高转移人卵巢癌细胞系及其母系多基因表达研究

为研究高转移人卵巢癌细胞系ＨＯ８９１０ＰＭ及其母系ＨＯ８９１０多基因表达情况及其彼此关系,采用ＳＰ免疫组化染色方法,观察了９种基因产物的表达。结果显示,除ｂａｘ外,其余８种基因产物在２株细胞均呈不同程度的阳性表达。在ＨＯ８９１０ＰＭ细胞系中,以ｐ５３、ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤ４４Ｖ６、ＥＧＦＲ的表达强度强于母系;而ｐ１６、ｎｍ２３表达强度则较母系弱。２株细胞ｃｅｒｂＢ２、ｂｃｌ２表达无明显不同。结果表明,ＨＯ８９１０ＰＭ是一株较母系ＨＯ８９１０更具侵袭和转移生长潜能的细胞株。同时也证实肿瘤的发生、浸润和转移是多基因参于、多阶段协同作用的结果     

米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞株的增殖抑制作用

 目的　探讨米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞株的生长抑制作用。方法　采用MTT测定 ,观察不同浓度米非司酮对HO8910 细胞的生长抑制作用 ,通过免疫组化染色 ,检测用药后细胞核增殖抗原Ki 67表达的变化。结果　 3个浓度的米非司酮对上述细胞均有抑制作用 ,以 2 0 μmol/L浓度抑制最明显 ,抑制率达 50 .2 8% ;5μmol/L米非司酮可使HO8910 细胞Ki 67抗原表达显著减少 ,细胞增殖受到明显抑制。结论　米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞株具有明显抑制作用 ,且通过降低核增殖抗原Ki 67的表达而抑制细胞增殖     

索拉非尼对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的探讨索拉非尼对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响。方法采用MTT法,检测不同浓度索拉非尼(1.5、3.0、6.0、12.0、24.0μmol/L)作用人卵巢癌SKOV-3细胞24、48、72 h的抑制率;Hoechst染色法观察药物处理后细胞凋亡情况;应用索拉非尼与紫杉醇不同给药方式作用于SKOV-3细胞,流式细胞仪检测药物处理后细胞周期和凋亡率变化。结果索拉非尼对SKOV-3细胞增殖具有明显抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且呈剂量和时间依赖性;索拉非尼主要使SKOV-3细胞周期阻滞在S期,与紫杉醇联合给药后S期及G2/M期均有延长,且凋亡率较高(P<0.05)。结论索拉非尼对SKOV-3细胞增殖有显著抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,紫杉醇序于索拉非尼给药时细胞凋亡率更高。     

拓扑替康诱导卵巢癌COC1/ DDP 细胞凋亡的分子机制初步探讨

  目的 探讨拓扑替康(TPT)对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP的杀伤和诱导凋亡活性及其作用机制。方法 MTT比色法与软琼脂克隆形成测定TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP的杀伤效应；TUNEL法和流式细胞仪研究TPT对靶细胞的凋亡诱导作用；Western blot检测TPT对COC1／DDP细胞内bcl-2、bax和caspase-3基因表达的影响以及caspase-3活性的改变。结果 TPT对COC1／DDP细胞有明显细胞毒性作用，不仅有剂量依赖性，也存在明显的时间依赖性；COC1／DDP细胞在TPT作用后出现特征性凋亡形态特征，且凋亡率由8．54％上升为23．16％(P<0．05)。TPT不影响COC1／DDP细胞内bcl-2蛋白表达，却明显增加19ax蛋白和caspase-3蛋白表达，并提高caspase-3活性。结论 TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP有明显的杀伤和促凋亡作用，其机制可能依赖于细胞内bax蛋白表达增高和caspase-3的活化。     

粉防已碱对人卵巢癌细胞株A2780增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞增殖与凋亡的影响，初步探讨粉防已碱对卵巢癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用MTT试验观察粉防已碱对A2780细胞的增殖抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳检测粉防已碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用，通过流式细胞术观察粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞周期的影响以及诱导凋亡的作用，以免疫印迹检测粉防已碱对p53、p21及Bax表达水平的影响。结果：MTT试验显示粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞增殖有抑制作用，其抑制效应具有时间及浓度依赖的特点，琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术表明粉防已碱可诱导A2780细胞凋亡，并引起G0／G1期阻滞，免疫印迹检测显示粉防已碱上调p53、p21及Bax蛋白表达。结论：粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞增殖的抑制效应具有时间及浓度依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与上调p53、p21及Bax蛋白表达有关。     

米非司酮对人卵巢癌细胞系HO-8910的生长及细胞周期的影响

目的：探讨米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞的杀伤活性及对细胞增殖和细胞周期分布的影响。方法：采用ＭＴＴ测定,观察不同浓度米非司酮（２０、１０、５、２．５μｍｏｌ／Ｌ）对ＨＯ－８９１０细胞的杀伤活性;通过ＡＢＣ免疫组化染色及流式细胞仪分析,检测用药后ＨＯ－８９１０细胞Ｋｉ－６７抗原表达、细胞周期分布及细胞增殖指数的变化。结果：４个浓度的米非司酮对ＨＯ－８９１０细胞均有杀伤作用,并呈剂量依赖性,以２０μｍ     

人卵巢癌细胞系克隆化亚系的转移潜能研究

目的:克隆具有不同转移潜能的癌细胞亚系,并对其侵袭转移能力进行探讨.方法:应用有限稀释法对卵巢癌细胞系SKOV3进行单细胞克隆,共分离出14个克隆亚系,根据细胞电泳率,筛选出3个电泳率差异较大的克隆亚系(S1、S6和S14).并应用体内外试验包括生长曲线、人工基底膜侵袭试验、裸鼠异种接种及自发转移试验,检测各亚系的生物学特性及其侵袭转移能力.结果:经体内外多项实验检测证明:S1为高转移亚系,体外生长快,侵袭人工基底膜细胞数显著多于其他二者;而S14为不转移亚系,体外生长慢,侵袭人工基底膜细胞数显著少于其他二者.S1裸鼠体内100%成瘤,70.00%转移;而S14裸鼠体内仅20.00%成瘤,无一例发生转移.结论:该系统为来自同一肿瘤母系,遗传背景完全相同,却具有不同转移潜能的异质性克隆,为肿瘤转移机制的研究和克隆肿瘤转移相关基因提供了良好模型.     

人突变p27基因对大肠癌细胞SW480生长的影响

目的：观察人突变p27基因（p27mt）对人大肠癌细胞生长的影响，探讨p27mt基因在大肠癌基因治疗中的作用机制。方法：以携带突变p27基因复制缺陷型腺病毒（Ad—p27mt）为载体，转染大肠癌细胞SW480；用Western blot方法检测p27mt蛋白的表达；细胞计数法检测p27mt对SW480细胞生长的抑制作用；用流式细胞仪检测细胞周期：用DNA片段分析法检测细胞凋亡。结果：通过免疫印迹分析Ad—p27mt转染SW480细胞后，p27在细胞中出现了蛋白高表达。PI染色流式细胞仪检测77．96％的细胞阻滞于G0/G1期，而Ad—LacZ组及空白对照组分别为27．57％和25．29％；生长曲线显示Ad—p27mt对细胞生长就有明显的抑制作用；DNA片段分析示p27mt基因可诱导细胞的凋亡。结论：p27mt对细胞周期有明显的阻滞作用，主要阻滞于G0／G1期；p27mt基因对细胞的生长抑制机制与诱导细胞凋亡和细胞周期的阻滞有关。     

丁酸钠诱导卵巢癌3AO细胞凋亡的研究

 目的　探讨丁酸钠 (NaB)诱导卵巢癌细胞株 3AO凋亡的机制。方法　以不同浓度的NaB对体外培养的 3AO细胞进行作用 ,通过光镜和DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡发生与药物剂量和作用时间的关系 ,进而选取 4mmol/LNaB作用 72h的 3AO细胞为实验组 ,应用流式细胞技术分析Fas/FasL、bcl 2 /Bax表达和线粒体跨膜电位的变化 ,透射电镜观察内质网形态的变化。结果　 4mmol/LNaB作用72h ,光镜下可见 3AO细胞出现凋亡改变 ,DNA琼脂糖凝胶电泳中出现典型的DNAladder,线粒体跨膜电位降低 ,内质网肿胀 ,bcl 2表达降低 ,Bax表达升高 ,而Fas/FasL无明显改变。结论　NaB可能通过线粒体通路和内质网通路诱导 3AO细胞凋亡 ,bcl 2 /Bax起着重要的调控作用。     

莱菔硫烷对人膀胱癌细胞周期的影响及机制研究

背景与目的:探讨莱菔硫烷对人膀胱癌细胞(T24)细胞周期的影响及作用机制。材料与方法:采用噻唑蓝(MTT)法研究不同浓度的莱菔硫烷对T24细胞生长的抑制作用并测定其半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪检测莱菔硫烷对T24细胞周期的影响;采用westernblot研究莱菔硫烷对T24细胞中细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂P16和P27的表达情况。结果:在较低剂量范围内(≤40μmol/L),随着作用剂量的增加,莱菔硫烷对T24细胞的生长的抑制作用也明显增强。10、20、40μmol/L莱菔硫烷的抑制率分别为(12.5±3.95)%,(25.0±2.50)%、(50.0±5.33)%;在较高剂量(60μmol/L~160μmol/L)时,这种抑制作用不再呈剂量依赖性;莱菔硫烷作用72h后的IC50值为(51.12±7.10)μmol/L;莱菔硫烷能使T24细胞周期阻滞于G0/G1期,20μmol/L莱菔硫烷作用48h后,在G0/G1峰之前出现凋亡峰;20μmol/L莱菔硫烷作用于T24细胞8、12、24h后能明显诱导P27蛋白的表达,作用早期(8h)时能诱导P16蛋白的表达。结论:莱菔硫烷能抑制T24细胞生长并使该细胞周期阻断在G0/G1期,其作用机制主要是通过诱导P27蛋白及早期诱导P16蛋白来实现的。     

Evaluation of Effects of Metformin in Primary Ovarian Cancer Cells

Background: Ovarian cancer is the third most common cause of cancer in Indian women. Despite an initial70-80% response rate, most patients relapse within 1-2 years and develop chemoresistance. Hence, identificationor repositioning of drugs to resensitise ovarian cancer cells to existing chemotherapy is needed. Traditionallyimmortalized cell lines have been used in research, but these may contain genetic aberrations and chromosomalabnormalities serving as poor indicators of normal cell phenotype and progression of early-stage disease. Theuse of primary cells, maintained for only short periods of time in vitro, may serve as the best representative forstudying in vivo conditions of the tissues from which they are derived. In this study we have attempted to evaluatethe effect of metformin (an antidiabetic drug) in primary ovarian cancer cells because of its promising effectin other solid tumours. Materials and Methods: Primary cultures of epithelial ovarian cancer cells establishedfrom ascitic fluid of untreated ovarian cancer patients were used. The cells were treated with metformin at dosesstandardized by MTT assay and its ability to induce apoptosis was studied. The cells were analysed for apoptosisand apoptosis related proteins by flow cytometry and western blotting respectively. Results: Metformin inducedapoptosis in ovarian cancer cells, provoking cell cycle arrest in the G0/G1 and S phase. It induced apoptosis inovarian cancer cells by, down-regulating Bcl-2 and up-regulating Bax expression. Conclusions: Metformin wasable to induce apoptosis in primary ovarian cancer cells by modulating the expression of Bcl-2 family proteins.These data are relevant to ongoing translational research efforts exploring the chemotherapeutic potential ofmetformin.     

miRNA-519d对卵巢癌的生长抑制作用及其对XIAP表达的影响

目的 探讨MicroRNA-519d(miRNA-519d)对卵巢癌细胞生长抑制的作用及其对XIAP表达的影响.方法对人卵巢癌细胞系OVCAR3瞬时转染miR-519d mimic(实验组)和NC(阴性对照组),不进行任何转染为空白对照组,转染48 h后进行MTT实验、流式细胞实验、Transwell侵袭实验,观察卵巢癌细胞生长抑制状况,WB实验测定XIAP的表达变化.结果定量Real-time PCR检测显示:miR-519d的表达水平均较对阴性对照组与空白对照组有明显的增高(P<0.05).MTT检测显示:上调OVCAR3细胞内miR-519d水平后,细胞增殖抑制率为(29.81±8.24)%,而阴性照组与空白对照组分别为(2.49±0.28)%和(1.98±0.34)%,对比差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞术检测显示实验组OVCAR3细胞凋亡率为(8.33±1.39)%,而阴性对照组与空白对照组分别为(2.13±2.11)%和(1.89±1.08)%,对比差异有统计学意义(P<0.05).Transwell侵袭实验显示:转染miR-519dmimics后实验组、阴性对照组、空白对照组的三组的细胞转移能力对比无明显差异(P>0.05).Western实验结果显示:处理后实验组的XIAP蛋白相对表达量为(0.98±0.34),阴性对照组为(7.54±1.22),空白对照组为(7.67±1.32),对比差异有统计学意义(P<0.05).结论增强miR-519d的表达能对卵巢癌细胞的增殖起抑制作用,并促进其凋亡,而对卵巢癌细胞的转移没有影响,能抑制XIAP的表达,表明miR-519d在卵巢癌的生长中起到一定的抑制作用.     

常规化疗药物诱导卵巢癌OVCAR-3细胞凋亡特点的分析

目的：观察抗卵巢癌药物顺铂、紫杉醇和阿霉素对卵巢癌细胞系ＯＶＣＡＲ－３体外生长和生存的影响并分析由它们所致的细胞死亡性质。方法：采用细胞形态学观察、细胞动力学检测及ＤＮＡ片段化分析等细胞和分子生物学方法,研究化疗药物对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用。结果：上述药物在抑制ＯＶＣＡＲ－３细胞生长的同时可不同程度地诱导细胞凋亡。其中,紫杉醇诱导细胞凋亡的能力最强;较低剂量紫杉醇（１０＾－８Ｍ）和顺铂（２μｇ／     

异博定等药物对人卵巢癌耐药细胞系多药耐受的逆转作用

用已建立的耐长春新碱人卵巢癌的耐药细胞做实验,应用ＭＴＴ法证实：异博定、潘生丁、黄体酮、环孢菌素Ａ和他莫西芬等药,能不同程度的逆转耐药细胞对长春新碱的耐受;高效液相色谱仪测定进一步证实了上述逆转药可保持或增加耐药细胞内长春新碱的药物浓度。该作用系由于逆转药使耐药细胞表达的大量Ｐ糖蛋白功能失活,通过增加细胞摄取药物量或延长药物在细胞内滞留时间形成的。     

双氢青蒿素诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡

目的研究双氢青蒿素（DHA）诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡作用,并观察其形态学变化。方法采用人前列腺癌PC-3细胞建立裸鼠种植瘤模型,20只模型鼠随机分为对照组、溶剂组、DHA大剂量组及小剂量组,经13天干预后,计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤组织形态学表现;TUNEL法及Hoechst 33258荧光染色检测凋亡。结果DHA大小剂量组抑瘤率分别为69.221%和63.186%;肿瘤组织内凋亡细胞明显增多;肿瘤细胞凋亡率及凋亡细胞数密度均明显升高（P＜0.05）。结论DHA具有较强的抗肿瘤作用,其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

卵巢癌组织中P16的表达及其临床意义

 目的:探讨抑癌基因P¹⁶与卵巢癌生物学行为的关系及在卵巢癌中表达的临床意义。方法:采用S-P免疫组织化学方法,检测19例卵巢癌,10例正常卵巢组织中抑癌基因P¹⁶的表达,结果:19例卵巢癌,P¹⁶检出率为63.2%,3例晚期卵巢癌表达阴性,4例Ic期以上低分化卵巢癌表达弱阳性,正常对照组,80%阳性表达,10%弱阳性表达。研究提示:P¹⁶的突变与缺失可能与卵巢癌的发生发展密切相关,与临床分期、病理分级密切相关。     

苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖影响

目的 探讨苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞增殖的影响。方法 不同浓度苏拉明作用于人卵巢癌细胞株HO-8910PM，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测HO-8910PM增殖情况。结果 MTT结果显示50、100,200、300,400、500、600ug／mL浓度的苏拉明作用于HO-8910PM细胞96h的生长抑制率（GI）分别是13．1％、22．6％,35．1％、43．7％、54．3％、64．8％、70．9％，不同时间及不同浓度组吸光光度值A差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 苏拉明以时间及剂量效应方式抑制体外培养的HO-8910PM增殖；提示苏拉明作为HPA抑制剂有望成为转移性卵巢癌联合化疗用药。     

野生型p53基因转染对卵巢癌细胞生长及药物敏感性影响

目的：探讨野生型p53基因转染对人卵巢癌细胞株SKOV-3的体外生长及裸鼠体内致瘤性抑制作用。并了解p53基因与SKOV-3细胞对顺铂敏感性之间的关系。方法：利用脂质体介导,将含有人野生型p53cDNA的真核表达质粒pCB6-p53导入SKOV-3细胞中,观察该细胞体外生长和裸鼠体内致瘤性改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,MTT法检测细胞药物敏感性改变。结果：免疫组化法证实外源性p53基因在阳性细胞克隆稳定存在;转染野生型p53基因的SKOV-3细胞体外生长速率下降,裸鼠体内致瘤性丧失;G1/G0期细胞百分比（81.5%)和凋亡细胞百分比（11%）增高;p53表达阳性的SKOV-3细胞对顺铂的敏感性明显增强。结论：野生型p53基因转染能使SKOV-3细胞出现生长抑制和对顺铂的化疗敏感性增强。     

Effects of Valproic Acid on Proliferation,Apoptosis, Angiogenesis and Metastasis of Ovarian Cancer in Vitro and in Vivo

Inhibitors of histone deacetylase activity are emerging as a potentially important new class of anticanceragents. In this study, we assessed the anticancer effects of valproic acid (VPA) on ovarian cancer in vitro and invivo. Cultured SKOV3 cells were treated by VPA with different concentrations and time, then the effects on cellgrowth, cell cycle, apoptosis, and related events were investigated. A human ovarian cancer model transplantedsubcutaneously in nude mice was established, and the efficacy of VPA used alone and in combination withdiammine dichloroplatinum (DDP) to inhibit the growth of tumors was also assessed. Proliferation of SKOV3 cellswas inhibited by VPA in a dose and time dependent fashion. The cell cycle distribution changed one treatmentwith VPA, with decrease in the number of S-phase cells and increase in G1-phase. VPA could significantly inhibitthe growth of the epithelial ovarian cancer SKOV3 cells in vivo without toxic side effects. Treatment with VPAcombined with DDP demonstrated enhanced anticancer effects. The result of flow cytometry (FCM) indicatedthat after VPA in vitro and in vivo, the expression of E-cadherin was increased whereas vascular endothelialgrowth factor (VEGF) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) were decreased. This study suggests that VPAcould be a novel attractive agent for treatment of ovarian cancer.     

溶酶体组织蛋白酶L对人卵巢癌SKOV3细胞迁移及侵袭的作用

目的 探讨溶酶体组织蛋白酶L（Cathepsin L）是否通过上皮-间充质转化（EMT）影响卵巢癌细胞的侵袭及迁移能力。方法 荧光定量PCR法检测人卵巢癌细胞ES-2、SKOV3、OV1以及OV2中CathepsinL的表达水平;设计并合成靶向Cathepsin L的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染Cathepsin L表达最高的卵巢癌细胞SKOV3以构建稳定低表达Cathepsin L细胞株,Western blot和定量PCR法验证shRNA的干扰效率;划痕实验及Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail、p-AKT的变化。结果 四株卵巢癌细胞中,SKOV3的Cathepsin L表达水平最高（以此为参照）,而ES-2、OV1以及OV2细胞的表达水平分别为0.72±0.04、0.34±0.03和0.55±0.05。Cathepsin L-shRNA转染SKOV3细胞后,SKOV3/shRNA中的Cathepsin L的表达水平较空白组和对照组显著下降;划痕12 h和24 h后, SKOV3/shRNA组的细胞迁移能力明显受到抑制;SKOV3、SKOV3/Con和SKOV3/shRNA组的穿膜细胞数分别为（93.67±8.62）、（90.33±12.22）、（35.67±4.73）,与对照组相比,SKOV3/shRNA组细胞侵袭能力受到显著抑制（P<0.01）;Cathepsin L干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,Cathepsin L干扰组细胞的Snail、p-AKT表达较对照组显著下降。结论 Cathepsin L可以促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭;其机制可能与调节EMT的上游信号分子Snail、p-AKT有关。提示Cathepsin L在卵巢癌的发生发展中起重要作用。