长链非编码RNA MALAT1在肝癌组织中的表达及其在肝癌细胞增殖与侵袭转移中的作用

目的:探讨长链非编码RNA MALAT1在肝癌组织中的表达及意义。方法:用qRT-PCR检测85例肝癌组织及其配对癌旁组织中MALAT1的表达,分析MALAT1的表达与肝癌患者临床病理因素的关系;在肝癌SMMC-7721细胞中分别过表达与敲除基因MALAT1后,通过CCK-8与Transwell实验检测肝癌细胞增殖与侵袭转移能力的改变。结果:MALAT1在肝癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P0.01);MALAT1在肝癌组织中的表达与肿瘤大小、肝癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显有关(均P0.05)。肝癌SMMC-7721细胞过表达MALAT1后增殖、侵袭与转移能力明显增强,而敲低MALAT1后增殖、侵袭与转移能力明显减弱(均P0.05)。结论:MALAT1在肝癌组织中表达上调,MALAT1可促进肝癌细胞增殖、侵袭与转移,故可能与肝癌的发生发展密切相关。     

长链非编码RNA在肝癌中的研究进展

长链非编码RNA(lnc RNA)是一类200~100 000核苷酸长度且无蛋白质编码功能的一类RNA分子。越来越多的证据表明,lnc RNA主要通过在转录、转录后以及表观遗传水平参与基因的表达调控,并以此影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭及转移等过程,与原发性肝癌发生、发展的病理生理机制及患者预后密切相关。原发性肝癌中多种显著异常表达的lnc RNA,有望成为原发性肝癌诊断和预后的新的分子标志物。笔者在简要介绍lnc RNA的基础上,对近年来lnc RNA在肝癌中的研究进展进行综述。     

长链非编码RNA在肝癌中表达谱的变化

目的 观察长链非编码RNA(lncRNA)在正常肝组织及肝癌中表达谱的变化.方法 利用lncRNA芯片技术检测人正常肝脏、肝癌组织LncRNA表达谱的差异,经过对原始数据进行预处理、均一化后,筛选出差异表达LncRNA,进行分析.结果 与正常肝脏组织比较,其中2倍以上变化并且差异有统计学意义(P＜0.05)的lncRNA,认为是差异表达的lncRNA,2倍以上变化的共837条,占所有lncRNA的4.30%;2倍以上升高的共325条;2倍以上降低的共512条;5倍以上升高为共47条;5倍以上降低的共69条;10倍以上升高为共7条;10倍以上降低的共6条.结论 肝癌与正常肝脏组织比较,LncRNA表达谱发生了显著变化,差异性lncRNAs中,可能包括相当一部分的促癌lncRNA和抑癌lncRNA,参与肝癌分子调节机制的关键环节.

Abstract：

Objective To analyze the expression profile variation of long non-coding RNA (IncRNA) in normal hepatic tissue and hepatocellular carcinoma.Methods Use lncRNA microarray technology to inspect the difference of lncRNA expression profile between normal human liver and hepatocellular carcinoma,screen out the lncRNA with differential expression after pretreatment and homogenization of raw data,and make hierarchical clustering and volcano scatter diagram analysis.Results Compare with normal hepatic tissue,and 837 lncRNA which have more than 2 times variation and significant difference (P ＜0.05 ) by statistical analysis are regarded as lncRNA with differential expression,accounting for 4.30% of all IncRNA ;while 325 increase more than 2 times and 512 reduce more than 2 times;47 increase more than 5 times;69 reduce more than 5 times;7 increase more than 10 times;and 6 reduce more than 10 times.Conclusion LncRNA expression profile of hepatoeellular carcinoma changes significantly in comparison with normal hepatic tissue.The different lncRNAs may include a fair proportion of cancer-promoting IncRNA and cancer-inhibiting lncRNA,participating in the critical section of regulatory mechanism in liver cancer molecule.     

长链非编码RNA在肝细胞性肝癌中的作用

肝细胞型肝癌(HCC)是常见的消化系统恶性肿瘤,也是与癌症相关死亡的第三大主要原因,目前缺乏有效的治疗手段.长链非编码RNA (lncRNA)是一种长度超过200个核苷酸的非编码转录本.目前,lncRNA被认为在HCC的增殖、凋亡、转移、耐药及肿瘤干细胞的调节起重要作用.笔者结合该领域的最新研究进展概述了lncRNA的...     

长链非编码RNA肝癌高表达转录本与原发性肝癌关系的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类序列长度大于200nt,缺乏编码蛋白质功能的RNA,其在众多生物学过程中具有重要作用。肝癌高表达转录本(HULC)是在肝癌组织中发现的一种特异性高表达lncRNA。现有研究表明,lncRNAHULC与肝癌及其相关疾病(如病毒性肝炎、肝炎后肝硬化)密切相关,可通过表观遗传调控、增加异常脂质代谢、促进血管生成及上皮-间质转化等机制涉及肝癌的发生、发展及预后;此外,lncRNAHULC还具有成为肝癌诊断标志物及治疗靶点的潜在价值。笔者就lncRNAHULC与原发性肝癌关系的研究进展予以综述。     

长链非编码RNA在肝癌干细胞中的作用研究进展

肝细胞癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一,也是癌症相关死亡的主要原因。HCC中包含一类具有干细胞特性的功能性细胞亚群,称为肝癌干细胞(LCSCs),在HCC的发生和发展中起重要作用。长链非编码RNA(lncRNA)是一类新的基因调控因子,在肿瘤等病理过程和生理过程中发挥着多方面的作用。越来越多的研究结果表明,某些lnc...     

长链非编码RNA GAS8-AS1与微小RNA 135b在肝细胞癌中的表达及临床意义

背景和目的：大量研究表明,长链非编码RNA (lncRNA)与微小RNA (miRNA)及其靶基因之间内源性竞争的调控模式与恶性肿瘤的发生发展密切相关。笔者团队前期通过软件预测发现,lncRNA GAS8-AS1和miR-135b之间存在结合位点,但两者在肝细胞癌（HCC）中是否存在竞争关系及其作用尚不清楚。因此,本研究探讨lncRNA GAS8-AS1和miR-135b在HCC组织中的表达及其临床意义。方法：收集2017年2月—2019年2月在青海大学附属医院行手术切除的110例HCC患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR检测lncRNA GAS8-AS1和miR-135b的表达,分析两者与患者临床病理特征及预后的关系。结果：lncRNA GAS8-AS1在HCC组织中的表达明显低于癌旁组织,而miR-135b在HCC组织中的表达明显高于癌旁组织（均P<0.05）。两者的表达水平均与HCC患者的Edmondson分期、TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况有关（均P<0.05）。lncRNA GAS8-AS1低表达患者与miR-135b高表达患者的3年总生存率分别明...     

长链非编码RNA AK125512在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的 检测长链非编码RNA AK125512 在肝癌、癌旁肝组织中的表达情况,探讨其与临床病理指标的关系及作为预测肝癌患者术后预后标记物的潜在价值。方法从本课题组已完成表达谱芯片（GSE54238）中筛选明显差异表达lncRNA-AK125512,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测lncRNAAK125512在肝癌、癌旁肝组织中的表达;x²检验分析肝癌组织中lncRNA-AK125512表达量与临床病理指标相关性;应用Log-rank检验和COX回归模型分析肝癌组织中lncRNA-AK125512表达量与肝癌患者术后预后的关系。结果lncRNA-AK125512在肝癌组织中较癌旁肝组织明显低表达（P＜0.0001）;肝癌组织中lncRNA-AK125512的表达水平与Edmondson分级（P=0.022）、肿瘤包膜完整与否（P=0.005）、血AFP（P=0.018）明显相关;肝癌组织中lncRNA-AK125512相对低表达患者肝癌切除术后无瘤生存期（P=0.0041）及总体生存期（P=0.0008）均显著缩短。肝癌组织中lncRNA-AK125512相对低表达是影响肝癌患者术后无瘤生存期（P=0.037）、总体生存期（P=0.003）的一个独立危险因素。结论lncRNA-AK125512有望成为预测肝癌患者术后预后的一个新的潜在标记物。     

基因间长链非编码RNA?524346在肝细胞癌中的?表达及临床意义

目的检测基因间长链非编码RNA 524346(long intergenic non-coding RNA 524346,LincRNA 524346)在肝细胞癌患者组织(癌、癌旁)及细胞系(正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2和Huh7)中的表达情况,探讨LincRNA 524346与肝细胞癌临床病理特征的关系。方法应用实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测LincRNA 524346在61例肝细胞癌患者癌组织、配对癌旁组织以及肝癌细胞系的表达水平,分析其与肝细胞癌患者临床病理特征之间的相关性。用受试者工作曲线(receiver operating characteristics,ROC)评价肝细胞癌组织中LincRNA 524346的表达水平在肝细胞癌早期诊断中的效能。结果 LincRNA 524346在83.6%(51/61)肝细胞癌患者的癌组织中较配对癌旁组织表达下调,差异有统计学意义(P0.01);LincRNA 524346的表达水平与肝细胞癌患者的病理分期(P=0.021)、肿瘤数目(P=0.013)、是否合并门静脉癌栓(PVTT)(P0.01)、肝硬化(P=0.005)和微静脉浸润(MVI)(P0.001)具有显著相关性。结论 LincRNA 524346在肝细胞癌组织中表达降低,其有望作为潜在肝细胞癌早期诊断、转移的分子标志物。     

长链非编码RNA MALAT1调控NEAT1对肝细胞癌增殖和侵袭的影响

目的:探索长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录物1(MALAT1)通过调控核富集转录物1(NEAT1)对人肝癌细胞外泌体分泌和肿瘤细胞增殖、侵袭的影响。方法:肝癌细胞HuH-7细胞敲低MALAT1表达(si-MALAT1)转染获得si-MALAT1组细胞,转染无意义的小干扰RNA (si-RNA)作为si-NC组,比较s...     

缺氧诱导的lncRNA AC114803在肝细胞癌中的表达及其作用

背景与目的:缺氧是肝细胞癌(HCC)微环境的关键特征之一.缺氧可诱导编码基因和非编码RNA的表达,从而影响HCC的进展.既往研究发现缺氧反应性长链非编码RNA (lncRNA) AC114803与肾细胞癌预后相关,但其在HCC中尚未见研究.因此,本研究探讨HCC中lncRNA-AC114803表达与缺氧的关系及其功能....     

长链非编码RNA RUSC1-AS1对肝细胞癌恶性生物学行的影响及其与微小RNA-326的关系

背景与目的:有研究表明长链非编码RNARUSC1-AS1(lnc RNARUSC1-AS1)与肿瘤的恶性生物学行为密切相关,但其对肝细胞癌(肝癌)的影响尚不清楚。笔者前期研究显示,lnc RNARUSC1-AS1与微小RNA-326(mi R-326)存在结合位点,因此本研究探讨lnc RNARUSC1-AS1在肝癌中的表达,以及是否通过靶向mi R-326调控肝癌细胞生物学行为。方法:用q RT-PCR检测41例肝癌组织和对应癌旁组织中lnc RNARUSC1-AS1与mi R-326的表达。以lnc RNARUSC1-AS1表达抑制质粒/阴性对照质粒、mi R-326模拟物/阴性对照序列、mi R-326抑制物/阴性对照序列为工具,采用MTT法、Transwell法、流式细胞术、Westernblot法观察接受不同转染处理的MHCC97-H细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力、凋亡以及相关蛋白表达的变化。采用荧光素酶报告实验分析lnc RNARUSC1-AS1和mi R-326的靶向关系,并用q RT-PCR验证。结果:与癌旁组织比较,肝癌组织中lnc RNARUSC1-AS1表达水平明显升高,mi R-326表达水平明显降低(均P0.05)。转染lnc RNARUSC1-AS1表达抑制质粒或mi R-326模拟物后,肝癌MHCC97-H细胞的增殖能力以及迁移与侵袭能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,cyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平明显降低,P21、Bax蛋白表达水平明显升高(均P0.05)。MHCC97-H细胞转染lnc RNARUSC1-AS1表达抑制质粒的同时mi R-326抑制物,前者对MHCC97-H细胞以上作用被取消(均P0.05)。双荧光素酶报告实验及q RT-PCR验证结果显示,mi R-326为lnc RNARUSC1-AS1的靶分子。结论:lnc RNARUSC1-AS1在肝癌中表达上调,其可通过靶向调控mi R-326的表达促进肝癌细胞的恶性生物学行。     

长链非编码RNA LINC00313与miR-342-3p/膜联蛋白A2轴在肝细胞癌细胞中的作用与机制

背景与目的 肝细胞癌（HCC）是造成癌症相关性死亡的常见原因之一,研究表明长链非编码RNA（lncRNA）调控微小RNA（miRNA）的表达,进而通过抑制靶mRNA翻译或促进mRNA降解来参与肿瘤发生及进展过程。LINC00313作为一种具有致癌活性的lncRNA参与肿瘤发生及进展过程;膜联蛋白A2（ANXA2）在包括HCC的多种恶性肿瘤中表达上调,促进恶性表型的发生,并可能受上游miR-342-3p的调控。因此,本研究探讨LINC00313、miR-342-3p、ANXA2在HCC细胞中的表达及其相互关系。方法 用qRT-PCR与Western blot检测人肝实质细胞及HCC细胞系（Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7）中LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达。将体外培养的Li-7细胞分为空白对照组（无处理）、LINC00313 siRNA组（转染LINC00313 siRNA）、miR-342-3p模拟物组（转染miR-342-3p模拟物）、共转染阴性对照组（转染阴性siRNA序列与阴性miRNA序列）、共转染组（转染LINC00313 siRNA及miR-342-3p抑制物）,用qRT-PCR与Western blot检测各组细胞LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达;MTT实验及平板集落形成实验检测各组细胞增殖;进行TUNEL染色检测各组细胞凋亡;Transwell侵袭及Western blot分别检测各组细胞侵袭数目及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白波形蛋白（vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达;免疫荧光染色检测各组细胞Bcl-2关联X蛋白（Bax）/B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）;双荧光素酶报告实验分析Li-7细胞中LINC00313对miR-342-3p、miR-342-3p对ANXA2的靶向调控。建立皮下裸鼠异种移植瘤模型,验证LINC00313沉默对Li-7细胞体内生长的影响。结果 与人肝实质细胞比较,Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7细胞的LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显升高,而miR-342-3p表达均明显降低（均P<0.05）。与对照组比较,LINC00313 siRNA组、miR-342-3p模拟物组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显降低（P<0.05）,miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（均P<0.05）;与LINC00313 siRNA组比较,共转染组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显升高,而miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显降低（均P<0.05）。Li-7细胞中,LINC00313可靶向下调miR-342-3p表达,miR-342-3p可靶向下调其ANXA2表达（均P<0.05）。体内实验结果显示,与无处理的Li-7细胞移植瘤比较,LINC00313敲低的Li-7细胞移植瘤的体积与质量均明显降低,肿瘤组织中LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显降低,而miR-342-3p表达明显升高（均P<0.05）。结论 LINC00313在HCC细胞中的表达上调,LINC00313可能通过抑制miR-342-3p而增加后者靶基因ANXA2的表达,进而促进HCC细胞的恶性表型。     

IFITM3在原发性肝癌中的表达及其对MMP-9调控效应

目的:探讨干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)在原发性肝癌中的表达及作用。方法:用免疫组化与Western blot检测60例肝癌组织及对应癌旁组织中IFITM3以及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达;构建IFITM3小干扰RNA片段(psilencer3.1-sh IFITM3)转染肝癌Hep G2细胞,用实时荧光定量PCR及Western blot法、CCK8法、Transwell试验和划痕试验分别检测细胞转染后IFITM3和MMP-9 m RNA及蛋白表达、增殖能力以及侵袭与迁移能力的变化。结果:与癌旁组织比较,肝癌组织中IFITM3与MMP-9的蛋白的阳性表达率与表达量均明显升高(81.67%vs.13.33%;88.33%vs.8.33%,均P0.05);psilencer3.1-sh IFITM3转染后,Hep G2细胞IFITM3和MMP-9的m RNA与蛋白表达水平、细胞增值率均明显降低,穿膜细胞数明显减少,划痕融合速率明显减慢。以上定量指标间的差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:原发性肝癌中IFITM3表达增高,高表达的IFITM3可能通过调控MMP-9的表达而促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

肝细胞癌自噬相关长链非编码RNA预后模型的建立与分析

背景与目的:肝细胞癌(HCC)是常见的原发性肝癌,其预后较差。自噬的失调可以促进HCC的发生与进展,本研究旨在分析自噬相关长链非编码RNA(lnc RNA)在HCC患者中的潜在预后作用,并构建自噬相关lnc RNA风险预测模型。方法:利用生物信息学方法分析TCGA数据库中374例HCC及50例正常对照样本的转录组数据及临床资料,从HADb网站获取自噬基因列表。采用Person相关性分析筛选与自噬基因相关的lnc RNA,采用R软件caret程序包将筛选后的342例HCC样本按70%与30%的比例随机分为训练集及验证集,在训练集中采用Kaplan-Meier法及单因素Cox回归分析筛选出具有预后意义的lnc RNA,随后采用多因素Cox回归分析筛选具有独立预后意义的自噬相关lnc RNA,建立构建预后模型。使用多因素Cox回归系数计算风险评分,将患者分为低风险组和高风险组,分析算风险评分与HCC患者临床特征及总体生存的关系,并使用验证集加以验证。结果:347个lnc RNA鉴定为自噬相关lnc RNA(|R~2|0.3,P0.001),其中26个lnc RNA对HCC患者具有预后价值(均P0.05)。多因素Cox回归分析得到基于12个自噬相关lnc RNA(CYTOR、DANCR、LINC01138、LUCAT1、MAPKAPK5-AS1、NRAV、NRSN2-AS1、LINC01871、LINC00864、LINC02362、TMEM220-AS1和PSMB8-AS1)的预测患者预后的风险模型。高风险组HCC患者总生存期明显低于低风险组HCC患者(P0.05)。12-自噬相关lnc RNA预后模型评分与肿瘤分级、肿瘤分期和T分期有关(均P0.05),与患者的年龄、性别无明显关系(均P0.05)。在训练集中该预后模型的1、3、5年生存的时间依赖性ROC曲线的曲线下面积(AUC)分别为0.801,0.819和0.787,在验证集中其1、3、5年生存的时间依赖性ROC曲线的AUC分别为0.694、0.733和0.746。结论:所筛选的自噬相关lnc RNA在HCC的肿瘤生物学中可能起关键作用,12-自噬相关lnc RNA的模型对HCC具有预后判断价值。     

DIP在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨死亡诱导蛋白(DIP)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与肝癌临床病理特征之间的关系.方法:运用RT-PCR免疫组化分别检测DIP在40例HCC及其癌旁组织中的表达情况,并分析DIP蛋白表达与HCC临床病理特征之间的相关性;应用RT-PCR检测人正常肝细胞株LO2和HCC细胞Hep3B,HepG2,SMMC-7721中DIP mRNA的表达.结果:DIP mRNA及蛋白在肝癌组织中的表达明显高于其癌旁组织(均P＜0.05);DIP蛋白高表达与较大肿瘤体积、高Edmonson分级和高TNM分期有关(r=0.419,0.414,0.531;均P＜0.05);人HCC细胞株Hep3B,HepG2,SMMC-7721中DIP mRNA的表达均较正常肝细胞株LO2明显增高(均P＜0.05).结论:HCC组织中DIP表达上调,且这种表达上调与HCC的恶性病理特征相关.     

NRAGE在小肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨NRAGE在小肝细胞癌中的表达情况及其临床意义。方法:采用免疫组化技术检测160例原发性小肝细胞癌组织及配对癌旁非癌组织中NRAGE的表达,分析NRAGE表达与小肝细胞癌患者临床病理指标及预后的关系。结果:NRAGE在小肝细胞癌组织中阳性表达率明显高于配对癌旁组织(63.13%vs.14.38%,P0.05)。NRAGE表达增高与患者年龄、术前AFP水平、完整包膜和复发密切相关(均P0.05)。单因素分析显示,微血管癌栓、术前AFP水平、子灶、完整包膜、复发、浆膜浸润、巴塞罗那分期、分化程度和NRAGE表达是小肝细胞癌患者的预后影响因素(均P0.05)。多因素分析结果显示,NRAGE表达与微血管癌栓、术前AFP水平、复发、巴塞罗那分期是影响小肝细胞癌患者预后的独立危险因素(均P0.05)。NRAGE高表达小肝细胞癌患者5年生存率明显低于低表达患者(35.63%vs.54.23%,P0.05)。结论:NRAGE在小肝细胞癌组织中表达增高,NRAGE高表达患者预后差。