-80℃冰箱直接冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤活性的影响

目的:研究-80℃冰箱直接冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)杀伤活性的影响。方法采用非程序降温方法-80℃冰箱冻存CIK,于冻存后6、12、18周复苏,通过LDH释放法分别测定其对K562细胞的杀伤活性,与新鲜未经冻存的CIK的杀伤活性进行比较。结果:未冻存的CIK在培养至第11天时,有较多贴壁成团细胞,而冻存后复苏培养的CIK贴壁成团细胞较少。比较各组细胞杀伤活性,冻存6、12周后复苏的CIK与未冻存的CIK,对K562细胞的杀伤活性无显著性差异(P>0.05),冻存18周后复苏的CIK的杀伤活性与未冻存的CIK对K562细胞的杀伤活性有显著性差异(P<0.05)。结论:采用-80℃冰箱直接冻存CIK,在12周内复苏应用于临床治疗较好。     

两种冻存液中海马神经元细胞复苏后生物学特性比较

目的:建立海马神经元适宜的冻存方法.方法:将新生24 h以内的大鼠海马消化成单个细胞后分别直接冻存于血清浓度不同的冻存液中,复苏后进行台盼蓝染色观察细胞活性;培养后观察其生长状态并在第7天固定细胞,分别进行Hoechst,微管蛋白(Tubulin)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)显色后,荧光显微镜下计数海马神经元、胶质细胞的百分率,从而建立最佳冻存方法.结果:冻存于高浓度血清冻存液中的神经元百分率为87.5%,冻存于低浓度血清冻存液中的神经元百分率为73.8%,高浓度血清冻存液中的细胞复苏后的状态及神经元存活率明显优于保存于低浓度血清冻存液中的;而冻存于高低浓度血清冻存液中的胶质细胞百分率分别为9.5%和16.5%,胶质细胞在高浓度血清的相对含量明显低于低血清组.结论:高浓度血清冻存液更利于海马神经细胞冻存后的复苏和生长.     

一种新贴壁细胞冻存液的研发与评价

目的 评价一种新的贴壁细胞冻存液。方法 使用含7.5%二甲基亚砜(DMSO)(V/V%)、17.5%丙二醇(V/V%)、2.5%聚乙二醇(V/V%)、10%胎牛血清(FBS)(V/V%)的达氏修正依氏培养液(DMEM)作为新型冻存液,对MDCK、LLC-MK2、HEp-2等3种贴壁细胞进行冻存实验。实验分常规冻存组、贴壁细胞冻存对照组和贴壁细胞冻存组,通过观察细胞形态并以HEp-2细胞为典型绘制细胞生长曲线;利用细胞病变法及免疫荧光法检测复苏的贴壁细胞对甲型流感病毒、副流感3型病毒、呼吸道合胞病毒的敏感性变化。结果 3种贴壁细胞冻存组复温后细胞保持完整的单层贴壁状态,与常规冻存组细胞复苏培养3 d后的新鲜贴壁细胞形态一致;3种贴壁冻存对照组细胞复苏后其细胞大量死亡,数量急剧减少,细胞间隙增大,细胞呈破碎样。生长曲线结果显示HEp-2贴壁细胞冻存组一直保持5×10⁵/mL水平。对上述病毒的敏感性检测中,贴壁细胞冻存组呈现出典型的细胞病变;感染甲型流感病毒的MDCK贴壁冻存细胞荧光呈胞浆颗粒型或细胞核均质型;感染呼吸道合胞病毒的HEp-2贴壁冻存细胞荧光呈胞浆颗粒型,...     

大鼠甲状旁腺细胞玻璃化冻存效果评价

目的观察玻璃化方法冻存甲状旁腺细胞的效果,探索甲状旁腺细胞经冻存复苏后移植治疗甲状旁腺功减退症的可行性。方法应用常规方法和玻璃化方法分别冷冻保存甲状旁腺细胞,冻存前后,对甲状旁腺细胞的结构和功能进行检测。随机将甲状旁腺功能减退症模型大鼠分为4组,分别移植培养液、未冻存的甲状旁腺细胞、常规方法冻存复苏后的甲状旁腺细胞和玻璃化方法冻存复苏后的甲状旁腺细胞,用血清钙水平的变化来判断移植物的存活。结果冻存前后,细胞的结构和功能没有明显变化,常规方法和玻璃化方法效果相似。移植后大鼠血清钙浓度的水平,4组分别是(1.35±0.05)mmol/L、(2.18±0.12)mmol/L、(2.22±0.09)mmol/L、(2.11±0.11)mmol/L,各实验组分别与移植前比较,血清钙水平的增高有统计学意义(P<0.05),各实验组在移植物存活时间上的差异没有统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化方法冷冻保存甲状旁腺细胞有效,细胞复苏后,可应用于移植。     

短期冻存时间和复苏温度对血清生化指标结果稳定性的影响

目的 分析血清样本短期冻存时间和冻存后复苏温度对临床常规检测生化指标结果稳定性的影响。方法 收集2021年6月同济大学附属上海市第四人民医院162例住院患者的血清样本为研究对象,将测得的新鲜血清样本临床生化指标结果作为基准值。血清样本各项指标检测完成后标记检测日期,将血清放置在–80℃冰箱中保存。运用配对t检验或秩和检验比较各组各项指标检测值与基准值之间的差异,分析血清短期冻存时间和复苏温度对于其生化指标结果稳定性的影响。结果 短期冻存时间对血清样本的生化指标值产生影响,尤其是血清中的代谢类指标均受冻存时间和复苏温度的影响。而对于蛋白质类和脂类指标而言,血清样本在4℃的条件下缓慢复苏时,其稳定性优于在常温条件下复苏。结论 短期冻存时间和复苏温度对血清生化指标结果准确性和稳定性有影响,为了后续临床研究结果的准确性,应根据不同的研究指标选择对血清样本的复苏温度。     

干式融化箱与水浴锅复苏细胞因子诱导的杀伤细胞的比较

目的对比干式融化箱与水浴锅复苏冻存细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）的效果。方法提取10份健康志愿者外周血单个核细胞分别诱导培养CIK细胞并冻存于一80℃冰箱。1个月后从每份CIK细胞中取出相同的两个冻存管,分别采用干式融化箱和水浴锅进行复苏。记录复苏时间,检测复苏后细胞存活率及对K562细胞的杀伤作用。结果干式融化箱较水浴锅复苏时间较长[（4．33±0．19）min、（2．47±0．30）rain],差异有统计学意义（P〈0．05）。但两种方法复苏的CIK细胞存活率[（89．55＋5．36）％、（89．86±4．63）％]和对K562细胞的杀伤活性[（44．76±9．53）％、（46．97±10．17）％]差异无统计学意义（P〉0．05）。结论干式融化箱可以代替水浴锅进行冻存CIK细胞复苏。     

简便高效的原代HUVECs培养

 目的 建立简便高效的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）体外分离、培养、冻存方法,以获得大量HUVECs为相关医学基础研究及组织工程学提供良好细胞来源。方法 新鲜脐静脉内灌注0.25%胰蛋白酶消化,获得HUVECs,内皮细胞培养基(ECM)进行培养。倒置显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学、RT-PCR检测VWF、CD144的表达。HUVECs加入10 %甘油的冻存液, 置于液氮保存4周,冻存复苏后Western blot检测VWF、CD144蛋白水平的表达。结果HUVECs体外生长2~3 d可铺满单层,细胞呈梭形,漩涡状排列生长,传代后可见管腔样结构;高表达VWF和CD144;冻存后复苏的细胞分裂增殖旺盛,蛋白水平高表达VWF、CD144。结论 脐静脉灌注胰蛋白酶消化法配合ECM培养可获取大量高纯度的内皮细胞,可作为相关研究良好的细胞来源。     

人胎脑神经干细胞来源少突胶质前体细胞冻存方法的优化

目的通过改变不同因素条件优化人胎脑神经干细胞来源的少突胶质前体细胞(OPC)冻存方法,进一步提高复苏活率。方法比较使用消化和机械吹打两种方法收集人OPC,采用人多能干细胞(hPSC)无血清冻存液、含930 mL/L胎牛血清(FBS)和70 mL/L二甲基亚砜(DMSO)的冻存液分别冻存细胞,比较两组冻存前后活率。择优后比较4种不同冻存液(含70 mL/L DMSO和930 mL/L FBS的冻存液,含70 mL/L DMSO、 300 mL/L FBS的OPC完全培养基,含70 mL/L DMSO、 300 mL/L FBS、 0.2 mol/mL海藻糖的OPC完全培养基,含70 mL/L DMSO、 100 mL/L FBS、 300 mL/L羟乙基淀粉溶液的OPC完全培养基)、冻存速率(冻存盒慢速降温和液氮气相快速降温)及冷冻保存时间3个因素对复苏活率的影响。在优选后的冻存方案基础上,复苏后7 d,使用免疫荧光细胞化学染色法比较OPC特异性标志物血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)、 ST8α-N-乙酰神经酰胺α2, 8-唾液酸转移酶1(ST8SIA1/A2B5)、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4/NG2)、增殖相关KI-67抗原(ki67)表达。结果消化组收集细胞,冻存前后活率明显高于机械组;快速降温4组复苏活率均低于30%且无法继续培养,慢速降温4组复苏活率均较高。使用消化法收集细胞,冻存细胞数为2×10~6/mL;使用含海藻糖的冻存液,慢速降温冻存,复苏活率最高;可达(75.73±6.66)%。与对照组相比,复苏后培养组增殖倍数、 ki67表达无明显差异,两组均表达PDGFRα、 A2B5、 NG2。短期和长期储存组复苏活率无明显差别。结论消化液收集OPC,使用含海藻糖的冻存液慢冻快融的方法,适用于人胎脑神经干细胞诱导OPC冷冻保存,复苏后不影响细胞增殖和标志物表达,储存时间对复苏活率无影响。     

微囊牛肾上腺髓质细胞的冻存及其活性评价

目的　建立一种微囊牛肾上腺髓质细胞 (bovinechromaffincell,BCC)的冻存方法 ,为临床推广微囊人工生物细胞技术移植异种细胞奠定基础。方法　微囊化牛肾上腺髓质细胞冻存以二甲基亚砜为保护剂 ,循序缓慢降温 (4℃ ,1h ,- 2 0℃ 2h ,- 5 0℃过夜 ,液氮 ) ,复苏时迅速将冻存管放入 37℃水浴中。通过检测其基础儿茶酚胺分泌量和在高钾 (5 8mmol/L)、乙酰胆碱 (10 -4mol/L)刺激下的分泌量来观察其功能活性。结果　冻存复苏后微囊BCC保留了儿茶酚胺的分泌功能 ,基础与刺激分泌量分别为 (3.2 0 7± 0 .35 0 )ng/ml和 (12 .4 96± 2 .30 2 )ng/ml,大约为冻存前微囊牛肾上腺髓质细胞分泌量的 80 % ;同时刺激后儿茶酚胺分泌增加 (P <0 .0 1)。结论　建立一种微囊牛肾上腺髓质细胞的冻存方法 ,通过功能检测证明该方法是有效和成功的     

用牛奶衍生物替代胎牛血清在-80℃冻存杂交瘤细胞的方法(文摘)

杂交瘤细胞的长期保存,一般都是冻存在液氮(或氮气)中,所用培基中含有胎牛血清(FCS)及二甲基亚砜(DMSO)。这种冻存杂交瘤细胞方法虽安全可靠,但需要液氮装置,并经常补充液氮,价值甚高。本文作者设计了一种以牛奶衍生物代替FCS作为冻存细胞的培基,置-80℃冰箱长期保存细胞的方法。牛奶衍生物为新鲜牛奶经过67℃加热处理,离心去脂肪、去细胞碎片的浓缩蛋白液。为了作对比,配制两种细胞冻存液,培基A含有40％牛奶衍生物和10％DMSO,培基B含有40％FCS及10％DMSO。实验用细胞是分泌抗人促性腺激素     

快速冷冻与慢速冷冻条件下复合组织血管内皮的生物活性

背景：恢复良好血供对于复合组织保存及再植至关重要,但不同冷冻方法对血管活性影响不同。 目的：比较快速冷冻与慢速冷冻方法对复合组织血管内皮活性的影响。 方法：新西兰大白兔后肢分别进行快速冷冻与慢速冷冻,快速冷冻的兔后肢直接放入液氮中,慢速冷冻组经4 ℃,-20 ℃,-80 ℃冷冻后再投入到液氮中,各组依次保存12 h,3 d,7 d后快速复温,并设对照组。所有新西兰大白兔后肢均经甲醛溶液固定后行苏木精-伊红染色及免疫组织化学染色检测各组血管内皮的病理变化。 结果与结论：快速冷冻组和慢速冷冻组冷冻12 h,3 d,7 d时兔血管组织形态评分均低于对照组(P < 0.05)。快速冷冻组冷冻12 h,3,7 d时血管内皮组织血管内皮生长因子评分低于慢速冷冻组(P < 0.05)。证实,慢速冷冻法能更好的维持复合组织中的血管内皮细胞的生物学活性。关键词：深低温冷冻;复合组织;冷冻方法;内皮细胞活性;组织构建 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.20.011     

无血清培养促进脂肪干细胞向血管内皮细胞分化

背景：无血清培养对大鼠脂肪干细胞向血管内皮细胞诱导分化影响的报道甚少。 目的：观察无血清培养大鼠脂肪干细胞后向血管内皮细胞诱导分化的情况。 方法：采用酶消贴壁培养法获得雄性SD大鼠脂肪干细胞,传代培养至第3代。实验组细胞无血清培养24 h,对照组用含体积分数10%胎牛血清的L-DMEM完全培养基培养。然后应用血管内皮细胞诱导培养基培养3周。 结果与结论：大鼠脂肪干细胞经体外培养可呈多角形或梭形贴壁生长,并能稳定传代。传代后大鼠脂肪干细胞极低表达细胞表面标志CD31。大鼠脂肪干细胞定向血管内皮细胞诱导分化后细胞呈鹅卵石样,CD31阳性表达明显上升且实验组明显高于对照组。实验组诱导后大鼠脂肪干细胞能够吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白及在基质胶上形成2D小管样结构,其能力明显强于对照组。结果证实无血清培养可促进体外大鼠脂肪干细胞向血管内皮细胞诱导分化。     

SD大鼠骨髓间充质干细胞在-80℃低温条件下的冻存

BACKGROUND: We attempt to explore a low-cost, simple and effective way to cryopreserve bone marrow mesenchymal stem cells at -80 ℃. OBJECTIVE: To screen the optimal cryopreservation fluid for bone marrow mesenchymal stem cells and to verify the biological features of bone marrow mesenchymal stem cells after long-term cryopreservation. METHODS: Bone marrow mesenchymal stem cells were cultured using adherent method and the biological features and purity of cells were detected using immunofluorescence method. Bone marrow mesenchymal stem cells were cryopreserved in the cryoprotectant medium containing low-sugar DMEM, fetal bovine serum and dimethyl sulfoxide at different proportions at -80 ℃ for a short term. Then, the optimal cryoprotectant was selected to storage the bone marrow mesenchymal stem cells. After 1, 3, 6 months of cryopreservation, the cells were resuscitated, cultured and passaged. Passage cells were identified immunofluorescence method to determine the biological features of bone marrow mesenchymal stem cells cryopreserved at -80 ℃. RESULTS AND CONCLUSION: Cryoprotectant medium of 80% DMEM+10% fetal bovine serum+10% dimethyl sulfoxide was suitable for cryopreserving MSCs at -80 ℃, and resuscitated cells were able to proliferate in vitro, and passage normally, indicating the cryopreserved bone marrow mesenchymal stem cells still maintain the original biological activity.      

不同冷冻保护剂对低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响

背景：非程序降温-80 ℃低温冰箱保存方便快捷,程序降温-196 ℃液氮保存可靠长久,将两者合二为一简化流程已成功用于临床。 目的：观察不同冷冻保护剂对-80 ℃低温冰箱转液氮阶梯降温冷冻保存造血干细胞效果的影响。 方法：分设10%二甲亚砜组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉组、5%二甲亚砜联合0.25 mol/L海藻糖组、5%二甲亚砜联合3%羟乙基淀粉及0.25 mol/L海藻糖组。采用  -80 ℃低温冰箱转液氮阶梯降温法对单采外周造血干细胞进行冷冻保存,通过透射电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞仪观察Annexin-V、PI、Caspase-3水平。 结果与结论：4组冷冻保存细胞的存活率、凋亡率和死亡率差异均无显著性意义(P > 0.05)。透射电镜下各组细胞超微结构变化差异不明显。单个核细胞群落冷冻保存后存活率在90%以上,含成熟细胞较多的CD45⁺细胞群落凋亡发生率可达50%左右。造血干祖细胞群落中,早期细胞较晚期细胞更能耐受冷冻损伤。提示在基础冷冻保护剂二甲亚砜的基础上,加入羟乙基淀粉和海藻糖并未显示出对冷冻保存效果的增强作用。     

-80℃冻干猪二道皮用于Ⅱ度烧伤创面换药方法的改进

目的应用自制-80％冻干猪二道皮（类似仿猪真皮）覆盖Ⅱ度烧伤创面，改进传统的换药方法并评价其效果。方法取小型健康白色家猪的新鲜皮，经常规清洁剃毛，以电动取皮机去脂，制成去表皮刃厚猪二道皮，经处理后放入-80％冰箱冻存备用。临床分为两组：A组为观察组共42例，以猪二道皮覆盖创面，B组为对照组共76例，以10％磺胺嘧啶银霜油纱布传统方法交敷创面。结果浅Ⅱ度创面愈合时间，A组平均（10．67±2．08）天，B组（13．1±1．73）天（P〈0．01）；深Ⅱ度创面愈合时间，A组平均（20．8±2．03）天，B组（23．20±2．60）天（P〈0．01）。结论与传统的换药方法相比，以猪二道皮覆盖烧伤创面，能促进上皮细胞生长，减轻疼痛，缩短愈合时间，减少疤痕和畸形的产生。     

超低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存造血干细胞的比较

背景：在造血干细胞整个冷冻保存过程中,受到降温速率、储存温度深浅、冷冻保护剂组合等因素影响,各国学者在提倡选择何种保存方法上面存在不同的主张。 目的：比较-80 ℃低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存外周造血干细胞的效果。 方法：将采集的造血干细胞分两组,第一组细胞浓度为1×10¹¹ L^-1,加入10%二甲基亚砜,放入程序冷冻仪内程序设置为室温至-4 ℃按1 ℃/min的速率降温,按35 ℃/min快速降至-45 ℃,再以15 ℃/min升至-21 ℃,然后以5 ℃/min降至-90 ℃,取出冷冻管置-196 ℃液氮罐内。第二组细胞浓度为1×10¹¹ L^-1,加入5%二甲基亚砜、3%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白,将冷冻管置-80 ℃冰箱过夜后取出,置-196 ℃液氮罐内的气相,再过夜后置液氮罐液相内。 结果与结论：两组冷冻方法保存细胞的锥虫蓝拒染率、回收率、凋亡率和死亡率差异无显著性意义(P > 0.05)。结果显示用5%二甲基亚砜、4%白蛋白、3%羟乙基淀粉组成的冷冻保护剂,通过-80 ℃低温冰箱转液氮阶梯降温法冷冻保存造血干细胞与传统10%二甲基亚砜作为冷冻保护剂用程序降温的方法取得一样效果,操作简便易于临床应用。     

人胚胎干细胞接种在鼠尾胶原包被培养板上定向分化为血管内皮细胞

背景：胚胎干细胞在体外可诱导分化为血管内皮细胞,进而形成血管,因而成为血管组织工程理想的种子细胞来源之一。 目的：探讨建立定向诱导人胚胎干细胞向血管内皮细胞分化的方法。 方法：在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养人胚胎干细胞H1,将H1细胞团块转移到鼠尾胶原包被的培养板,贴壁24- 48 h后,培养基换为含不同辅助因子和内皮细胞生长添加剂的EGM-2内皮细胞培养基。 结果与结论：①在EGM-2内皮细胞培养基诱导下,细胞逐步表达内皮细胞特异性标记基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化细胞表达内皮细胞特异性标记VE-cadherin、CD31。③分化细胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。说明将人胚胎干细胞接种在鼠尾胶原包被培养板上,通过EGM-2内皮培养体系诱导,可直接分化为功能性血管内皮细胞。为研究胞外基质对诱导胚胎干细胞血管内皮细胞分化的作用以及相关信号分子机制打下了基础。     

不同体积分数富血小板血浆与大鼠毛囊干细胞的增殖

背景：研究发现富血小板血浆在促进骨再生、软组织修复以及组织工程研究中种子细胞的增殖分化方面有着重要的作用。 目的：观察不同制备方法、不同体积分数富血小板血浆对体外培养大鼠毛囊干细胞增殖的影响。 方法：联合采用显微分离技术,两步酶法及差速贴壁法获取纯度较高、生长状态较好的第3代大鼠毛囊干细胞。采用2次离心法和3次离心法获取大鼠富血小板血浆,分别按1.0%,2.0%,4.0%不同浓度稀释于K-SFM培养基中,以加入含不同体积分数富血小板血浆培养基组为实验组,并以未加入富血小板血浆的培养基为对照。 结果与结论：联合采用显微分离技术,两步酶法及差速贴壁法能获取纯度较高的毛囊干细胞。培养前2 d各实验组与对照组的比较差异无显著性意义(P > 0.05),实验组加入富血小板血浆干预2 d后,毛囊干细胞出现较高的增殖活性,第4天开始进入生长对数期,细胞第5天即达到70%-80%汇合,培养六七天细胞进入平台期。高剂量富血小板血浆组对细胞增殖效果优于低剂量组,体积分数相同的情况下3次离心法制备所得富血小板血浆对毛囊干细胞增殖作用明显高于2次离心法,以加入3次离心法制备且体积分数为4.0%的富血小板血浆组毛囊干细胞增殖效果最明显。     

siRNA沉默FOXO3a对三氧化二砷抑制内皮细胞增殖的影响

背景：课题组前期已证实As2O3可以促进乳腺癌细胞中FOXO3a因子的表达,并抑制肿瘤细胞中血管内皮生长因子的表达,但As2O3对血管内皮细胞增殖的影响,以及对血管内皮细胞中FOXO3a、血管内皮生长因子的影响尚未证实。 目的：观察siRNA沉默FOXO3a对As2O3抑制人脐静脉内皮细胞增殖及血管生成的影响。 方法：实验分为4组：①As2O3组：待人脐静脉内皮细胞贴壁,在含4 μmol/L As2O3的RPMI-1640培养基中培养。②control siRNA组：转染无关序列control siRNA后,细胞在含4 μmol/L As2O3的RPMI-1640培养基中培养。③FOXO3a siRNA组：转染FOXO3a siRNA后,细胞在含4 μmol/L As2O3的 RPMI-1640培养基中培养。④对照组：与实验药物等体积PBS作为对照,细胞在完全培养基条件下培养。应用CCK-8方法检测细胞增殖情况,采用免疫细胞化学方法观察人脐静脉内皮细胞中FOXO3a、血管内皮生长因子蛋白的表达情况。 结果与结论：与对照组相比,FOXO3a siRNA明显减弱了As2O3抑制人脐静脉内皮细胞增殖的作用,As2O3促进人脐静脉内皮细胞中FOXO3a蛋白的表达并抑制血管内皮生长因子蛋白的表达,FOXO3a siRNA处理后明显抑制FOXO3a蛋白表达且增加血管内皮生长因子蛋白表达。结果提示FOXO3a可能成为As2O3抑制肿瘤细胞增殖及血管生成治疗的重要靶点。     

兔主动脉血管内皮细胞原代改良提取法

BACKGROUND: Primary vascular endothelial cells are mostly harvested through aorta endothelial cell cultures and micro-artery endothelial cell cultures using enzyme digestion and tissue adhesion methods, and the quality and purity of harvested cells cannot meet the need for current scientific research. OBJECTIVE: To investigate an improved extraction of primary vascular endothelial cells and the relevant identification method. METHODS: A segment of rabbit aorta was cut to culture vascular endothelial cells using the improved extraction method in group A or using adhesion method in group B. In the group A, the vascular intima was striped out with microsurgical instruments, and digested enzymatically to acquire single primary cells followed by culture in endothelial cell culture medium. In the group B, the whole vascular intima was adhered to the culture dish that was incubated in a 5%CO2, 37 ℃ incubator for 1 hour. Cell pellets in the two groups were cultured in vitro. Cell morphology was observed using a microscope; immunohistochemical staining was used to detect CD31, VIII factor and Vimentin protein for identification of vascular endothelial cells. RESULTS AND CONCLUSION: The purity and number of vascular endothelial cells extracted by the improved method were higher than those by the adhesion method. Immunohistochemical findings showed positive expression of CD31 and VIII factor, but negative expression of Vimentin. These findings indicate that the improved extraction method can obtain more vascular endothelial cells with higher purity, which is of strong operability and practicality.