黄芪注射液对体外血管新生的影响

背景：血管新生受生长因子的影响,黄芪可与血管内皮生长因子具有协同促血管新生的功效,但机制尚不明确。 目的：通过与单一血管内皮生长因子干预比较,观察中药黄芪对体外血管新生的作用机制。 方法：将黄芪注射液及血管内皮生长因子作用于SD大鼠胸主动脉内皮细胞,应用细胞增殖、细胞迁移、小管形成实验观察黄芪注射液对体外血管新生的促进作用,用Western blot实验检测血管内皮生长因子的表达。 结果与结论：黄芪能明显促进大鼠胸主动脉内皮细胞的增殖(P < 0.01),迁移的细胞数增加(P < 0.01),胸主动脉内皮细胞的小管形成数增加(P < 0.01),并明显促进内皮细胞血管内皮生长因子的表达(P < 0.01)。说明黄芪能明显促进内皮细胞增殖、细胞迁移、小管形成,具有显著的促进体外血管新生作用,其机制可能是通过增加血管内皮生长因子的表达而实现的。     

血管内皮生长因子和内皮抑素对血管生成的作用研究进展

血管内皮生长因子（VEGF）是一种多功能糖蛋白，是由肿瘤细胞或宿主的非内皮细胞分泌的特异的内皮细胞有丝分裂因子，是最主要的促进血管生成因子。它具有促进血管通透性增加、血管内皮细胞分裂、增殖及诱导血管生成等作用。内皮抑素（ES）是胶原XⅧC末端降解片段，体内、体外实验表明内皮抑素能有效抑制血管内皮细胞增殖、迁移及新生血管形成，是一种特异性的目前为止作用最强的血管形成抑制荆。但其确切的抗血管形成的作用机制尚未阐明。现就血管内皮生长因子、内皮抑素在血管生成中的作用作一综述。     

电刺激糖尿病模型大鼠创面的愈合及血管生成

文题释义：糖尿病性难愈创面：是最常见的糖尿病并发症之一,主要由于体内高糖环境和多种生物学因素共同作用导致创面形成,大多难以治愈,以糖尿病足为代表,多数患者面临着截肢风险,其主要机制有晚期糖基化终末产物相关学说、炎性浸润、外周神经功能障碍等。 血管生成：指从已有的毛细血管或毛细血管后静脉发展而形成新的血管,主要包括：激活期血管基底膜降解;血管内皮细胞的激活、增殖、迁移;重建形成新的血管和血管网,是一个涉及多种细胞的多种分子的复杂过程。 背景：糖尿病性创面愈合障碍是糖尿病的常见并发症之一,然其发病机制目前尚未阐明。电刺激疗法是临床治疗创面损伤的常用手段之一,能有效促进损伤皮肤愈合。 目的：探讨电刺激疗法对糖尿病大鼠创面愈合及血管生成的影响及潜在机制。 方法：SPF级雄性SD大鼠42只,随机分为空白对照组和糖尿病模型组。模型组采用一次性尾静脉注射链脲佐菌素(50 mg/kg)联合背部皮肤创伤的方法建立糖尿病性难愈创面大鼠模型,再将造模成功的24只大鼠随机分为模型组和电刺激治疗组;空白对照组为正常大鼠造成背部创面,治疗组予以电刺激治疗21 d,对照组和模型组正常饲养,于治疗第3,7,14,21天分别评价创面愈合情况。治疗完成后,取大鼠血清和创面组织用于指标检测,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠创面病理形态,酶联免疫吸附法检测血清内皮型一氧化氮合酶、血管生成素1和血管内皮生长因子水平,免疫组织化学法和Western-blotting法定位定量观察创面血管生成素受体2和血管内皮细胞生长因子受体2蛋白的表达。实验方案经西南医科大学附属医院动物实验伦理委员会批准。结果与结论：①经电刺激治疗后,糖尿病大鼠创面愈合率于第14天时即接近90%,而模型组不到60%,差异有显著性意义(P < 0.01);血清内皮型一氧化氮合酶、血管生成素1和血管内皮生长因子水平较模型组均显著升高(P < 0.05或P < 0.01);②与模型组比较,治疗组创面新生血管多,血管管腔较大,血管周围及创面组织的血管生成素受体2和血管内皮细胞生长因子受体2表达均显著升高(P < 0.05或P < 0.01);③电刺激疗法能明显促进糖尿病大鼠创面愈合及新血管生成,其机制与升高内皮型一氧化氮合酶、血管生成素1和血管内皮生长因子水平,上调血管生成素受体2和血管内皮细胞生长因子受体2水平有关。 ORCID: 0000-0001-9624-6694(耿康) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

斯赤列提取物抑制骨关节炎模型大鼠的异常血管新生

背景：课题组前期研究表明,斯赤列提取物具有促进成骨细胞增殖分化,促进骨折愈合、抗炎、抗氧化等作用,可有效缓解骨关节炎的发展。血管内皮生长因子则为骨关节炎严重程度评价的生物标记物。目的：探讨斯赤列两种提取物(甲醇提取物SAW-ME、二氯甲烷提取物SAW-DCE)对抗骨关节炎血管新生的作用及机制。方法：(1)采用前交叉韧带切断法复制大鼠骨关节炎模型(模型组),分别给予SAW-ME、SAW-DCE干预,并设假手术组为对照。运用免疫组化、免疫荧光等方法检测大鼠关节中血管内皮生长因子A、血清中血管内皮生长因子和软骨下骨H型血管的变化。(2)以血管内皮细胞EA.hy926为研究对象,给予SAW-ME、SAW-DCE干预,MTT法检测对细胞增殖的影响;采用血管内皮生长因子诱导EA.hy926细胞,复制血管新生模型,进行划痕实验、成管实验研究其作用和机制。(3)采用EA.hy926细胞进行转录组测序,分析给予SAW-DCE干预后细胞差异基因及相关功能的特征变化。结果与结论：(1)SAW-ME、SAW-DCE可下调骨关节炎大鼠膝关节软骨中血管内皮生长因子A的表达,减少关节中H型血管的生成;SAW-ME可...     

血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞生成的影响

目的：探讨血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞增殖和游走的影响及作用机制。方法：淋巴管内皮细胞取自猪的胸导管。采用划线法和MTT法观察血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞增殖和游走的影响。Hoechst染色检测细胞凋亡。结果．划线法和MTT法均显示血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞的增殖和游走有明显的抑制作用。Hoechst染色证实,经血管生成抑制素和反应停处理后的淋巴管内皮细胞,核周围有凋亡小体。结论：血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞的增殖和游走具有明显的抑制作用,且有剂量依赖性。血管生成抑制素和反应停具有促进细胞凋亡的作用。     

血管生成抑制素对胃癌细胞的影响

目的探讨血管生成抑制素对胃癌细胞增殖和游走的影响及对胃癌细胞分泌血管内皮生长因子A和C(VEGF-A和VEGF-C)的影响并分析其作用机制。方法采用MTT法和划线法观察0、0.5、1.0、1.5μg/ml浓度的血管生成抑制素对胃癌细胞增殖和游走的影响。免疫组化的方法检测0、0.5、1.0、1.5μg/ml浓度的血管生成抑制素对胃癌细胞内血管内皮生长因子(VEGF)-A和VEGF-C的影响。结果 MTT法显示不同浓度的血管生成抑制素对胃癌细胞增殖无明显影响(p0.05),同样,划线法测得的胃癌细胞迁移距离同对照组相比无明显差异(p0.05)。但免疫组化法结果显示,0.5、1.0、1.5μg/ml浓度的血管生成抑制素组胃癌细胞VEGF-A和VEGF-C的表达同对照组相比明显减少(p0.05)。结论血管生成抑制素明显减少胃癌细胞内的VEGF-A和VEGF-C的分泌,但对胃癌细胞的增殖和游走无明显作用。     

前列腺素E1联合碱性成纤维细胞生长因子干预人牙髓干细胞增殖和血管生成能力的变化

文题释义：前列腺素E1：是一种生物活性物质,广泛存在于体内各组织细胞,由BERGSRTOEM等于1960年首先分离获得,并详细研究了其分子结构,具有舒张血管、稳定细胞膜降低血小板黏附率、改善血液黏度及抗炎等作用,可促进骨髓间充质干细胞和神经干细胞的增殖、迁移,并促进细胞分泌血管内皮生长因子,进而促进血管生成。碱性成纤维细胞生长因子：是一种肝素黏合多肽,也是一种重要的潜在有丝分裂原,属于成纤维细胞生长因子家族,对细胞有丝分裂及分化具有很强的调节作用,特别是对中胚层和神经外胚层来源的细胞作用更强,可促进细胞生长,研究发现牙髓中的成纤维细胞可表达碱性成纤维细胞生长因子,在体外能明显促进人牙髓干细胞增殖。  摘要背景：前列腺素E1及碱性成纤维细胞生长因子可促使人牙髓干细胞增殖,但两者联合应用对人牙髓干细胞增殖和血管生成能力的影响还未见研究。目的：探究前列腺素E1联合碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓干细胞增殖和血管生成能力的影响。方法：①体外分离培养人牙髓干细胞,经表面标志物检测鉴定后,分别以5,10,20,50,100 μg/L前列腺素E1及5,10,20,50,100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子单独作用于体外培养的人牙髓干细胞,以未加药物处理的细胞作为空白对照组,采用CCK-8法分别在1,2,3 d检测人牙髓干细胞增殖情况,筛选最佳药物作用质量浓度和时间。②将体外培养的人牙髓干细胞分为4组：空白对照组、前列腺素E1组、碱性成纤维细胞生长因子组、前列腺素E1+碱性成纤维细胞生长因子组,采用CCK-8法检测人牙髓干细胞增殖情况,然后提取人牙髓干细胞条件培养基,以ELISA测定条件培养基中血管内皮生长因子、内皮抑素水平,以小管形成实验检测人牙髓干细胞条件培养基干预后人脐静脉血管内皮细胞的体外小管形成能力。结果与结论：①前列腺素E1、碱性成纤维细胞生长因子的最佳作用质量浓度均为20 μg/L,最佳作用时间为2 d;②与空白对照组相比,前列腺素E1组、碱性成纤维细胞生长因子组、前列腺素E1+碱性成纤维细胞生长因子组人牙髓干细胞相对增殖率、血管内皮生长因子水平、人脐静脉血管内皮细胞体外血管生成能力均显著升高(P < 0.05),内皮抑素水平显著降低(P < 0.05);前列腺素E1+碱性成纤维细胞生长因子组上述各指标均优于前列腺素E1组、碱性成纤维细胞生长因子组(P < 0.05);③结果表明,前列腺素E1联合碱性成纤维细胞生长因子可促进人牙髓干细胞增殖,增强人脐静脉血管内皮细胞体外小管形成能力。 ORCID: 0000-0002-7727-1883(项海东) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

内皮细胞抑素与子宫内膜异位症

子宫内膜异位症(EM s)被认为是一种血管相关性疾病,大量研究证实血管内皮生长因子(VEGF)具有强大的促血管内皮增殖、促血管生成作用,与EM s的发病密切相关;另有研究表明内皮细胞抑素(endostatin)可诱导血管内皮细胞凋亡,抑制其生长和迁移,从而拮抗VEGF的促血管生成作用。本文就VEGF、endostatin对EM s发病的影响做一综述。     

血管内皮生长因子治疗缺氧缺血性脑损伤的研究进展

血管内皮生长因子,又称血管通透因子是一种多功能的细胞因子。它具有促进血管内皮细胞的增殖,迁移,诱导血管生成减少凋亡,神经保护等作用,本文就其在缺氧缺血性脑损伤治疗中的研究现况作一综述。     

血管内皮生长因子对肿瘤血管生成的影响

血管生成对于实体肿瘤的生长和转移十分重要。肿瘤可通过血管生成从机体获得大量营养,并通过生成的血管转移到身体其他部分继续生长繁殖。在肿瘤血管生成中各种细胞因子起着极为重要的作用,其中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)又叫血管通透因子(Vascular permeability factor,VPF)特异地作用于内皮细胞,升高细胞内Ca~(2 )浓度,促进内皮细胞迁移增殖,增加血管通透性,诱导细胞外基质形成。     

siRNA沉默FOXO3a对三氧化二砷抑制内皮细胞增殖的影响

背景：课题组前期已证实As2O3可以促进乳腺癌细胞中FOXO3a因子的表达,并抑制肿瘤细胞中血管内皮生长因子的表达,但As2O3对血管内皮细胞增殖的影响,以及对血管内皮细胞中FOXO3a、血管内皮生长因子的影响尚未证实。 目的：观察siRNA沉默FOXO3a对As2O3抑制人脐静脉内皮细胞增殖及血管生成的影响。 方法：实验分为4组：①As2O3组：待人脐静脉内皮细胞贴壁,在含4 μmol/L As2O3的RPMI-1640培养基中培养。②control siRNA组：转染无关序列control siRNA后,细胞在含4 μmol/L As2O3的RPMI-1640培养基中培养。③FOXO3a siRNA组：转染FOXO3a siRNA后,细胞在含4 μmol/L As2O3的 RPMI-1640培养基中培养。④对照组：与实验药物等体积PBS作为对照,细胞在完全培养基条件下培养。应用CCK-8方法检测细胞增殖情况,采用免疫细胞化学方法观察人脐静脉内皮细胞中FOXO3a、血管内皮生长因子蛋白的表达情况。 结果与结论：与对照组相比,FOXO3a siRNA明显减弱了As2O3抑制人脐静脉内皮细胞增殖的作用,As2O3促进人脐静脉内皮细胞中FOXO3a蛋白的表达并抑制血管内皮生长因子蛋白的表达,FOXO3a siRNA处理后明显抑制FOXO3a蛋白表达且增加血管内皮生长因子蛋白表达。结果提示FOXO3a可能成为As2O3抑制肿瘤细胞增殖及血管生成治疗的重要靶点。     

炎性环境下内皮微粒介导单核细胞促内皮细胞增殖的作用

目的 探讨炎性环境中内皮微粒(EMPs)在单核细胞参与的促内皮细胞增殖中的作用,并探讨EMPs对单核细胞表达内皮细胞标志物的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激内皮细胞,超速离心法获取EMPs;用透射电镜观察其形态和结构;运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测经EMPs激活的单核细胞株THP-1对血管内皮生长因子(VEGF)中VEGF-A、VEGF-C的表达情况;将HUVECs和THP-1细胞或者经EMPs诱导的THP-1细胞共培养,检测HUVECs的增殖情况;运用RT-PCR和免疫荧光细胞化学技术,观察经EMPs激活的THP-1细胞对内皮细胞标志物vWF和血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)的表达情况.结果 内皮细胞经炎性因子刺激后释放EMPs,EMPs刺激的THP-1细胞上清中VEGF-A和VEGF-C蛋白水平明显升高;HUVECs细胞增殖实验中,与THP-1细胞或者经EMPs诱导的THP-1共培养的两种情况下,HUVECs均显著增多;与EMPs共培养3d后,THP-1中vWF和VEGFR-2蛋白表达为阳性,基因表达为阴性,共培养8d后,vWF和VEGFR-2的蛋白和基因表达均为阴性.结论 炎性环境中内皮细胞释放EMPs可以促使单核细胞分泌VEGF-A和VEGF-C,后两者可使HUVECs增殖,EMPs仅能使单核细胞一过性呈现内皮表型,而不能将其转分化为内皮细胞.     

联合应用血管内皮生长因子及血小板衍生生长因子BB干预骨髓间充质干细胞的血管化及增殖能力

背景：组织工程骨为修复极限骨缺损提供了新的选择,但只有先形成完善的功能性血管网,保证稳定的成骨和骨整合,才能取得良好的治疗效果。因此,血管化可以说是组织工程骨面临的最大挑战与难题。 目的：探讨体外联合应用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血小板衍生生长因子BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)对骨髓间充质干细胞增殖和成血管能力的影响。 方法：体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,分别用不同质量浓度VEGF(20,40,60,80,100,120 μg/L)、PDGF-BB(20,40,60,80,100,120 μg/L)联合干预以及100 μg/L VEGF单独干预、100 μg/L PDGF-BB单独干预,CCK-8实验检测2种细胞因子促进细胞增殖的最佳质量浓度,然后在第7天和第14天通过RT-PCR方法检测血管生成素1、缺氧诱导因子1α、肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子等相关成血管基因的表达量。 结果与结论：①加入生长因子后,细胞增殖能力明显提高,联合作用效果更优,最佳组合为80 μg/L VEGF+   80 μg/L PDGF-BB;②VEGF、PDGF-BB都可以促进血管生成素1、缺氧诱导因子1α、肝细胞生长因子和胰岛素样生长因子的mRNA表达,联合应用时效果最佳;③缺氧诱导因子1α、肝细胞生长因子 mRNA表达随时间延长有所升高,差异有显著性意义(P < 0.05);而血管生成素1、胰岛素样生长因子 mRNA表达量随时间延长有所降低,差异有显著性意义(P < 0.05);④体外实验结果证明,当VEGF和PDGF-BB质量浓度均为80 μg/L时,能够持续稳定促进整个血管形成过程,且促进作用优于单独一种生长因子。ORCID: 0000-0003-1918-579X(何惠宇) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

rhIFN-α、rhIL-2对血管内皮细胞调控的实验研究

目的：探讨干扰素-α(rhIFN-α)和白细胞介素-2 (rhIL-2) 对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移、细胞周期及血管内皮生长因子(VEGF)含量的影响。 方法： 以离体培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)为模型，采用MTT法测定细胞增殖，流式细胞术分析其细胞周期，琼脂糖刮除法检测其对内皮细胞迁移的影响；采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测上述细胞因子作用下培养的HUVEC血管内皮生长因子（VEGF）在上清液中的含量。 结果： rhIFN-α组细胞增殖和迁移数分别为0.199±0.009和75.750±23.330，rhIL-2组为0.217±0.005和49.250±8.140，而合用组为0.183±0.080和40.500±17.230，与对照组（0.248±0.005和160.500±13.220）比较，有显著差异（均P<0.01）；细胞周期中S期细胞数目，rhIFN-α、rhIL-2单用或合用组分别为14.18±0.55、13.31±0.78、10.05±0.43，而对照组为15.99±1.02（P<0.05或P<0.01）。单独应用rhIFN-α或rhIL-2可显著增加上清液中VEGF含量（P<0.01），而合用组上清液中VEGF水平与对照组比较，差异无显著（P>0.05）。 结论： rhIFN-α、rhIL-2有抑制血管内皮细胞（VEC）增殖、迁移及DNA合成的作用，两细胞因子合用时具有联合效应，提示其在血管生成性疾病的治疗中可能具有一定的作用。     

血管内皮细胞生长因子表位肽体外抗肿瘤作用研究

目的:研究筛选血管内皮细胞生长因子(VEGF)不同表位肽抗肿瘤及抗血管新生效用。方法:构建4种不同的pCANTAB5-E/VEGF表位肽载体,将VEGF表位肽通过噬菌体展示技术展示于噬菌体表面,MTT法检测VEGF噬菌体表位肽对黑色素瘤细胞(B16)、人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,Transwell小室检测其对B16F10细胞迁移的影响,ECMgel检测其对HUVEC成管的影响。结果:筛选出VEGF的4种(VSB、VNB、VEB、VTB)表位肽中,VNB对HUVEC细胞增殖的抑制率达到64.8%,VEB、VTB对B16的增殖抑制率分别为75.7%和66.5%。4株表位肽对高转移细胞B16F10迁移抑制率均超过80%。结论:筛选得到的4株VEGF表位肽对黑色素瘤细胞、血管内皮细胞的增殖、迁移和成管有抑制作用,通过分析其表位区段后可制备成小分子多肽,为今后抗肿瘤多肽药物和疫苗的研发奠定基础。     

HB-EGF promotes angiogenesis in endothelial cells via PI3-kinase and MAPK signaling pathways

OBJECTIVE: Heparin-binding EGF-like growth factor (HB-EGF) belongs to the epidermal growth factor (EGF) superfamily of ligands. It has been implicated as a regulator of angiogenesis. However, the mechanisms by which HB-EGF promotes angiogenesis are unknown. The goal of the present study was to define the pathways by which HB-EGF stimulates angiogenesis in endothelial cells. METHODS: To characterize the angiogenic activity of HB-EGF, we treated human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) with HB-EGF and analyzed the effects on cell proliferation, migration and tube formation. Side-by-side assays with EGF were used for comparison. RESULTS: Both HB-EGF and EGF stimulated HUVEC migration in scratch assays and promoted vascular tube formation in 2D-angiogenesis assays, without inducing cell proliferation. HB-EGF- and EGF-induced HUVEC migration and capillary tube formation were dependent upon activation of PI3K, MAPK and eNOS. Importantly, HB-EGF-and EGF-induced tube formation was comparable to, but were independent of tube formation induced by VEGF. CONCLUSIONS: We have demonstrated that HB-EGF and EGF induce angiogenesis via activation of PI3K, MAPK and eNOS in a VEGF-independent fashion. Thus, the role played by HB-EGF in stimulating physiologic processes such as wound healing in vivo may be dependent, in part, on its ability to promote angiogenesis.     

Hepatocyte growth factor enhances vascular endothelial growth factor-induced angiogenesis in vitro and in vivo

Vascular endothelial growth factor (VEGF) is an important mediator of angiogenesis in both physiological and pathological processes. Hepatocyte growth factor (HGF) is a mesenchyme-derived mitogen that also stimulates cell migration, and branching and/or tubular morphogenesis of epithelial and endothelial cells. In the present study, we tested the hypothesis that simultaneous administration of HGF and VEGF would synergistically promote new blood vessel formation. HGF acted in concert with VEGF to promote human endothelial cell survival and tubulogenesis in 3-D type I collagen gels, a response that did not occur with either growth factor alone. The synergistic effects of VEGF and HGF on endothelial survival correlated with greatly augmented mRNA levels for the anti-apoptotic genes Bcl-2 and A1. Co-culture experiments with human neonatal dermal fibroblasts and human umbilical vein endothelial cells demonstrated that neonatal dermal fibroblasts, in combination with VEGF, stimulated human umbilical vein endothelial cells tubulogenesis through the paracrine secretion of HGF. Finally, in vivo experiments demonstrated that the combination of HGF and VEGF increased neovascularization in the rat corneal assay greater than either growth factor alone. We suggest that combination therapy using HGF and VEGF co-administration may provide a more effective strategy to achieve therapeutic angiogenesis.     

Differential influences of bFGF and VEGF on the expression of vascular cell adhesion molecule-1 on human umbilical vein endothelial cells]

A fundamental feature of inflammation includes angiogenesis, adhesion of leukocytes to vascular endothelium, and entry of leukocytes into inflamed tissues. Recent studies have suggested that angiogenesis and cellular adhesion may be mutually linked processes. Both basic fibroblast growth factor (bFGF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) have been shown to facilitate angiogenesis. However, their roles in the expression of adhesion molecules on the endothelial cells have not been clarified. The current studies therefore examined the effect of bFGF and VEGF on the expression of vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) on human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) stimulated with tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha). HUVEC (1 x 10(4)/well) were incubated in a 96 well microtiter plate with culture medium containing endothelial cell growth supplement (ECGS) for 24 h. After the incubation, culture medium was replaced by ECGS free culture medium with or without TNF-alpha (10 ng/ml), bFGF (10 ng/ml) and VEGF (10 ng/ml), and the culture was further carried out for additional 24 h. The expression of VCAM-1, E-selectin, and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) was measured by cell ELISA and the proliferation of HUVEC was measured by MTT colorimetric assay. Soluble VCAM-1 (sVCAM-1) in the supernatants were assessed by ELISA. Although, both bFGF and VEGF supported the proliferation of HUVEC, bFGF, but not VEGF, selectively suppressed the expression of VCAM-1 on HUVEC stimulated with TNF-alpha. The expression of ICAM-1 and E-selectin induced by TNF-alpha was not inhibited by either bFGF or VEGF. In addition, bFGF also decreased the levels of sVCAM-1 in the supernatants of TNF-alpha stimulated HUVEC. The data indicate that bFGF, but not VEGF, suppresses the production of VCAM-1 by HUVEC under stimulation with TNF-alpha. These results therefore suggest that angiogenic cytokines bFGF and VEGF play different roles in the regulation of the expression of adhesion molecules on endothelial cells under inflammation.     

缺氧预处理脐带间充质干细胞诱导分化为内皮样细胞

背景：糖尿病下肢血管病变发病率的升高,使如何通过改善下肢血管及增加新生血管生成成为关注的焦点,临床上已用人脐带间充质干细胞局部肌肉注射进行治疗,但是具体的治疗效果及机制尚不明确。 目的：探讨缺氧预处理及氯化钴培养液对脐带间充质干细胞诱导分化为内皮样细胞的影响。 方法：分离、培养脐带间充质干细胞,经不同浓度氯化钴模拟体内病理状态下的缺氧,通过ELISA检测细胞上清中碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子基因水平表达、MTT检测细胞增殖,选取最适氯化钴浓度,染色体进行氯化钴诱导前后安全性检测,用含10 µg/L血管内皮生长因子、10 µg/L的碱性成纤维细胞生长因子及体积分数10%胎牛血清的DMEM-LG/F12培养液向内皮样细胞方向诱导分化,鉴定诱导前及诱导后内皮样细胞表型CD31、假性血友病因子,通过三维血管形成模型的观察进行诱导前后脐带间充质干细血管形成能力检测。 结果与结论：分离的脐带间充质干细经流式鉴定高表达脐带间充质干细相关表面标志。经含不同浓度氯化钴的培养液处理后,细胞增殖与作用时间呈正相关。根据碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子基因水平的表达,验证得出氯化钴浓度为200 µmol/L为最适浓度。染色体检测显示氯化钴干预后的安全性可靠。诱导后CD31及假性血友病因子强阳性表达,三维血管成形观察显示脐带间充质干细诱导后可形成直径大小不等的管腔样结构,证实脐带间充质干细可诱导为内皮样细胞,且具有成血管的能力。