寨卡病毒E、NS5蛋白生物信息学分析

目的对寨卡病毒(ZIKV)E蛋白和NS5蛋白序列进行生物信息学比较研究,并分析其意义。方法利用多种生物信息在线分析工具和软件包对ZIKV E、NS5基因及编码蛋白与其他黄病毒属代表株序列比对,计算核苷酸和氨基酸同源性。预测ZIKV E、NS5蛋白跨膜区、信号肽与二级结构以及B细胞表位。结果不同地理株的ZIKV E蛋白核苷酸和氨基酸同源性分别为87.1%～100%和94.2%～100%,与黄病毒属中Spondweni病毒最接近,氨基酸同源性最高达72.8%。不同地理株的ZIKV NS5蛋白核苷酸和氨基酸同源性分别为88%～99.9%和95.5%～100%,与Spondweni病毒最接近,氨基酸同源性最高达77.5%。E蛋白二级结构以无规则卷曲居多,占50.79%,存在两个跨膜结构区域461～479aa、483～501aa,信号肽断裂位点位于501aa,可能的抗原表位区域有:317～342aa、155～181、66～89、226～238、380～384aa;NS5蛋白二级结构也以无规则卷曲居多,占51.60%,无跨膜结构区域,信号肽断裂位点位于152aa,可能的表位区域有100～114aa,、360～372、148～159、688～707aa。结论预测到ZIKV E、NS5蛋白的基本结构特征和潜在的线性B细胞表位,为ZIKV的疫苗研究和免疫诊断试剂的研制打下基础。     

Homer蛋白在钙通道调控中作用研究进展

Homer蛋白是一种支架蛋白,包括Homer1、Homer2和Homer3 3种受体蛋白及其剪接体。Homer蛋白参与调节一系列Ca~(2+)调控蛋白,包括代谢性谷氨酸受体、三磷酸肌醇受体、瞬时受体电位通道、兰尼碱受体、基质相互作用分子1及Orial。Homer蛋白调控细胞内多种钙通道的开关。Ca~(2+)作为细胞内主要信使,参与多种细胞和组织生理活动,包括细胞吞噬、凋亡及基因调节,而细胞内Ca~(2+)稳态的维持需多种钙通道参与,阐明Homer对细胞内钙通道调控的作用有一定意义。本文就Homer蛋白在钙通道调控中作用的研究进展作一综述。     

血栓调节蛋白与炎症反应

血栓调节蛋白(TM)是一含有575个氨基酸和5个主要基团的完整的膜糖蛋白,它可出现在动脉、静脉、毛细血管和淋巴管的内皮细胞表面。人类TMcDNA已分离并可表达于中国仓鼠卵细胞〔1〕,这种可溶性人TM含有1、2和3主要基团(氨基酸1491),但它不是跨膜结构和天然单链TM的细胞浆尾。TM是     

基因1b型HCV不同截短片段核心蛋白在HepG2亚细胞器中的定位表达

目的 为进一步探讨HCV核心蛋白(CORE)在HCV致病机制中的作用,观察基因1b型不同截短片段CORE在瞬时转染HepG2细胞中亚细胞器的分布状况.方法 将含有增强型绿荧光蛋白(EGFP)的3个基因1b型不同准种HCV和同一准种5个不同截短片段的CORE融合蛋白真核表达质粒pEGFF-CORE,瞬时转染HepG2细胞,用荧光显微镜及激光共聚焦观察它们在亚细胞的分布状况.结果 基因1b型不同准种CORE的N端1～172氨基酸(腿)主要表达于胞质,含有N端越长表达于胞质内越多,而N端1～58 aa主要表达于核内,而59～126 aa及127～172 aa胞质和核内均有表达.结论 不同区段CORE在细胞内亚细胞器的表达部位不同,与其在致病机制中功能的发挥可能存在一定的关系.     

蛋白C系统分子生物学研究的近况

蛋白C(PC)系统是由PC、蛋白S(PS)、蛋白C抑制物(PCI)及血栓调节蛋白(TM)所组成,在机体抗凝功能中起重要作用.此系统的分子生物学研究及其应用进展很快,现摘要介绍如下.一、各成份的基因、结构与功能的关系(一)PC PC的基因长11.2Kb(表1),有8个外显子(A-H),7个内含子.其启动子区有一个TATA盒,位于-34至-25.内含子含92-2668个碱基(bp),而外显子只有25-885个bp.PC的mRNA约有1700(1717)个bp,其中99个编码信号肽,27个编码连接前肽,1257个编码重链及轻链,296个是3′非编码区其后为38个bp的多聚腺苷酸.人类PC是由419个氨基酸(AA)残基所组成的单链.在合成后加工时,赖156-精157被除去,成为双链PC.在血浆中,85-95%的PC以双链形式     

融合蛋白TAT-NEP1-40对PC12细胞氧糖剥脱模型保护作用的研究

目的观察融合蛋白TAT-NEP1-40的细胞转导功能及其对PC12细胞氧糖剥脱模型(OGD)损伤的保护作用。方法含80nmol/L浓度TAT-NEP1-40的DMEM培养液孵育PC12细胞60min后,用免疫荧光染色法检测该融合蛋白的细胞转导功能;以Na2S2O4造成缺氧合并缺糖模拟PC12细胞缺血性损伤,分别给予TAT-NEP1-40、TAT-β-gal及β-gal等进行处理,利用MTT比色法、FCM法及Hoechst33258染色法检测PC12细胞存活情况并计算保护率,观察TAT-NEP1-40对模拟PC12细胞缺血性损伤的保护作用。结果 (1)TAT-NEP1-40蛋白能跨细胞膜进入PC12细胞;(2)该蛋白具有保护作用,最大保护率为66.8%;(3)该蛋白能提高PC12细胞拟缺血损伤时的存活率,TAT-NEP1-40较OGD模型组高,活细胞生存率分别为(90.05±1.83)%、(77.10±2.00)%,P<0.05。结论融合蛋白TAT-NEP1-40具有细胞转导功能,对体外模拟PC12细胞缺血性损伤具有保护作用。     

多囊蛋白-1 LRR-WSC区单克隆抗体的制备及其在免疫组织化学诊断中的应用

目的 用杂交瘤技术制备抗多囊蛋白-1 LRR-WSC区单克隆抗体，检测多囊蛋白-1在肾组织和肾细胞株中的分布和定位。方法 用多囊蛋白-1 LRR-WSC区融合蛋白PCI-e免疫BALB／c小鼠，将其脾细胞与骨髓瘤细胞株SP2／0进行细胞融合，间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选出阳性克隆，有限稀释法将杂交瘤细胞株单克隆化，间接ELISA法和免疫印迹法(WB)鉴定抗体的特异性。用制备的抗多囊蛋白-1 LRR-WSC区单克隆抗体，免疫组织化学和免疫细胞化学法检测多囊蛋白-1在不同肾组织和肾细胞株中的分布。结果 细胞融合后经筛选和克隆得到的杂交瘤细胞株经WB分析表明，该细胞株分泌的单克隆抗体能特异地与多囊蛋白-1 LRR-WSC区结合。免疫组织化学显示，多囊蛋白-1主要分布于正常肾组织的远端肾小管和集合管，在胎肾囊肿组织中表达于近端肾小管，在人常染色体显性多囊肾病(ADPKD)肾囊肿组织中，表达于囊肿衬里上皮细胞，同时在ADPKD肾囊肿衬里上皮细胞系和猪近端肾小管细胞株(LLC-PK1)中也发现了多囊蛋白-1的表达。结论 本实验成功制备了抗多囊蛋白-1 LRR-WSC区的单克隆抗体，该抗体对深入研究ADPKD的发病机制具有重要意义。多囊蛋白-1在肾组织中的表达模式对肾小管的形态发生、维持肾小管结构的完整性非常重要。     

水通道蛋白9与消化系统疾病

水通道蛋白是一组对水有高选择性的跨膜转运蛋白,广泛分布在机体各组织,在水的分泌吸收、细胞内外水平衡等过程中起着重要作用。水通道蛋白9(AQP9)是水通道蛋白家族成员之一,是1998年发现的一种新的水通道蛋白亚型,现就AQP9的基本特点,在消化道的分布、表达,与疾病的关系作一     

水通道蛋白-4与脑水肿关系的研究

水通道蛋白(AQPs)是近年来研究水液代谢疾病的热点,水通道蛋白-4(AQP4)是美国科学家Agre教授于1994年分离发现的[1],它是水通道蛋白家族的一个成员.迄今为止,已从哺乳动物组织中鉴定中13种AQPs[2].脑组织中的AQP主要为AQP4.AQP4是分布于脑组织中的主要水通道蛋白.     

CD47单抗与CD38单抗对输血前检查的影响对比分析

<正>CD47是一种广泛表达的跨膜糖蛋白,也称为整联蛋白相关蛋白(IAP),分子量52kDa^[1]。该蛋白具有免疫球蛋白可变的N端结构域、5个跨膜结构域和一个短的C端胞内尾,胞内尾部有四种可变不同剪接异构体,从而形成4个亚型。CD47亚型2主要在造血细胞、血管内皮细胞和上皮细胞中表达,     

钙离子和钙网织蛋白对心肌细胞的作用

目的:阐述钙离子与钙网织蛋白对心肌细胞的作用。资料来源:检索PubMed 1994-01/2005-12与钙离子和钙网织蛋白对心肌细胞作用的相关文章,检索词为“Ca2 ,calreticulin,cardiomy-ocytes/cardiac myocyte,differentiation”,并限定语言种类为英语。资料选择:对所检索到的文献进行初筛,选择与钙离子和钙网织蛋白对心肌细胞作用的相关文章,筛除明显不符合原文的文章和重复性研究。资料提炼:共收集相关文章200篇,纳入42篇,排除158篇。资料综合:通过对内质网和肌质网上细胞内Ca2 释放通道(RyR和IP3R)的分子结构以及crt基因结构的研究表明:通道分子和钙网织蛋白共同参与调控体内Ca2 稳态,从而在心脏发育分化过程中发挥重要作用。结论:在心脏中细胞内游离Ca2 是一种关键的第二信使,细胞内Ca2 稳态的改变会显著影响许多心脏功能包括收缩舒张和心脏发育。细胞内Ca2 稳态的维持主要依赖内质网。在内质网中,钙离子主要与钙网织蛋白结合。crt基因敲除可损伤心脏发育而导致胚胎死亡。     

肺水通道蛋白与慢性阻塞性肺疾病

<正>20世纪90年代初发现第一个水通道蛋白AQP1(aquaporin1),自此越来越多的水通道蛋白被发现,并且对水的跨膜转运有了新的了解和认知[1]。目前在哺乳动物体内体内发现的水通道蛋白有13种之多,AQP0-12[2]。而在肺组织中主要分布的有AQP1、AQP3、AQP4及AQP5,并且他们在肺水转运中起着不可或缺的作用,近年来的研究表明:肺水通道的异常表达与慢性阻塞性肺疾病的气道炎症、气道黏液高分     

水通道蛋白在腰椎间盘退变过程中作用的研究进展

腰椎间盘退行性疾病是临床引起腰腿痛的常见疾病,严重危害人类健康,目前认为其发病机制主要包括分子生物学因素、遗传学因素、生物力学因素、营养因素等[1-4]。椎间盘退变时出现的一个特征性改变是椎间盘含水量的下降[5]。以前多认为营养物质和水分是通过渗透作用进出椎间盘,但自从水通道蛋白(aquaporins,AQPs)被发现后,外界认为水的跨膜转运有2种基本形式,一种是简单扩散,另一种是AQPs的水     

异型缝隙连接通道选择通透性研究进展

缝隙连接通道(gap junction channels,GJ)由相邻细胞间连接蛋白(connexins,Cx)聚合形成六聚体半通道(连接子)对接组成[1].缝隙连接蛋白经四次跨膜(M1-M4),产生两个胞外环(E1-E2)和一个胞内环,胞内环和羧基末端存在调控电导率,pH依赖性,电压依赖性和对小分子物质选择通透性区域[2].六个亚单位都相同则称之为同聚体连接子,两个或两个以上亚单位不同则称之为异聚体连接子,相同连接子对接形成同型缝隙连接,反之,称为异型缝隙连接[3].并非所有CX都可以相互组合在一起,迄今只对部分检测了彼此相容性[4],Cx在功能上不能相容可能因通道不能开放而在结构上却能对接成形成GJ[5].本文主要对异型缝隙连接通道的物质选择通透性相关研究进展作一综述.     

水通道蛋白与神经系统疾病关系的研究进展

水通道蛋白是细胞膜上具有高度选择性的自由水分子跨膜转运通道蛋白,在生理情况下可调节细胞内外水及电解质的平衡;在各种病因的作用下,其与病理损害及水肿形成有关,同时对诊断视神经脊髓炎有重要意义。调节或阻遏水通道蛋白的表达以减轻各种病理损伤和脑水肿,将为,临床疾病的诊治提供新的思路和方法。该文就水通道蛋白与神经系统疾病关系的研究进展进行了综述。     

沙眼衣原体外膜蛋白2重组蛋白的表达纯化和免疫性鉴定

目的表达沙眼衣原体外膜蛋白2,纯化表达产物,并对其免疫性进行鉴定。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术获得沙眼衣原体D型外膜蛋白2第167～434位氨基酸的编码基因片段,将此片段克隆于表达载体pET28b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE、蛋白印迹试验分析表达产物,亲和层析法纯化重组蛋白;重组蛋白免疫家兔以检测其免疫原性。结果重组质粒酶切分析及DNA测序证实成功构建pET28b(+)/Omp2aa167～aa434表达质粒;通过优化表达和纯化条件,获得了相对分子质量约为35.0×103纯化蛋白产物,蛋白印迹试验证实该重组蛋白能与Ct感染者阳性血清反应;ELISA法测定免疫血清特异性抗体效价在1∶1280以上。结论表达的重组外膜蛋白2aa167～aa434具有良好的免疫性。     

大鼠细胞因子信号转导抑制因子-1基因的多态性及其结构分析

目的 扩增大鼠细胞因子信号转导抑制因子-1(SOCS-1)基因,利用生物信息学方法预测其结构和功能特征,为进一步的实验研究提供理论指导.方法 扩增并测序大鼠的SOCS-1编码区序列,利用生物信息学网站的在线分析工具和Vector NTI suite软件包,识别大鼠SOCS-1基因并预测其编码蛋白质的各种结构特征,根据该基因构建其分子进化树.结果 聚合酶链反应(PCR)扩增获得2个序列不同的SOCS-1基因,BLASTx分析该基因为全长基因,该基因全长639 bp,编码212个氨基酸(aa),具有1个SOCS盒(aa172～aa208),1个Scr同源区2(SH2)结构域(aa80～aa155)和1个核定位序列(aa160～aa174),一级结构含有2个线性B细胞抗原表位,全部位于蛋白的表面,并在空间结构上相距较远.结论 SOCS-1基因具有基因多态性,其保守的SH2区域及SOCS盒与其对信号转导通路抑制作用有关,而其核定位序列可能影响其他核转导因子,B细胞线性表位则在免疫诊断方面有较好的应用前景.     

肺水通道蛋白与肺疾病

水是生物机体细胞的主要成分,细胞摄取和排出水分是生命最基本地的活动之一。长期以来,人们普遍认为细胞内外的水分子是以简单的跨膜扩散方式来通过脂质双层膜,但某些细胞如红细胞、肾近曲小管上皮细胞对渗透压引起的水通透性很高,很难单纯以弥散来解释。Agre(1991年)及其同事完成了第一个水通道蛋白的cDNA的分子克隆和功能鉴定,证实了在哺乳动物的细胞膜上存在特异转运水的通道-水通道蛋白(Aquaporin),近年来逐渐鉴别了有关AQP家族,从而使水代谢的研究进入了一个新的阶段。目前已鉴定出6种肺水通道蛋白,其中AQP1、AQP3、AQP4、AQP5…     

蛋白C系统与脓毒症

蛋白 C(protein C,PC)系统是体内抗凝的主要成分之一〔1 ,2〕。 PC在体内为一种维生素 K依赖性丝氨酸蛋白酶原 ,受凝血酶凝血酶调节蛋白 (thrombinthrombomodulin,T TM)复合物激活为活性 PC (activated protein C,APC ) ,灭活凝血因子 a、 a而达到抗凝作用。近年来 ,随着脓毒症 (sepsis)病理生理的研究进展 ,PC在脓毒症治疗中的作用受到人们重视 ,并成为研究热点。1　脓毒症病因学的新认识近年来 ,感染、炎症、内环境的联系持续受到人们的重视 ,炎症级联和凝血级联及其相互作用可能是脓毒症预后的决定因素〔3,4〕。1.1　炎症级联 :…     

水通道蛋白-1与腹膜透析超滤相关性的研究进展CSCD

研究证实腹膜组织上有水通道蛋白-1(aquaporin 1,AQP1)表达,AQP1是腹膜超小孔的分子对应物,在腹膜跨细胞水转运中起重要作用,其结构或功能受损及在细胞内分布的改变可能导致超滤衰竭(ultrafiltration failure,UFF)的发生,是引起腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)失败的主要原因之一,AQP1编码基因的一种常见变异与超滤(ultrafiltration,UF)减少和患者预后、技术生存率下降显著相关,证实腹膜UF功能受到遗传背景的影响。调控AQP1表达的因素包括渗透性调控、药物调控、pH调控,AQP1通道活性调控等。近年来发现,腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells,PMCs)也表达AQP1,且与UF存在相关性,在PD过程中AQP1可能具有更多重要功能,譬如AQP1对PMCs、腹膜纤维化改变具有保护作用,以AQP1作为调控靶点在改善PD超滤功能中的作用也越来越受到关注,特别在AQP1基因水平、通道活性选择性药理学调节方面。本文将对AQP1与PD超滤相关性的研究进展进行综述。