VEGF165转染大鼠血管内皮细胞对新生血管形成影响的实验研究

目的探讨血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）基因与增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）共表达载体转染大鼠血管内皮细胞，植入大鼠体内，观察诱导新生血管情况，为移植组织诱导新生血管形成奠定基础。方法对质粒pIRES2-EGFP／VEGF，岱进行扩增、纯化，以脂质体法转染大鼠血管内皮细胞并植入肾被膜下。采用荧光显微镜检测增强绿色荧光蛋白在内皮细胞中的表达，用流式细胞仪检测转染效率。用RT-PCR检测VEGF mRNA的表达。免疫组化检测VEGF在内皮细胞中的表达。切取移植肾脏组织标本,HE染色观察组织形态学变化。结果荧光显微镜观察到实验组内皮细胞有特异性的EGFP表达。流式细胞仪分析转染效率为13．06％。实验组血管内皮细胞胞核和胞浆中均有VEGF表达。RT-PCR显示实验组大鼠血管内皮细胞中有人源化VEGF165基因在mRNA水平表达。移植后14d，实验组大鼠肾被膜下可见成团的新生毛细血管网形成，而对照组及空白转染组尽管血管内皮细胞仍存活，但未形成明显血窦。结论转染VEGF是促进内皮细胞早期（14d内）形成新生血管的有效途径。     

低能量体外震波对糖尿病慢性创面模型血管新生和血管内皮细胞生长因子表达的影响**☆

背景：体外震波作为一种非侵入性的物理刺激近年来发现具有促进新生血管形成、促进组织修复的功能。 目的：观察体外震波对创面内血管内皮细胞生长因子表达和新血管形成的影响及促进创面愈合的作用。 方法：72只SD大鼠随机均分为治疗组、糖尿病组及对照组。治疗组和糖尿病组制作糖尿病慢性创面模型。建模后1 d治疗组创面用体外震波处理,糖尿病组和对照组仅涂抹耦合液。观察创面的肉芽组织和新血管形成情况,检测血管内皮细胞生长因子蛋白含量及mRNA的表达水平。 结果与结论：与糖尿病组比较,治疗组创面的闭合率增加。治疗后3 d开始,治疗组创面内毛细血管数量比糖尿病组增多,肉芽组织相应增加。与对照组比较,糖尿病组血管内皮细胞生长因子蛋白含量和mRNA表达水平在3 d和7 d均降低,在7 d出现下降。经体外震波治疗后,各时间段表达均增高,在14 d出现下降。说明糖尿病创面局部血管内皮细胞生长因子分泌量降低和高表达时段缩短是其难愈的重要因素之一,体外震波治疗可增加糖尿病创面组织内血管内皮细胞生长因子的表达强度,延长其高表达的时间,从而促进创面内新血管形成,最终加快肉芽组织生长和创面愈合。关键词：体外震波;糖尿病创面;血管内皮细胞生长因子;血管新生;愈合 缩略语注释：VEGF: vascular endothelial growth factor,血管内皮细胞生长因子 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.15.019     

黄芪注射液对体外血管新生的影响

背景：血管新生受生长因子的影响,黄芪可与血管内皮生长因子具有协同促血管新生的功效,但机制尚不明确。 目的：通过与单一血管内皮生长因子干预比较,观察中药黄芪对体外血管新生的作用机制。 方法：将黄芪注射液及血管内皮生长因子作用于SD大鼠胸主动脉内皮细胞,应用细胞增殖、细胞迁移、小管形成实验观察黄芪注射液对体外血管新生的促进作用,用Western blot实验检测血管内皮生长因子的表达。 结果与结论：黄芪能明显促进大鼠胸主动脉内皮细胞的增殖(P < 0.01),迁移的细胞数增加(P < 0.01),胸主动脉内皮细胞的小管形成数增加(P < 0.01),并明显促进内皮细胞血管内皮生长因子的表达(P < 0.01)。说明黄芪能明显促进内皮细胞增殖、细胞迁移、小管形成,具有显著的促进体外血管新生作用,其机制可能是通过增加血管内皮生长因子的表达而实现的。     

牵张应力介导细胞成骨分化及相关基因的表达

背景：ERK1/2信号通路和核因子κB信号通路是否参与了牵张应力作用下MC3T3-E1细胞成骨分化及相关基因表达的调控,尚不清楚。 目的：观察机械牵张应力对作用下ERK1/2和核因子κB通路对成骨细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙蛋白、白细胞介素6表达的影响,探讨ERK1/2与核因子κB信号通路对成骨细胞分化的调控作用。 方法：体外培养的MC3T3-E1细胞,以ERK1/2通路特异性抑制剂PD098059及核因子κB通路抑制剂PDTC分别处理30 min后加载12%的拉伸应变率24 h,以正常细胞及单纯加载12%牵张应力24 h为对照。采用ELISA及Real-time PCR方法检测细胞加载前后碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原、骨钙蛋白及白细胞介素6 mRNA的表达。 结果与结论：在12%牵张应力作用下,MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、白细胞介素6的表达受ERK1/2信号通路的调控,而骨钙蛋白基因表达的变化不受ERK1/2通路的影响。核因子κB信号通路抑制剂PDTC可显著抑制机械牵应张力作用下MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性的降低,同时抑制白细胞介素6基因的表达,而Ⅰ型胶原、骨钙蛋白基因表达的变化不受核因子κB信号通路的影响。结果表明牵张应力可以通过ERK1/2和核因子κB通路影响MC3T3-E1细胞的成骨分化及相关基因表达。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

黄芪-脉络宁胶原促进体外胸主动脉内皮细胞血管新生的实验研究

目的:探讨黄芪-脉络宁胶原对血管新生的细胞学影响及其可能机制,为其应用于临床提供理论依据。方法:应用增殖、迁移、管腔形成实验观察黄芪-脉络宁胶原对大鼠胸主动脉内皮细胞在血管新生各阶段的作用,用Western Bloting实验检测大鼠胸主动脉血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达率。结果:黄芪-脉络宁胶原能明显促进大鼠胸主动脉内皮细胞的增殖率(与对照组比较,增加了90.22%,P<0.01)、迁移率(与对照组比较增加了211.43%,P<0.01)、管腔形成数(是对照组的2.46倍,P<0.01),同时刺激VEGF蛋白表达比对照组增加63.8%(P<0.01)。结论:黄芪-脉络宁胶原能明显促进内皮细胞增殖、迁移、管腔形成,具有显著促体外血管新生作用,其机制可能与增加VEGF蛋白的表达有关。     

枸杞多糖干预糖尿病大鼠颌下腺组织中核因子κB的表达

背景：核因子κB是一种广泛存在于体内多种细胞的核转录因子,能介导多种炎性递质转录表达,也参与细胞凋亡的调控。 目的：观察枸杞多糖对糖尿病大鼠颌下腺组织中核因子κB表达的影响。 方法：60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、补枸杞多糖组,后2组用四氧嘧啶诱发糖尿病大鼠模型。造模成功后补枸杞多糖组灌胃50%枸杞多糖水溶液,糖尿病组和对照组灌胃等容量生理盐水,连续灌胃8周。 结果与结论：灌胃8周后糖尿病组和补枸杞多糖组体质量低于正常对照组(P < 0.05),补枸杞多糖组体质量高于糖尿病组(P < 0.05)。灌胃8周后糖尿病组、补枸杞多糖组血糖高于正常对照组(P < 0.05),补枸杞多糖组血糖低于糖尿病组(P < 0.05)。核因子κB在正常颌下腺中无表达或仅有少量表达;糖尿病时表达量明显增多,而补枸杞多糖组表达量则明显减少。结果可见枸杞多糖能够抑制核因子κB的活化与表达,对糖尿病大鼠颌下腺组织起到一定的保护作用。     

MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型血管内皮生长因子和核因子κB1的表达

背景：恶性肿瘤耐药研究中发现核因子κB1及血管内皮生长因子基因可能与肿瘤耐药密切相关。 目的：观察MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型中血管内皮生长因子和核因子κB1表达的差异。 方法：对数期生长的MG63细胞采用阿霉素浓度递增培养法冲击诱导建立MG63/ADR细胞株。BALB/C裸鼠随机分为2组,分别将含5.0×106个MG63和MG63/ADR细胞的0.2 mL细胞悬液采用皮下接种法注入裸鼠的一侧腋部皮下。第6周处死裸鼠取材。 结果与结论：注射MG63和MG63/ADR细胞的2组裸鼠成瘤率均为100%;免疫组织化学及RT-PCR方法检测发现MG63/ADR组瘤灶中血管内皮生长因子和核因子κB1基因和蛋白的表达均明显高于MG63组(P < 0.05)。说明血管内皮生长因子和核因子κB1表达的上调可能是导致骨肉瘤耐药的重要原因。     

天然、重组水蛭素对随意皮瓣淤血模型血管内皮细胞生长因子的影响

背景：随意皮瓣移植后易发生皮瓣静脉淤血,甚至坏死,临床与动物实验证明水蛭素能够提高淤血皮瓣的成活率。 目的：观察水蛭素对大鼠随意皮瓣淤血模型成活保护作用。 方法：Wistar大鼠30只背部设计随意皮瓣10 cm×3 cm制成淤血模型,随机分为天然水蛭素组、重组水蛭素组和对照组,分别于皮下注射5 U天然水蛭素、5 U重组水蛭素和生理盐水。术后测定血管内皮细胞生长因子含量及血管内皮细胞生长因子mRNA表达量,计算皮瓣成活率。 结果与结论：天然水蛭素组与重组水蛭素组皮瓣成活率比对照组高(P< 0.05)。天然水蛭素组与重组水蛭素组比对照组新生毛细血管血管内皮细胞生长因子表达多(P < 0.05),且天然水蛭素组最多。提示天然、重组水蛭素均能够促进随意皮瓣血管内皮细胞生长因子表达,有利于新生血管的生成,能够提高随意皮瓣的成活率,且天然水蛭素效果优于重组水蛭素。     

黄芪、脉络宁注射液载入修饰胶原对鸡胚尿囊膜血管新生的协同促进作用

背景:课题组先期研究发现黄芪载入修饰后胶原可以促进血管新生,与生长因子载入疗效相当,运用中医理论中具有协同作用的中药合用是否能进一步提高疗效尚不清楚。目的:探查黄芪、脉络宁载入修饰后胶原促鸡胚尿囊膜血管新生及长入胶原的疗效,并证明黄芪与脉络宁是否有协同作用。方法:实验分空白组、控制组(单纯胶原)、黄芪组(黄芪注射液1mL载入胶原)、脉络宁组(脉络宁注射液1mL载入胶原)、黄芪+脉络宁组(黄芪注射液及脉络宁注射液各0.5mL载入胶原),各组植入鸡胚尿囊膜孵化7d后取出,测定鸡胚尿囊膜内微血管数、各组胶原内微血管数、血红蛋白含量、rhVEGF165阳性细胞数。结果与结论:各实验组鸡胚尿囊膜内血管呈轮辐状生长及鸡胚尿囊膜包裹标本率高于空白组与控制组,鸡胚尿囊膜内微血管数、胶原内微血管数、血红蛋白含量、rhVEGF165阳性细胞数均高于控制组,差异有显著性意义(P0.01);其中黄芪+脉络宁组又高于黄芪组与脉络宁组,差异有显著性意义(P0.05)。提示黄芪、脉络宁载入胶原后可以促进鸡胚尿囊膜内血管新生并刺激血管长入胶原内,黄芪与脉络宁合用具有协同作用,机制之一为刺激血管内皮细胞血管内皮生长因子的表达。     

微囊化异种嗅球组织细胞悬液移植脊髓损伤大鼠核因子κB表达的变化

背景：研究发现,微胶囊包裹异种嗅球组织细胞可以减少免疫排斥反应,促进损伤脊髓的功能修复,但其作用途径尚不清楚。 目的：观察微囊化异种嗅球组织细胞移植于脊髓损伤大鼠后核因子κB的表达及活性变化。 方法：家兔用于制备异种嗅球组织细胞悬液。SD大鼠分为4组,即假手术组、微囊组、细胞组及单纯损伤组,后3组在建立大鼠脊髓半横断损伤模型后分别于损伤处植入明胶海绵吸附的10 μL微囊化异种嗅球组织细胞、10 μL异种嗅球组织细胞以及10 μL生理盐水。采用苏木精-伊红染色观察脊髓组织的病理学改变,免疫组织化学染色观察核因子κB的表达变化。 结果与结论：脊髓损伤后大鼠神经元细胞浆及细胞核内核因子κB表达增加,24 h达高峰水平,3 d后开始逐渐降低,7 d基本降至正常。微囊组脊髓核因子κB阳性细胞数少于单纯损伤组及细胞组(P < 0.05)。提示微囊化异种嗅球组织细胞移植对脊髓损伤后核因子κB的活性表达起抑制作用,有益于减轻核因子κB介导的炎性反应。     

A fusion protein of hepatocyte growth factor for immobilization to collagen

We describe here a fusion protein consisting of hepatocyte growth factor (HGF; an angiogenic factor) and a collagen-binding domain (CBD) polypeptide of fibronectin (FN). This fusion protein (CBD-HGF), produced by a baculovirus expression system, exhibited much stronger collagen binding activity than native HGF in the range of 0.4-6.4microg/ml. Its binding at the lowest concentration exceeded that of HGF at the highest concentration. In addition, the collagen-bound CBD-HGF promoted growth of endothelial cells (ECs) to a greater degree at least 4 days longer than HGF added to the culture medium; about 5-fold greater increase in cell number after 10 days. These findings suggest that the fused CBD moiety not only helped immobilize HGF on collagen but also helped stabilize the fusion molecule, resulting in prolonged activity. The angiogenic activity of CBD-HGF in animal tissues was examined by subcutaneously implanting collagen sponges containing bound CBD-HGF. Blood vessel formation in the sponges after 7 days was 4-6-fold extensive as compared to the control sponges without sample. Implanted sponges with native HGF did not show significant difference from control. These results indicate that CBD-HGF is suitable for in vitro culture of ECs, and that this fusion protein can be used to confer HGF activity on biomaterials for use in tissue engineering.     

黄芪多糖联合顺铂对小鼠Lewis肺癌细胞肺转移的影响

目的观察黄芪多糖(APS)联合顺铂(DDP)对小鼠Lewis肺癌细胞肺转移、核因子(NF)-κB、P38、P53及Caspase-9表达的影响。方法将90只Lewis小鼠随机分为模型组、顺铂组(6mg/kg DDP)、APS组(50、100、200)mg/kg,联合用药组[1/2 DDP+APS,即:(3+25、3+50、3+100)mg/kg]。各组均于造模第2天起用药,APS每日1次,DDP每周1次,连续20d。观察肿瘤肺转移情况,采用Real-time PCR法和Western blotting法检测肿瘤组织中NF-κB、P38、P65蛋白和基因,并用免疫组织化学检测Caspase-9的表达。结果与模型组相比,各治疗组均可降低肺转移灶数目(P0.05或P0.01);除P38外,APS中、高剂量组可使小鼠Lewis肺癌组织中NF-κB p65、P53表达降低,Caspase-9表达增高;联合用药高剂量组作用则接近DDP组。结论 APS可抑制小鼠Lewis肺癌细胞的转移,抑制NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的激活,这可能是其抑制肿瘤转移的机制之一;APS与减半剂量的DDP铂类化疗药物联合使用时,作用增强,APS对DDP有增效减毒作用。     

Collagen distribution in developing experimentally induced granulation tissue. A morphometric study

Viscose cellulose sponges were implanted subcutaneously on the back of full-grown Sprague-Dawley rats. Seven, 14, 21, 28, 42, 60 and 90 days after implantation, groups of 12 animals decapitated and the sponges were removed and processed for light microscopy. Five microns sections were stained with Picro-Sirius Red. Morphometry was performed on the zone of ingrowth and the collagen. The intersectional variation in the morphometrically determined collagen density within the sponges was below 20%. The hydroxyproline content was determined biochemically in 5 microns sections of sponges implanted for 14, 42, 60 and 90 days. A positive correlation (rho = 0.79, p less than 0.0001) was observed between the biochemically and morphometrically determined collagen contents. The morphometric determinations showed a steady increase in the granulation tissue ingrowth. At day 60 the ingrowth was complete. There was an increasing collagen density from days 7 and 14 through days 21 and 28, followed by a nearly steady state up to day 90 and a significantly higher collagen density peripherally than centrally in the day 42 sponges. The study has shown that morphometric collagen determination at light microscopical level using Sirius Red-stained sections may add quantitative data describing the dynamic changes in collagen content and distribution within developing granulation tissue.     

骨髓间充质干细胞经核转录因子κB途径干预心肌纤维化

背景：骨髓间充质干细胞移植能否直接干预心肌纤维化及其可能的机制尚不完全清楚。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植干预心肌纤维化的效果并分析其机制。 方法：分离培养雄性小鼠骨髓间充质干细胞,经尾静脉输入异丙肾性心肌纤维化雌性小鼠为治疗组,另设未治疗组和正常对照组。5周后处死小鼠,实时荧光定量PCR检测心肌y染色体鉴别基因(SRY)、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶组织抑制剂1的表达;天狼猩红染色对比心脏胶原纤维含量;免疫组织化学染色法观察心脏核转录因子κB表达。 结果与结论：骨髓间充质干细胞能归巢于纤维化心肌。与未治疗组相比,治疗组的心肌基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶组织抑制剂1和核转录因子κB表达下调(P < 0.05),胶原纤维含量下降(P < 0.05)。结果表明,骨髓间充质干细胞移植干预心肌纤维化,其机制可能与抑制核转录因子κB过度活化有关。     

齐墩果酸抗矽肺大鼠TNF-α和胶原表达的实验研究

目的:观察齐墩果酸对矽肺大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)和胶原表达的影响及其可能作用机制。方法:80只SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为对照组、模型组、齐墩果酸组和溶剂组,每组20只。除对照组外,其余组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入Si O2悬液(250 mg/kg)复制动物矽肺模型。齐墩果酸组自注射Si O2后每天给予齐墩果酸60 mg/kg灌胃,溶剂组每天用0.6%羧甲基纤维素钠溶液(10 m L/kg)灌胃,对照组用生理盐水(10 m L/kg)灌胃,连续56 d。动物分别在注射Si O2后第7、14、28和56天处死(每次每组5只)。处死后检测各组大鼠肺系数,并观察形态学变化;应用ELISA法检测大鼠血清中TNF-α的含量;试剂盒检测肺组织中总胶原蛋白含量;免疫组织化学法检测肺组织核因子κB(NF-κB)表达。结果:(1)与对照组比较,模型组和溶剂组大鼠肺系数和总胶原蛋白含量明显升高,结合形态学变化,矽肺模型造模成功。齐墩果酸组各时点肺系数和总胶原蛋白含量比模型组和溶剂组相应时点低,但比对照组高。(2)模型组和溶剂组大鼠血清中的TNF-α含量各时点明显升高,高峰在第14天,之后稍降,但明显高于对照组,差异有统计学意义;模型组与溶剂组各时点比较,差异无统计学意义。齐墩果酸组TNF-α含量与模型组相比均降低,各时点比较差异有统计学意义。(3)模型组和溶剂组大鼠肺组织中NF-κB表达量逐渐升高,至第28天达高峰,各时点与对照组比较差异均有统计学意义。齐墩果酸组的NF-κB阳性表达趋势与模型组相同,但明显低于模型组而高于对照组,各时点与对照组比较差异有统计学意义。结论:齐墩果酸通过抑制TNF-α和胶原表达减缓矽肺纤维化的发生,可能与NF-κB通路有关。     

Neovascularization in aged mice: delayed angiogenesis is coincident with decreased levels of transforming growth factor beta1 and type I collagen.

Angiogenesis, the growth of new vessels from existing microvasculature, is delayed in aged animals. In this study we asked whether this impairment might be due, in part, to changes in the expression of a growth factor, transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1), and a matrix protein, type I collagen, which have been shown to regulate angiogenesis in vivo. We implanted polyvinyl alcohol sponges subcutaneously in the dorsa of young and aged mice and examined the sponges 7 to 21 days later for the presence of invasive fibrovascular bundles. Blood vessel ingrowth and proliferative activity were assessed by immunostain for von Willebrand factor and Ki-67, respectively. The fibrovascular bundles were also analyzed for TGF-beta1 and type I collagen. Relative to young mice, angiogenic invasion of sponges in aged mice was similar at 7 days, was diminished significantly (70%) at 14 days, but was again similar by 21 days after implantation. The expression of TGF-beta1 and type I collagen mRNA and protein in fibrovascular bundles was coincident but was also delayed (42 to 47%) at 14 days in the aged mice. Moreover, levels of active TGF-beta1 were decreased (48%) in the sera of aged relative to young mice. The delay in angiogenesis in aged mice was thus associated with decreased expression of TGF-beta1 and type I collagen by neovascular bundles. We conclude that changes in the levels of growth factors and proteins in the extracellular matrix contribute to impaired angiogenesis in aging.     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及PPARγ、NF-κB表达的影响

目的:初步探讨硫化氢(H2S)对糖尿病心肌纤维化的影响及其作用机制。方法:采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射的方法制作大鼠糖尿病模型,以硫氢化钠作为外源性H2S供体。将40只雄性SD大鼠随机分为对照组、STZ组、STZ+H2S组及H2S组,每组各10只。8周后处死大鼠,HE染色及VG染色观察心肌胶原分布情况,并用图像分析系统测量心肌间质胶原容积分数。Western blotting观察大鼠心肌组织中Ⅰ型胶原、PPARγ和NF-κB的表达水平。结果:与对照组相比,STZ组大鼠心肌组织胶原纤维明显增多,Ⅰ型胶原表达水平明显升高(P0.05),PPARγ表达明显减少(P0.05),NF-κB蛋白表达水平明显升高(P0.05)。与STZ组相比,STZ+H2S组心肌胶原纤维较少,Ⅰ型胶原表达明显降低(P0.05),PPARγ表达显著上调(P0.05),NF-κB蛋白表达显著降低(P0.05),而H2S组大鼠心肌组织Ⅰ型胶原、PPARγ以及和NF-κB蛋白表达水平较对照组均无显著差异。结论:硫化氢可改善糖尿病心肌纤维化,其内在机制可能与PPARγ-NF-κB途径有关。     

NF-κB活化在IL-1β诱导的小鼠肾小球系膜细胞表达IL-6中的作用

目的:研究NF-κB在rhIL-1β刺激引起的体外培养的鼠肾小球系膜细胞表达IL-6中的作用。方法:NF-κΒ活性检测采用电泳迁移率改变法(EMSA),IL-6mRNA表达采用逆转录/聚合酶链反应(RT/PR)检测,培养上清IL-6蛋白含量采用ELISA检测。结果:rhIL-1β刺激肾小球系膜细胞时,在上调IL-6蛋白和基因表达的同时亦激活NF-κB,而且这种上调作用可被NF-κB特异性抑制剂PDTC所阻抑。结论:IL-1β诱导鼠肾小球系膜细胞表达IL-6是通过NF-κB调控,NF-κB可能参与肾小球肾炎的免疫炎症反应。     

NF-κB参与低氧预适应对自体原位肝移植大鼠JNK通路的影响

背景：在肝脏缺血再灌注损伤中,NF-κB与JNK通路的串扰方式决定了细胞的死亡或存活。而将低氧预适应用于肝移植过程所导致的细胞凋亡现象,尚未见有报道。 目的：探讨低氧预适应后NF-κB的表达对移植肝JNK通路的影响及保护作用。 方法：采用经门静脉灌注法建立大鼠自体原位肝移植模型,SD大鼠随机分为正常对照组：不接受任何处理;自体移植组：行自体原位肝移植;低氧预适应组：移植前体积分数8%氮氧混合气体的低氧预处理90 min,然后行自体原位肝移植。分别于移植后 1,6,24 h处死大鼠取肝脏标本检测肝组织丙二醛、超氧化物歧化酶水平,免疫组化方法测定大鼠肝组织p-JNK蛋白,RT-PCR检测肝脏 NF-κB mRNA含量,透射电子显微镜下观察肝细胞的超微结构变化。 结果与结论：与对照组比较,两移植组肝组织丙二醛水平升高,超氧化物歧化酶水平降低(P < 0.05);与自体移植组比较,低氧预适应组丙二醛水平显著降低、超氧化物歧化酶水平显著升高(P < 0.05)。与正常对照组比较,两移植组各时相p-JNK蛋白的表达、NF-κB mRNA的转录水平显著升高 (P <0.05);与自体移植组比较,低氧预适应组NF-κB mRNA转录水平显著增高(P < 0.05),p-JNK蛋白的表达明显降低(P < 0.05)。透射电镜下自体移植组肝细胞出现典型的凋亡征象,而低氧预适应组肝细胞无明显凋亡形态。提示,肝移植大鼠低氧预适应后可能通过上调NF-κB的表达,减少活性氧释放,抑制JNK通路的持续激活,从而抑制肝细胞凋亡,减轻肝脏缺血再灌注。     

Spatially Guided Angiogenesis by Three-Dimensional Collagen Scaffolds Micropatterned with Vascular Endothelial Growth Factor

Abstract

Successful regeneration of large and highly functionalized tissue and organs depends on the ability to guide blood vessel formation with three-dimensional scaffolds. Angiogenic growth factors have the potential to stimulate blood vessels in scaffolds. However, simply incorporating angiogenic growth factors in a random fashion may lead to uncontrolled blood vessel generation, which ultimately results in poor blood vessel network function and uneven growth of engineered tissue. To control and guide the formation of a blood vessel network in porous scaffolds, we prepared collagen sponges with micropatterned vascular endothelial growth factor (VEGF). VEGF was micropatterned in three-dimensional collagen sponges using micropatterned collagen/VEGF ice lines, which were prepared by a dispersing machine. The VEGF-micropatterned collagen sponges were implanted subcutaneously in nude mice. Following 6 weeks of implantation, the VEGF-micropatterned collagen sponges induced the formation of micropatterned blood vessel networks. More blood vessels were observed in the regions in which VEGF was immobilized than those without VEGF. The micropattern of VEGF determined the micropattern of the regenerated blood vessel network. The spatial immobilization of VEGF in three-dimensional porous scaffolds may be useful to stimulate guided blood vessel formation in a variety of tissue-engineering applications.