血管内皮生长因子及其磷酸化受体系统在背景型糖尿病视网膜病变大鼠中的表达

目的　血管内皮生长因子 (VEGF)是糖尿病诱发的视网膜新生血管形成的主要媒介。为探讨VEGF及其高亲和力酪氨酸激酶受体 (VEGFR :Flt 1、Flk 1)是否参与了背景型糖尿病视网膜病变 (BDR)的发生。方法　采用斑点杂交和免疫组织化学技术检测了链脲菌素诱导的糖尿病大鼠模型中视网膜VEGFmRNA和蛋白表达的丰度及分布。免疫沉淀和免疫印迹分析了Wistar鼠视网膜血管磷酸化Flt 1和Flk 1表达情况。消化铺片和电镜定量分析评估DR。结果　形态观察显示病程 6月的糖尿病动物视网膜病变尚未突破内界膜 ,其血管床无细胞性毛细血管数目仅较正常对照组轻微上升 ,而深层毛细血管基底膜异常则较对照组显著为高 (P <0 .0 5 )。虽然糖尿病视网膜VEGF蛋白表达分布与对照组无异 ,但在血管壁、内核层、外丛状层糖尿病大鼠VEGF表达上调 ,糖尿病组视网膜VEGFmRNA水平也较对照组显著升高 (1.4 2± 0 .0 8任意光密度单位VS 0 .92± 0 .0 5任意光密度单位 ,P <0 .0 1)。另外 ,在糖尿病视网膜血管磷酸化Flt 1和Flk 1表达也明显上调。结论　本文结果提示VEGF VEGFR系统在BDR大鼠视网膜表达上调 ,此可能参与了BDR特征性毛细血管渗漏等病理生理过程。     

人脑转移瘤中VEGF及PCNA的表达

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)在脑转移瘤发生和发展中的作用。方法 :采用Northern印迹杂交和免疫组化方法检测 30例人脑转移瘤中VEGF基因及蛋白表达 ,同时进行细胞增殖核抗原 (PCNA)检测 ,以内减压术取得的 8例正常脑组织为对照。结果 :30例转移瘤与正常脑组织相比 ,均有PCNA、VEGF基因及蛋白高表达 ,其表达水平在不同肿瘤类型中无明显差异。结论 :VEGF基因在人脑转移瘤的发生发展过程中起重要作用。     

一种新的人血管内皮生长因子基因的剪切体(英文)

目的探索人胚胎肺组织中是否存在一种新的血管内皮生长因子(VEGF)基因可变剪切形式。方法对1例4月龄引产胎儿肺组织的总RNA进行逆转录聚合酶链反应、克隆并测定扩增片段的序列。结果用一对引物(引物5’端-21~7 bp,3’端554~576 bp)可扩增出3条片段,一条为长度正常的VEGF16(5619 bp)全长序列,另一条为长度正常的VEGF12(1487 bp)全长序列,第三条为新的VEGF mRNA异常剪切片段。测序检测显示,此扩增片段长度为639 bp,同样为VEGF165全长核苷酸序列,但在VEGF165的第3和第4外显子之间插入了长度为20 bp的碱基片段。序列分析显示此插入序列为滞留的第Ⅲ内含子终末序列,含内含子剪切信号。上述移码突变导致VEGF基因阅读框架发生改变,在第4外显子中游出现终止密码,故仅含VEGF165外显子1~3及4部分序列,在蛋白水平上可能编码含97个氨基酸的新肽链。结论在一引产胎儿的肺组织中发现了新的VEGF mRNA可变剪切形式,其生物学意义有待进一步研究。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达影响的初步研究

目的:观察辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体表达的影响.方法:将人脐静脉内皮细胞分为辛伐他汀组、TNF-α组、辛伐他汀+TNF-α组、IL-1β组、辛伐他汀+IL-1β组和空白对照组.采用免疫细胞化学方法,观察TNF-α和IL-1β对细胞中VEGF及其受体表达的影响,并观察辛伐他汀的干预作用.结果:TNF-α组和IL-1β组的VEGF及其受体表达明显高于空白对照组(P＜0.05),辛伐他汀十TNF-α组和辛伐他汀+IL-1β组表达分别明显低于TNF-α组和IL-1β组(P＜0.05).结论:辛伐他汀可以抑制炎性刺激导致的人脐静脉内皮细胞VEGF及其受体的表达.     

肝细胞生长因子及受体促进人大肠癌细胞血管内皮生长因子表达

目的:观察不同浓度肝细胞生长因子对体外培养的大肠癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:体外培养人大肠癌细胞,分别加入不同浓度的人重组肝细胞生长因子和或其受体抑制剂Herbimycin A(HA),用Western blot、RT-PCR、ELISA等方法检测肝细胞生长因子对其受体磷酸化表达及大肠癌细胞VEGF表达的影响.结果:肝细胞生长因子在10～100 ng/ml浓度范围内较对照组相比显著促进大肠癌细胞VEGF mRNA(增加了4～5倍)、蛋白质表达(增加了3～10倍);Western blot检测肝细胞生长因子引起其受体磷酸化,并与其诱导的VEGF表达相关.结论:体外培养条件下,肝细胞生长因子呈剂量依赖性促进大肠癌细胞VEGF表达,其表达与其受体磷酸化水平相关;其受体磷酸化抑制剂可以抑制大肠癌细胞VEGF表达.     

脑胶质瘤组织中血管内皮生长因子的表达意义

目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在脑胶质瘤组织中的表达及其意义.方法:采用免疫组化和核酸原位杂交的方法,检测68例脑胶质瘤和10例正常脑组织标本中VEGF的表达.结果:VEGF蛋白和mRNA在胶质瘤中的阳性表达率随着胶质瘤病理分级的增加而增加,差异均有显著性(P<0.01),而正常脑组织不表达.结论:VEGF高表达与胶质瘤的恶性进展有着密切关系.VEGF可能通过参与诱发胶质瘤血管的生成,对胶质瘤的演进过程起促进作用.     

人血管内皮生长因子基因cDNA的克隆及其在COS-7细胞中的表达

目的：克隆和在COS－7细胞中表达人血管内皮生长因子165（VEGF165）。方法：利用RT－PCR方法，从新鲜卵巢癌组织中扩增到人VEGF165的全长cDNA，并测定其核酸序列；利用基因重组技术构建VEGF165的真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165；应用脂质体介导的基因转移术将这一表达载体导入COS－7细胞后，免疫组化（SP法）检测瞬时表达的产物。结果：经酶切鉴定和基因测序证实，克隆的基因片段为人VEGF65cDNA，重组质粒pcDNA3．1－VEGF165转染COS－7细胞后，免疫组化检测有VEGF表达，结论：成功克隆人VEGF165基因，并在COS－7细胞获得表达。     

人参三七组方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子分泌及其受体2表达的影响

目的：探讨益气活血中药人参三七组方对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体2（vascular endothelialgrowth factor receptor-2,VEGFR-2）表达的影响。方法：体外培养HUVEC,分为高剂量人参三七组方（0.4 mg/mL）组、中剂量人参三七组方（0.2 mg/mL）组、低剂量人参三七组方（0.1 mg/mL）组,另设碱性成纤维细胞生长因子（bovine basic fibroblast growth factor,bFGF,320 U/mL）阳性对照组和只加培养液的空白对照组。酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中的VEGF含量,免疫细胞化学法检测VEGFR-2阳性细胞数及其光密度值,蛋白印迹法检测VEGFR-2蛋白的表达。结果：与空白对照组比较,高剂量人参三七组方组和bFGF组细胞上清液中VEGF含量增加（P〈0.05）,VEGFR-2阳性细胞数及光密度值增加,细胞中VEGFR-2蛋白表达增强。结论：促进HUVEC分泌VEGF和表达VEGFR-2可能是人参三七组方促血管生成的基础。     

卵巢上皮性肿瘤中血管内皮生长因子的表达

目的探讨不同性质的卵巢上皮性肿瘤中血管内皮生长因子(VEGF)的表达与微血管形成情况的关系及临床病理学意义。方法对22例良性卵巢上皮性肿瘤、9例交界性卵巢上皮性肿瘤和33例恶性卵巢上皮性肿瘤的石蜡切片运用免疫组化方法检测其中VEGF表达和微血管密度(MVD)。结果3组间VEGF表达评分无显著差异(P>0.05),MVD表达有显著差异(P良交界<0.05,P良恶<0.01,P交界恶<0.05),VEGF与MVD呈负相关性(P<0.05)。结论VEGF表达评分仅能反映组织血管生成的潜能,而MVD与组织分化程度有关。     

表皮生长因子受体和血管内皮生长因子在胃近端癌组织中的表达

目的检测表皮生长因子受体（EGFR）和血管内皮生长因子（VEGF）分别在胃贲门部和胃窦部癌组织中的表达情况,了解胃贲门癌和胃窦癌的生物学特性及不良预后的原因,指导胃癌术后的治疗。方法选取手术切除的胃贲门癌组织标本64例和胃窦癌组织标本67例,常规病理检查,应用链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接（S-P）免疫组化法检测癌组织中EGFR和VEGF蛋白表达,比较两组患者3年生存率。结果胃贲门癌组EGFR和VEGF蛋白表达率高于胃窦癌组（P〈0．05）。胃贲门癌组患者3年生存率差于胃窦癌组（P〈0．05）。结论胃贲门部癌组织中的EGFR和VEGF基因蛋白过度表达,与胃责门部癌生物学行为差、预后不良存在着密切关系,反映了贲门癌有较高复发和转移危险,提示有加强责门癌手术后辅助治疗的必要性。     

Construction and identification of recombinant adenovirus-mediated gene transfer system for rat vascular endothelial growth factor

Objective To construct the recombinant adenovirus vector carrying rat vascular endothelial growth factor(VEGF), as preparation for genetic transfection that follows. Methods Rat VEGF was obtained by using RT-PCR amplification and then cloned into the shutter plasmid pDC316. Subsequently, this newly constructed plasmid pDC316-VEGF, after identification by nuclease digestion analysis and sequencing analysis, was transfected into human embryonic kidney cells HEK293 by Lipofectamine 2000 mediation, together with adenovirus-packaging plasmid pBHGE3. Based on the homologous recombination of the two plasmids within HEK293 cells, the recombinant adenovirus vector carrying VEGF and VDC316-VEGF was created. VDC316-VEGF was subsequently identified using PCR, purified using repeated plaque passages, proliferated using freezing and melting within HEK293 cells, and titrated using 50% Tissue Culture Infective Dose(TCID50) assay. ResultsThe newly constructed recombinant adenovirus was confirmed to carry rat VEGF based on PCR results, and its titration value determined based on TCID50 assay was 3×109 pfu/ml. ConclusionThe recombinant adenovirus carrying rat VEGF was successfully constructed. The newly constructed adenovirus can produce a sufficiently high titration value within HEK293 cells, providing a reliable tool for genetic transfection in further gene therapy researches.     

血管内皮生长因子在动脉粥样硬化斑块中的表达

目的：观察血管内皮生长因子（VEGF）在动脉粥样硬化斑块中的表达。方法: 利用高胆固醇饲料复制兔动脉粥样硬化模型,采用免疫组织化学方法,观察VEGF在胸主动脉粥样硬化斑块中的表达。结果：正常兔主动脉组织中未见VEGF蛋白阳性表达,而动脉粥样硬化斑块区VEGF蛋白表达明显增加。结论：动脉粥样硬化斑块中VEGF表达增加,并可能参与动脉粥样硬化发生和发展的病理过程。     

甲苯二异氰酸盐对人支气管上皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨甲苯二异氰酸盐(TDI)对正常人支气管上皮细胞(HBE)血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用改良的Son氏等方法制备TDI-人血清白蛋白(TDI-HSA).四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的TDI-HSA和HSA对正常人支气管上皮细胞株HBE135-E6E7活力的影响;分别用浓度为10、20、30、40μg/ml的HSA和TDI-HSA处理HBE135-E6E7,以未加任何处理因素的HBE135-E6E7为对照组.用半定量RT-PCR同时扩增各组HBE135-E6E7VEGF和β-actin基因片段,从基因水平上比较各组VEGF的相对表达情况.结果 40μg/ml以下浓度的HSA和TDI-HSA不影响HBE135-E6E7活力;HBE135-E6E7组成性表达VEGF189和VEGF165;与10μg/ml HSA组以及对照组相比,10μg/ml TDI-HSA组HBE135-E6E7 VEGF189和VEGF165的表达增加,但无显著差异(P＞0.05),20、30、40μg/ml的TD1-HSA组与相应浓度的HSA组以及对照组相比,HBE135-E6E7 VEGF189和VEGF165的表达均显著增加(P＜0.05),且随着TDI-HSA浓度的增加,HBE135-E6E7 VEGF189和VEGF165的表达亦随之增加(P＜0.05).结论 TDI显著增加HBE VEGF表达,这可能是TDI诱发哮喘的发病机制之一.     

脑血管病与VEGF关系的研究

目的测定脑血管病人血浆血管内皮生长因子(VEGF)水平及其与病情轻重的关系,探讨VEGF对脑缺血再灌注损伤的作用.方法用ELISA法测定脑血管病人的血浆VEGF水平,采用线栓法做鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,比较缺血对照组和VEGF处理组梗死体积和脑组织含水量的差异.结果脑梗死及脑出血患者急性期血浆VEGF水平明显升高(P＜0.05),脑梗死患者在患病3周后VEGF较急性期还高(P＜0.05),而脑出血患者则较急性期下降(P＜0.05),VEGF水平与病情轻重成正比(P＜0.05),应用VEGF组脑梗死的体积和脑细胞含水量较对照组明显降低(P＜0.05).结论脑缺血诱导VEGF的产生,而VEGF能减小梗死体积,减轻脑水肿.     

人外周血单核细胞B7.2基因的克隆及其可溶剪接体的发现

目的研究B7.2基因在肿瘤免疫方面作用,从人外周血单核细胞中克隆人B7.2基因的全长基因,并构建含此基因的重组质粒。方法根据人B7.2基因序列设计特异引物,用RT-PCR、巢式PCR方法扩增B7.2基因的全长基因,并构建至PGEM-T载体中,测序鉴定后进行序列分析。结果成功构建B7.2/PGEM-T重组载体,并发现一种新的B7.2异常的剪接体,保留第1,2,3,5外显子,第四外显子全部缺失,共144 bp,其编码蛋白质由此缺少一段跨膜结构。结论新剪接体在灵长类动物中的存在可能是个普遍现象,其对细胞功能有待进一步的研究,为研究B7.2编码蛋白质的结构和生物学功能及其在肿瘤中的作用奠定基础。     

Serum Vascular Endothelial Growth Factor-C and Vascular Endothelial Growth Factor Level in Patients with Colorectal Carcinoma and Clinical Significance

The opti mal staging approachin patients withcolorectal carcinoma(CRC)who have been in-volved in lymph node metastasis on computedtomography(CT)scans or magnetic resonance i m-aging scans(MRI)is far less reliable and contro-versial,because the i maging criteria for tumor in-volvement are relied on the size and shape of thelymph nodes.But as we known,accurate tumorstaging is essential for choosing the appropriatetreat ment strategy for patients with CRC.The in-volvement of lymph nodesis ani…     

血管内皮细胞生长因子在哺乳动物细胞的表达

目的：本实验试图构建具有生物学活性的ＶＥＧＦ真核表达载体,为ＶＥＧＦ基因治疗提供载体。方法：将已获得的ｈＶＥＧＦ１６５ ｃＤＮＡ克隆到ＧＳＴ融合表达载体,构建原核表达质粒,转染大肠杆菌ＤＨ５α,ＩＰＴＧ诱导表达,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定表达产物。在此基础上构建真核表达载体ｐｃＤＮＡ３ ／ｈＶＥＧＦ１６５,脂质体介导转染ＣＨＯ－Ｋ１细胞,Ｇ－４１８筛选,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ,Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ ｂｌｏｔ分别检测其在细胞内的转录和表达情况,３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测表达蛋白的活性。结果：实验组的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ出现特异性条带,而对照组在相应部位未出现条带。实验组的大鼠心肌血管内皮细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率明显高于对照组（Ｐ＜ ０．００１）。结论：本实验所构建的ＶＥＧＦ真核表达质粒能够在真核细胞内获得表达,其表达产物具有血管内皮细胞增殖刺激活性。     

成纤维细胞生长因子及血管内皮生长因子在喉粘膜上皮中的分布及作用

目的：探讨成纤维细胞生长因子超家族成员（ｂＦＧＦ和ＫＧＦ）及血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）与喉粘膜上皮与间质相互作用的关系．方法：用免疫组化方法和原位杂交方法，分别观察ｂＦＧＦ，ＫＧＦ及ＶＥＧＦ在喉部正常粘膜（Ｎ）和炎症（ＩＦ）中的分布．结果：ｂＦＧＦ和ＫＧＦ的转录仅在Ｎ及ＩＦ的间质中出现，阳性反应位于血管内皮细胞和成纤维细胞，此外巨噬细胞也见阳性反应，上皮细胞均未见阳性表达．而ＶＥＧＦ不仅在上皮细胞中表达，部分血管内皮细胞及慢性炎性细胞亦表达ＶＥＧＦ．在ＩＦ中，ｂＦＧＦ，ＫＧＦ及ＶＥＧＦ的阳性率和反应程度较Ｎ均有所提高．结论：ｂＦＧＦ，ＫＧＦ和ＶＥＧＦ通过自分泌或（和）旁分泌途径促进上皮细胞生长及间质中的血管形成，在上皮与间充质细胞的交互作用中发挥着重要的作用．     

血管内皮生长因子与类风湿关节炎的相关性研究简

血管内皮生长因子（VEGF）在类风湿关节炎的血管新生中起着重要的作用,VEGF主要是通过与血管内皮细胞表面特异受体结合发挥生物学效应。对VEGF及其受体的功能,缺氧、细胞因子及炎症因子对VEGF及其受体的表达调控以及VEGF及其受体与RA病理变化、病情改变和治疗作用的相关性进行探讨。     

细胞核转录因子和血管内皮细胞生长因子在胃癌组织中的表达及其意义

目的　研究早期、中期、晚期胃癌和不典型增生及慢性胃炎中细胞核转录因子 κBp65 (NF κBp65 )、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的表达 ,探讨胃癌发生、浸润和转移过程中NF κBp65、VEGF的表达和微血管密度 (MVD)的关系及其临床意义。方法　收集 1997年～ 2 0 0 2年期间经术后病理证实的早期、中期和晚期胃癌患者 62例作为研究对象 ,同时将 15例不典型增生及 2 0例慢性胃炎患者作为对照 ,进行免疫组织化学染色 ,检测NF κBp65、VEGF的表达和MVD ,分析它们之间的关系及其意义。结果　胃癌组中NF κBp65、VEGF的表达阳性率分别为 62 .9%、5 1.6% ,而对照组的NF κBp65、VEGF的表达阳性率仅为 17.1%、11.4% ,胃癌组与对照组NF κBp65、VEGF的表达阳性率差异有显著性 (均为P <0 .0 1)。胃癌组中的MVD明显增高 (P <0 .0 1) ;胃癌组中 ,早期、中期和晚期胃癌之间NF κBp65、VEGF表达阳性率和MVD差异有显著性 (均为P <0 .0 5 )。NF κBp65表达与VEGF表达呈正相关 (r =0 .5 93 ,P <0 .0 0 1)。胃癌组中有淋巴结转移者VEGF的表达和MVD明显高于无淋巴结转移者 (均为P <0 .0 5 )。结论　胃癌中NF κBp65、VEGF表达阳性率和MVD均增高 ,与肿瘤的浸润程度、淋巴结转移密切相关 ,NF κB、VEGF对肿瘤血管生成有重要作用