无心跳供体肺移植大鼠模型的建立

背景：大量实验表明,供肺组织及肺血管功能在适当条件下可以保存,当供体心跳停止后,肺的气体交换系统可耐受热缺血60 min。 目的：建立一种简单有效的无心跳供体肺移植大鼠模型。 方法：60只SD大鼠随机分为有心跳供体组、无心跳供体-缺血30 min组和无心跳供体-缺血60 min组,每组20只。有心跳供体组供体大鼠取供肺保存在4 ℃低钾右旋糖苷液中4 h;无心跳供体-缺血30 min组供体放血处死后,维持通气30 min,使供肺在热缺血30 min后冷保存;无心跳供体-缺血60 min组方法同无心跳供体-缺血30 min组,不同之处在于供肺热缺血60 min。各组大鼠循环回路连接后,于1,15,30 ,45,60 min测出气道峰压和肺静脉血氧气分压。灌注结束后检测供肺湿质量干质量比和丙二醛水平。 结果与结论：有心跳供体组和无心跳供体-缺血30 min组所有指标比较差异均无显著性意义(P > 0.05)。各组气道峰压随时间的延长逐渐升高,但无心跳供体-缺血60 min组升高程度高于有心跳供体组和无心跳供体-缺血30 min组 (P < 0.05)。各组供肺血氧气分压均随着时间的延长而降低,无心跳供体-缺血60 min组供肺血氧气分压低于有心跳供体组和无心跳供体-缺血30 min组(P < 0.05)。无心跳供体-缺血60 min组供肺湿质量干质量比和丙二醛水平较有心跳供体组和无心跳供体-缺血30 min组高(P < 0.05)。结果提示大鼠无心跳供肺热缺血30 min肺移植灌注模型是一种安全有效的肺移植方法。     

肝肾联合移植的解剖学基础及临床应用

目的：探讨肝肾联合移植的供体器官切取及移植手术方法。方法：1998年5月-2001年7月共联合切除供肝、供肾30例次,施行1例肝移植及1例肝肾联合移植,手术方法主要有3个步骤：供体肝脏、肾脏联合原位灌洗、整块切取;病肝的切除;供肝和供肾联合植入。结果：供体肝肾联合切取30例均成功,热缺血时间在5-10min之内。1例肝移植及1例肝肾联合移植获得成功。结论：肝肾联合移植是唯一能挽救肝、肾同时衰竭的病人生命的有效方法,供体肝脏、肾脏联合原位灌洗、整块切取的方法可有效缩短热缺血时间,提高供肝、肾的质量以及供体器官利用率。     

迟发缺血预处理低温保存肾移植供体中血红素加氧酶1的表达

背景：缺血预适应延迟反应通过诱导保护性蛋白增强组织对缺血再灌注损伤的耐受能力;血红素加氧酶1参与缺血预适应延迟保护作用。迟发缺血预处理对低温保存肾脏的作用及血红素加氧酶1是否参与其中尚不清楚。 目的：观察缺血预处理诱导血红素加氧酶1的迟发缺血预处理反应对低温保存肾脏移植供体的作用。 方法：雄性SD大鼠随机分入5组：空白对照组、低温保存组、缺血预处理组、缺血+低温组(n=12);缺血+给药+低温组。各组大鼠均行右肾切除,预处理或假手术操作处理后24 h采用大鼠肾脏非循环离体灌注模型获取肾脏,分别于保存24,48,72 h取样。缺血+给药+低温组除上述处理外,还于原位低温灌注术前1 h接受1次血红素加氧化酶1抑制剂锡原卟啉腹腔注射。低温保存肾脏于各保存终点留取保存液,测定pH值和乳酸脱氢酶含量;切取1/2肾脏按照光镜要求制备标本送检;剩余1/2肾脏用于免疫印迹法测定血红素加氧酶1表达,比色法测定皮质Na-K-ATP酶活性、丙二醛和还原型谷胱甘肽含量;未保存肾脏仅通过免疫印迹法测定血红素加氧酶1的基础表达情况。 结果与结论：迟发缺血预处理诱导了肾组织血红素加氧酶1的表达,与单纯低温保存组相比保存24,48 h后,缺血+低温组保存液pH值、乳酸脱氢酶活性降低;肾脏组织Na-K-ATP酶活性、谷胱甘肽含量增加,丙二醛含量降低;同时点预处理组肾组织光镜形态学改变稍好于单纯低温保存组。给予血红素加氧酶1抑制剂后,这种保护作用消失。提示,迟发缺血预处理延长了肾脏低温保存时限,这可能与诱导血红素加氧酶1,增加组织抗氧化能力,减轻低温保存氧应激有关。     

BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立与评价

背景：对于一些药物研究,小鼠是理想的造模工具,但由于小鼠耐受性相对较差,肾脏及肾蒂小且难于寻找,容易增加实验误差,导致造模失败。 目的：探讨BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立方法,评价肾脏缺血时间对肾缺血再灌注损伤的影响。 方法：采用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂的方法建立雄性BALB/c小鼠肾缺血再灌注损伤模型,根据肾缺血时间不同分为    0 min组(对照组)、30 min组、35 min组、45 min组,肾再灌注后24 h观察肾功能和肾脏病理组织学的变化,比较不同的肾脏缺血时间对上述指标的影响;观察45 min组小鼠肾缺血再灌注损伤后的生存率。 结果与结论：模型成功率95.9%,与对照组相比,肾缺血30 min组、35 min组和45 min组再灌注后24 h血清肌酐、尿素氮和肾脏病理组织学评分均升高,肾缺血45 min组生存率明显下降,差异均有显著性意义(P < 0.05)。结果提示,应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾蒂的方法可制备稳定肾缺血再灌注损伤模型,雄性小鼠肾缺血35~45 min是造模较为理想的肾缺血时间,所得模型效果满意。     

中性粒细胞在大鼠肾缺血再灌注造成肺损伤中的作用研究

目的探讨中性粒细胞在大鼠肾缺血再灌注造成肺损伤中的作用。方法SD大鼠40只，随机分为对照组（假手术组）、缺血30min再灌注60min组（I30’＋R60＇组），缺血60min再灌注60min组（I60’＋R60’组），缺血90mib再灌注60min组（I90＇＋R60’组），缺血120min再灌注60min组（I120’＋R60’组），测定各组血浆中肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）含量；支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、NE的含量。结果肾脏缺血再灌注（I／R）导致肾脏、肺损伤，中性粒细胞在其中发挥重要作用。随着肾缺血时间延长，再灌注后肾功能严重损害，血浆Cr、BUN含量、肾系数逐渐升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。血浆、支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α含量逐渐升高，炎症反应加重，差异有统计学意义（P〈0．05）。血浆、BALF中中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）高于对照组（P〈0．05），组织破坏程度逐渐加重。病理观察结果显示，肾缺血再灌注（I／R）后，肾组织和肺组织有损伤性改变。结论肾脏I／R损伤可造成肺功能损伤，损伤机制与中性粒细胞的活化引发的非特异性局部或全身炎性反应有关。     

大鼠双侧供肾左侧原位肾移植模型的建立及肾功能监测

背景:大鼠肾移植模型是移植免疫耐受、免疫抑制及器官库开发的重要实验手段。目的:建立实验动物使用效率高,重复性好的耐受、急性排斥、慢性排斥肾移植模型,及移植肾功能动态无创检测方法。方法:封闭群Wistar大鼠用于解剖及预实验。采用改良左侧原位肾移植术,分次顺序使用供体左肾与右肾,动静脉及输尿管端端吻合,7d后行右侧肾切除。DA、Lewis大鼠分别为供受体作为急性排斥组。F344、Lewis大鼠分别为供受体作为慢性排斥组。Lewis大鼠自体肾移植组作为移植耐受组。观测大鼠双侧肾脏应用解剖,供肾热缺血时间、冷缺血时间,肾移植手术成功率。检测分析肾移植模型生存曲线、蛋白尿水平动态变化。结果与结论:解剖观测大鼠43例,灌注肾29例,行单侧原位肾移植21例。移植肾热缺血时间小于10s,冷缺血时间(47.2±3.7)min,成功率85.7%(18/21)。其中自体肾移植3例,急性排斥肾移植3例,慢性排斥肾移植12例。改良的单侧原位肾移植术简捷经济,分次顺序使用供体左肾与右肾,不干扰受体腹主动脉及下腔静脉血流,重复性好。结果提示,建立的近交系大鼠移植耐受、急性排斥、慢性排斥肾移植模型生存曲线、蛋白尿动态检测具有显著性差异。     

不同肝缺血时限肝硬化及非肝硬化肝组织基因差异表达及其意义

目的探讨肝硬化和非肝硬化肝组织肝缺血不同时限基因差异表达，为合理掌握肝缺血安全时限提供理论依据。方法以正常肝组织为对照，将观测标本分为A（非肝硬化）、B（肝硬化）两组，每组按不同缺血时限（分别为15、30、45min）分为3个亚组。标本取材后立即置入冻存备测，应用4000点基因芯片分析不同缺血时限各组基因差异表达。结果肝缺血15min，非肝硬化组基因表达谱变化以调控内环境稳定的编码基因表达上调为主，而肝硬化组则出现了多个调亡相关基因的高表达。肝缺血30min，两组肝组织调亡相关基因表达均处高峰阶段，不同点在于：肝硬化组促调亡基因表达的数量和Ratio值均大于非肝硬化组；非肝硬化组同期有多个热休克蛋白家族成员编码基因和抗氧化蛋白编码基因高表达肝缺血45min，肝硬化组和热休克蛋白和抗氧化蛋白编码基因均处于低表达水平。结论肝脏遭受缺血性损伤后决定细胞生存状态的关键时限点大约在30min左右；非肝硬化组织抗损伤能力较强，有可能发生耐受超过30min甚至更长的肝缺血时限；肝硬化组织肝缺血安全时限以控制在30min以内为宜。参18。     

胰、十二指肠及肾联合移植的解剖学基础及临床应用

目的：探讨胰肾联合移植的供体器官切取及移植手术方法。方法：2001年10月施行1例胰液肠腔引流式胰、十二指肠及肾联合移植，手术分3个步骤：①供体腹部多器官(包括胰、肝脏、肾脏)联合原位灌洗、整块切取；②供胰、供肾的修整；③供胰和供肾的植入。监测术后胰腺、肾的功能恢复。结果：联合整块切取腹部多器官成功，热缺血时间在3min之内。施行1例胰液肠腔引流式胰、十二指肠及肾联合移植，术后移植肾功能在术后第3d肌酐、尿素氮恢复正常；第5d停用胰岛素，移植胰内外分泌功能正常。随访1年，人／移植物存活良好。结论：胰、十二指肠及肾联合移植是治疗胰岛素依赖型糖尿病并发尿毒症的有效方法，供体腹部多器官联合原位灌洗、整块切取的方法可有效缩短器官的热缺血时间，减少损伤和提高供体器官的利用率。     

热缺血损伤对大鼠心脏死亡供肝线粒体形态和功能的影响

背景：如何才能很好的把握控制心脏死亡后捐献器官的功能活性,使移植物达到最佳功能状态是器官移植领域研究的重点方向之一。目的：初步探讨热缺血损伤对大鼠心脏死亡供肝功能的影响。方法：建立SD大鼠心脏死亡动物模型,将大鼠随机分为6组,分别为对照组(热缺血0 min组),热缺血10 min组,热缺血20 min组,热缺血30 min组,热缺血40 min组和热缺血50 min组。取各组大鼠肝脏标本制备超薄切片,透射电镜观察肝细胞结构改变并行Flameng评分。提取肝脏线粒体,用分光光度法测定细胞色素C氧化酶的活性。结果与结论：透射电镜下见热缺血30 min内肝细胞无明显改变,核膜尚完整,线粒体轻度肿胀,线粒体嵴未发生断裂,Flameng评分在2分以下。随着热缺血时间的延长,细胞核固缩,部分肝细胞自溶,可见凋亡小体,线粒体基质凝固,线粒体逐渐呈空泡状,Flameng评分3至4分。线粒体细胞色素C氧化酶活性在热缺血30 min内无明显改变,热缺血40 min组和热缺血50 min组发生明显降低。从线粒体形态和细胞色素C氧化酶活性两方面来看,热缺血时间在30 min内对肝脏功能影响较小,热缺血时间在40 min以上时肝脏呈不可逆性损伤。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

脂质过氧化在肾缺血和缺血再灌注损伤中的变化

本实验观察大鼠肾缺血75min及缺血60min后再灌注15min时肾组织脂质过氧化(LPO)和有关酶类变化。结果显示,肾脏缺血和缺血/再灌注后肾皮质和髓质中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量均显著增高。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性无明显变化。缺血/再灌注后黄嘌呤氧化酶(XO)活性显著升高。上述结果提示,肾缺血和缺血/再灌注时的LPO增强与氧自由基(OFR)产生增多有关。但上述二种情况时OFR产生机制不尽相同。     

内支架法在大鼠肾移植模型中的应用

目的建立一种稳定、操作简单的肾移植模型。方法以BN（RT1n）大鼠为供体,Lewis（RT11）大鼠为受体,实验组静脉吻合用3号prolene线作内支架,对照组直接端端吻合肾动静脉,将输尿管带膀胱瓣吻合于膀胱。结果实验组和对照组移植成功率分别为90%和85%,两组准备供体耗时为（23.0±2.4）min,供肾热缺血时间为（5.6±1.3）s,实验组和对照组移植手术耗时分别为（40.6±6.3）min和（54.1±4.2）min,冷缺血时间分别为（38.4±5.7）min和（49.7±6.3）min,手术耗时和冷缺血时间比较,两组有显著差异（P〈0.05）。结论内支架法简单实用,明显缩短肾缺血时间。     

大鼠肾移植1 000例经验总结

目的：对大鼠肾移植进行经验总结以指导实验与临床研究。 方法：作者在2004-01/2009-07海德堡大学移植中心期间,采用大鼠肾动、静脉与腹主动脉、腔静脉行端侧吻合。对于急性肾移植模型,输尿管直接植入膀胱内;对于慢性肾移植模型,输尿管采用端端吻合法。术中直接切除对侧肾脏,完成大鼠肾移植1 000例,并对其进行总结。 结果：只要供体肾脏冲洗良好,吻合时暖缺血时间小于30 min,手术时间60 min左右,吻合技术娴熟,移植成功率达98%以上。 结论：该实验模型安全、方便、可行。肾移植成功的关键是手术技术。     

兔肝冷保存后复温缺血-再灌注损伤及其相关机制的研究

目的:探讨原位肝移植过程中供肝冷保存后复温缺血-再灌注损伤的意义及其相关机制。方法:采用兔肝冷保存-再灌注损伤模型,观察兔肝冷保存后复温缺血对其再灌注后肝功能的影响及在此过程中肝组织内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化。结果:冷保存6h后又分别经历0、15、30及60min复温缺血的4组供肝于再灌注2h时,复温缺血时间越长者,其受体兔血液中AST、ALT或AKP值越大;且各组彼此间均存在非常显著差异(P＜0.01)。此外,各组供肝在复温缺血末及再灌注2h时,组织中SOD活性或MDA含量彼此间也均有非常显著差异(P＜0.01);且复温缺血时间越长的供肝组织中SOD活性越低,而MDA含量则越高。结论:兔肝冷保存后即使经历一短暂的复温缺血也会给其再灌注后的肝功能带来显著损伤,且氧自由基及其引发的脂质过氧化反应参与了兔肝复温缺血-再灌注损伤过程;提示供肝冷保存后复温缺血可能是导致肝移植术后原发性供肝功能损伤的重要原因。     

无心跳供体供肺的低温保存

背景：目前无心跳供体供肺原位低温保护实现的途径主要有2种,一种是胸腔内表面降温技术,这种方法已经被临床成功的移植证实有效,一种是气管内通气降温技术。 目的：探讨大鼠无心跳供肺移植模型中原位支气管内通气降温和胸腔内表面降温技术结合实现低温保存供肺的可行性。 方法：将无心跳供肺移植Wistar大鼠模型随机分为：通气组以低温气体吹入气管降温,表面组双侧胸腔置管连续注入低温生理盐水,结合组同时行低温气体通气和低温盐水胸腔内降温。  结果与结论：结合组降温效果强于表面组和通气组(P < 0.05),可在60 min内将气管内、肺实质和胸腔内温度降到保存温度。初步证明原位支气管内通气降温和胸腔内表面降温技术结合降温的方式在肺移植中应用的可行性。     

DA至Lewis大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立：技术改良分析

背景：国际上研究肝移植免疫耐受的基础动物模型是大鼠肝移植急性排斥反应模型,国际上公认的肝移植急性排斥反应模型鼠种配对方式为DA至Lewis大鼠、DA至BN大鼠及BN至Lewis大鼠,但由于鼠种缺乏和操作技术有待成熟的原因,国内较少引用以上鼠种配对方式进行该模型的建立。 目的：课题组在大量SD大鼠肝移植模型建立训练的基础上,采用DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,摸索DA至Lewis大鼠肝移植急排模型建立技巧和经验。 方法：通过改良二袖套法,以雄性DA大鼠为供体,雄性Lewis大鼠为受体,建立原位肝移植动物模型60只,受体大鼠术前1 d和术后1周内饲喂治疗剂量的他克莫司,1周后半量递减并停药,记录移植手术时间,观察受体大鼠的术后生存状况、手术成功率及生存期,分别于术后7,14,21,28 d处死受体大鼠,获取肝组织标本,苏木精-伊红染色,观察肝脏大体和镜下的病理学变化,进行急性排斥反应评分。 结果与结论：供肝冷缺血时间30~60 min,供体手术时间(18.5±4.0) min,供肝修整时间(7±3) min,受体手术时间(35.0±  7.3) min,无肝期为(13.0±3.0) min,手术成功率为98%,1周存活率为91.6%。术后2周随着他克莫司撤药,受体大鼠迅速发生急性排斥反应,于术后14~28 d死亡,平均生存时间为(20.85±0.71) d,中位生存时间为21 d。实验建立DA至Lewis大鼠肝移植急性排斥反应动物模型需要以大量SD大鼠肝移植训练为基础进行,通过对二袖套法技术的改良和围手术期短期应用他克莫司有助于该模型的稳定建立。     

人工虫草复合液对无心跳模型大鼠离体肾的低温保护作用

BACKGROUND: Non-heart beating donors have become the most promising source of donor in recent years. To further improve donor preservation solution, on the basis of conventional storage solution hypertonic citrate adenine solution, artificial cordyceps was added to prepare artificial cordyceps compound solution. It is hoped to reduce donor injury and to elevate donor quality by antioxidation. OBJECTIVE: To investigate the preservation effect of artificial cordyceps compound solution on isolated renal from non-heart-beating rats. METHODS: Medullas of 39 Sprague-Dawley rats were injured. Without in vitro respiratory and circulatory supports, non-heart-beating models were established and randomly divided into three groups: artificial cordyceps compound group (n=15), hypertonic citrate adenine solution group (n=15) and physiological saline group (n=9). The kidneys of rats in different groups were stored in artificial cordyceps compound solution, hypertonic citrate adenine solution and physiological saline at 4 ℃. RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the hypertonic citrate adenine solution group, after 6 and 12 hours of preservation, morphological injury was mild, apoptotic index, malondialdehyde, Bax and Caspase-3 expression levels decreased, superoxide dismutase activity and Bcl-2 expression increased; after 24 hours, the degree of injury was similar, malondialdehyde content decreased, and superoxide dismutase activity increased in the artificial cordyceps compound group. These findings indicated that the preservation effect of artificial cordyceps compound on antioxidation and inhibition of apoptosis was better than that of hypertonic citrate adenine solution in non-hearting beating rats.      

II: Ex vivo viability testing of kidneys after postmortem warm ischemia

Future approaches to expand the organ donor pool with marginal and nonheartbeating donors, will be dependent upon prospective organ evaluation. Restoration of metabolism by preservation at warmer temperatures could potentially provide the window for such evaluation. Using a small bovine model, kidneys were subjected to either < 15, < 30 or < 60 minutes of warm ischemia (WI) followed by cold ischemia (CI) in ViaSpan. After WI and CI, kidneys were transitioned to a warm temperature perfusion (30 degrees C to 32 degrees C) using exsanguinous metabolic support (EMS) technology. Restored renal metabolism and function was assessed by oxygen consumption, glucose consumption, urine production, glomerular filtration rate, and hemodynamic characteristics. The results of this study suggest that it is feasible to distinguish viable from nonviable organs ex vivo by assessing renal metabolism and function during warm preservation using EMS technology.     

心肌缺血对大鼠延髓利钠肽受体表达的影响

 目的:探讨大鼠延髓腹侧部利钠肽受体A(NPR-A)、利钠肽受体C（NPR-C）、胆碱乙酰转移酶（ChAT）和酪氨酸羟化酶（TH）的表达在心肌缺血后不同时程的动态变化。方法:大鼠分为空白对照组、假手术组和模型组。建立心肌缺血模型后,于术后3、7、14、18和28 d取材,用Western blotting方法检测延髓腹侧部吻段、尾段内NPR-A、NPR-C、ChAT和TH表达。结果:在模型复制后的上述时点,延髓腹侧部NPR-A的表达显著升高（P<0.05）,NPR-C表达的升高晚于NPR-A,TH的表达显著低于空白对照组（P<0.05）,在延髓腹侧部吻段ChAT的表达低于空白对照组（P<0.05）,而在尾段与对照组无显著差异。结论:延髓心血管中枢内NPR-A和NPR-C的表达在心肌缺血后均显著升高,而ChAT和TH的表达则显著降低。利钠肽、ChAT和TH可能都参与了心肌缺血后心血管系统的植物神经调控。     

右美托咪定抑制肾缺血/再灌注炎性反应

背景：在缺血/再灌注肾脏损伤的防治研究中,用药物激活或抑制机体某些因子从而保护肾组织,对肾移植和移植物的功能恢复有着重要意义。 目的：探索右美托咪定对大鼠肾缺血/再灌注炎性因子及C-X-C型趋化因子受体4表达的影响。 方法：40只大鼠随机等分为假手术组、缺血再灌注组、右美托咪定预处理组及右美托咪定后处理组。后3组行右肾切除,左肾缺血45 min,再灌注60 min,造肾缺血再灌注模型;右美托咪定预处理组于大鼠股静脉穿刺置管后泵注1 μg/kg右美托咪定,10 min后改为0.5 μg/kg,泵注30 min直至缺血即刻;右美托咪定后处理组于左肾再灌注后静脉泵注0.5 μg/kg右美托咪定 30 min。 结果与结论：肾脏缺血再灌注大鼠肾脏损伤严重,炎症明显,肾小管扩张,有肾小球肾炎表现,血清中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平显著升高(P < 0.05),血清和肾脏中C-X-C型趋化因子受体4水平也明显增加(P < 0.05);经右美托咪定预处理或后处理的肾缺血再灌注大鼠血清中白细胞介素1和肿瘤坏死因子α水平明显降低(P < 0.05),血清和肾脏中C-X-C型趋化因子受体4水平也明显降低(P < 0.05)。提示肾缺血再灌注可致以炎性反应为特征的肾损伤;右美托咪定可以抑制炎性反应并弱化C-X-C型趋化因子受体4的表达,具有一定的肾保护作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：