鸡形觉剥夺性近视眼后极部巩膜IGF-1R/IGF-2RmRNA的表达

目的：观察鸡形觉剥夺性近视眼后极部巩膜IGF-1R/IGF-2RmRNA表达水平的变化,探讨IGF-1R/IGF-2R在实验性近视眼发生机制中的信号转导作用.方法：孵化1d的白色来亨鸡36只,右眼为遮盖眼,左眼为自身对照眼;测量实验前、单眼遮盖1,2,3wk时遮盖眼和对照眼的屈光度和眼轴长度,并检测不同遮盖时间鸡眼后极部巩膜IGF-1R/IGF-2RmRNA的表达水平.结果：鸡眼后极部巩膜可检测到IGF-1R/IGF-2RmRNA的表达,随着眼球的生长发育其表达水平明显升高;随着遮盖时间的延长,IGF-1R/IGF-2RmRNA在遮盖眼后极部巩膜的表达水平显著升高;遮盖眼后极部巩膜IGF-1RmRNA的表达水平自遮盖1wk起明显高于对照眼;IGF-2RmRNA表达水平则在对照眼与遮盖眼无显著差异.结论：形觉剥夺可能通过上调鸡眼后极部巩膜IGF-1RmRNA表达水平,IGF-1R通过结合IGF并启动下游信息转导途径,从而调控巩膜细胞的增殖和分化,导致近视的发生.     

豚鼠形觉剥夺性近视眼后极部巩膜IGF-Ⅰ/IGF-ⅡmRNA的表达

目的目的观察豚鼠形觉剥夺性近视眼后极部巩膜IGF-Ⅰ/IGF-ⅡmRNA表达的变化,以探讨IGFs与形觉剥夺性近视发生的关系。方法实验用三色豚鼠30只,于出生后第2d,将左眼以半透明眼罩遮盖作为形觉剥夺眼,右眼不做任何处理为对照眼。测量实验前、遮盖4周、遮盖8周时遮盖眼和对照眼的屈光度、眼轴长度。遮盖8周实验结束时,RT-PCR检测后极部巩膜IGF-Ⅰ/IGF-ⅡmRNA的表达水平。结果形觉剥夺使遮盖眼后极部巩膜IGF-Ⅰ/IGF-ⅡmRNA表达升高,与对照眼相比差异有显著性意义（P〈0.05）。结论豚鼠巩膜可以自分泌/旁分泌IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ。形觉剥夺使遮盖眼后极部巩膜IGF-Ⅰ/IGF-ⅡmRNA表达升高,IGFs参与豚鼠形觉剥夺性近视形成中巩膜重塑的过程。     

小鸡形觉剥夺性近视眼后极部巩膜MMP-2与TIMP-2 mRNA表达的动态变化

目的　探讨小鸡形觉剥夺性近视眼 (form deprivationmyopia,FDM )后极部巩膜基质金属蛋白酶 2 (matrixmetalloproteinase 2 ,MMP 2 )及其特异性组织抑制剂 (tissuein hibitorofmatrixmetalloproteinase 2 ,TIMP 2 )mRNA表达的时间动态性变化。方法　 5 0只 1d龄来亨雏鸡以半透明眼罩分别遮盖右眼 4、7、14、2 1、30d制备FDM动物模型 ,每组10只 ,未遮盖眼为自身对照眼 ,并随机选取同数目同龄小鸡作为正常对照眼。实验前及预定实验时间进行视网膜检影验光和眼轴长度测量。摘除眼球 ,提取后极部巩膜总RNA ,采用一步法逆转录 聚合酶链反应检测每组小鸡后极部巩膜MMP 2、TIMP 2mRNA表达水平。结果　与正常组、自身对照组相比 ,FDM后极部巩膜MMP 2mRNA显著增高 ,TIMP 2mRNA表达明显降低 ,组间差异非常显著 (P <0 .0 1)。随遮盖时间延长 ,MMP 2mRNA表达逐渐上调 ,7～ 2 1d达最高峰 ,以后轻度下降 ,但仍维持于一较高水平 ,不同遮盖时间组间差异显著 (P <0 .0 1) ,而TIMP 2mRNA表达与之相反。自身对照组MMP 2mRNA表达较同龄正常对照组有轻度上调趋势 ,TIMP 2有下调趋势 ,但组间均无统计学差异 (P >0 0 5 )。结论　MMP 2 /TIMP 2之间动态平衡失调极可能是启动小鸡FDM巩膜细胞外基质早期主动重塑的关键     

胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸对豚鼠形觉剥夺性近视眼的抑制作用

目的观察豚鼠形觉剥夺性近视眼后极部视网膜胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R）基因表达水平的动态变化,以及IGF-1R反义寡核苷酸玻璃体腔注射对形觉剥夺性近视眼屈光度及眼轴长度的影响,探讨视网膜IGF-1R在实验性近视眼发病中的作用。方法3周龄的三色豚鼠64只,随机均分为8组（每组8只）,A组：单眼遮盖7d;B组：未遮盖7d;C组：单眼遮盖14d;D组：未遮盖14d;E组：单眼遮盖14d后去遮盖7d;F组：未遮盖21d;G组：单眼遮盖14d＋玻璃体腔注射40μg（20μl）IGF-1R正义寡核苷酸;H组：单眼遮盖14d＋玻璃体腔注射40μg（20μl）IGF-1R反义寡核苷酸。检测各组的近视屈光度、眼轴长度以及后极部视网膜IGF-1R mRNA和蛋白质的表达水平。结果遮盖14d后实验眼眼轴明显延长,形成近视,去遮盖7d后,近视屈光度减低,眼轴增长减缓;随着遮盖时间的延长,后极部视网膜IGF-1R表达水平明显上调,去遮盖后,表达水平降低（P=0.000）。形觉剥夺14d后,IGF-1R正义寡核苷酸注射眼的眼轴长度 、近视屈光度以及后极部视网膜IGF-1R表达水平与单纯遮盖组无显著差异（P=0.664,0.797,0.312,0.117）;但IGF-1R反义寡核苷酸注射眼的近视屈光度显著减低,眼轴变短,后极部视网膜IGF-1R mRNA和蛋白质表达水平均明显下调（P=0.000）。结论形觉剥夺能上调豚鼠眼后极部视网膜IGF-1R的表达水平,去遮盖后,豚鼠近视屈光度减低,眼轴增长减缓,后极部视网膜IGF-1R的表达水平下调。利用反义寡核苷酸技术抑制视网膜IGF-1R基因的表达,可以抑制近视的发展。     

大鼠形觉剥夺性近视眼后极部巩膜HPSE mRNA和MMP-2 mRNA表达的时间动态变化

目的 探讨形觉剥夺性近视前后乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)mRNA和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2 mRNA在大鼠后极部巩膜中表达的时间动态变化.方法 采用出生后2～3周的Wistar大鼠30只,随机分成A、B、C 3组,每组10只,右眼分别行单眼眼睑缝合20 d、40 d、60 d,左眼开放作为对照眼.于实验前、后剪取包括视盘在内的约3 mm ×3 mm大小的后极部巩膜,行RT-PCR反应检测HPSE mRNA及MMP-2 mRNA的表达.结果 正常眼后极部巩膜均有HPSE mRNA和MMP-2 mRNA少量表达.形觉剥夺前,HPSE mRNA和MMP-2 mRNA表达组间及组内左、右眼比较,差异均无统计学意义(均为P>005);形觉剥夺后,各组实验眼HPSE mRNA和MMP-2 mRNA表达均较对照眼增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 大鼠在形觉剥夺诱导后实验眼后极部巩膜HPsE mRNA和MMP-2 mRNA表达显著.     

NGF在鸡巩膜中的表达及其与形觉剥夺性近视眼形成的关系

目的探讨神经生长因子(NGF)在鸡形觉剥夺性近视形成中巩膜中的表达和变化情况。方法鸡雏30只,随机分为3组,每组10只,于出生后第2 d将右眼以半透明眼罩遮盖作为遮盖眼,左眼开放作为对照眼。分别遮盖3、7、14d。运用免疫组织化学和原位杂交技术探测NGF蛋白及其mRNA在鸡巩膜软骨细胞中的表达。结果NGF蛋白及其mRNA均表达于巩膜的软骨细胞中尤其在双核细胞中;两者在各时间段遮盖眼巩膜中阳性细胞数均明显高于对照组(P<0.05);免疫组织化学(FDG=20.556P<0.01)和原位杂交(FDG=25.520P<0.01)在对照组(或遮盖组)各组间阳性细胞的表达数目随时间变化明显下降。结论NGF对鸡巩膜软骨层的发育和形觉剥夺性近视的形成密切相关。     

豚鼠形觉剥夺性近视眼巩膜胶原密度变化

目的探讨新生豚鼠形觉剥夺性近视发生时巩膜胶原密度的变化.方法 20只新生花豚鼠随机分成形觉剥夺组(单眼眼睑缝合组)和正常对照组(无处理组),21 d后测量屈光度,眼球冰冻切片行VanGieson氏天狼猩红染色,以锯齿缘为界分别分析前、后部巩膜胶原密度.结果新生豚鼠21 d的形觉剥夺缝合眼后部巩膜胶原密度明显低于对照眼和正常对照组双眼(P＜0.001);前部巩膜胶原密度在形觉剥夺组和正常对照组相比较,差异无统计学意义(P＞0.05);形觉剥夺组缝合眼和对照眼屈光度差值与后部巩膜胶原密度差值呈明显正相关(r=0.866,P＜0.001).结论新生豚鼠眼形觉剥夺性近视时后部巩膜胶原密度减少,影响胶原代谢的机制需进一步研究.     

视黄酸在形觉剥夺性近视眼巩膜中作用的研究

剥夺新生动物视网膜正常成像可导致轴性近视的发生,这种近视称为形觉剥夺性近视(FDM).高度近视形成过程中的眼轴过度延长及巩膜变薄,可能是受局部视网膜信息调控的巩膜细胞外基质(ECM)主动重塑的结果.巩膜主动重塑在眼球生长发育及正视化形成中起重要作用.视黄酸(RA)及其受体在FDM形成中对巩膜基质、软骨层和成纤维细胞层及基质降解相关蛋白酶的改变具有重要调节作用.它可能是调节FDM眼球伸长的信号分子,在巩膜重塑中扮演重要角色.     

视黄酸在形觉剥夺性近视眼巩膜中作用的研究

剥夺新生动物视网膜正常成像可导致轴性近视的发生,这种近视称为形觉剥夺性近视(FDM).高度近视形成过程中的眼轴过度延长及巩膜变薄,可能是受局部视网膜信息调控的巩膜细胞外基质(ECM)主动重塑的结果.巩膜主动重塑在眼球生长发育及正视化形成中起重要作用.视黄酸(RA)及其受体在FDM形成中对巩膜基质、软骨层和成纤维细胞层及基质降解相关蛋白酶的改变具有重要调节作用.它可能是调节FDM眼球伸长的信号分子,在巩膜重塑中扮演重要角色.     

视黄酸在形觉剥夺性近视眼巩膜中作用的研究

剥夺新生动物视网膜正常成像可导致轴性近视的发生,这种近视称为形觉剥夺性近视(FDM).高度近视形成过程中的眼轴过度延长及巩膜变薄,可能是受局部视网膜信息调控的巩膜细胞外基质(ECM)主动重塑的结果.巩膜主动重塑在眼球生长发育及正视化形成中起重要作用.视黄酸(RA)及其受体在FDM形成中对巩膜基质、软骨层和成纤维细胞层及基质降解相关蛋白酶的改变具有重要调节作用.它可能是调节FDM眼球伸长的信号分子,在巩膜重塑中扮演重要角色.     

形觉剥夺性近视中巩膜重塑机制的研究

近视是全球发病率最高的屈光不正,发病机制至今不明。形觉剥夺性近视（FDM）动物模型的建立为近视的病因学研究开辟了新局面。形觉剥夺主要通过“局部视网膜机制”来调控邻近巩膜的生长。外界刺激作用于视网膜,启动视网膜一视网膜色素上皮层一脉络膜信号转导系统,把局部视网膜信号转化为调控巩膜重塑的信号,诱导细胞外基质异常表达,巩膜胶原纤维改变等,引起巩膜重塑。就FDM中不同种属动物间巩膜重塑发生的形态学变化及相关因素等做一综述。     

小鸡形觉剥夺性近视眼巩膜TIMP-2 mRNA表达的时间动态变化

目的 探讨小鸡形觉剥夺性近视眼(FDM)后极部巩膜基质金属蛋白酶2组织抑制剂(TIMP-2)mRNA表达水平的动态变化。方法 取1d龄来亨雏鸡以半透明眼罩分别遮盖右眼4、7、14、21、30d制备FDM动物模型,未遮盖眼为自身对照眼,并随机选取同数目同龄小鸡作为正常对照眼。实验前及预定实验时间进行视网膜检影验光和眼轴长度测量,摘除眼球,提取后极部巩膜总RNA,采用一步法逆转录-多聚酶链反应检测每组小鸡后极部巩膜TIMP-2 mRNA表达水平。结果 与正常组、自身对照组相比,FDM后极部巩膜TIMP-2 mRNA表达明显降低,组间差异非常显著(P<0.01)。随遮盖时间延长其表达降低,7～21d降低最明显,FDM组间差异显著(P<0.01)。自身对照组TIMP-2 mRNA表达水平较同龄正常对照组存在下调趋势,但组间无统计学差异(P>0.05)。结论 后极部巩膜TIMP-2表达抑制极可能作为导致巩膜ECM主动重塑的始发因素之一而参与FDM形成。     

视网膜对形觉剥夺性近视鸡巩膜MMP-2的调控

目的建立鸡形觉剥夺性动物模型,通过观察用庆大霉素破坏小鸡视网膜后,后极部巩膜基质金属蛋白酶Ⅱ(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的变化,探讨视网膜在形觉剥夺性近视(formdeprivation myopia,FDM)发生、发展中的影响作用。方法48只白色来亨鸡(鸡龄2d,SPF级)分为A、B、C、D4组,每组12只,其中A组、B组在第2d即行双眼半透明眼罩遮盖同时行右眼玻璃体内1次注射庆大霉素400μg;C组仅右眼玻璃体内1次注射庆大霉素400μg不予遮盖,左眼不作处理为自身对照;D组不作任何处理,为正常对照组。在第3周末,对全部小鸡行检影验光测屈光度后,将A、C2组鸡处死,迅速摘除双眼球,测量其前后径。并随机取出2只送病理组织切片;B组摘除双眼眼罩后继续饲养3周,在第6周末对B、D2组行检影验光后将其处死,摘除双眼球测量眼球前后径。用7mm直径环钻钻取后极部巩膜组织,研磨离心后取上清液作为标本,对所有标本采用ELISA(即酶联免疫吸附)试剂盒测定MMP-2活性浓度。所有数据经过EXCEL和SPSS统计软件进行处理。结果第3周末,A、B两组双眼屈光度之间均具有显著性差异(P<0·001),C组和D组双眼屈光度间无显著性差异(P=0·088,0·920),且A、B2组与C组双眼屈光度比较均分别具有显著性差异(P<0·001);A组双眼眼轴测量值具有显著性差异(P<0.01),C组双眼眼轴未见显著性差异(P>0.05),A组与C组比较时,右眼眼轴无显著性差异(P>0.05),而左眼间差异具有显著性(P<0.001);第6周末,B组去遮盖后双眼屈光度及眼轴测量值之间均无显著性差异(P>0.05),且与D组比较差异亦无显著性意义(P>0.05),但B组去遮盖前后双眼屈光度之间具有明显显著性差异(P<0.001)。ELISA结果显示,除了A组双眼后级部巩膜MMP-2含量自身对照及与其他各组比较均有显著性差异外(P<0.001),另外3组之间差异均无显著性意义(P>0.05)。结论视网膜色素上皮层在形觉剥夺性近视的发生发展过程中起着非常重要的作用,破坏视网膜色素上皮层能一定程度的减轻近视的发展程度。     

单眼形觉剥夺对豚鼠后极部巩膜整合素β1表达的影响

目的探讨豚鼠形觉剥夺性近视模型中巩膜整合素β1的表达及其与形觉剥夺的关系。方法40只出生后1周花色豚鼠,右眼遮盖作为形觉剥夺组,左眼不作处理作为对照组。遮盖2、4、8周和遮盖8周去遮盖1周后测量屈光度,眼科A超测定眼轴长度;对两组4个时间点眼球后壁行SP法免疫组织化学染色和RT-PCR检测巩膜整合素β1蛋白和mRNA水平的动态变化。结果与对照组相比,形觉剥夺组4个时间点眼球后壁巩膜整合素β1表达明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）,去遮盖1周后,表达上调,但仍低于对照组（P〈0.05）;而对照组间相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;形觉剥夺组和对照组屈光度、眼轴长度比较,差异有显著的统计学意义（P〈0.05）。结论豚鼠形觉剥夺时,后极部巩膜整合素β1表达减少,去遮盖后表达上调,提示整合素β1可能参与了形觉剥夺性近视的发生,其影响巩膜重塑的机制有待进一步研究。     

实验性近视鸡模型眼形态学改变的研究

本实验选用出生当天的彼得逊肉食鸡雏,将实验组右眼睑缝合作为实验眼,左眼为对照眼。于小鸡出生当天检测其屈光状态,用Ａ超测量其前房深度、晶体厚度和眼轴长度,计算玻璃体腔长度。分别于小鸡出生后１５、３０、４５天对小鸡作上述检查后处死实验组、空白对照组各１０只,作病理切片观测鼻、颞侧及后极部巩膜软骨层、纤维层厚度,做相应部位巩膜软骨细胞、双核细胞计数。取４５天小鸡实验、对照眼后极部巩膜做透射电镜切片。结果发现：小鸡被形觉剥夺后,实验眼出现明显轴性近视,眼轴延长主要以玻璃体腔延长为主;后极部巩膜软骨层变厚,纤维层变薄,巩膜软骨基质呈嗜酸性红染,提示有退行性变化。     

VIPmRNA在鸡形觉剥夺性近视眼球后壁组织中的表达

目的:探讨雏鸡高度近视眼眼球后壁组织血管活性肠肽(vasoactiveintestinalpeptide,VIP)mRNA的动态表达及意义。方法:选择出生1d来亨雏鸡共30只,15只右眼遮盖作为实验组,分别持续遮盖1,2和4wk;另15只双眼均未遮盖作为正常对照组。两组均采用检影验光检测屈光度;眼科A超测定活体眼轴长度;对两组3个时间段眼球后壁行RT-PCR检测VIPmRNA的动态表达。结果:实验组由实验前远视眼快速演变为高度近视眼,并随遮盖时间延长,近视度数加深,眼轴延长;两组眼球后壁均有VIPmRNA阳性表达;随出生时间延长两组VIPmRNA表达均逐渐增强。与对照组相比,实验组VIPmRNA表达明显上调(P<0.01)。结论:形觉剥夺可导致高度近视眼;高度近视眼较正常眼VIPmRNA表达明显上调。VIP可能参与了近视眼形成与发展的调控。     

视黄酸在早期形觉剥夺性近视豚鼠后巩膜中的变化

目的检测豚鼠早期形觉剥夺性近视（FDM）眼巩膜中视黄酸（RA）的水平,探讨RA在FDM眼后极部巩膜中的作用。方法3周龄三色豚鼠30只随机分组,正常对照组6只,形觉剥夺15d组和形觉剥夺24d组各12只,左眼用气球头套分别遮盖15d和24d,右眼为自身对照。实验前后均测量屈光度,实验结束后摘除眼球,测量眼轴长,应用高效液相色谱法（HPLC）测定后极部巩膜RA含量。结果形觉剥夺15d组、形觉剥夺24d组动物实验眼诱导出明显的相对近视,且与正常组比较差异有统计学意义（F=23.053,P〈0.05）。形觉剥夺15d组、形觉剥夺24d组实验眼眼轴均长于自身对照眼（P〈0.05）。形觉剥夺15d组、形觉剥夺24d组实验眼巩膜中RA水平较自身对照眼均明显升高（P〈0.01）,但形觉剥夺15d组、形觉剥夺24d组间比较差异无统计学意义（P=0.857）。结论形觉剥夺可诱导近视,且近视程度在早期随时间递增,形觉剥夺眼眼轴增长。豚鼠早期形觉剥夺眼后极部巩膜RA含量增多,但在15～24d时段内差异无统计学意义。