大鼠羊膜上皮细胞移植对损伤脊髓生长相关蛋白43表达的影响

目的:探讨羊膜上皮细胞(AECs)移植对大鼠损伤脊髓生长相关蛋白43(GAP-43)表达和神经功能恢复的影响.方法: 取E12d～14d的SD大鼠AECs体外培养;改良-Allen撞击法制备大鼠脊髓损伤(SCI)模型,并随机分成假手术组、SCI+生理盐水对照组和SCI+AECs移植组;分别于术后第1、3、7、14和28天通过BBB 神经行为学评分法对神经功能进行评估,观察其恢复状况,并采用免疫组织化学和免疫印迹法检测脊髓组织GAP-43表达的变化.结果: GAP-43的表达于脊髓损伤后第7天显著增加,AECs移植后损伤脊髓中的GAP-43持续高表达至第28天,而盐水对照组的表达于术后14d左右逐渐恢复至正常水平.与盐水对照组相比较,AECs移植后2～4周脊髓损伤大鼠的后肢运动功能得到一定的改善.结论: AECs移植后可使损伤大鼠脊髓GAP-43的表达增高,并在一定程度上促进了大鼠后肢运动功能的恢复.     

人羊膜上皮细胞静脉移植治疗大鼠心肌梗死

背景：人羊膜上皮细胞在体外适当诱导条件下可分化为心肌样细胞,可望成为细胞心肌成形术的种子细胞,但在心肌梗死原位是否能分化成心肌细胞值得探讨。 目的：探讨人羊膜上皮细胞移植在心肌梗死原位的分化及对心肌梗死后心室重构和心功能的影响。 方法：用胰酶消化分离人羊膜上皮细胞,行流式细胞仪检测和免疫组化染色以鉴定其表型特征。结扎SD大鼠左冠状动脉前降支以建立心肌梗死模型,实验分为人羊膜上皮细胞移植组、模型组及假手术组,人羊膜上皮细胞移植组于造模后1周经舌下静脉移植Brdu标记的人羊膜上皮细胞。移植后1,4,6周采用超声心动图检查心功能变化,应用苏木精-伊红和Masson染色观察心肌重构的变化,以免疫荧光双染色法检测人羊膜上皮细胞在心肌梗死区的植活与分化。 结果与结论：①所分离的人羊膜上皮细胞表达CD29、CD166、CD73和CK19,不表达CD44、CD34、CD45、CD80、CD86和HLA-DR。②人羊膜上皮细胞移植后6周,心肌梗死区仍可见Brdu标记的阳性细胞,表达心肌特异蛋白连接蛋白43、α-辅肌动蛋白和结蛋白。③移植组大鼠左心室纤维化程度明显低于模型组。④移植组大鼠射血分数、左室短轴缩短率显著高于模型组(P < 0.01);舒张期左室前壁厚度和收缩期左室前壁厚度也显著大于模型组(P < 0.05)。提示人羊膜上皮细胞在心肌梗死原位可分化为心肌细胞,可减缓心室重构并改善心脏功能。     

人羊膜上皮细胞移植修复兔臂丛神经损伤

背景：目前人们把目光多集中在干细胞修复脊髓损伤方面,而对于干细胞移植治疗周围神经损伤的研究却不多,尤其人羊膜上皮细胞修复治疗周围神经损伤的研究和报道更少。 目的：探讨人羊膜上皮细胞对臂丛神经的修复作用。 方法：应用测力神经根拉钩水平牵拉臂丛神经根的方法制备大白兔臂丛损伤模型,提取人羊膜上皮细胞并扩增培养,扫描电子显微镜下观察人羊膜组织及羊膜上皮细胞的超微结构,人羊膜上皮细胞转染绿色荧光蛋白标记并注射入臂丛神经损伤区,苏木精-伊红染色及荧光显微镜观察羊膜上皮细胞对兔臂丛神经损伤的修复作用。 结果与结论：①分离得到的人羊膜上皮细胞表达上皮细胞标志物角蛋白CK19,不表达间充质细胞标志物波形蛋白,不同程度表达CD29,CD73。扫描电子显微镜观察到人羊膜上皮细胞胞体饱满,连接紧密,细胞状态良好。②人羊膜上皮细胞移植到新西兰大白兔臂丛神经损伤模型后18周,免疫荧光检测到神经损伤区可见有表达绿色荧光蛋白的羊膜上皮细胞。③术后6周实验组大白兔前爪功能开始恢复,术后12,18周实验组大白兔前爪功能得到明显改善,功能评分明显提高,对照组几乎没有恢复。以上结果可见人羊膜上皮细胞参与了臂丛神经损伤的修复。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

人结膜上皮细胞在不同浓度甘油羊膜表面负载培养的研究

目的　比较人结膜上皮细胞接种培养在不同浓度的甘油保存液、不同保存温度及不同保存时间羊膜上的差异。方法　将传代培养的第 2代结膜上皮细胞分别接种在纯甘油及 5 0 %甘油 (DMEM或平衡盐液∶甘油 =1∶1 )保存的羊膜表面 ,观察其体外培养情况。结果　纯甘油保存的羊膜组结膜上皮细胞 48h后即贴壁 ,且生长旺盛 ,而 5 0 %甘油短期保存羊膜组结膜上皮细胞不能贴壁生长。结论　经纯甘油保存的羊膜接种结膜上皮细胞易贴壁生长 ,而采用 5 0 %甘油短期保存 ,则因羊膜上皮尚未脱落 ,而导致接种的结膜上皮细胞不易贴壁生长     

甲强龙、电针联合羊膜上皮细胞移植对损伤脊髓神经纤维再生及功能恢复的影响

目的:探讨甲强龙(MP)、电针与羊膜上皮细胞(AECs)移植联合治疗对脊髓损伤(SCI)后大鼠神经纤维再生和功能恢复的作用.方法:成年雌性Wistar大鼠随机分成5组,SCI对照组、甲强龙组、MP+华佗夹脊穴电针组、MP+电针+AECs组和假手术组.各组术后30d神经丝蛋白行(NF)、5-羟色胺(5-HT)和降钙素基因相关肽(CGRP)免疫荧光组织化学观察以及神经电生理检测.结果:MP+电针+AECs组损伤区可见大量有序的NF、5-HT和CGRP阳性神经纤维,其中5-HT阳性纤维假手术组比例高于CGRP阳性纤维所占比例;神经电生理检测显示该组与其他损伤组比较感觉诱发电位与运动诱发电位的峰-峰值增加,潜伏期明显缩短,差异有统计学意义,其中运动诱发电位恢复程度优于感觉诱发电位.结论:甲强龙、电针联合AECs移植治疗脊髓损伤促进了神经纤维的再生和大鼠后肢功能的恢复.     

人羊膜上皮细胞移植急性肝损伤小鼠的定量效果分析

背景：目前已有较多关于人羊膜上皮细胞移植入动物体内的存活、迁徙及相关特性的初步研究,但其对移植效果的定量分析尚未见报道。 目的：对脾内移植传代的人羊膜上皮细胞小鼠血清肝生化功能及人血白蛋白的定量分析。 方法：40只裸小鼠随机分为4组,每组各10只。肝叶切除+细胞移植2周组、肝叶切除+细胞移植4周组、肝叶切除+盐水组,行半肝叶切除,肝叶切除+细胞移植组自脾下极移植密度为5×106传代的人羊膜上皮细胞约0.2 mL,分别于移植后2周和4周采血;肝叶切除+盐水组自脾下极注射生理盐水0.2 mL;单纯细胞移植组：不行肝叶切除,自脾下极移植密度为5×106传代的人羊膜上皮细胞约0.2 mL。检测其各组肝脾组织学、形态学的改变及各组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、人血白蛋白的变化和人血白蛋白表达定量分析。 结果与结论：人羊膜上皮细胞移植急性肝损伤小鼠4周后肝脾形态未见明显改变,组织学可检测到特异性细胞,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、人血白蛋白有明显改善,血清中能检测到人血白蛋白且移植后4周较移植后2周有明显升高。因此,人羊膜上皮细胞移植入肝受损小鼠体内能存活超过4周且仍表达肝细胞样细胞的部分特性及功能,改善小鼠的肝功能,治疗小鼠急性肝损伤。     

人羊膜上皮细胞的诱导分化

目的:建立体外培养及标记人羊膜上皮细胞(HAECs)的方法并应用原子力显微镜(AFM)从细胞形貌变化上探讨人羊膜上皮细胞向角膜上皮细胞转分化的可视性研究。方法:取足月产人羊膜,采用酶消化法获得HAECs进行原代和传代培养,对培养的细胞进行形态学观察和鉴定;HAECs与兔角膜基质细胞共培养2周,采用CK3+12免疫荧光细胞化学染色鉴定诱导后的细胞;应用AFM分别对共培养前后的人羊膜上皮细胞的表面超微结构进行观察,并与人角膜上皮细胞(HCECs)对比,分析细胞形貌的变化。结果:HAECs体外培养呈铺路石样外观,核/质比率小,连接成片。细胞形态为多角形,角蛋白keratin表达阳性,不表达CK3+12;免疫荧光显示共培养2周的HAECs表达CK3+12;AFM观察,共培养2周后HAECs细胞核中央由山谷样外观转变成类似HCECs的山峰样外观。结论:HAECs可成功进行原代和传代培养,在兔角膜基质细胞诱导培养条件下可向角膜上皮细胞转分化。     

纤维蛋白支架上人羊膜上皮细胞的培养

目的：观察人羊膜上皮细胞（HAEC）能否在体外构建的纤维蛋白支架上良好生长。 方法： 体外构建的纤维蛋白支架，采用倒置显微镜观察，吉姆萨（Giemsa）染色和扫描电子显微镜，观察人羊膜上皮细胞在纤维蛋白支架上生长情况。 结果： 人羊膜上皮细胞在纤维蛋白支架上生长良好，细胞间相互有伪足等多种形式的接触。 结论： 体外构建的纤维蛋白支架与羊膜上皮细胞有组织相容性，纤维蛋白支架可能作为人羊膜上皮细胞的生长载体和胎膜破口的修复材料。     

羊膜移植联合睑内翻矫正术治疗眼表及眼睑烧伤的临床观察

目的 探讨羊膜移植联合睑内翻矫正术治疗眼表及眼睑烧伤患者的临床效果。方法 选取于我院行手术治疗的化学或热烧伤致眼表损伤及下眼睑内翻的80例患者为研究对象,所有患者均接受羊膜移植联合睑内翻矫正术治疗。患者于术前、术后8周分别进行裂隙灯显微镜检查并拍照;比较患者术前、术后8周视力变化情况、泪膜破裂时间以及血清血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子β1(TGF-β1)、胰岛素生长因子1(IGF-1)水平;术后8周,采集中央角膜和角膜缘的脱落上皮细胞,采用PAS染色及免疫荧光染色进行分析。结果 术后8周,患者眼表状况恢复良好,眼睑内翻成功矫正,患者视力显著优于术前（P<0.05）。与术前比较,术后8周患者泪膜破裂时间显著延长（P<0.05）,血清VEGF、TGF-β1、IGF-1水平显著升高（P<0.05）。PAS染色显示中央角膜及角膜缘无杯状细胞;免疫荧光染色显示细胞角蛋白12(CK12)在角膜上皮细胞中高表达,在角膜缘上皮靠近角膜侧的细胞中低表达。结论 羊膜移植联合睑内翻矫正术治疗眼部烧伤效果显著,可促进患者眼表修复,矫正眼睑内翻,改善术后视力,实现角膜干细胞的自体扩...     

Engraftment of bone marrow-derived epithelial cells

The long-held concept that transplanted bone marrow (BM)-derived cells contribute only to cells of the hematopoietic system was challenged by data from our laboratory showing that a single male BM-derived cell could not only reconstitute the hematopoietic system of an irradiated female recipient, but could also lead to the generation of mature BM-derived epithelial cells in the liver, lung, skin, and gastrointestinal tract. Careful costaining and single-cell analyses have been used to rule out false positive cells due to inadequate detection techniques in microscopy or cell overlay. Since this initial discovery, we have sought to understand the mechanisms underlying the formation of BM-derived epithelial cells, and to evaluate their therapeutic use for gene therapy and/or tissue regeneration. Several reports have shown that donor BM-derived cells, possibly macrophages, can fuse with existing host epithelial cells to form heterokaryons that express both donor and tissue-specific markers. While this is certainly true for murine tyrosinemia models, we have used a Cre-lox system to demonstrate that fusion is not a requirement for the generation of BM-derived epithelial cells and is likely not responsible for the BM-derived epithelial cells generated after standard BM transplantation. In a proof of principal experiment for potential gene therapy applications, we have shown that autologous BM-derived cells transfected with a transgene prior to BM transplantation are able to develop into mature type-II pneumocytes that express the transgene. We also discuss future research directions in the field and the therapeutic potential of BM-derived epithelia, including ongoing work to test whether combined cell and gene therapy can be used therapeutically in preclinical mouse models of human disease.     

人羊膜上皮细胞体外培养重建角膜上皮的实验研究

目的: 探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells, HAECs)诱导分化为角膜上皮细胞的可塑性及其重建角膜上皮的可行性。方法: 取足月产人羊膜,通过胶原酶、胰蛋白酶和EDTA消化获得HAECs,将细胞在体外培养扩增、传代,将2~3代HAECs接种于去上皮的兔角膜基质上培养,待HAECs融合形成单层后,置于插入式培养皿中进行气液界面培养14 d。对角膜基质上培养的HAECs用光镜、扫描电镜和透射电镜进行形态学及超微结构观察,以及细胞角蛋白(CK)3/12的免疫组织化学检测。结果: HAECs可在角膜基质上生长,培养1~2 d可形成单层,气液界面培养14 d可形成4~5层细胞的复层上皮,扫描电镜观察细胞表面有丰富的微绒毛,透射电镜下可见上皮细胞之间有桥粒连接,免疫组化检测复层细胞表达CK3/12,所形成的复层结构与正常角膜上皮相似。结论: HAECs有可能作为种子细胞用于组织工程角膜上皮重建。     

人羊膜上皮细胞的干细胞特性

背景：研究发现人羊膜上皮细胞具有类似胚胎干细胞或多能干细胞的多向分化潜能,说明其可能是未来组织工程重建的一种新型种子细胞。 目的：研究体外培养的人羊膜上皮细胞的干细胞特性。 方法：取足月剖宫产的人羊膜组织,经酶消化法和差异黏附法获得纯度高的人羊膜上皮细胞,接种于含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中进行原代和传代培养,用免疫荧光法和流式细胞仪检测法检测人羊膜上皮细胞表面胚胎干细胞的表面标记蛋白OCT-4和干细胞表面分子标记CD29、CD34、CD44、CD45、CD105的表达。 结果与结论：人羊膜上皮细胞在体外培养条件下呈上皮细胞特有的铺路石样外观,其胞浆中有OCT-4免疫荧光表达,其干细胞标记分子CD29、CD34的表达是阳性,但干细胞标记分子CD44、CD45、CD105的表达为阴性。结果表明人羊膜上皮细胞具有干细胞的某些特性,其可能是未来组织工程重建的一种新型种子细胞。     

Anticancer effects of human amniotic membrane and its epithelial cells

Anticancer property of the amniotic membrane, the innermost layer of fetal membrane, was previously hypothesized. The recent reports confirmed the published hypotheses and developed new hypotheses in this context. Based on some evidences, it is hypothesized that inducing of apoptosis in cancer cells is originated from amniotic epithelial cells and cancer cell cycle arrest arises from amniotic mesenchymal cells. We also hypothesized here that apoptosis and cell cycle arrest in cancer cells induced by amniotic membrane arise from release of soluble factors from amniotic cells.     

人羊膜上皮细胞上清液对人肝癌BEL-7402细胞的体外抗肿瘤作用

目的探讨人羊膜上皮细胞(h AECs)上清液对体外培养的肝癌细胞系BEL-7402细胞迁移、增殖与凋亡的影响。方法 BEL-7402细胞随机分为5组,其中对照组不加h AECs上清液,其余4组加入体积分数分别为6.25%、12.5%、25%和50%的h AECs上清液作用24 h后,通过划痕实验、MTT试验和流式细胞术检测BEL-7402细胞迁移、增殖和凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达量。结果 h AECs上清液能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞迁移、增殖并诱导凋亡(P0.05);25%和50%h AECs上清液组BEL-7402细胞caspase-3和caspase-8蛋白的切割片断蛋白定量明显高于对照组(P0.05)。结论 h AECs上清液对体外培养的BEL-7402细胞具有一定的抗肿瘤作用。     

米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8表达的影响

目的观察米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8（AQP8）表达的影响,探讨药物调控羊膜上皮细胞AQP8表达的可行性。方法将体外培养的人羊膜上皮WISH细胞分为不同浓度米非司酮作用48h组和单一浓度米非司酮作用不同时间组,前者培养基中分别加入终浓度为0．1、1、5、10、15μmol／L的米非司酮,培养48h;后者培养基中加入终浓度为10μmol／L的米非司酮,分别培养6、12、24、36、48h,同时2组均设加入含0．01％二甲基亚砜（DMSO）完全培养液的对照组。采用免疫荧光细胞化学方法检测10μmol／L米非司酮作用48h后细胞AQP8蛋白的分布;RT-PCR和蛋白质印迹技术分别检测不同浓度米非司酮作用组和米非司酮作用不同时间组各组细胞AQP8mRNA和蛋白的表达水平。结果免疫荧光细胞化学检测显示,米非司酮作用后WISH细胞细胞质内及细胞膜上AQP8蛋白黄绿色荧光信号较对照组均明显减弱。在不同浓度米非司酮作用组中,除0．1μmol／L组外,其余各组细胞的AQP8mRNA和蛋白表达水平分别与对照组相比均明显减弱（均p〈0．01）,而0．1、1、5、10μmol／L组细胞的AQP8mRNA表达水平和1、5、10μmol／L组细胞的AQP8蛋白表达水平分别与15pmol／L组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。在米非司酮作用不同时间组中,除6h组外,其余各组细胞的AQP8mRNA和蛋白表达水平分别与对照组相比均明显减弱（均P〈0．01）,而6、12、24、36h组细胞的AQP8mRNA和蛋白表达水平分别与48h组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论米非司酮对人羊膜上皮细胞AQP8mRNA和蛋白的表达具有抑制作用。