Bcl-2/Bax蛋白在生后大鼠卵巢不同发育时期的表达

目的 探讨Bcl-2/Bax与卵泡发育和凋亡的关系. 方法 用免疫组织化学技术和图像分析系统,对95只大鼠生后不同发育时期卵巢中凋亡相关因子Bcl-2/Bax的表达情况进行研究. 结果 0～360 d卵巢各级卵泡中的卵母细胞均呈Bcl-2/Bax阳性染色.正常卵细胞中Bcl-2反应强于Bax,退化卵细胞中Bax的反应强于Bcl-2.Bcl-2/Bax在卵泡细胞中的表达模式有所不同,21d前 Bcl-2为阳性,21～150d之间为Bcl-2阴性;180d以后正常卵泡为阴性,闭锁卵泡为阳性;Bax的表达,180d前全为阴性,180d后的表达同Bcl-2.膜细胞中Bcl-2/Bax的表达与卵泡细胞存在相似之处.Bcl-2/Bax在黄体中的表达只见于180d后. 结论 Bcl-2/Bax对卵细胞的生长、发育、存活和凋亡可能有重要的调节作用,其对卵泡细胞、膜细胞及黄体细胞的存活和凋亡的调节作用不明显.     

白藜芦醇拮抗卵泡颗粒细胞氧化应激的损伤

目的 探讨白藜芦醇是否可以拮抗过氧化氢诱导的卵泡颗粒细胞氧化应激损伤。方法 收集体外受精/单精子卵泡浆内注射（IVF/ICSI）患者捡卵后卵泡液中的颗粒细胞并进行培养。将培养后的颗粒细胞分为4组：对照组,损伤模型组,10 μmol/L白藜芦醇组和50 μmol/L白藜芦醇组。采用CCK-8法测定细胞活性,硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）含量,水溶性四氮唑-1（WST-1）法测定超氧化物歧化酶（SOD）水平,竞争ELISA 法测定孕酮分泌量,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞仪测定细胞凋亡,Western blotting测定Bcl-2、Caspase-3和沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）蛋白表达。结果 与对照组比较,损伤模型组的细胞活性、SOD水平、孕酮分泌量和Bcl-2蛋白表达均明显降低,而MDA含量、细胞凋亡率和Caspase-3凋亡蛋白表达均明显增加（P<0.05）。与损伤模型组比较,10 μmol/L白藜芦醇组各项指标未显示出统计学差异;而50 μmol/L白藜芦醇组的细胞活性、SOD水平、孕酮分泌量和Bcl-2及SIRT1蛋白表达均明显升高,MDA含量、细胞凋亡率和Caspase-3凋亡蛋白表达均明显下降（P<0.05）。结论 50 μmol/L白藜芦醇可以通过增加SIRT1的活性,增强颗粒细胞的抗氧化及抗凋亡能力,改善颗粒细胞的功能。     

猪卵泡闭锁过程中颗粒细胞凋亡现象的检测

目的　验证猪卵泡闭锁过程中是否存在细胞凋亡及其发生的范围。　方法　用透射电镜观察猪各类卵泡的超微结构 ,对颗粒细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳图谱分析 ,对颗粒细胞涂片进行了DNA末端原位标记(TUNEL)及HE染色检测。　结果　猪的闭锁卵泡中存在大量的凋亡颗粒细胞 ,而健康卵泡中凋亡颗粒细胞则很少 ;对颗粒细胞涂片进行DNA末端标记和常规HE染色检测所得到的颗粒细胞凋亡比例分别为 :健康卵泡TUNEL法为 9% ,HE法为 3 6 % ;闭锁卵泡TUNEL法为 39 2 % ,HE法为 34 % ,尽管两种方法检测的结果之间有差异 ,但两者之间的相关系数达到 0 94。　结论　猪卵泡闭锁过程中确实存在细胞凋亡现象 ,并且凋亡细胞主要集中于颗粒层 ;同时DNA末端标记和常规HE染色检测所得到的颗粒细胞凋亡比例结果说明在某些情况下可以采用简单易行的HE法替代TUNEL法进行细胞凋亡趋势判定     

乙二醇、丙二醇对冻融人卵巢卵泡凋亡的影响

目的:比较乙二醇和丙二醇对人卵巢组织中卵泡的凋亡及凋亡相关基因P53及Bcl-2表达的影响,为人卵巢组织的最佳冷冻保护剂的选择提供实验依据。方法：获取12例活检人卵巢组织每例标本分为3组：新鲜对照组、乙二醇（EG）组和丙二醇（PROH）组,冻融卵巢皮质块采用慢速冷冻法和快速解冻法,冻融后的卵巢皮质组织采用TUNEL实验检测卵泡凋亡,免疫组化法检测凋亡相关蛋白P53及Bcl-2表达变化。结果：新鲜对照组、PROH组、EG组的卵泡凋亡率分别为14.58%、23.08%、30.43%,EG组卵泡凋亡率与新鲜对照组相比差异显著（P<0.05）,但3组卵母细胞凋亡率之间差异无显著（P>0.05）。3组P53阳性卵泡率分别为13.48%、25.00%、33.93%,EG组卵泡凋亡率与新鲜对照组相比差异显著（P<0.05）,卵泡凋亡率与P53阳性率表达正相关（r=0.7791,P<0.01）。3组Bcl-2阳性卵泡率分别为5.29%、 3.65% 、 2.41%,其差异无显著（P>0.05）,凋亡与Bcl-2表达无相关性（P>0.05）。结论:结果提示对人卵巢组织进行冻存PROH优于EG;冻融过程对颗粒细胞的凋亡有明显影响,对卵母细胞凋亡无显著影响;P53蛋白在卵巢组织冻融过程中参与凋亡的发生,但不通过Bcl-2介导的途径。     

大鼠Ⅱ型糖尿病心肌细胞凋亡及其调控基因表达的变化

目的:探讨Ⅱ型糖尿病大鼠模型心肌细胞细胞凋亡及其调控基因表达的变化,为进一步研究NIDDM的发病机制提供实验资料。方法:建立NIDDM大鼠模型,TUNEL法观察凋亡的心肌细胞。抽提心肌组织DNA进行琼脂糖凝胶电泳。免疫组织化学方法观察心肌细胞内Bax、Bcl-2、c-fos、c-jun蛋白染色强度。结果:TUNEL法染色可见核呈棕色反应的阳性凋亡细胞,NIDDM组与对照组比较,凋亡率有高度显著差异(P<0.01)。琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。NIDDM组较对照组Bax蛋白阳性平均光密度值(OD值)显著增高(P<0.01);对照组较NIDDM组Bcl-2/Bax光密度比值增高(P<0.05);NIDDM组较对照组c-fos、c-jun表达显著增高(P<0.01)。结论:实验性Ⅱ型糖尿病大鼠部分心肌细胞显示凋亡;细胞凋亡与Bax、c-fos、c-jun表达增强及Bcl-2/Bax比值降低有关。     

银杏苦内酯B对N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜细胞凋亡的抑制作用

目的: 探讨银杏苦内酯B(GB)对N-甲基-N-亚硝脲(MNU)诱导的大鼠视网膜变性的影响及其机制。方法: 建立大鼠视网膜变性模型,应用TUNEL法检测光感受器细胞凋亡,RT-PCR法和免疫组织化学法分别检测MNU作用后不同时间大鼠视网膜中bcl-2和bax mRNA和蛋白的表达。结果: GB治疗组外核层细胞凋亡指数显著低于模型组(P<0.01)。MNU作用后12 h、1 d、2 d、3 d和5 d,bcl-2/bax mRNA模型组为0.36、0.15、0.29、0.42和0.64,GB治疗组为0.98、0.92、0.53、0.45和0.68,显著高于模型组(P<0.01)。GB治疗组Bcl-2蛋白在MNU给药后1 d表达最强,2 d阳性表达下降,3 d后阳性表达消失,模型组未见视网膜Bcl-2阳性表达;GB治疗组Bax蛋白表达显著低于模型组(P<0.01)。结论: 银杏苦内酯B能抑制MNU诱导的视网膜光感受器细胞凋亡,可能与上调Bcl-2的表达量,提高Bcl-2/Bax比值有关。     

RNA干扰技术沉默STAT3对肺腺癌A549细胞生长抑制的作用

目的:利用RNAi技术研究STAT3对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,同时研究STAT3对CyclinDl,Bcl-2,BAX,Caspase-9的影响及其意义.方法:利用荧光定量PCR法检测后STAT3mRNA的表达,选取1条最能有效抑制STAT3mRNA的siRNA进行后续实验;利用AM-BLUE法检测STAT3siRNA的抑制率;利用流式细胞术(FCM)检测STAT3沉默前后肺腺癌A549细胞周期分布状况和凋亡情况;利用Western blot检测RNA干扰前后STAT3与CyclinDl ,Bcl-2,BAX,Caspase-9的蛋白表达.结果:STA3被沉默后,肺腺癌细胞A549生长被抑制(P<0.05);细胞处于Go/G1期(P<0.05),而S,G2/M期的细胞相对减少(P<0.05);凋亡细胞明显增多(P<0.05) ; STAT3基因被沉默后,CyclinDl、Bcl-2蛋白的表达明显降低(P<0.05),BAX,Caspase-9蛋白的表达增高(P<0.05).Person相关性分析显示,RNAi后人肺腺癌细胞A549中STAT3与CyclinDl,Bel-2蛋白表达呈正相关(P<0.05),STAT3与BAX蛋白表达呈负相关(P<0.05),STAT3与Caspase-9蛋白表达无相关性(P>0.05).结论:RNA干扰技术抑制A549细胞STAB基因后,可阻断A549的细胞周期,使细胞阻滞在Go/G1期,无法进人到S,M期.同时可诱导肺腺癌A549细胞的凋亡.其机制可能为STAT3siRNA抑制了STAB基因的表达,从而使CyclinDl、Bcl-2蛋白表达降低,BAX蛋白表达增高.     

自然流产中的早孕期蜕膜细胞Bcl-2 /Bax 比例异常

探讨早孕期蜕膜细胞细胞凋亡异常与妊娠失败的关系。应用TUNEL法测定凋亡的发生及凋亡细胞的定位，免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达和相互关系。结果发现：（1）正常早孕40d蜕膜组织细胞大量凋亡，Bcl-2蛋白表达量较低，Bax蛋白有较强表达。（2）正常早孕50d，凋亡细胞明显减少，Bcl-2的表达显著增强，Bax蛋白表达减弱。（3）早孕50d自然流产组，蜕膜组织大量凋亡，与同时期正常蜕膜组织相比，P＜0．01。Bcl-2蛋白表达明显降低，Bax蛋白表达明显增强，Bcl-2/Bax比例降低。早孕期蜕膜组织凋亡异常可能是自然流产的机制之一，Bcl-2/Bax途径可能是诱导早孕期蜕膜细胞凋亡的重要因素。     

环孢菌素A对HL-60细胞Bcl-2和Fas蛋白表达影响的研究

目的:观察环孢菌素A(CsA)诱导白血病HL-60细胞凋亡时Bcl-2和Fas蛋白表达。方法:CsA15mｇ/L作用HL-60细胞,在0-10ｈ之间不同的时点应用细胞免疫组化及流式细胞术方法观察HL-60细胞Bcl-2和Fas蛋白表达。结果:HL-60细胞有Bcl-2强表达,当CsA15mｇ/L作用HL-60细胞8-10h,见Bcl-2表达明显下调。HL-60细胞有较弱的Fas蛋白表达,CsA15mｇ/L作用HL-60细胞10ｈ,未见Fas蛋白表达有明显改变。结论:CsA在体外诱导HL-60细胞凋亡与Bcl-2有关,使Bcl-2表达量减少。CsA在体外诱导HL-60细胞凋亡过程中,未见Fas蛋白表达的明显改变。     

牙周炎患者牙龈组织中细胞凋亡和Bcl-2的表达

目的:探讨牙周炎患者牙龈组织中细胞凋亡和Bcl-2表达及其临床意义。方法:应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色)和免疫组织化学方法检测100例牙周炎患者牙龈组织中和100例健康牙龈中细胞凋亡情况和Bcl-2表达。结果:牙周炎组的凋亡细胞计数明显高于对照组(P0.01),而Bcl-2阳性表达率则明显低于正常对照组(P0.01)。Spearman等级相关分析显示,牙周炎患者牙周袋深度(PD)与牙龈组织中凋亡细胞计数呈显著正相关(r=0.618,P0.01),而PD与牙龈组织中Bcl-2的表达呈显著负相关(r=-0.597,P0.01)。结论:细胞凋亡参与了牙周炎病变的发生发展过程,而Bcl-2表达与牙龈组织中细胞凋亡调控有关,并随牙周袋深度加深呈下降趋势。     

Evidence of apoptosis in human primordial and primary follicles

BACKGROUND: Apoptosis may operate the 'selection' between follicles destined for atresia and follicles that will remain available for ovulation. The aim of this study is to assess the expression of apoptosis in quiescent follicles. METHODS: Ovarian cortex samples from women of reproductive age, fixed in formalin, were used for immunohistochemical and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxy-UTP nick end labelling (TUNEL) methods. In histological sections the follicles were classified as primordial, primary, secondary and antral. Follicle density was defined as the total number of follicles/0.5 cm(2) of ovarian cortical tissue. Mab DO-7 (anti-p53) and Mab 124 (anti-bcl-2) were used in the immunohistochemical study. RESULTS: TUNEL was positive in 23.4% of the primordial follicles, and in 23.2% of the primary follicles, both in oocytes and granulosa cells, whereas all secondary follicles were negative. Bcl-2 activity was expressed in 75% of secondary follicles. p53 was negative in all samples. CONCLUSIONS: Apoptosis could be the process responsible for atresia of quiescent follicles and hence depletion of the ovarian germ stockpile. Follicular cells expressing Bcl-2 may therefore be the viable cells that escape the apoptotic process. Negative p53 patterns may be a favourable prognostic finding showing genome integrity in the replicating follicular cells of women of reproductive age.     

高血糖对小鼠卵母细胞发育及颗粒细胞凋亡的影响

目的 研究高血糖对排卵前小鼠卵母细胞发育及颗粒细胞凋亡的影响.方法 出生后20d ICR雌鼠,建立急性高血糖模型;取高血糖模型雌鼠和正常雌鼠超排卵,分别于hCG注射后的0、2、6和10h取卵巢组织,石蜡切片,TUNEL检测凋亡,免疫组织化学ABC法检测连接蛋白connexin-43的表达,相同时间点取生发泡期(GV期)卵母细胞统计生发泡破裂(GVBD)和第一极体(FB1)的发生率.结果 1.高血糖组卵巢湿重与小鼠体重的比值与排卵数目均低于正常组(P＜0.01);2.免疫组织化学显示,hCG注射后6h、10h颗粒细胞表达connexin-43在高血糖组明显低于正常组(P＜0.05);3.高血糖组卵泡颗粒细胞的凋亡率明显高于正常组,hCG注射后6h、10h差异最显著(P＜0.05);4.高血糖组卵母细胞GVBD发生率低于正常组,于注射后2h差异最显著(P＜0.01).结论 高血糖环境下卵母细胞发育延迟,颗粒细胞的凋亡率增高.这种发育延迟与颗粒细胞间connexin-43低表达呈正相关.     

补肾阴及补肾阳法对化疗诱导的卵巢早衰大鼠外周血TNF-α、IFN-γ水平及卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的:观察化疗诱导的卵巢早衰大鼠接受补肾阴法和补肾阳法干预后,其外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)水平及卵巢颗粒细胞凋亡情况。方法:48只雌性SD大鼠随机分成对照(control)组、环磷酰胺(CTX)组、环磷酰胺+补肾阴(CTX+kidney yin)组、环磷酰胺+补肾阳(CTX+kidney yang)组。ELISA法检测各组大鼠外周血TNF-α、IFN-γ水平;末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测卵巢颗粒细胞凋亡;Western blot法检测卵巢Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:CTX组大鼠外周血TNF-α、IFN-γ表达水平上升,卵巢颗粒细胞凋亡明显,卵巢中Bax蛋白明显增多,而Bcl-2蛋白明显减少。经本实验中补肾方药治疗后,外周血TNF-α、IFN-γ水平下降,颗粒细胞凋亡程度减轻,Bax蛋白减少,Bcl-2蛋白增多,部分指标变化以CTX+kidney yin组较为明显。结论:补肾阴及补肾阳法可通过调控颗粒细胞凋亡相关的Bax、Bcl-2蛋白及外周血TNF-α、IFN-γ的水平,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,恢复卵巢功能、增强储备能力。     

罗布麻颗粒对化疗型卵巢早衰大鼠Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的： 探讨罗布麻颗粒对化疗型卵巢早衰大鼠Bax 和Bcl-2 蛋白表达的影响。方法：性成熟SD雌鼠随机分 为对照组、造模组,腹腔注射（ 顺铂1.5 mg/kg）制备卵巢早衰模型,随机分为卵巢早衰模型组和罗布麻颗粒高、 中、低剂量治疗组。H-E 染色观察卵巢形态;ELISA 检测各组大鼠血清Bax、Bcl-2 和雌二醇、促黄体生成素（LH）、 促卵泡激素（FSH））的含量,免疫组织化学法检测卵巢Bax 与Bcl-2 蛋白表达。结果：卵巢早衰模型组大鼠中初 级卵泡减少,闭锁卵泡增多,罗布麻颗粒高剂量治疗组大鼠可见初级卵泡,闭锁卵泡较卵巢早衰模型组减少;卵 巢早衰模型组大鼠血清中雌二醇及Bcl-2 含量降低,FSH、LH、Bax 的含量升高; 各药物治疗组雌二醇、Bcl-2 含 量升高,FSH、LH、Bax 的含量降低;Bax 蛋白主要表达在颗粒层细胞及卵泡液中,卵巢早衰模型组大鼠较对照 组表达显著升高, 各药物治疗组在不同程度上能够降低其表达;Bcl-2 蛋白在各组主要表达在颗粒层细胞中,卵 巢早衰模型组大鼠较对照组表达显著下降, 各药物治疗组在不同程度上能够升高其表达。结论：顺铂能够导致雌 性大鼠血清中性激素水平的紊乱及卵巢组织形态的改变,可能与细胞凋亡因子Bax 与Bcl-2 在血清及卵巢组织中 表达水平的高低有关;罗布麻颗粒可能通过下调Bax 蛋白、上调Bcl-2 蛋白从而改善顺铂致卵巢早衰大鼠的卵巢 功能。     

叶酸拮抗同型半胱氨酸诱导的内皮细胞凋亡的作用机制

目的： 明确同型半胱氨酸（Hcy）对内皮细胞凋亡的影响以及叶酸的拮抗作用，阐明Bax和Bcl-2在同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及叶酸拮抗中的作用。方法: 用不同浓度的Hcy处理内皮细胞后，应用末端转移标记技术（TUNEL）以及Annexin V/PI染色加流式细胞术了解细胞凋亡状态，免疫组化方法检测Bax、Bcl-2的表达。结果: Hcy能促进细胞凋亡，叶酸具有拮抗作用。Hcy能促进细胞Bax、Bcl-2的表达，上调Bax/Bcl-2比值，叶酸能减少细胞表达Bax及Bcl-2，下调Bax/Bcl-2比值。结论: Bax、Bcl-2参与了Hcy诱导内皮细胞凋亡以及叶酸拮抗作用的过程。     

Ultrastructure and viability of isolated bovine preantral follicles

Techniques for the isolation of ovarian follicles and maturation of oocytes in vitro have enormous reproductive potential. Preservation of normal tissue function is vital. This study emphasizes the ultrastructure and viability of mechanically isolated bovine small (diameter 40-100 microm) preantral and large (140-450 microm) preantral/early antral follicles. Viability studies were performed for small preantral follicles. The presence of esterase activity, active mitochondria and dead cells served as parameters of oocyte and granulosa cell viability. After 1 day of culture, all follicles had a viable granulosa, displaying active mitochondria and/or esterase activity in all their cells, although a few (generally <5) dead granulosa cells were present in 17% of the follicles. Of the oocytes, 35 and 80% had esterase activity and active mitochondria respectively, whereas 8% appeared dead. The percentages of oocytes showing esterase activity and active mitochondria decreased during culture, whereas the percentage of follicles with dead oocytes or dead granulosa cells strongly increased. More than 90% of the isolated small follicles showed a poor ultrastructure, especially of their oocyte, which points to a negative selective isolation of poor follicles in the present study and/or an isolation procedure-induced damage of follicles. With respect to large preantral follicles, 42% of those distributed in the cortex and 64% of those isolated and cultured for 1 day had a poor ultrastructure. In contrast with the small ones, the percentage of ultrastructurally poor large preantral follicles had decreased to 27% after 5 days of culture, possibly due to better isolation and culture conditions. It is recommended to use ultrastructural and/or viability cell markers for in-vitro grown follicles to evaluate their quality, and particularly that of their oocytes.     

Rho相关激酶抑制剂Y27632对小鼠腔前卵泡体外发育的作用

目的 探讨Rho相关激酶（ROCK）抑制剂Y27632在小鼠腔前卵泡体外发育中的作用。 方法 取出生12.5 d的小鼠卵巢,机械法收集单枚腔前卵泡,采用超低吸附96孔板模拟3D环境对其进行培养。设置对照组和含有Y27632的实验组,通过形态学观察、卵泡直径的变化、成熟卵泡的数量、成熟卵母细胞纺锤体的变化等来评估卵泡的整体发育情况。采用Real-time PCR技术检测颗粒细胞中卵泡刺激素受体（FSHR）、卵母细胞中骨形态发生蛋白15（BMP15）、生长分化因子9（GDF9）等以及凋亡相关基因（Bad、Bax和Caspase-3）的表达情况,同时,用细胞存活染料检测卵泡发育过程中颗粒细胞的凋亡情况。 结果 ROCK抑制剂Y27632对卵泡直径增长和基本发育指标（存活数、成腔率和成熟率）无明显影响（P>0.05）,但对照组卵母细胞成熟后纺锤体组装出现异常。培养8 d后,与对照组相比,实验组颗粒细胞特异性基因FSHR上调;卵母细胞特异性基因BMP15和GDF9上调,而叉头框O3（FoxO3)下调;凋亡基因Bax、Bad和Caspase3表达下调,实验组卵泡内的颗粒细胞凋亡明显少于对照组。 结论 小鼠卵泡体外发育过程中,ROCK抑制剂Y27632能够抑制颗粒细胞的凋亡,防止卵母细胞纺锤体组装异常,进而提高卵泡体外发育质量。     

去甲肾上腺素和缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:研究去甲肾上腺素预处理(NE-P)和缺血预处理(IP)对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:复制缺血再灌注损伤(IRI),采用末端标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;应用免疫组化SABC法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:I/R组凋亡细胞较多,NE-P组及IP组凋亡细胞明显少于I/R组(P＜0.01)。在I/R组Bcl-2的表达少而Bax的表达较多,NE-P组及IP组Bcl-2的表达明显高于I/R组(P＜0.01),而Bax的表达明显低于I/R组(P＜0.01)。NE-P组与IP组各指标均无显著差异(P＞0.05)。结论:NE-P可抑制I/R诱发的心肌细胞凋亡,Bcl-2和Bax的蛋白表达在心肌凋亡的发生中起重要作用。NE-P与IP两者对心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响的作用相近。