贵金属烤瓷合金与高糖对细胞外液炎性因子的影响

背景：前期研究中发现高糖与烤瓷合金浸提液对小鼠成纤维细胞L-929的增殖存在交互效应。 目的：观察3种贵金属烤瓷合金与高糖对小鼠成纤维细胞L-929中白细胞介素6水平的影响。 方法：采用两因素析因设计实验研究不同糖浓度(11.1,22.2,33.3 mmol/L)下,89%金合金、74%金合金及银钯合金贵金属烤瓷合金浸提液,分别与小鼠成纤维细胞L-929体外共培养24h后,细胞外液中白细胞介素6水平的变化,并设未加入合金材料的空白对照为阴性对照组。 结果与结论：两因素析因设计分析结果表明,贵金属烤瓷合金浸提液的主效应有统计学意义(P=0.001),其中74%金合金与银钯合金白细胞介素6水平低于阴性对照组(P=0.004,0);糖浓度的主效应也有统计学意义(P=0.005), 33.3 mmol/L糖浓度组白细胞介素6水平低于11.1 mmol/L(正常)糖浓度组(P=0.001)。但贵金属烤瓷合金浸提液与糖浓度两因素对小鼠成纤维细胞L-929细胞外液中白细胞介素6水平的影响无交互作用(P=0.33)。     

不同牙科烤瓷合金材料诱导小鼠成纤维细胞DNA损伤的研究

研究不同牙科烤瓷合金材料诱导小鼠成纤维细胞(L929细胞)DNA的损伤情况,评价各种合金材料的遗传毒性.选择镍铬合金、钛合金、钴铬合金和金合金4种牙科烤瓷合金材料,制备4种合金材料的浸提液,用浸提液培养L929细胞.采用单细胞凝胶电泳(彗星试验)方法检测细胞DNA的损伤情况,镍铬合金和钛合金对细胞DNA损伤等级主要为重度损伤,钴铬合金组和金合金组的DNA损伤等级分别为中度损伤和轻度损伤.4种合金组彗星细胞的尾长、尾矩和Olive尾矩数值之间的差异具有统计学意义(P<0.05). 不同牙烤瓷合金材料诱导L929细胞DNA损伤的情况表现不同.金合金的遗传毒性性能优于镍铬合金、钛合金和钴铬合金,是具有良好生物学性能的牙科烤瓷合金材料.     

三种比色法评价4种牙科金属材料对L-929细胞的毒性

背景：采用不同方法评价材料的细胞毒性可能会得出不同的实验结果。 目的：采用3种比色法评价镍铬合金、钴铬合金、3铬13及纯钛等牙科金属材料对小鼠成纤维细胞(L-929细胞)的细胞毒性。 方法：以镍铬合金、钴铬合金、3铬13及纯钛4种牙科金属材料的浸提液分别作用于体外培养的L-929细胞24,72 h。以体积分数10%小牛血清+高糖DMEM培养液培养的L-929细胞为阴性对照组,以0.7%丙烯酰胺+体积分数10%小牛血清+高糖DMEM培养液培养的L-929细胞为阳性对照组,分别采用MTT、CCK-8及结晶紫3种比色法检测上述材料的细胞毒性。 结果与结论：①4种材料浸提液中培养的细胞形态正常,胞内结构清晰,随着培养时间延长细胞大量增殖,与阴性对照组细胞形态无明显差异。阳性对照组细胞数量明显减少,形态完整性受破坏,形成大量细胞碎片。②培养24 h时,CCK-8比色法检测中钴铬合金组的细胞相对增殖率低于阴性对照组(P < 0.05),MTT及结晶紫比色法检测中钴铬合金组的细胞相对增殖率与阴性对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05);培养72 h时,MTT比色法检测中4种牙科金属材料组细胞相对增殖率低于阴性对照组(P < 0.01),CCK-8及结晶紫比色法检测中4组的细胞相对增殖率与阴性对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05),但材料细胞毒性均为0-1级。表明上述4种牙科金属材料细胞毒性均在临床应用的允许范围内,具有良好的生物安全性。     

钴合金和钛合金的细胞毒性研究

对植入材料磨损态的Co-29Cr-5Mo(CCM)和Ti-6Al-4V(Ti64)的细胞毒性进行研究。与固溶态相比,在完全培养液中,通过噻唑蓝(MTT)法研究两种合金在不同浸提浓度、不同浸提时间下的材料浸提液对小鼠成纤维细胞(L929)的毒性及影响机制。扫描电子显微镜(SEM)观察腐蚀前后材料表面的变化,ICP发射光谱仪(ICP-MS)检测CCM和Ti64合金中主要金属离子的释放,电化学工作站(CHI760E)表征两种磨损态合金在完全培养液中的腐蚀情况。MTT实验结果表明:磨损态的两种合金随材料浸提浓度和时间的增大,细胞的相对增殖率(RGR)均减小,其中CCM的RGR由98.36%减小至73.28%,细胞毒性由0级升至2级;Ti64的RGR减小至85.86%,细胞毒性升至1级。ICP-MS结果表明,磨损态合金有害离子的释放量随着浸提时间不断上升,浸提至168 h时,磨损态CCM合金Co和Cr释放量分别高达1 249.7和293.9 μg/L;磨损态Ti64合金Al和V释放量分别为30.7和19.7 μg/L。CCM的Tafel曲线和SEM分析表明,在完全培养液中,CCM表面化学位较高的棱、尖角以及微米级沟壑位置发生了缝隙腐蚀,造成金属离子的释放,并对L929细胞的生长和分裂产生抑制作用。     

新型医用无镍不锈钢的生物相容性评价

背景：BIOSSN4无镍不锈钢是一种奥氏体医用不锈钢材料,在中国药品生物制品检定所通过了标准的溶血实验、细胞毒性实验和致敏实验。 目的：评价新型医用BIOSSN4无镍不锈钢的体外细胞毒性及抗腐蚀性。 方法：将小鼠L929成纤维细胞悬液以1×108 L-1的浓度接种于96孔板,分5组培养,分别加入BIOSSN4无镍不锈钢浸提液、316L不锈钢浸提液、金合金浸提液、铅材料浸提液(阳性对照)及RPMI1640培养液(阴性对照)。培养1,2,3 d,观察细胞形态,采用MTT法检测各组吸光度值,计算细胞相对增殖率,评价毒性分级。在模拟口腔环境中,检测BIOSSN4无镍不锈钢、316L不锈钢及金合金的自腐蚀电位、自腐蚀电流密度及极化电阻。 结果与结论：培养3 d内,铅材料浸提液组细胞皱缩,细胞数量明显减少,细胞相对增殖率低于其余4组(P < 0.05);其余4组细胞形态良好,增殖旺盛,细胞相对增殖率均在75%以上。BIOSSN4无镍不锈钢浸提液、316L不锈钢浸提液与金合金浸提液的毒性均为1级,铅材料浸提液的毒性为2至3级,表明BIOSSN4无镍不锈钢具有良好的生物相容性。BIOSSN4无镍不锈钢的抗腐蚀性高于316L不锈钢,低于金合金。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

4种烤瓷冠基底合金浸提液影响人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax的表达

背景：研究显示,纯钛材料对人牙龈成纤维细胞的影响不明显,而镍铬合金、含钛镍铬合金明显影响了细胞的炎性表达。 目的：比较4种烤瓷冠基底合金对人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的影响。 方法：用组织块法分离培养人牙龈成纤维细胞,实验组分别用4种烤瓷冠基底合金浸提液加入人牙龈成纤维细胞培养液中,空白对照组用含体积分数10%小牛血清的DMEM培养液,Western-blot法检测人牙龈成纤维细胞中Bcl-2和Bax表达的改变。 结果与结论：金合金组对Bcl-2和Bax表达的影响接近空白对照组,纯钛组和钴铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响较小,镍铬合金组对Bcl-2和Bax表达的影响最大,与其他各组相比差异有显著性意义(P < 0.05)。提示镍铬合金可通过影响Bcl-2与Bax的表达水平,抑制人牙龈成纤维细胞的增殖,促进细胞凋亡。关键词：烤瓷冠基底合金;人牙龈成纤维细胞;Bcl-2;Bax;钛 缩略语注释：HGFs：human gingival fibroblasts,人牙龈成纤维细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.16.022     

四种烤瓷冠基底金属浸提液干预人牙龈成纤维细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂的表达

背景：修复材料的生物相容性是决定临床修复效果的重要因素之一。 目的：通过比较4种金属浸提液对人牙龈成纤维细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂表达的差异探索其生物相容性。 方法：选用活体牙龈,原代培养人牙龈成纤维细胞,采用镍铬、钴铬、纯钛及金钯合金4种金属浸提液进行干预,以未进行干预的细胞作为对照。 结果与结论：ELISA检测结果显示镍铬和钴铬合金浸提液干预后细胞尿纤溶酶原激活剂表达增加;免疫荧光实验结合电镜观察发现镍铬和钴铬合金浸提液干预的细胞胞质荧光染色深,分布均匀,遍布整个细胞,提示细胞Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂表达增加。而纯钛和金钯合金浸提液对细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂的表达无影响。说明纯钛和金钯合金的生物相容性优于镍铬和钴铬合金。      

海藻酸钙止血敷料与临床常用3种止血敷料体外细胞毒性的比较

背景：止血敷料是作用于创伤表面与人体组织直接接触,其生物相容性是评价敷料优劣的重要指标之一,以海藻酸钙为原料的制备的止血敷料有着廉价、相容性好等优点已成为研究的热点。目的：观察海藻酸钙止血敷料的细胞毒性,并与明胶止血海绵、纳吸棉、普通纱布等材料作对比。方法：①浸提液法：以DMEM高糖培养液作为浸提介质,分别制备海藻酸钙止血敷料、明胶止血海绵、纳吸棉、普通纱布浸提液,并设置100%,75%,50%,25%,10% 5个浓度梯度;采用上述材料浸提液培养L-929小鼠成纤维细胞24 h,以含体积分数10%DMEM高糖培养液为空白对照,以含5%二甲基亚砜DMEM高糖培养液为阳性对照组,观察细胞增殖及形态变化。②直接接触法：将L-929小鼠成纤维细胞分别接种于海藻酸钙止血敷料、明胶止血海绵、纳吸棉、普通纱布上培养24 h,观察细胞形态变化。结果与结论：①浸提液法：不同浓度梯度海藻纤维止血敷料、纱布、纳吸棉浸提液的细胞毒性均为1级,符合GB/T16886/ISO10993 医疗器械生物学评价标准;100%,75%明胶止血海绵浸提液的细胞毒性为3级,严重抑制细胞增殖。②直接接触法：纱布与海藻纤维止血敷料的细胞毒性1级,纳吸棉为2级,明胶止血海绵的细胞毒性为3级。表明海藻酸钙止血敷料无细胞毒性。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

不同材料烤瓷冠在后牙种植修复中的对比

背景：种植体上部结构牙冠材料的选择十分重要,其临床修复效果直接影响到种植体的寿命和患者的牙周健康状况。 目的：比较Lava氧化锆全瓷、金铂合金烤瓷与银钯合金烤瓷冠在后牙单颗缺失口腔种植修复中的临床效果。 方法：选择60例120颗第一磨牙缺失病例,完成单颗牙缺失种植牙修复治疗,上部结构修复牙冠材料分别为Lava氧化锆全瓷冠、金铂合金烤瓷冠与银钯合金烤瓷冠,每种材料40颗,比较3种修复体的临床修复效果。 结果与结论：通过6-48个月的随访发现,Lava氧化锆全瓷冠组和金铂合金烤瓷冠组的牙龈边缘着色、龈缘密合度、修复体颜色优于银钯合金烤瓷冠组,Lava氧化锆全瓷冠组的牙龈边缘着色和修复体颜色优于金铂合金烤瓷冠组,金铂合金烤瓷冠组的龈缘密合度优于Lava氧化锆全瓷冠组;银钯合金烤瓷冠抗折程度最强,最具临床优越性,但其牙龈指数最高,牙龈健康程度最差,菌斑形成速度最快、程度最重。由此可见,在种植修复完成后需要选择较为适合的冠部修复体进行种植修复,Lava氧化锆全瓷冠具有卓越的生物相容性,而金铂合金烤瓷冠在边缘密合性方面更具优势,此两种修复体在临床治疗中具有一定的优势。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

烤瓷合金对机体细胞毒性的实验研究

目的:探讨3种口腔科常用烤瓷合金的细胞毒性。方法:分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和单细胞凝胶电泳(彗星试验)法检测3种烤瓷合金材料对小鼠成纤维细胞L929相对增殖率(RGR)的影响以及DNA的损伤情况。结果:金合金组的RGR为87.7±11.3,与钴铬合金组、对照组比较差异无统计学意义,其余各组间RGR比较差异均有统计学意义(P0.05);镍铬合金对DNA的损伤主要为严重损伤,而钴铬合金和金合金分别为中度和轻度损伤。结论:金合金材料和钴铬合金材料对RGR的影响显著小于镍铬合金,同时金合金材料所造成的DNA损伤最轻,因此,金合金材料是具有良好生物学性能的口腔科烤瓷合金材料。     

干扰素调节因子-1和CD74的表达变化与自发性高血压大鼠源大血管平滑肌细胞增殖相关

目的:借助体外模型验证IRF-1、 CD74、 CD36、 GAP43、 CYP2E1和TCA4基因表达变化是否与糖尿病大血管病变相关. 方法:取自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞,并将其分别培养于含不同浓度葡萄糖(5.5、 15、 25、 30mmol/L和35mmol/L)、波动糖中(25mmol/L和5.5mmol/L葡萄糖交替,每一浓度持续12h)以及持续高糖(25mmol/L)中,48h后运用半定量RT-PCR检测IRF-1、 CD74、 CD36、 CYP2E1和TCA4的表达变化,SPSS分析基因变化与平滑肌增殖的相关性. 结果:葡萄糖浓度低于30mmol/L时,平滑肌细胞的增殖随糖浓度的增加而加速.持续高糖中培养平滑肌细胞自第6h起增殖明显.统计分析显示,CD74、 IRF-1和GAP43的表达变化与平滑肌细胞的增殖存在相关性. 结论:IRF-1和CD74参与调节糖尿病大血管病变中平滑肌细胞的增殖.     

医用可降解锌合金材料抗菌性能及细胞相容性的体外实验研究

目的研究医用可降解锌合金材料的体外抗菌性能及细胞相容性。 方法大肠杆菌与金黄色葡萄球菌菌株分别与LB培养基混合,采用细菌比浊仪将浓度调节至1.0×10⁸CFU/mL,在二氧化碳恒温箱内37℃下培养24 h,作为细菌原液;各取相同尺寸锌合金与钛合金棒,打磨、除去表面氧化层,在100%乙醇、蒸馏水中超声波震荡洗涤,后用环氧乙烷消毒,备用。(1)大肠杆菌/金黄色葡萄球菌分别与可降解锌合金、钛合金于LB培养基中共培养,培养0、2、4、6、8、12、24、48、72 h后分别用酶标仪测定其在600 nm波长下的吸光度值。(2)将可降解锌合金、钛合金置于含金黄色葡萄球菌的固体培养平板上,培养24、48 h后观察抑菌圈大小。(3)不同浓度锌合金浸提液培养L929细胞,培养1、5 d后观察细胞形态,并用CCK8法检测细胞增殖情况,计算细胞相对增值率(RGR)。(4)将小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3－E1细胞)接种于可降解锌合金、钛合金表面,培养2 d后观察细胞在不同材料表面的黏附生长情况。组间数据比较采用单因素方差分析(ANOVA)及t检验。 结果不同时相点,大肠杆菌加锌合金共培养组的吸光度值明显低于单纯大肠杆菌培养组、大肠杆菌加钛合金共培养组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05);不同时相点,金黄色葡萄球菌加锌合金共培养组吸光度值明显低于单纯金黄色葡萄球菌培养组、金黄色葡萄球菌加钛合金共培养组,差异有统计学意义(P值均小于0.05)。可降解锌合金周围出现抑菌圈,培养24 h后,锌合金圆柱体周围(4.38±0.40)mm范围内无菌落出现,培养48 h后锌合金圆柱体周围(4.75±0.44)mm范围内无菌落出现,培养24 、48 h的抑菌圈大小比较差异无统计学意义(t＝－1.10,P＝0.31),而钛合金周围未出现抑菌圈。不同浓度锌合金浸提液培养组与阴性对照组,L929细胞细胞生长状况良好,CCK8检测提示不同时相点各浸提液组细胞RGR均大于75%,细胞毒性为0～1级,细胞毒性安全性合格。MC3T3－E1细胞能黏附生长于锌合金与钛合金材料表面,细胞形态与钛合金组相比未见异常。 结论锌合金材料具有良好的抗菌性能,对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均有抑菌效果;具有良好的细胞相容性,细胞毒性安全性合格,细胞能在其表面黏附生长。     

Effects of synthetic bis-β-chloroethylamine estrogen derivatives on proliferation of skin sarcoma cells

The effects of four new synthetic bis-β-chloroethylamine-containing estrogens and known cytostatic agents chlorophenacyl and estradiol mustard were compared on monolayer cultures of transformed L-929 fibroblasts (from murine skin sarcoma). The drugs within the concentration range of 10⁻⁵-5×10⁻⁷M inhibited proliferation of cultured cells by 67%. Chlorophenacyl displayed the least antiproliferative activity (15% inhibition at 10⁻⁵M). Steroid nucleus introduced into the molecule enhanced antiproliferative activity of test drug in comparison with chlorophenacyl, probably due to accumulation of the hormone-cytostatic molecules in cells. Estradiol had no effect on proliferative activity of L-929 cells, and no specific estrogen-binding sites were found in cultured transformed fibroblasts. The antiproliferative effect of hormone-cytostatics on this culture is not mediated via specific interactions with estrogen receptors. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 129, No. 6, pp. 695–697, June, 2000     

Glucose inhibition of human fibroblast proliferation and response to growth factors is prevented by inhibitors of aldose reductase

Diabetes mellitus is associated with premature senescence of cultured dermal fibroblasts. The present study investigated the effect of elevated glucose concentrations on cultured human fibroblasts from normal donors. Mean population doubling times, population doublings until senescence, saturation density at confluence (cells/cm2), tritiated thymidine incorporation, and response to platelet-derived growth factor (PDGF) were inhibited with the increasing glucose concentrations (11.0, 22, 44, or 55 mM glucose) (P less than 0.05). Replicative life span was markedly diminished by multiple passages in high glucose medium (5.5 mM glucose: 62.4 +/- 7.9 population doublings; 22 mM glucose: 22.8 +/- 3.4 population doublings: P less than 0.05). Aldose reductase activity was present in the cultured fibroblasts (3.9 +/- 0.5 nmol/min per mg protein), and inhibitors of aldose reductase, including sorbinil (10(-4) M--10(-6) M) and tolrestat (10(-6) M--10(-8) M), completely prevented glucose-mediated inhibition of fibroblast proliferation, restored the response to PDGF, and allowed a normal replicative life span. Myo-inositol (11 microM--5.5 mM) also reversed the adverse effects of glucose. These in vitro data demonstrate that elevated concentrations of glucose inhibit cell growth and promote premature senescence, effects which can be prevented with inhibitors of aldose reductase or supplemental myo-inositol. These aldose reductase-related effects may explain the impaired growth and premature senescence of cultured connective tissue from diabetic patients.     

PDTC对高糖培养大鼠肾成纤维细胞中MCP-1表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对高糖培养大鼠肾成纤维细胞(NRK)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法:将NRK分4组进行体外培养:(1)正常组:5.6mmol/L的葡萄糖;(2)高糖组:30mmol/L葡萄糖;(3)高糖+PDTC1组:30mmo/L葡萄糖+5μmol/LPDTC;(4)高糖+PDTC2组:30mmo/L葡萄糖+10μmol/LPDTC,分别于培养24h、48h取各组NRK采用RT-PCR检测其MCP-1mRNA表达水平,采用WesternBlot检测MCP-1蛋白表达水平。结果:与正常组相比,高糖组MCP-1mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),不同浓度PDTC干预后,MCP-1mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.05),且随PDTC浓度增大,下降更明显。结论:高糖可使NRK中MCP-1表达增高,PDTC能抑制NRK中MCP-1表达。     

亚油酸对成纤维细胞增殖和分泌炎症介质影响的实验研究

目的探讨亚油酸对人成纤维细胞增殖及其分泌炎症介质的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人成纤维细胞,分为正常对照组（不作任何处理）和实验组（细胞培养液中分别加入4mmol/L、2mmol/L、1mmol/L、0.5mmol/L和0.25mmol/L的亚油酸）。不同培养时相点观察细胞的光镜和电镜形态学、台盼蓝染色法绘制生长曲线、MTT法检测增殖抑制、流式细胞仪检测生长周期,ELISA法检测培养上清液中TNFα、IL-1β、IL-6、IL-8的含量,改良Griess法测定NO含量。结果亚油酸培养48h后,细胞增殖明显降低（P〈0.05）,光镜下见细胞生长缓慢,形态改变;电镜下见胞内脂滴、胞核和线粒体肿胀,部分细胞胞膜与核膜溶解破裂;流式细胞分析显示,G0/G1期、G2/M期细胞增多,S期细胞明显减少。亚油酸浓度为1mmol/L和2mmol/L时,实验组细胞TNFα分泌量显著高于对照组（P〈0.05）;亚油酸浓度为4mmol/L时,IL-1β、IL-6的分泌量与对照组相比明显升高（P〈0.01）;亚油酸浓度为2mmol/L和4mmol/L时,细胞IL-8、NO分泌量与对照组相比明显升高（P〈0.05）。结论高浓度亚油酸抑制体外培养人成纤维细胞生长、增殖,并促进人成纤维细胞分泌炎症介质。