磁珠分选U251细胞系中的CD133+细胞及其生物学特性

背景：脑肿瘤干细胞理论认为,脑肿瘤干细胞是脑肿瘤细胞中“种子”细胞,是脑肿瘤发生、浸润和复发的关键细胞。 目的：观察人多形性胶质母细胞瘤U251细胞系中CD133⁺细胞的增殖、分化及体内致瘤性等生物学特性。 方法：运用磁珠分选技术分选U251细胞系中的CD133⁺和CD133^-细胞亚群;MTT法绘制两个亚群细胞的生长曲线;单克隆形成率实验检测2个亚群细胞的增殖能力;免疫荧光检测CD133⁺细胞亚群的多向分化能力;裸鼠移植实验检测2个亚群细胞在裸鼠体内致瘤性的差异。 结果与结论：U251细胞系中只有约4.5%的CD133⁺细胞;分选后的CD133⁺细胞能增殖形成典型的脑肿瘤干细胞球,生长曲线显示CD133⁺细胞增殖能力明显强于CD133^-细胞;单克隆形成率实验显示CD133⁺细胞能形成脑肿瘤干细胞球的细胞比率达到78.5%~92.4%,而CD133^-细胞仅有0.8%~2.4%;CD133⁺细胞能分化为具有GFAP和NeuN成熟表型的肿瘤细胞;CD133⁺的致瘤率为71.42%,而CD133^-细胞无致瘤性。提示U251细胞系中存在少量具有增殖、多向分化与体内致瘤能力的CD133⁺细胞,CD133⁺细胞是符合肿瘤干细胞定义的细胞亚群。     

人鼻咽癌细胞株分选CD133~+细胞实验研究

目的观察CD133在人鼻咽癌细胞株中的表达,探讨CD133+肿瘤细胞的体外增殖及分化能力从而确定鼻咽癌肿瘤干细胞的标志。方法使用免疫细胞化学及流式细胞技术检测鼻咽癌CNE2Z细胞株中的表达,免疫磁珠分选技术纯化肿瘤细胞,体外培养,观察其增殖及分化能力。结果鼻咽癌CNE2Z细胞株中有0.168%呈微量阳性表达,利用免疫磁珠分选技术纯化细胞的百分比为87.2%,免疫磁珠富集的CD133+肿瘤细胞在无血清培养基中1、3、5、7天的吸光度均高于相同条件下未分选细胞和CD133-细胞;CD133+在培养体系中的比例逐日下降,至培养的第12天,由第1天的87.2%下降至0.1%。结论鼻咽癌CNE2Z细胞株中,CD133+癌细胞有比其他细胞亚群强的体外分化和增殖能力,具有自我更新、生成其他表型肿瘤细胞等干细胞样特性,CD133可能是肿瘤起始细胞的标志之一。     

干细胞表面标志CD133在肝癌中的表达及其阳性亚群增殖特性北大核心

背景:以CD133为标志物,利用其蛋白特异性特征可对不同的肿瘤干细胞进行分选和研究。目的:探讨干细胞表面标志CD133在肝癌中的表达及其阳性亚群的体外增殖特性。方法:对人肝癌MHCC97-H细胞株进行培养和分选,分别获得CD133^+与CD133^-MHCC97-H细胞,检测CD133表达及细胞迁移侵袭能力;培养14 d,检测细胞克隆形成率;培养7 d,检测细胞增殖及Notch基因蛋白表达。将CD133^+与CD133^-MHCC97-H细胞分别接种于裸鼠背部皮下,4周后,检测成瘤情况。结果与结论:(1)CD133表达与细胞克隆形成率:CD133^+MHCC97-H细胞CD133表达率、克隆形成率均显著大于CD133^-MHCC97-H细胞(P<0.05);(2)细胞增殖:CD133^+MHCC97^-H细胞培养3-7 d的吸光度值大于CD133^-MHCC97-H细胞(P<0.05);(3)细胞迁移侵袭:CD133^+MHCC97-H细胞迁移与侵袭实验的透膜细胞数均显著多于CD133^-MHCC97-H细胞(P<0.05);(4)Notch基因蛋白:CD133^+MHCC97-H细胞Notch基因蛋白表达多于CD133^-MHCC97-H细胞(P<0.05);(5)成瘤实验:CD133^-MHCC97-H细胞组成瘤体积大于CD133^-MHCC97-H细胞组(P<0.05);(6)结果表明:CD133阳性肝癌细胞亚群具有较强的体外增殖特性,具有一定的肿瘤干细胞特性,并有较强的侵袭、转移及致瘤能力。     

卵巢癌细胞中CD90+肿瘤干细胞的生物学特性

背景：肿瘤干细胞与卵巢癌的发生和发展等之间存在十分密切的联系,CD90+是一种重要的肿瘤干细胞标志物。 目的：探索卵巢癌细胞中CD90+肿瘤干细胞生物学特性。 方法：获得原代卵巢癌细胞并进行分析,对人卵巢癌细胞系SKOV3和原代卵巢癌细胞的CD133和CD90阳性率进行流式细胞术检测,分选获得CD90+和CD90-细胞,并通过反转录PCR法对其干细胞和上皮间质化相关基因mRNA的相对表达情况进行检测。通过Transwell小室侵袭试验对细胞侵袭能力进程观察,利用克隆形成试验对细胞增殖分化能力进行观察,利用悬浮成球试验对干细胞潜能进行观察。并通过免疫缺陷小鼠体内有限稀释成瘤试验,对成瘤时间以及成瘤率进行观察。 结果与结论：SKOV3细胞的CD133和CD90阳性率均显著低于原代卵巢癌细胞。SKOV3细胞系CD90+干细胞相关基因mRNA相对表达CD133和OCT4均显著高于SKOV3细胞系CD90-干细胞;原代卵巢癌细胞CD90+干细胞中CD44、CD133、乙醛脱氢酶1和OCT4均显著高于原代卵巢癌细胞CD90-干细胞。SKOV3细胞系CD90-和CD90+干细胞的上皮间质化相关基因mRNA相对表达水平差异有显著性意义,原代卵巢癌细胞CD90-和CD90+干细胞的上皮间质化相关基因mRNA相对表达水平差异有显著性意义。随着接种细胞数量的增加,CD90-和CD90+细胞成瘤率呈现出不断上升的情况,成瘤时间则不断下降。其中,CD90+干细胞的上升较之CD90-干细胞更为显著。SKOV3细胞系和原代卵巢癌细胞的CD90+干细胞穿膜细胞数、细胞克隆数、悬浮成球数量均显著大于CD90-干细胞。提示卵巢癌细胞中CD90+干细胞可高表达干细胞相关基因和间质属性基因,并具备较高的侵袭、增殖分化能力以及成瘤能力和较大的干细胞潜能。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人鼻咽癌细胞株中肿瘤干细胞分离鉴定方法及肿瘤多药耐药机制

目的:研究人鼻咽癌细胞株中肿瘤干细胞分离鉴定方法及对肿瘤多药耐药机制。 方法:取鼻咽癌细胞株（SUNE）,进行细胞的培养、传代及鉴定,采用免疫荧光细胞化学技术联合流式细胞仪检测SUNE中CD133-及CD133+细胞体外分化能力。利用免疫磁珠分选技术完成CD133+肿瘤细胞纯化,测定CD133+细胞体外增殖能力,将其与未分选及CD133-细胞进行比较。取顺铂、紫杉醇化疗药物,采用CCK-8法测定CD133+细胞耐药性。取10只4周龄ICR小鼠,皮下注射人鼻咽癌细胞株和普通细胞株,分析耐药性。 结果:分离培养的SUNE在含有血清的培养基中呈贴壁生长,并且生长活跃,培养2~3 d后倒置显微镜下显示细胞呈梭形、扁平状,光泽度良好,培养2 周左右细胞融合瓶底80.00%;流式细胞仪检测结果显示:约0.35%细胞表面膜存在抗原CD133。免疫细胞化学显示:SUNE细胞贴壁爬行,部分细胞能与SUNE中的CD133-相互结合,荧光显微镜下显示呈现橙红色,球状;向经免疫磁珠分选后的细胞中加入培养基,细胞呈单细胞,球形,悬浮生长。随着培养时间的不断延长,细胞开始出现团状生长,体积增加,细胞数量增多,培养24 h后细胞开始贴壁生长,培养7 d后呈串状生长;CD133+肿瘤细胞、CD133-肿瘤细胞及未分选细胞随着时间的延长细胞均出现增长,且CD133+肿瘤细胞增殖能力显著高于CD133-肿瘤细胞及未分选细胞（P<0.05）。10只小鼠均可见瘤体形成,种植人鼻咽癌细胞株组的瘤体体积显著大于普通细胞株组（P<0.05）。结论:鼻咽癌干细胞中CD133+对化疗药物的耐药性强。     

X射线增强CD133~-鼻咽癌细胞干样能力的研究

目的探讨CD133~-鼻咽癌细胞经X射线处理后,其干样相关潜能是否得到增强。方法采用免疫磁珠法分选人鼻咽癌CNE-1细胞株,采用流式细胞仪检测分选后细胞CD133的表达率,并通过侵袭能力分析及体内成瘤实验鉴定其干性。采用4 Gy的X射线照射非肿瘤干细胞的CD133~-鼻咽癌细胞,通过侵袭能力分析及体内成瘤实验观察照射前后其干性特征变化,采用RT-PCR检测其CD133、SOX2及OCT4 mRNA表达变化。结果流式细胞仪检测结果提示CD133~+细胞及CD133~-细胞亚群,其CD133表达分别为97.72%±0.82%和1.63%±0.66%。CD133~+细胞亚群其侵袭能力及体内成瘤能力明显强于CD133~-细胞亚群。经电离辐射后,CD133~-细胞亚群其侵袭能力及体内成瘤能力明显增加。RT-PCR结果显示,照射后CD133、SOX2及OCT4 mRNA的表达水平明显上调。结论在体外,X射线可通过上调干样相关基因表达,从而增强CD133~-鼻咽癌细胞的干样相关潜能。     

CD133+卵巢癌干细胞样细胞在血管内皮细胞中的分化

背景：大量研究证实,新生血管形成在肿瘤的生长、浸润以及转移过程中发挥重要作用。 目的：探讨CD133+卵巢癌干细胞样细胞向血管内皮细胞分化的特点。 方法：通过无血清培养方法从卵巢癌A2780细胞株中成功诱导出CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞,在体外接种于铺或不铺Matrigel基质胶的96孔板内,观察不同时间点CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞形成管腔样结构能力。通过裸鼠皮下移植实验,免疫荧光法观察CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞在卵巢癌血管新生中的作用。 结果与结论：CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞(阳性对照)在未铺 Matrigel基质胶上并不能形成相应的管腔结构,且不表达内皮细胞标志物CD31,在Matrigel基质胶上能够形成相对稳定的管腔结构,CD31表达明显。CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞接种裸鼠皮下成瘤后,可观察到肿瘤组织中有人源性CD31的表达。结果表明CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞能够分化为血管内皮细胞,参与肿瘤血管重建。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

白细胞介素8参与CD133^+肝癌细胞的侵袭与转移北大核心

背景:白细胞介素8是一种重要的炎性趋化因子,其在调节肿瘤细胞增殖、血管新生方面发挥了重要作用。目的:探讨白细胞介素8对CD133^+肝癌细胞侵袭转移能力的影响。方法:分离培养人肝癌MHCC97-H细胞株,免疫磁珠分选出CD133^+/CD133-MHCC97-H细胞,流式细胞仪检测CD133表达,ELISA检测上清液白细胞介素8水平。克隆形成实验、裸鼠成瘤实验、Transwell小室分别检测CD133^+/CD133-MHCC97-H细胞克隆形成率、小鼠成瘤能力、细胞迁移侵袭能力。另外,采用白细胞介素8中和抗体处理细胞,比较CD133^+/CD133-MHCC97-H细胞CD133表达、上清液中白细胞介素8水平及细胞克隆形成能力和迁移、侵袭能力。结果与结论:(1)CD133^+MHCC97-H细胞的CD133表达率、上清液白细胞介素8水平及克隆形成率均显著大于CD133-MHCC97-H细胞(P<0.05);(2)细胞浓度为1×10~6 L^(-1)和1×10~7 L^(-1)的CD133^+MHCC97-H细胞接种后有部分小鼠出现皮下移植瘤,但CD133-MHCC97-H细胞在同样细胞浓度下,均未出现皮下移植瘤;(3)CD133^+MHCC97-H细胞的透膜细胞数量均显著大于CD133-MHCC97-H细胞(P<0.05);(4)经白细胞介素8中和抗体处理之后,CD133^+/CD133-MHCC97-H细胞的CD133表达率、上清液中白细胞介素8水平、克隆形成率均显著下降(P<0.05),且CD133^+MHCC97-H细胞下降程度更大(P<0.01);CD133^+MHCC97-H细胞的迁移、侵袭透膜细胞数显著减少(P<0.05),CD133-MHCC97-H细胞则未出现明显的改变(P>0.05);(5)结果表明,白细胞介素8可以特异性参与调节CD133^+MHCC97-H细胞侵袭、转移能力。     

Survivin基因沉默鼻咽癌G666-1细胞的生物学特性

背景：Survivin基因是迄今发现的最强效的凋亡抑制因子,能够抑制肿瘤细胞的增殖、迁移能力,成为近年有关肿瘤研究的热点之一。目的：探讨Survivin基因沉默对鼻咽癌G666-1细胞生物学特性的影响。方法：设计及合成Survivin的siRNA序列,Lipofectamine^TM 2000转染G666-1细胞,利用RT-PCR、Western blot检测Survivin基因沉默后的G666-1细胞Survivin mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测G666-1细胞中肿瘤干细胞标志物CD44⁺CD133⁺的表达变化。另外还采用CCK-8增殖实验、划痕愈合实验、细胞侵袭实验评价Survivin基因沉默对鼻咽癌G666-1细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果与结论：与对照组、空白组比较,实验组Survivin 基因沉默后的鼻咽癌G666-1细胞Survivin mRNA及蛋白表达显著降低,差异有显著性意义(P < 0.05);与对照组、空白组比较,实验组Survivin 基因沉默后的鼻咽癌G666-1细胞的生长速度明显减慢,增殖能力受到抑制,迁移能力和侵袭能力显著下降,差异有显著性意义(P < 0.05);肿瘤干细胞标志物CD44⁺CD133⁺的表达比例显著降低(P < 0.05)。结果表明特异性干扰Survivin基因表达可抑制鼻咽癌G666-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,使具有CD44⁺CD133⁺肿瘤干细胞特性的细胞比例降低,因此,Survivin基因沉默可能成为有效治疗鼻咽癌的新靶点。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人骨肉瘤细胞株MG-63中肿瘤干细胞的生物学特性

背景：骨肉瘤干细胞在骨肉瘤的发生、复发及对化疗药物的耐药性中发挥关键作用,而目前关于骨肉瘤干细胞体外分离培养及生物学特性研究的报道甚少。 目的：从人骨肉瘤细胞株MG-63中分离出具有干细胞特征的高致瘤性细胞亚群,检测肿瘤干细胞特异性标志物CD105的表达。 方法：无血清悬浮培养法从人骨肉瘤细胞株MG-63中分离出骨肉瘤细胞球,应用流式细胞术检测细胞球中CD73、CD90、CD105的表达,免疫荧光法检测骨肉瘤细胞株及骨肉瘤细胞球中CD105的阳性率,免疫磁珠法分选出CD105⁺和CD105^-的细胞,传代后分别接种于NOD/SCID小鼠评估其致瘤性。 结果与结论：CD105在球体细胞中高表达,此类肿瘤细胞具有高侵袭性和高致瘤性,在NOD-SCID小鼠中仅需移植1 000个细胞即可形成肿瘤,这些细胞具有自主生长特性,能够在无血清条件下长期培养,CD105⁺骨肉瘤细胞显示了干细胞的生物学特性,CD105可能成为骨肉瘤干细胞的表面标志之一。     

胃癌单克隆细胞球和CD44＋及CD133＋亚群成瘤能力的比较

目的研究胃癌干细胞亚群的筛选方法,探讨建立胃癌干细胞稳定亚群的可行性。方法利用流式细胞仪从MKN45、MKN25、SGC7901细胞株和人胃癌组织中分选出不同CD44和CD133表型的亚群,比较不同亚群和无血清培养基培养的单克隆细胞球细胞在裸鼠移植瘤模型中的成瘤能力。结果不同细胞的CD44＋和CD133＋亚群在低数量级时几乎不具有裸鼠皮下成瘤能力,在高数量级接种时成瘤能力与母系细胞差异无统计学意义;单克隆细胞球细胞在各数量级下的成瘤能力、瘤体积和生瘤速度均显著高于母系细胞。结论与CD44和CD133等细胞表面标志物筛选法相比,单克隆细胞球细胞可更好的作为胃癌干细胞研究的细胞学基础。     

Establishment of pancreatic cancer stem cells by flow cytometry and their biological characteristics

To investigate the method of separating human pancreatic cancer stem cells by Hoechst 33342 labeled flow cytometry and to analyze the biological properties of pancreatic cancer stem cells. The human pancreatic cancer cell line PC-3 was divided into SP and non-SP cells by flow cytometry. The number of two cell clone spheres and nude mice tumor formation rates were compared by cultivating in serum-free medium; The expression of CD133, Nestin mRNA and protein was analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot; The expression of two cell drug resistance genes (MDR1, ABCG2, ABCA2 and MRP1) was analyzed by real time fluorescent quantitative PCR. The number of the cloned spheres in SP cells in serum-free medium was significantly higher than that of non-SP cells (P<0.05). The incidence of SP cells in the tumor of immunodeficiency nude mice was significantly higher than that of non-SP cells, and the difference was statistically significant (P<0.05). Real-time fluorescence quantitative PCR analysis showed that the expression of CD133 and Nestin mRNA in SP cells was significantly higher than those of non-SP cells, and the expression of CD133 and Nestin protein in SP cells was also significantly higher than those of non-SP cells (P<0.05). In conclusion, SP side population pancreatic cancer cells by Hoechst 33342 separation have the stem cell characteristics, higher tumor formation rate and higher drug resistance, which may be related to chemotherapy resistance.     

Isolation and characterization of stem cell-like precursor cells from primary human anaplastic oligoastrocytoma.

A small population of stem cell-like precursors in solid tumors are linked to histological composition, progression, angiogenesis, metastasis, recurrence and drug resistance of a variety of malignant tumors. Oligoastrocytoma is the most common brain mixed glioma composed of mixed cells of oligodendroglial and astrocytic phenotypes. Identification and characterization of stem cell-like precursors in oligoastrocytoma may shed light on the oncogenesis of this unique type of tumor and assist in the design of novel therapeutic strategy. Here, tumor stem cell-like precursors were identified from primary human anaplastic oligoastrocytomas by labeling of the tumor sections with nestin and CD133. Tumor cells were cultured in vitro in stem cell medium with growth factors and the capacity of the surviving stem cell-like precursors to form tumor spheres was tested. The tumor spheres were further injected subcutaneously into nude mice to observe the contribution of stem cell-like precursors to histological composition and tumor progression. We found that primary human oligoastrocytoma tissues contained nestin+/CD133+ stem cell-like precursors. These cells differentiated into tumor cells with both oligodendroglial and astrocytic characteristics and formed tumor spheres in vitro, which upon implantation in nude mice, grew into tumor nodules containing nestin+/CD133+ cells at levels higher than in the primary tumor tissues. This study revealed for the first time that anaplastic human oligoastrocytomas contained stem cell-like precursors, which exhibit neural stem cell properties with tumorigenicity. These stem cell-like precursors may be responsible for the oligodendroglial and astrocytic components of human oligoastrocytoma and should be considered as therapeutic targets.     

人食管癌细胞株KYSE-150、TE-1中肿瘤干细胞的培养分化及增殖侵袭能力分析

BACKGROUND: There is a certain cell subset in esophageal cancer tissues, with certain invasive and metastatic properties, which is closely related to the clinical therapeutic effect on tumors. OBJECTIVE: To isolate tumor stem cell spheres in human esophageal carcinoma cell lines KYSE-150 and TE-1 and to analyze their proliferation and invasion ability. METHODS: KYSE-150 and TE-1 cells were cultured in serum-free medium to observe the formation of cell spheres. Cell proliferation and invasion were detected using MTT and Transwell chamber culture. Surface markers of cells were detected using flow cytometry. RESULTS AND CONCLUSION: Cell spheres that were stably subcultured were obtained from KYSE-150 and TE-1 cells cultured in serum-free medium. The proliferation and invasion abilities of cell spheres were significantly stronger than those of parent cells (P < 0.05). The number of CD44+, CD271+ and CD44+CD271+ cells in TE-1 and KYSE-150 cell spheres was significantly higher than that in the TE-1 and KYSE-150 parent cells (P < 0.05). These experimental results show that cell spheres isolated from human esophageal carcinoma cell lines TE-1 and KYSE-150 have tumor stem cell properties as well as strong proliferation and invasion abilities. And moreover, CD44 and CD271 can be used as important surface markers of esophageal carcinoma stem cells.      

人胶质瘤干细胞趋化因子受体CXCR4活化促进血管生成的作用

目的从人恶性胶质瘤细胞系U87中分离、培养和鉴定胶质瘤干细胞,观测其CXCR4表达情况及其活化后促血管生成因子分泌的变化。方法通过流式细胞术检测U87细胞中CD133阳性细胞的比例。使用CD133免疫磁珠分离试剂盒通过磁性细胞分选系统分离胶质瘤干细胞。采用间接免疫荧光标记、激光共聚焦扫描显微术观测胶质瘤干细胞中神经巢蛋白（nestin）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、趋化因子受体CXCR4的表达;以CXCR4配体刺激通过钙流试验检测受体功能,采用酶联免疫吸附试验（EIJSA）检测培养上清中血管内皮生长因子（VEGF）和白细胞介素-8（IL-8）的含量。建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察胶质瘤干细胞成瘤情况及瘤体内VEGF表达情况。结果U87细胞系中CD133阳性细胞的比例为0．5％,这些细胞具有干细胞增殖和生长特性;它们表达CXCR4,用其相应配体激活后导致胞内钙流增加、分泌VEGF和IL-8增多。与CD133阴性细胞相比,CD133阳性细胞在体外分泌VEGF、IL-8多,在体内成瘤率高,形成的移植瘤生长迅速,表达更多VEGF。结论人恶性胶质细胞瘤细胞系U87中含有极少量胶质瘤干细胞,表达功能性CXCR4、分泌更多促血管生成因子,提示这些干细胞也直接参与胶质瘤血管生成。     

A2B5 Cells from Human Glioblastoma have Cancer Stem Cell Properties

Glioblastomas, like other cancers, harbor small cell populations with the capability of sustaining tumor formation. These cells are referred to as cancer stem cells. We isolated cells expressing the surface marker A2B5 from three human glioblastomas (GBM) and showed that after grafting into nude mice, they generated dense and highly infiltrative tumors. Then, we extensively studied A2B5⁺ cells isolated from 11 human GBM. These cells display neurosphere-like, self-renewal, asymmetrical cell division properties and have multipotency capability. Stereotactic xenografts of dissociated A2B5⁺-derived secondary spheres revealed that as few as 1000 cells produced a tumor. Moreover, flow cytometry characterization of A2B5⁺-derived spheres revealed three distinct populations of cells: A2B5⁺/CD133⁺, A2B5⁺/CD133^- and A2B5^-/CD133^-, with striking proportion differences among GBM. Both A2B5⁺/CD133⁺ and A2B5⁺/CD133^- cell fractions displayed a high proliferative index, the potential to generate spheres and produced tumors in nude mice. Finally, we generated two green fluorescent protein-cell lines that display—after serum induction—distinct proliferative and migratory properties, and differ in their CD133 level of expression. Taken together, our results suggest that transformed A2B5⁺ cells are crucial for the initiation and maintenance of GBM, although CD133 expression is more involved in determining the tumor's behavior.