银杏叶提取物GBE50及其主成分总黄酮对缺氧致人脐静脉内皮细胞凋亡及活性氧自由基生成的作用

目的观察银杏叶提取物GBE50及其主成分总黄酮对缺氧致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性氧自由基(ROS)生成及凋亡的保护作用。方法通过消化法获得HUVECs,传代后干预分为N组(正常对照)、H组(缺氧24 h)、HG组(缺氧前GBE50干预4 h)和HF组(缺氧前总黄酮干预4 h),其中GBE50和总黄酮各有12．5、25．0和50．0μg／mL 3个浓度。采用流式细胞仪测各组ROS水平及早期凋亡率(Annexin V),通过TUNEL测晚期凋亡率,探讨缺氧及GBE50和总黄酮对HUVECs凋亡及其ROS生成的影响。结果①H组ROS水平较N组明显升高(P<0．05),由(9．88±0．97)％升至(29．27±2．21)％;HG各浓度组与H组相比ROS水平均降低,但与N组及H组相比差异均无统计学意义(P值均>0．05);HF各浓度组与H组相比ROS水平均明显下降(P值均<0．05),其中HF组中总黄酮浓度为50．0μg／mL时ROS降到最低,为(7．42±1．81)％。②H组细胞Annexin V阳性率较N组明显增加(P<0．05),由(9．00±1．00)％升至(18．47±2．53)％:HG 25．0μg／mL时为(10．69±2．08)％,显著降低了HUVECs的Annexin V阳性率(P<0．05);HF各浓度组均能不同程度地降低Annexin V阳性率,但差异均无统计学意义(P值均>0．05),该保护效应在总黄酮浓度为50．0μg／mL时最明显,Annexin V阳性率为(14．25±2．22)％。③H组TUNEL阳性率较N组明显增加(P<0．05),由(1．28±0．65)％升至(8．59±1．10)％; HG 25．0μg／ml时降至(3．58±0．28)％,HF 50．0μg／ml为(3．06 0．40)％,较H组均明显下降(P值均<0．05)。结论缺氧可导致HUVECS ROS生成增加伴凋亡增多。而GBE50及总黄酮可降低缺氧所致的ROS生成增多及凋亡增加,对缺氧所致的内皮功能障碍有一定的保护作用。     

阿托伐他汀对急性心肌梗死大鼠心肌血管新生及eNOS及RhoA表达的影响

目的观察不同剂量阿托伐他汀对急性心肌梗死大鼠心肌血管新生及心肌eNOS及RhoA表达的影响。方法雄性急性心肌梗死大鼠60只,随机分为对照组(0．9％NaCl溶液)、小剂量阿托伐他汀组(3 mg·kg-1·d-1)、中剂量阿托伐他汀组(12 mg·kg-1·d-1)及大剂量阿托伐他汀组(50 mg·kg-1·d-1),连续灌胃2周。2周后处死动物,α-SMA及vWF免疫组化染色检测心肌血管密度;逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测eNOS及RhoA mRNA的表达。结果大剂量组α-SMA染色阳性血管计数较对照组明显减少(P<0．01):中剂量组vWF染色阳性微血管计数较对照组明显增加(P<0．01)。中剂量组eNOS mRNA表达较对照组明显增加(P<0．05)。大剂量组RhoA mRNA表达较对照组明显减少(P<0．05)。结论阿托伐他汀对大鼠急性心肌梗死后心肌血管新生的作用与剂量有关。eNOS、RhoA可能参与阿托伐他汀对急性梗死心肌血管新生作用过程。     

川崎病(KD)患者血清中抵抗素对人冠状动脉内皮细胞(HCAEC) ET-1及NO/eNOS的作用

 目的  探讨抵抗素与川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿冠状动脉内皮细胞ET-1及NO/eNOS的关系。方法  收集川崎病患儿和健康儿童血清,加入人冠状动脉内皮细胞培养体系,分为4组:KD患儿血清组(KD组)、抵抗素组(Re组)、正常人血清组(N组)、KD患儿血清加抵抗素抗体组(KD+antiRe组)。干预24 h后,硝酸酶还原法测定细胞上清液中NO水平,real-time PCR测定细胞ET-1及eNOS的mRNA表达,ELISA检测细胞上清抵抗素及eNOS蛋白的表达水平。结果  各组抵抗素水平:与N组比较,KD组与Re组抵抗素水平明显增高(P<0.05),KD+antiRe组抵抗素水平明显下降(P<0.05),KD组较Re组降低(P<0.05)。各组NO水平:与N组比较,KD组和KD+antiRe组NO水平明显升高(P<0.05),Re组下降(P<0.05);KD+antiRe组较KD组NO水平升高更明显(P<0.05)。各组ET-1mRNA表达水平:与N组及KD+antiRe组比较,KD组、Re组的ET-1 mRNA表达水平升高(P<0.05),N组与KD+antiRe组间差异无统计学意义,KD组与Re组间差异无统计学意义。各组eNOS mRNA及蛋白表达水平:KD组、Re组与KD+antiRe组较N组均降低(P<0.05),KD组较Re组及KD+antiRe组降低(P<0.05),Re组较KD+antiRe组降低(P<0.05)。结论  抵抗素参与了KD患儿冠状动脉内皮细胞损伤,其机制可能与调节ET-1及NO/eNOS表达有关。     

糖基化终产物抑制THP-1巨噬细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ的表达

目的:观察糖基化终产物(AGEs)对THP-1巨噬细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响,探讨AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中可能的作用.方法:用佛波酯(PMA)诱导THP-1单核细胞72h使其分化为巨噬细胞,并将糖基化-牛血清白蛋白(AGE-BSA)与巨噬细胞共同孵育,运用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测巨噬细胞PPARγ mRNA和蛋白的表达水平.结果:PMA诱导72h后,THP-1细胞停止增殖,由单核细胞分化成为巨噬细胞.50、100、200和400μg/mlAGE-BSA处理24h后,巨噬细胞PPARγ mRNA相对表达量分别是1.235±0.044、0.752±0.055、0.494±0.026、0.277±0.025;PPARγ蛋白的平均积分光密度值分别为36.460±0.625、24.561±0.636、19.326±0.803、12.715±0.752,二者较100μg/ml牛血清白蛋白(BSA)组均明显降低(P<0.05).200μg/ml AGE-BSA作用12、24、36和48h后,巨噬细胞PPARγ mRNA相对表达量分别是1.564±0.060、1.260±0.043、0.467±0.033、0.360±0.012;PPARγ蛋白的平均积分光密度值分别为32.502±0.739、22.234±0.835、16.568±0.683、11.537±0.547,二者较0h组也明显降低(P<0.05 o结论:AGEs可下调THP-1巨噬细胞PPARγmRNA和蛋白的表达水平,且呈浓度和时间依赖性.     

银杏叶提取物对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征合并高血压大鼠血压的影响

目的：研究银杏叶提取物( GBE)对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征( OSAS)合并高血压大鼠血压的影响,及GBE可能的作用机制。方法30只健康雄性SD大鼠随机均分为正常对照( NC)组、慢性间歇性低氧( CIH)组、GBE灌胃组,各组10只。于实验前后采用无创血压分析仪观察大鼠血压变化;HE染色观察大鼠心肌、肾、腹主动脉的病理变化;同时检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α( TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)的含量;及外周脂肪组织中Toll样受体4(TLR4)、c-Jun 氨基末端激酶(JNK)蛋白及其mR-NA表达水平。结果 CIH组大鼠血压明显高于对照组( P<0．01),GBE灌胃组大鼠血压显著低于CIH组(P<0．01);与 NC 组相比,CIH组心肌细胞、肾小管明显水肿呈水样变性,GBE灌胃组与CIH组比较心肌细胞、肾小管水肿显著降低,各组腹主动脉均无明显病理改变;与NC组比较,CIH组大鼠血清中 TNF-α、IL-1、IL-6的含量均显著增高( P <0．01),GBE灌胃组与CIH组比较大鼠血清中TNF-α、IL-1、IL-6的含量显著降低(P<0．05),GBE灌胃组与NC 组比较TNF-α、IL-6的含量差异无统计学意义,而IL-1的含量GBE灌胃组明显高于NC 组(P<0．01);与NC组比较,CIH组外周脂肪组织中TLR4、JNK蛋白及其mRNA表达水平显著增高(P<0．01),而GBE灌胃组其表达含量显著低于CIH组(P<0．01)。结论 GBE可以抑制OSAS合并高血压大鼠脂肪组织TLR4、JNK蛋白及mRNA的表达,降低血清中TNF-α、IL-1、IL-6的水平,对OSAS合并高血压大鼠血压有显著降压作用。     

eNOS在 EPO调节慢性缺氧心肌细胞线粒体生物合成中的作用机制研究

目的：探讨内皮型一氧化氮合酶（eNOS）在促红细胞生成素（EPO）调节慢性缺氧环境中心肌细胞线粒体生物合成中的作用及其机制。方法采用H9c2心肌细胞,将其于缺氧环境下培养7 d （94％ N2,5％ O2）,建立心肌细胞慢性缺氧模型。将心肌细胞根据不同处理分为缺氧对照组（HC）,20 U／mL重组人 EPO（rhEPO）处理缺氧组（HE）和20 U／mL rhEPO＋ eNOS shRNA干扰处理缺氧组（HR）。以荧光探针检测线粒体数量变化;RT‐PCR检测线粒体DNA相对表达量;Western blot 检测eNOS总蛋白表达及磷酸化水平（p‐eNOS）变化。结果 rhEPO显著增强eNOS磷酸化水平,增加线粒体数量及其DNA相对拷贝数（P＜0．05）;而同时采用shRNA干扰eNOS后,HR组eNOS总蛋白表达及磷酸化水平较HE组降低（P＜0．05）,同时线粒体数量及其DNA相对拷贝数较 HE组减少（P＜0．05）。结论 eNOS的磷酸化激活是EPO增强慢性缺氧心肌细胞线粒体生物合成的重要信号转导机制。     

大肠癌PPARγ和PPAR8基因的表达及其与临床病理的关系

目的研究大肠癌过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisomeproliferator—activatedreceptor,PPAR）中PPARy和PPAR8基因mRNA的表达水平及其与患者临床病理参数的关系。方法采用SYBRGreenI实时定量RT—PCR技术检测38例手术切除的大肠癌及相应癌外正常大肠组织中PPARγ和PPAR8mRNA的表达。结果①表达阳性率PPARymRNA在癌组织低于相应癌外正常组织（52．6％VS86．8％,P=0．001）,PPARSmRNA在两者间无差异（50．0％VS44．7％,P=0．646）。大肠癌组织PPARγmRNA的表达水平低于癌外正常组织[0．0016（0,0．017）VS0．011（0,0．088）,P=0．036];PPARSmRNA则两者间表达无差异[0．086（0,0．24）VS0．052（0,0．19）,P=0．73]。②大肠癌浸润越深,PPARγmRNA相对表达水平越低,PPAR8mRNA的表达与临床病理参数间无明显关联。③PPARγ和PPARSmRNA表达无相关性（r=0．098,P=0．560）。结论大肠癌PPARγmRNA低表达,且与大肠癌浸润程度有关;PPARγmRNA表达无明显上调,两基因间表达水平无相关性。     

细胞因子信号抑制物SOCS1／JAB介导CT-1对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的保护作用

目的通过使用信号抑制子(SOCS1)反义寡核苷酸干预,从细胞和分子水平阐明SOCS1如何介导CT-1对心肌细胞缺氧复氧损伤中保护作用。方法将改良法培养的出生1-3 d的乳鼠心肌细胞分为5组:①对照组:DMEM液培养6 h;②缺氧／复氧组:缺氧3 h,复氧培养3 h;⑧缺氧／复氧 CT-1组(CT-1组):缺氧3 h后,加CT-1(10ng／mL)进行复氧3 h处理;④缺氧／复氧 CT-1 反义SOCS1组(反义SOCS1组,终浓度为10μmol/L):反义SOCS1培养24 h后,缺氧3 h,加CT-1(10 ng／mL)进行复氧3 h处理;⑤缺氧／复氧 CT-1 正义SOCS1组(正义SOCS1组,终浓度为10μmol/L):加正义SOCS1培养24 h后,缺氧3 h,加CT-1(10 ng／mL)进行复氧3 h处理。MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化氰碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位(mPTP),二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH CA)检测细胞活性氧(ROS),心肌细胞凋亡率用流式细胞仪检测。心肌细胞eNOSmRNA和SOCS1mRNA表达采用RT-PCR法,蛋白免疫印迹(WeStern blot)检测SOCS1和磷酸化SFAT3蛋白。结果:缺氧复氧后心肌细胞搏动频率明显减慢,搏动幅度减弱,节律不规整。心肌细胞存活率明显降低,凋亡率明显增加。CT-1处理组搏动频率与缺氧复氧组比明显加快,与对照组相近,节律较整齐。反义SOCS1干预后,频率明显减慢,搏动幅度减弱,节律明显不规则;与CT-1组比较,心肌细胞存活率下降,心肌细胞凋亡率增加,分别为(87．8％±7．5％比74．8％±5．2％;5．8％±1．5％比12．8％±1．5％,尸值均<0．05),LDH增加,正义SOCS1并不干扰CT-1的作用。缺氧复氧损伤后心肌细胞ROS水平明显升高(14．28±1．42比3．54±0．86,P<0．001),CT-1组心肌细胞ROS水平较缺氧复氧损伤组下降(6．73±1．21比14．28±3．42,P<0．01),接近空白对照组。加反义SOCS1干预后ROS水平则明显增加。流式细胞仪结果示;缺氧／复氧损伤组心肌细胞△(?)明显小于对照组, CT-1组较缺氧复氧升高(12．93±1．46比4．62±0．38, P<0．05),加反义SOCS1后△(?)水平则小于CT-1组(6．86±0．75比12．93±1．46,P<0．05)．正义SOCS1组结果与CT-1组类似。荧光显微镜结果:缺氧复氧损伤组心肌细胞绿色荧光强度明显强于对照组,表明线粒体膜转运孔mPTP受到破坏。CT-1预处理后心肌细胞JC1荧光强度明显减弱,反义SOCS1干预后,心肌细胞mPTP下降,荧光强度增强。而正义SOCS1组结果与CT-1组类似。缺氧复氧组较空白对照组SOCS1 mPNA表达和SOCS1蛋白水平有所增加;而CT-1组SOCS1 mRNA表达和SOCS1蛋白水平均较缺氧复氧组显著升高(1．596±0．065比0．639±0．063;2．568土0．219比s1．539±0．127,P<0．05),表明CT-1促进心肌细胞SOCS1表达。加SOCS1反义寡核苷酸后SOCS1mRNA和蛋白水平较CT-1组明显下降(1．596±0．065比0．896±0．065:1．945±0．158比2．568±0．219,P0．05),表明SOCSI抑制CT-1引起的STAT3磷酸化。结论细胞因子信号抑制物SOCSI介导了心肌营养素-1减轻缺氧复氧引起的心肌细胞损伤。     

三种荧光染料SYBR GreenⅠ、LCGreen PLUS、EvaGreen在实时定量PCR应用中的比较

目的：研究中间型滋养细胞的凋亡及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ PPARγ）在子痫前期患者胎盘中的表达及临床意义。方法收集2014－2016年间大连市妇女儿童医疗中心住院分娩的正常妊娠晚期（正常组）、轻度子痫前期（轻度子痫前期组）及重度子痫前期（重度子痫前期组）产妇胎盘组织,各30例。采用TUNEL法检测3组胎盘底板中间型滋养细胞的凋亡并计算凋亡指数（AI）,采用免疫组化S－P法检测PPARγ的表达情况。结果正常妊娠晚期组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组胎盘滋养细胞的AI分别为1．5860±0．2541、5．2609±2．8643及9．0000±6．2763,呈增高趋势,各组间差异有显著性意义（ P＜0．05）。 PPARγ在正常妊娠晚期组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组的表达阳性率分别为46．7％,93．3％,100％,呈增强趋势,各组间差异有显著性意义（ P＜0．05）。子痫前期胎盘组织中PPARγ与凋亡细胞的表达呈正相关（ r＝0．591, P＜0．05）。结论 PPARγ可能通过诱导胎盘滋养细胞的凋亡参与子痫前期的发病。     

干扰RNA片段对过氧化物酶体增殖物激活受体γ及内皮素-1基因表达的影响

目的:研究干扰RNA片段对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达的影响,了解PPARγ基因表达量发生变化的时候,内皮素-1(ET-1)的基因表达量有无变化,以探讨PPARγ及ET-1基因在动脉粥样硬化致病机制中的作用。方法:采用siRNA Expression Cassette方法干预体外培养的人正常脐静脉内皮细胞,通过RT-PCR、适时定量PCR(quantitative real-time PCR)及Western blot法检测PPARγ及ET-1的mRNA、蛋白质表达水平。结果:针对PPARγ基因设计的siRNA Expression Cassette 1(1 326)使PPARγmRNA及蛋白表达量下调,ET-1 mRNA表达量增多,二者之间表达量的mRNA灰度比值变化有相关性(r=0.995,P=0.042)。siRNAExpression Cassette 2,3,4片断未能发挥干扰效应。结论:干扰RNA片段siRNA Expression Cassette 1(1 326)对PPARγ的基因表达有抑制作用,可以在转录水平抑制PPARγ在人脐静脉内皮细胞的基因表达,同时使ET-1基因表达上调。     

过表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因对小鼠缺氧性肾损伤的影响

目的 探讨过表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因对小鼠缺氧性肾损伤的干预作用及可能机制。方法 将15只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、缺氧组和过表达组，每组5只。给予过表达组小鼠注射过表达PPARγ基因的腺相关病毒，对照组和缺氧组小鼠则注射等量生理盐水。3周后将缺氧组和过表达组小鼠放入低压低氧动物实验舱进行缺氧干预7 d。干预结束后取各组小鼠肾组织，光镜下观察肾组织病理学变化，并采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测各组小鼠肾组织中PPARγ、混合谱系蛋白激酶结构域样蛋白(MLKL)、转化生长因子β(TGF-β)的mRNA和蛋白相对表达量。结果 与对照组比较，缺氧组肾组织中部分肾小管细胞肿胀，管腔狭窄堵塞，PPARγ的mRNA和蛋白相对表达量均明显降低，MLKL和TGF-β的mRNA和蛋白相对表达量均明显增高(均P<0.05)。与缺氧组比较，过表达组肾组织中肾小管病变相对轻微，PPARγ的mRNA和蛋白相对表达量均明显增高，MLKL和TGF-β的mRNA和蛋白相对表达量均明显降低(均P<0.05)。结论 过表达PPARγ基因可减轻小鼠缺氧性肾损伤，其...     

普伐他汀对柯萨奇病毒性心肌炎小鼠干扰素-γ和白细胞介素-10表达的影响

背景病毒性心肌炎(VMC)的炎症和免疫损伤机制曰益明确,细胞介导及自身免疫介导的心肌损伤成为重要致病机制。新近的研究表明,VMC患者干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)等细胞因子及其构成的内环境对心脏有多方面损伤作用。现认为他汀类药物具有抗炎和免疫调节作用,故可能通过调节Th1／Th2的平衡从而减轻心肌病变严重性。目的通过比较不同剂量干预组和模型对照组小鼠IFN-γ、IL-10表达水平,探索不同剂量普伐他汀对VMC及IFN-γ与IL-10的影响。方法取60只雄性4周龄BALB／c小鼠,腹腔接种柯萨奇病毒B组3型(CVB3,10-7TCID50)0．06 mL建立VMC模型。随机等分为A组(模型对照组,予生理盐水0．2mL灌胃)、B组(普伐他汀40 mg·kg-1·d-1灌胃)和C组(普伐他汀80 mg·kg-1·d-1灌胃)。给药14 d后处死所有存活小鼠,采用ELISA法检测血清IFN-γ、IL-10水平,实时定量PCR法检测心肌IFN-γ、IL-10表达水平。结果A组心肌病变严重,,B组(0．60±0．06)和C组(0．33±0．07)的IFN-γmRNA表达显著低于A组(P<0．01),C组显著低于B组(P<0．05);而B组(1．81±0．03)和C组(2．14±0．03)的IL-10mRNA表达显著高于A组(P<0．05),前两组间的差异无统计学意义(P>0．05)。血清IFN-γ、IL-10水平改变与其核酸水平的改变基本一致。A组的血清IFN-γ[(61．10±8．62)pg／mL]显著高于B组[(49．60±4．56)pg／mL]和C组[(37．13±7．63)pg／mL] (P<0．01),后两组的差异也有统计学意义(P<0．01)。A组血清IL-10[(11．89±2．84) pg／mL]水平显著低于B组[(20．65±2．71)pg／mL]和C组[(34．93±8．19)pg／mL,P值分别<0．05、0．01],后两组的差异也有统计学意义(P<0．05)。结论普伐他汀对VMC有一定的疗效。普伐他汀能维持细胞因子(IFN-γ、IL-10)基因的平衡表达,说明它可通过调节Th1／Th2的平衡发挥抗VMC作用。     

别嘌呤醇通过调节自噬及恢复Nrf2通路减轻糖尿病心肌病

目的:探讨抗氧化药物别嘌呤醇(ALP)对糖尿病心肌病的保护作用及机制。方法:用高浓度的葡萄糖培养H9C2细胞建立糖尿病心肌病模型,实验分组为正常糖浓度培养组(NG),高糖组(HG)及高糖加ALP处理组(HG+ALP),检测细胞分泌乳酸脱氢酶活性,观察细胞形态,用Western Blot和实时定量PCR分别检测Nrf2及LC3蛋白表达量和mRNA表达量。结果:HG组较NG组LDH释放量增多及细胞表面积增大(P<0. 05),ALP处理后可以改善上述指标(P<0. 05,HG+ALP vs HG);与此同时,HG组Nrf2的蛋白量相比NG组下降,而LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高(P<0. 05),在给予ALP处理后,Nrf2及LC3Ⅱ/Ⅰ比值均恢复至正常水平(P<0. 05,HG+ALP vs HG),而Nrf2 mRNA在3组间均无统计学差异。结论:ALP通过调控自噬修复Nrf2保护通路发挥糖尿病心肌病的保护作用。     

罗格列酮对KKAy小鼠肾脏小管间质结缔组织生长因子表达的影响

目的观察罗格列酮对2型糖尿病KKAy小鼠肾皮质和小管间质结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法选取16周龄KKAy小鼠25只,随机分组给予罗格列酮30mg·kg-1·d-1和安慰剂灌胃,分别于第16、20、24周龄时处死动物。用Westernblot方法分析各组小鼠肾皮质转化生长因子-β1(TGF-β1)、CTGF、纤连蛋白(FN)和过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPARγ)蛋白表达,对组织切片进行免疫组织化学染色半定量分析CTGF在小管间质阳性面积比。结果20周龄罗格列酮治疗组与同周龄安慰剂组小鼠相比肾皮质区TGF-β1、CTGF和FN蛋白质表达分别下降37%、21%和52%(P<0·01),小管间质区CTGF免疫染色减少25%(P<0·01);24周龄罗格列酮治疗组与同周龄安慰剂组小鼠相比24h尿蛋白明显减少(44·53±1·96)vs(63·66±5·57)μg/24h(P<0·05),肾皮质区TGF-β1、CTGF和FN蛋白质表达分别下降61%、50%和51%(P<0·01),小管间质区CTGF免疫染色阳性面积减少44·9%(P<0·01)。肾皮质PPARγ表达增加18·1%(P<0·05)。结论外源PPARγ激动剂罗格列酮上调肾皮质PPARγ表达,并明显抑制糖尿病小鼠肾皮质和小管间质CTGF表达。     

糖肾清2号有效成分对糖尿病肾病小鼠PPARγ信号通路的影响

目的观察糖肾清2号有效成分对糖尿病肾病小鼠肾脏及血清中PPARγ、RANTES、IL-1β、MCP-1水平的影响,探讨该方减轻DN小鼠肾脏损伤的作用。方法将KK-Ay小鼠30只予高脂饲料喂养3周制备糖尿病肾病模型。造模成功的小鼠随机分为模型组,阳性药组(缬沙坦13. 33 mg/kg),糖肾清2号高、中、低剂量组(糖肾清2号方有效成分13. 33 mg/kg,6. 67 mg/kg,3. 33 mg/kg),另设6只C57BL/6J小鼠为正常组,各组小鼠灌胃1次/d,连续干预12周后取血清及肾脏。采用RT-PCR技术检测肾脏组织PPARγ,RANTES,IL-1β,MCP-1mRNA转录水平,Western blot技术测定肾脏组织PPARγ、RANTES蛋白表达水平。ELISA法检测血清IL-1β、MCP-1蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组PPARγ mRNA水平下调,蛋白表达水平上调(P 0. 01),RANTES、IL-1β、MCP-1 mRNA水平及蛋白表达水平上调(P 0. 01)。与模型组比较,TSQ高、中、低剂量组PPARγ mRNA水平下调,蛋白水平上调(P 0. 05,P 0. 01),RANTES、IL-1β、MCP-1 mRNA及蛋白表达均下调(P 0. 05,P 0. 01)。结论糖肾清2号方可以上调DN小鼠PPARγ水平,抑制炎性损伤,对DN有一定保护作用。     

生物钟基因Bmal1对高糖高脂H9C2细胞缺氧/复氧损伤的影响及分子机制探讨

目的：探讨生物钟基因Bmal1对高糖高脂H9C2细胞缺氧/复氧损伤的影响及分子机制。方法：采用随机数字表法将36个H9C2细胞分为低糖+常氧组(LG+N组)、低糖+缺氧/复氧组(LG+H/R组)、高糖高脂+常氧组(HG/HP+N组)、高糖高脂+缺氧/复氧组(HG/HP+H/R组)、高糖高脂+缺氧/复氧+Bmal1过表达组(HG/HP+H/R+Ad-Bmal1组)、高糖高脂+缺氧/复氧+Bmal1过表达+PI3K抑制剂Wortmannin组(HG/HP+H/R+Ad-Bmal1+Wort组)，每组6个。比较各组H9C2细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞凋亡率、细胞存活率，Bmal1、磷酸化AKT蛋白/AKT蛋白(p-Akt/Akt)、Bax的表达水平。结果：LG+H/R组、HG/HP+N组的Bmal1表达量低于LG+N组，细胞损伤程度高于LG+N组，差异有统计学意义(P<0.05);HG/HP+H/R组Bmal1表达量低于LG+H/R组，细胞损伤程度高于LG+H/R组，差异有统计学意义(P<0.05);HG/HP+H/R+Ad-Bmal1组细胞损伤程度低于HG/HP+H/R组...     

雷帕霉素对前脂肪3T3-L1细胞脂质稳态和分泌功能的影响

目的 探讨雷帕霉素对前脂肪3T3-L1细胞脂质稳态、分泌功能的影响,阐明雷帕霉素引起高脂血症的可能机制.方法 体外培养前脂肪细胞3T3-L1细胞株,分成对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组.用油红O染色(定性)及高效液相色谱法(定量)检测3T3-L1细胞内胆固醇水平,酶联免疫吸附实验分析瘦素、脂联素的分泌量,实时荧光定量PCR法及Western blot法检测3T3-L1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) mRNA和蛋白的表达.结果 油红O染色显示雷帕霉素组脂肪细胞脂滴数量较对照组明显减少;对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组细胞内游离胆固醇含量分别为(12.89±0.16)、(9.84±0.45)、(9.39 ±0.46)和(8.61 ±0.34) mg/ml,与对照组相比,雷帕霉素能抑制3T3-L1前脂肪细胞内胆固醇的蓄积(P＜0.05).对照组、雷帕霉素50、100、200 nmol/L组瘦素分泌量分别为(19.02±0.52)、(16.98±0.01)、(15.62±0.01)和(13.84±0.66)ng/ml,与对照组相比,雷帕霉素能减少成熟后3T3-LI脂肪细胞瘦素的分泌水平(P＜0.05).雷帕霉素50、100及200 nmol/L组PPARγ mRNA表达量分别为对照组的94％、62％和47％,均显著低于对照组(P＜0.05);PPARγ蛋白表达量分别为对照组的80％、74％和61％,均显著低于对照组(P＜0.05).雷帕霉素100 nmol/L、PPARγ阻断剂GW9662 10 μmol/L、PPARγ增敏剂曲格列酮10 μmol/L分别处理细胞96 h,检测PPARγmRNA的表达分别为对照组的(0.60±0.14)、(0.67 ±0.03)和(1.30±0.14)倍,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05); PPARγ蛋白表达与mRNA的表达变化趋势相似,差异具有统计学意义(P＜0.05).雷帕霉素100 nmol/L、PPARγ阻断剂GW9662 10 μmol/L、PPARγ增敏剂曲格列酮10 μmol/L分别处理细胞96 h,ELISA检测各处理组瘦素表达量分别为(19.02 ±0.52)、(15.62 ±0.10)、(14.45±1.01)和(18.07 ±0.66) ng/ml,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 雷帕霉素通过下调PPARγ的表达减少脂肪细胞内的脂质蓄积,并且抑制其瘦素分泌,这为临床上雷帕霉素引起的高脂血症提供了一个可能的解释.     

PPA Rγ激动剂干预对急性胰腺炎小鼠肝损伤的影响

目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对急性胰腺炎小鼠肝损伤的影响并对其机制进行初步研究。方法72只健康雄性昆明小鼠分为3组,急性胰腺炎组（AP组）、罗格列酮预处理组（AP‐ROS组）和生理盐水组（N S组）,每组24只。分别于建模后6 h、12 h和24 h处死小鼠,全自动生化分析仪检测血清淀粉酶、丙氨酸氨基转移酶（A L T ）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST ）水平。运用RT‐PCR方法检测肝脏组织NF‐κB和PPARγmRNA表达,应用Western blot技术检测肝脏组织PPARγ和NF‐κB p65蛋白表达。结果小鼠血清淀粉酶、ALT 和AST水平在相对应的各时间点AP组比NS组明显升高（P＜0．01）,AP‐ROS组较AP组明显降低（P＜0．01）。AP组肝脏组织PPARγmRNA和蛋白表达在造模后6 h和12 h均低于NS组（P＜0．05）;AP‐ROS组PPARγmRNA和蛋白表达在各时间点均明显高于AP组和NS组（P＜0．01）。AP组肝脏组织NF‐κB mRNA和NF‐κB p65蛋白表达水平在各时间点与AP‐ROS组和NS组相比较均升高（P＜0．01）。结论 NF‐κB与小鼠急性胰腺炎肝损伤有明显关系,PPARγ在肝损伤中的表达受到抑制;罗格列酮在AP早期能增强PPARγ表达,抑制NF‐κB的表达。     

大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤胆道组织PPARγmRNA表达的意义

目的:探讨PPARγ在大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤胆道组织中的表达情况以及意义。方法:40只SD大鼠随机分成假手术组(SO组)、缺血-再灌注组(I/R组)、罗格列酮组(ROS组)和GW9662组,每组10只。通过制作大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注模型,应用PPARγ的配体罗格列酮(ROS)和拮抗剂GW9662作为干预,采用RT-PCR方法检测各组胆道组织中PPARγmRNA表达情况,应用图像分析系统进行灰度扫描,以各组β-actin条带的扫描值为标准,计算PPARγmRNA/β-actin吸光度比值,记录PPARγmRNA的相对表达量。结果:PPARγmRNA在SO组胆道组织中呈低表达;I/R组PPARγmRNA表达稍有增高,较SO组无显著差异;ROS组PPARγmRNA表达显著增加,与I/R组比较有显著差异(P<0.05);在GW9662组PPARγmRNA表达显著降低,与ROS组比较有显著差异(P<0.05)。结论:SD大鼠自体原位肝移植胆道缺血再灌注损伤各实验组胆道组织中存在PPARγmRNA表达,但各组表达量不同。配体罗格列酮可以活化原位肝移植胆道缺血再灌注损伤中肝外胆道组织中的PPARγ,但这种活化是PPARγ依赖性的,可被PPARγ的拮抗剂GW9662逆转。     

一氧化氮合酶蛋白和基因在肝肺综合征大鼠肺组织中的表达

目的　探讨一氧化氮 (NO) 在肝肺综合征 (HPS) 发生机制中的作用。方法　采用 Wistar大鼠行胆总管结扎术 (CBDL) 制备HPS动物模型, 应用免疫组化方法观察内皮型一氧化氮合酶 (eNOS) 和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) 蛋白在肺血管的表达和分布特点, 采用RT PCR方法检测肺组织中eNOS、iNOS mRNA的表达。结果　CB- DL组肺血管eNOS染色强度较假手术组显著升高 (P<0 .01), 而 iNOS表达在两组间差异无显著性意义 (P>0 .05);CBDL组大鼠肺组织eNOS mRNA的表达较对照组增高 (P<0. 01), 两组iNOS mRNA的相对表达量差异无统计学意义; 相关分析表明, 肺组织中eNOS mRNA水平与肺泡动脉氧分压差 (A- aDO2) 显著相关 (r=0. 920 1, P<0. 01)。结论　HPS时内皮细胞eNOS表达增强可能是肺血管NO增多的主要原因。