水平较高,kdr突变发生率(R%)分别为84%和91%,杂合子RS%达到44.8%和43.9%。结论对卫生害虫抗药性调查和风险评估,有助于合理选择防治用药,达到有效治理目的,实现可持续控制。     

溴氰菊酯抗性家蝇酯酶的生化分析

目的 :研究拟除虫菊酯对家蝇的抗性机制。方法 :通过对溴氰菊酯敏感、抗性和高抗性家蝇的离体酯酶活力测定、酶反应动力学及不连续非变性凝胶电泳 ,观察酯酶在拟除虫菊酯抗性中的作用。结果 :用α -NA做底物酯酶活力 ,Vm 在 3种品系家蝇中无差异 ,2个抗性品系之间Km 和Vm 也无差异 ,但敏感品系的Km 分别高于两抗性品系 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳表明其同功酶谱差异很大 ,SS有 6条带 ,R、RR各有 5条带 ,且三者之间带的位置和带型均发生改变。结论 :拟除虫菊酯抗性家蝇酯酶性质发生改变 ,可能参与对拟除虫菊酯的代谢抗性     

家蝇对菊酯类杀虫剂抗性的分子生物学监测

目的用分子生物学方法测定甘肃省部分地区家蝇对菊酯类杀虫剂的抗药性。方法用引物P1、P2、P3对采自甘肃省6个地区（部队营区）的家蝇的钠离子通道基因进行扩增。结果4个地区的家蝇对菊酯类杀虫剂产生了抗性，其他2个地区的家蝇对菊酯类杀虫剂仍然敏感。结论PCR可用于家蝇抗药性的快速检测。     

家蝇对高效氯氰菊酯抗药性机制的探索

目的研究揭示家蝇对高效氯氰菊酯抗药性机制。方法生物测定、遗传学、生物化学以及分子生物学方法。结果经过25代选育，选育品系家蝇对高效氯氰菊酯抗性高达4419．07倍；抗性遗传为隐性遗传；抗性家蝇羧酸酯酶比活力是敏感家蝇的2．436倍；抗性品系的钠离子通道基因发现了2个氨基酸的改变。结论家蝇对高效氯氰菊酯抗性可能与钠离子通道基因的突变有关。     

三门峡市区家蝇抗药性水平变化分析

目的探讨分析区域家蝇抗药性变化水平。方法在相同的家蝇孳生地,采集成蝇,带回三门峡市疾病预防控制中心昆虫饲养室饲养,取F1代羽化后3~5 d的雌性成蝇,采用微量点滴法进行家蝇抗药性监测试验,用POLO软件对数据进行统计分析比较家蝇抗性变化水平。结果三门峡市区家蝇对拟除虫菊酯杀虫剂为高抗性水平,且呈上升的趋势;对敌敌畏为低抗水平。2011年与2006年结果相比,家蝇对敌敌畏的抗性水平下降了37.6%,对溴氰菊酯和高效氯氰菊酯的抗性分别增加了2.61和1.19倍。结论多领域、大剂量使用拟除虫菊酯杀虫剂是家蝇抗性水平逐年增加的主要因素之一。     

高分辨率熔解曲线分析检测家蝇kdr基因突变

目的探讨kdr基因在家蝇溴氰菊酯抗性增加中的作用。方法首次将高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析与半定量PCR相结合,用于分析家蝇抗性基因kdr扩增和突变情况。对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性。结果与敏感品系家蝇相比,kdr的mRNA表达量在现场品系家蝇中没有显著改变(P>0.05)。使用HRM对kdr进行突变分析,发现所有样本均为同一基因型。经核酸测序,该扩增片段没有突变位点。结论杭州家蝇溴氰菊酯抗性增加与kdr基因无关。     

云南及河南省部分地区中华按蚊对溴氰菊酯抗性及kdr突变频率调查

目的了解云南及河南省部分地区中华按蚊对溴氰菊酯杀虫剂的抗药性状况及该抗性与击倒抗性基因型的关联性。方法2010年7-8月采集云南省勐腊和元阳县,河南省桐柏、淮滨县以及永城市中华按蚊样本,F1代成蚊用接触筒内成蚊药膜滤纸接触法,按照WHO区分剂量,调查5个地区中华按蚊对溴氰菊酯的抗药性状况,并以PCR产物直接测序法抽取部分样本对kdr相关钠离子通道1014位点的基因型进行检测。结果5个地区中华按蚊溴氰菊酯区分剂量死亡率均<98%,其中淮滨县、永城市、桐柏和元阳县中华按蚊的死亡率均<80%,为抗性群体;勐腊县中华按蚊为初步抗性群体。PCR产物测序结果显示,河南省淮滨县、永城市和桐柏县中华按蚊样本中均发现kdr位点突变,云南省元阳和勐腊县中华按蚊样本中未发现kdr位点突变。结论河南省永城市和桐柏县的溴氰菊酯抗性与kdr位点突变相关;淮滨县中华按蚊kdr突变率高,但未发现其与溴氰菊酯抗性的关联。     

一种非致死提取单头家蝇基因组DNA的简便方法

目的家蝇是一种广泛分布的重要公共卫生害虫,开展其遗传学、分子生物学的研究为认识和利用家蝇、有效地控制蝇传疾病提供科学依据。遗传学、分子生物学的研究常需要用到DNA样品和聚合酶链反应(PCR),建立一种简单快速的DNA提取方法,为研究工作提供极大的便利。方法剪取家蝇的双翅或后足置于提取液中,温育1h后获得家蝇基因组DNA的样品;以此基因组DNA为模板,扩增CYP6D1v1基因;测定去翅或去后足的家蝇繁殖能力。结果基因组DNA成功地从家蝇个体的双翅或后足中提取,此DNA制备液可直接用于PCR扩增;剪除双翅或后足对家蝇个体无致命损伤,不影响家蝇的正常繁殖。结论该方法快速、简便、有效且样品非致死,提取的DNA可以应用于诸如用PCR法鉴定个体基因型等的后续分析。     

Insecticide susceptibility and vector status of natural populations of Anopheles arabiensis from Sudan

Species composition, blood meal source, sporozoite infection rate, insecticide resistance and the kdr mutations were investigated in the Anopheles gambiae complex from 13 sentinel sites in central Sudan. Species identification revealed that 89.5% of 960 specimens were A. arabiensis. Of 310 indoor resting females, 88.1% were found to have fed on humans, while 10.6% had fed on bovines. The overall sporozoite infection rate from the five localities tested was 2.3%, ranging from 0 to 5.5%. Insecticide susceptibility bioassay results showed 100% mortality on bendiocarb, 54.6-94.2% on permethrin, 55.4-99.1% on DDT and 76.8-100% on malathion. The kdr analysis by PCR and sequencing revealed the presence of the Leu-Phe mutation in both permethrin and DDT bioassays. There was no significant difference in the frequency of kdr (P>0.05) between dead and surviving specimens. These findings have serious implications for the malaria control programmes in Gezira and Sennar states.     

Pyrethroid cross resistance spectrum among populations of Anopheles gambiae s.s. from C?te d'Ivoire.

Field samples of Anopheles gambiae s.s. from C?te d'Ivoire were tested with 5 pyrethroids (cyfluthrin, lambda-cyhalothrin, alpha-cypermethrin, deltamethrin, permethrin), 1 pseudo-pyrethroid (etofenprox), and an organochlorine (DDT). With the use of World Health Organization diagnostic tests, 5 out of 6 samples were found cross-resistant to these insecticides. A strong decrease in knockdown effect and mortality was also observed when testing deltamethrin-impregnated nettings. With a polymerase chain reaction amplification of specific alleles diagnostic test, resistance was found associated with the presence of a kdr mutation. The strong correlation between kdr allelic frequency and resistance to DDT or etofenprox indicated that kdr was the main resistance factor for these 2 insecticides. On the contrary, a lower correlation was observed between kdr frequency and resistance to 4 of the 5 pyrethroids tested, suggesting that another mechanism was also involved, likely a metabolic detoxification. These results point out the necessity to monitor pyrethroid resistance and the presence of kdr before implementation of any impregnated bed-net programs for malaria control.     

溴氰菊酯对德国小蠊滞留喷洒药效与kdr突变关系研究

目的 明确现场种群德国小蠊对溴氰菊酯抗性状态,研究其滞留喷洒的杀蟑效果,以及耐受个体kdr抗性基因型.方法 根据相关国标用药膜法检测试虫对溴氰菊酯抗性,用强迫接触法测定在玻璃、清漆木板及水泥3种代表性表面滞留喷洒药效,用钠离子通道基因DNA扩增产物测序确定基因型.结果 随着表面吸水性增强,对试虫击倒速度降低,持效期缩短;不同种群的抗性状态影响药效,3种表面对敏感及低抗(2.05倍)种群均有较好效果,对中抗(5.17倍)种群效果较差.对杀虫剂耐受的个体均携带kdr抗性基因型,中抗种群中抗性纯合(RR)基因型频率较高,而低抗种群中抗性杂合(RS)基因型频率较高.结论 滞留喷洒防治中,德国小蠊对杀虫剂抗性表型与其携带的抗性基因型密切相关,不恰当的防治反而增加种群中抗性基因频率,因此要根据环境类型、靶标抗性状态与用药史,调整施药次数与剂量,并将滞留喷洒与胶、毒饵等手段结合,从而达到理想的防治效果.     

Evidence of multiple pyrethroid resistance mechanisms in the malaria vector Anopheles gambiae sensu stricto from Nigeria

Pyrethroid insecticide resistance in Anopheles gambiae sensu stricto is a major concern to malaria vector control programmes. Resistance is mainly due to target-site insensitivity arising from a single point mutation, often referred to as knockdown resistance (kdr). Metabolic-based resistance mechanisms have also been implicated in pyrethroid resistance in East Africa and are currently being investigated in West Africa. Here we report the co-occurrence of both resistance mechanisms in a population of An. gambiae s.s. from Nigeria. Bioassay, synergist and biochemical analysis carried out on resistant and susceptible strains of An. gambiae s.s. from the same geographical area revealed >50% of the West African kdr mutation in the resistant mosquitoes but <3% in the susceptible mosquitoes. Resistant mosquitoes synergized using pyperonyl butoxide before permethrin exposure showed a significant increase in mortality compared with the non-synergized. Biochemical assays showed an increased level of monooxygenase but not glutathione-S-transferase or esterase activities in the resistant mosquitoes. Microarray analysis using the An. gambiae detox-chip for expression of detoxifying genes showed five over-expressed genes in the resistant strain when compared with the susceptible one. Two of these, CPLC8 and CPLC#, are cuticular genes not implicated in pyrethroid metabolism in An. gambiae s.s, and could constitute a novel set of candidate genes that warrant further investigation.     

合肥市屠宰场家蝇对10种杀虫剂的抗药性研究

目的：研究屠宰场家蝇的抗药性情况。方法：微量点滴法测出卫生杀虫剂对家蝇的致死中量,结果：家蝇对10种卫生杀虫剂敏感程度不同,其中对氯菊酯最敏感,对益必添和甲醚菊酯产生了耐药性,对其他杀虫剂产生了抗药性,对氰菊酯和敌敌畏抗性最高,溴氰菊酯的抗性发展速度最快,氯菊酯的抗性发展速度较慢,结论：从抗药性角度考虑,氯菊酯可以优先用于屠宰场家蝇防制。