多参数诊断复发急性髓性白血病的再生耐药

为研究临床多参数诊断急性髓性白血病（AML）再生耐药的标准和方法，选择20例复发AML，用流式细胞仪（FCM）检测细胞周期中S期细胞百分比（S%）和细胞内柔红霉素（DNR）浓度，检测白血病细胞集落形成单位（CFU-L）和MTT药敏试验，用碱性磷酸酶抗碱性磷酶法（APAAP）检测P-170蛋白的表达。经多参数诊断20例复发AML，11例为再生耐药，提示：多参数检测可作为诊断，AML再生耐药的方法，并提出了诊断标准，为AML化疗方案的选择提供了重要的依据。     

DNR荧光直方图诊断白血病细胞耐药的意义

为研究用细胞内柔红霉素（ＤＮＲ）的荧光直方图诊断白血病耐药的方法,用流式细胞仪（ＦＣＭ）检测了２０例急性髓性白血病（ＡＭＬ）的荧光直方图,结合患者的临床耐药表现,耐药细胞的荧光强度诊断界点,耐药指数和荧光指数进行分析。结果,初治４例诊断为药敏,１例诊断为原发耐药;１５例有耐药临床表现的病例,１２例诊断为经典耐药,３例诊断为再生耐药。该方法可快速、简便、直观地在临床上及时发现和评价白血病耐药的类型和程度,为指导临床制定个体化的化疗方案提供依据     

高白细胞性急性髓系白血病细胞基因表达谱的研究

[目的]综合分析高白细胞性急性髓系白血病不同预后患者祖细胞集落形成及对化疗药物的敏感性以及差异表达的基因。[方法]半固体集落形成法观察不同预后患者骨髓祖细胞集落形成及对化疗药物的敏感性。采用Affymetrix公司人类寡核苷酸表达谱芯片检测患者初诊时骨髓单个核细胞基因表达谱,筛选出差异表达数据。[结果](1)患者骨髓祖细胞集落形成和化疗药物的敏感性与预后密切相关,未缓解者的骨髓祖细胞集落明显高于完全缓解患者,且对化疗药物不敏感。(2)完全缓解患者白血病细胞表达上调2倍以上的基因109条,占0.5%。下调2倍以上的基因134条,占0.6%,其中与预后密切相关的为TRIM16、TM4SF1。CD34和DNMT3B。(3)差异表达的基因按功能分成离子通道运输、细胞周期、细胞骨架运动、细胞凋亡等14类。上调的主要为DNA合成修复、细胞凋亡、细胞周期和应激相关等4类;而下调的主要为蛋白翻译合成、信号传导传递、发育相关和细胞骨架运动等4类。[结论]特定的基因表达模式决定患者预后。     

BCL-XL异质性表达与复发急性髓性白血病细胞体外生长类型的关系

选择１５例复发急性髓性白血病（ＡＭＬ）患者,研究ＢＣＬ－ＸＬ的异质性表达与复发ＡＭＬ细胞体外生长类型的关系。用白血病祖细胞培养（ＣＦＵ－Ｌ）判断生长类型,ＲＴ－ＰＣＲ方法检测 ＢＣＬ－ＸＬ ｍＲＮＡ的表达丰度。结果：ＣＦＵ－Ｌ检测中,１０例为生长型,其ＢＣＬ－ＸＬ ｍＲＮＡ ９例高表达,１例为低表达;ＣＦＵ－Ｌ检测 ５例为不生长型,ＢＣＬ－ＸＬ ｍＲＮＡ均为低表达（ Ｐ＜０．０１）。在复发ＡＭＬ中,ＢＣＬ－ＸＬ ｍＲＮＡ的高表达与其细胞体外生长类型有关,提示与其细胞的自分泌生长有关,可以作为复发ＡＭＬ再生耐药的一个判断指标。     

白细胞介素3受体α亚基与急性髓系白血病的靶向治疗

目前的化疗方案可能已达到治疗急性髓细胞白血病(AML)的极限,今后急性髓系白血病治疗的探索方向更多地是转向靶向治疗。单克隆抗体治疗已经在复发AML中产生明显的缓解率。在AML越来越多的异常分子描述中,白细胞介素3受体(IL-3R)α值得高度关注。IL-3R是造血生长因子受体家族成员之一,其α亚基CD123是白血病干细胞的特异标志,在白血病的发生和白血病细胞增殖、分化及凋亡中发挥重要作用。绝大部分急性髓系白血病高表达IL-3Rα。针对IL-3Rα靶向治疗的Ⅰ期临床研究已显示出一定的疗效。     

绞股蓝总皂甙对P-糖蛋白高表达急性粒系白血病细胞化疗药物敏感性的影响

目的　观察GP对P -糖蛋白 (Pgp)高表达急性粒系白血病 (AML)细胞药物敏感性的影响。方法　采用S -P免疫组化法检测Pgp表达。应用MTT比色分析法测定药物敏感性。结果　 16.67% ( 2 / 12 )初治患者和 58.33% ( 7/ 12 )难治或复发AML患者Pgp表达增高 (P <0 .0 5) ;Pgp高表达的AML细胞对阿糖胞苷(AraC)和柔红霉素 (DNR)药物敏感性低于低水平表达者 (P <0 .0 1)。无细胞毒剂量GP显著增强AraC和DNR对Pgp高表达AML细胞增殖的抑制作用 (P <0 .0 1)。结论　AML细胞Pgp高表达和其多药抗性相关 ,GP能增加高水平Pgp表达AML细胞对化疗药物的敏感性     

急性白血病多药耐药性与临床疗效关系的探讨

目的：探讨白血病细胞的多药耐药性与临床疗效及预后的关系。方法：采用逆转录聚合酶链法（RT－PCR）检测65例急性白血病（AL）患者的多药耐药基因（MDR1mRNA)表达。同时采用MTT法对35例患者做体外药物敏感试验。结果：初治组MDR1mRNA阳性表达率为31．1％,复发难治组性表达率为75．0％;MDR1mRNA阳性表达组完全缓解率和总缓解率均低于MDR1mRNA阴性表达组（P＜0．01）。药敏试验与化疗疗效相关,总临床符合率为80．0％。结论：MDR1mRNA表达及体外药敏检测与AL的化疗效果及预后密切相关,可作为判断疗放与预后的重要指标。     

增殖细胞核抗原、ras癌基因产物P21与白血病的相关性

目的探讨急性白血病及骨髓增生异常综合征（MDS）患者增殖细胞核抗原（PCNA）、ras-P21表达的相关性及其临床意义。方法采用单克隆抗体免疫细胞化学染色技术（SP法）检测33例急性髓细胞白血病（AML）、18例急性淋巴细胞白血病（ALL）、25例MDS及10例正常人的增殖细胞核抗原（PCNA）及ras-P21的表达，分析其相关性。结果AML、ALL及MDS PCNA的阳性率分别为62％，56％和53％，三者阳性率差别无统计学意义（P〉0．05）。AML与ALL、AML与MDS的PCNA表达强度（阳性细胞％）差别无统计学意义（X^2值分别为2．027和0．5217）。2例半年内转化成AML的MDS患者为PCNA高表达。17例ras-P21阳性者均有PCNA表达。结论ras-P21和PCNA共同表达的白血病细胞增殖活性及恶性增殖的潜能更高，ras-P21和PCNA综合检测对于白血病细胞增殖活性和预后分析可能具有参考价值。     

急性髓系白血病Bcl-2/Bax比值与细胞生长类型和耐药关系的研究

为了解白血病耐药与Bcl-2,Bax基因和细胞生长的关系,运用半固体培养,MTT药敏试验和免疫组织化学测定抗原表达的方法研究40例急性髓系白血病(AML)。结果:AML患者Bcl-2/Bax比值显著高于正常对照组,分别为12.21±8.05和0.75±0.05(P<0.001)。细胞集落生长组Bcl-2/Bax比值为(14.84±8.88)较无集落生长组(7.14±3.41)明显增高(P<0.05),耐药组和药物敏感组Bcl-2/Bax比值分别为14.32±8.99和7.50±5.04,有显著性差异(P<0.05)。Bcl-2/Bax高比值患者化疗反应差,缓解率明显低于低比值患者(P<0.05)。结论:Bcl-2、Bax异常表达是AML形成、发展和产生耐药的重要因素,检测Bcl-2/Bax比值对指导治疗,药物选择及判断预后有重要意义。     

白血病细胞对白细胞介素—2的反应研究

为研究重组人ＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）对白血病治疗的可用性和安全性，用＾３Ｈ胸腺嘧核苷（＾３ＨＴｄＲ）掺入法检测有白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因表达的７个白血病细胞株，６例急林巴细胞白血病（ＡＬＬ）患者和８例生髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者白血病细胞体外对ｒｈＩＬ－２的反应性。结果显示，ＩＬ－２Ｒ基因表达阳性细胞体外对ｒｈＩＬ－２的反应呈不均一性。ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ均为阳性的Ｎｕ     

STUDIES ON CFU-MIX OF 47 PATIENTS WITH LEUKEMIA AND MYELODYSPLASTIC SYNDROME

By limiting dilution assay, CFU-Mix of 47 cases of untreated leukemia, myelodysplastic syndrome and 30 cases of normal adults were studied. It is suggested that most cases of acute nonlymphocytic leukemia, like chronic myelogenous leukemia (CML) and myelodysplastic syndrome should have defect in pluripotent hemopoietic stem cell. The CFU-Mix of acute myelogenous leukemia (AML) and CML were obviously lower than that of normal adults (p less than 0.001). By light microscopy, scanning and transmission electron microscopy, it was confirmed that the CFU-Mix colonies, of leukemic patients were chiefly composed of leukemic cells. Their incorporating rate of 3H-TdR was high in the early stage of culture, but that of 55 + 59Fe was low in the whole course. This phenomenon was quite different from that of the normal adults in that the CFU-Mix of the patients showed distinctive proliferation and differentiation into the leukemic progenitor cells.     

急性髓细胞白血病细胞IL—2受体基因的研究

为研究髓细胞白血病（ＡＭＬ）细胞白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因及ＩＬ－２在ＡＭＬ中的作用，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对４１例ＡＭＬ患者化疗前白血病细胞ＩＬ－２Ｒα ｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ进行检测，并对部分ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定其对重组人ＩＬ－２（ｒＨＩＬ－２）的反应。结果显示，ＡＭＬ组织ＩＬ－２Ｒα和ＩＬ－２β基因表达是一普遍现象，４１例中白血病     

和厚朴酚对U937/ADR细胞系耐药逆转作用及其机制研究

目的 探讨和厚朴酚（HNK）对白血病细胞U937阿霉素（ADR）耐药细胞系U937/ADR多药耐药逆转作用及其机制。方法 以大剂量（IC₅₀）ADR短时间诱导方法,构建U937/ADR细胞系。以低浓度HNK（IC₂₀）与不同化疗药物联合作用于U937/ADR细胞系,检测其对不同化疗药物耐药逆转倍数。罗丹明123检测药物外排功能;荧光定量PCR（FQ-PCR）和Western blotting检测不同浓度HNK对U937/ADR细胞系核转录因子-κB(NF-κB)和耐药相关基因MDR1及其蛋白P-糖蛋白（P-gp）表达的影响;ELISA法检测NF-κB亚单位p65（NF-κB p65）的DNA结合活性。结果 成功构建了白血病多药耐药细胞系U937/ADR,对ADR耐药指数为亲代U937细胞的11倍。6.5 μg/mL HNK可以逆转U937/ADR对ADR的耐药,逆转倍数为2.20倍。HNK能够浓度依赖性地下调U937/ADR细胞NF-κB、MDR1 mRNA和P-gp表达,抑制NF-κB p65的活性。结论 HNK能有效逆转U937/ADR多药耐药,其机制可能与抑制NF-κB p65活性、下调MDR1和P-gp表达有关。     

成人白血病特殊免疫标志细胞增殖特性的分析

本文用流式细胞仪,以细胞膜分化抗原和DNA含量双参数测定法,探讨了57例各型白血病患者骨髓和11例正常骨髓单个核细胞分化抗原阳性表达细胞的增殖特性。结果表明:不同型白血病细胞不仅有相应的分化抗原表达,而在不同病期相应的抗原呈彼消此长现象。HLA-DR~+细胞％、HI_(115)~+细胞％在初发、复发病人较高,在慢性期、缓解期病人较低。膜抗原和DNA双参数分析表明,白血病骨髓增殖期细胞中大部分为与各型白血病细胞相应的免疫标志细胞,根据白血病细胞这种增殖特性的变化,可预测疾病变化进程。     

G-CSF和GM-CSF对髓系白血病细胞增殖的影响

目的 了解粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）和粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对髓系白血病细胞增殖的影响。方法 采用甲基纤维素半固体培养法培养白血病细胞集落（ＣＦＵ－Ｌ）,观察Ｇ－ＣＳＦ和ＧＭ－ＣＳＦ对１１例ＡＭＬ和ＣＭＬ患者外周血ＣＦＵ－Ｌ形成的影响。结果 ＣＭ－ＣＳＦ对ＣＦＵ－Ｌ的促进作用明显高于Ｇ－ＣＳＦ（Ｐ＝０．０１２）,而Ｇ－ＣＳＦ对ＣＦＵ－Ｌ形成影响与对照组没有显著性差别（Ｐ＝０．４９５）。结论 Ｇ－ＣＳＦ对髓系白血病细胞体外增殖无明显影响,作为髓系白血病大剂量化疗的支持治疗可能更为安全。     

急性髓系白血病与低胆固醇血症

分析了52例急性髓系白血病(AML)患者的血浆总胆固醇(T-chol)水平,发现初发患者的血浆T-chol水平明显低于正常对照组,并与外周血白细胞数和白血病细胞所占比例呈负相关,单核细胞型AML患者血浆T-chol水平最低,经治疗完全缓解后血浆T-chol浓度明显上升。表明AML的低胆固醇血症与肿瘤细胞负荷和肿瘤细胞亚型有关。     

脐血血浆、rhGM-CSF增强急性髓性白血病细胞对Ara-C敏感性的研究

研究了脐血血浆（ＣＢＰ）、基因重组人粒－单细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）对２０例急性髓性白血病（ＡＭＬ）细胞体外对阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）敏感性的影响。采用ＭＴＴ法测定Ａｒａ－Ｃ的细胞毒作用，发现，ＣＢＰ及ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可显著增强Ａｒａ－Ｃ对耐药ＡＭＬ细胞的毒性作用，与对照组相比，Ｐ＜０．０５；另采用台盼蓝拒染法测定细胞的存活能力，发现：ＣＢＰ虽然可增加耐药ＡＭＬ细胞的存活能力，但当Ａｒａ－Ｃ与ＣＢＰ或ｒｈＧＭ－ＣＳＦ合用时，ＡＭＬ活细胞总数反而下降，与对照组相比，Ｐ＜０．０５。由此认为：ＣＢＰ及ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可通过促进耐药ＡＭＬ细胞进入增殖周期，从而增强耐药ＡＭＬ细胞对Ａｒａ－Ｃ的敏感性，预示着ＣＢＰ、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ与Ａｒａ－Ｃ联合应用治疗耐药ＡＭＬ的潜在价值。     

米托蒽醌联合FLAG治疗复发性和难治性急性白血病的研究

目的评价分析米托蒽醌联合FLAG方案治疗复发性和难治性急性白血病的临床疗效。方法米托蒽醌联合FLAG方案治疗20例难治性及复发性白血病。结果20例难治性及复发性白血病患者完全缓解率65%,部分缓解率10%,总有效率75%,主要不良反应为骨髓抑制。结论米托蒽醌联合FLAG方案是治疗难治性及复发性白血病的有效方法之一。     

急性髓系白血病中乳腺癌耐药蛋白基因表达与临床意义

目的  研究急性髓细胞白血病（AML）患者乳腺癌耐药蛋白（BCRP）基因的表达以及在预后判断中的意义。方法  构建实时定量PCR检测BCRP基因表达的技术，定量检测20例初治组AML患者、20例完全缓解组AML患者及20例难治复发组AML患者BCRP基因的表达水平，分析其在AML患者和非血液系统恶性肿瘤患者中的差异及与临床疗效的关系。结果  急性髓系白血病患者中BCRP的表达高于对照组（P <0.01），初治组、完全缓解组、难治复发组的BCRP表达均存在差异（P <0.01），其中难治复发组表达最高，初治组次之，完全缓解组最低。结论  BCRP基因在急性髓系白血病患者中表达增高，BCRP的表达水平可能是疾病进展的重要标志，可能是AML的独立危险因素。