智脑胶囊调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路诱导阿尔茨海默病模型细胞增殖的研究

目的:探讨智脑胶囊(Zhinao Capsule,ZNC)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)体外细胞模型增殖的影响及其作用机制。方法:采用全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)+冈田酸(okadaic acid,OA)刺激人神经母细胞瘤细胞(human neuroblastoma cell,SK-N-SH)建立AD体外模型,CCK8法筛选ZNC含药血清最佳作用浓度和时间;流式细胞术、RT-qPCR和Western blot法检测最佳浓度ZNC含药血清作用最佳时间后,对SK-N-SH细胞周期、凋亡及PI3K、AKT、GSK-3β mRNA、总蛋白和磷酸化蛋白表达的影响。结果:ATRA＋OA刺激后,SK-N-SH细胞活力降低,细胞凋亡增加,p-PI3K、p-AKT和p-GSK-3β蛋白表达显著降低,GSK-3β mRNA和总蛋白表达明显升高;给予ZNC干预后,不仅可明显促进SK-N-SH细胞增殖,抑制其凋亡,还可显著升高p-PI3K、p-AKT和p-GSK-3β蛋白表达,降低GSK-3β mRNA和总蛋白表达。结论:智脑胶囊可促进AD模型细胞增殖,其机制可能与调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路有关。     

逆萎康含药血清调控AKT/GSK-3β/β-catenin通路抑制MC细胞的上皮间质转化

目的：逆萎康（NWK）含药血清对MC细胞（MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞系（GES-1）恶性转化）上皮间质转化（EMT）的影响及可能机制。方法：用不同浓度含药血清作用于MC细胞,采用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、p-AKT Ser⁴⁷³、β-catenin、α-SMA、GSK-3β、p-GSK-3β Ser⁹、AKT蛋白的表达影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测C-myc基因的表达影响。结果：与空白组比较,蛋白质印迹实验表明,逆萎康含药血清、AKT抑制剂GSK690693（10 μmol·L^-1）使得β-catenin、p-AKT Ser⁴⁷³、E-cadherin和p-GSK-3β Ser⁹在蛋白水平的表达下调（P<0.05）,而α-SMA、N-cadherin和vimentin在蛋白水平上的表达上调（P<0.05）,但GSK-3β和AKT这两种蛋白的表达差异不显著;qRT-PCR结果证实逆萎康含药血清可以抑制C-myc mRNA（P<0.05）的表达,并且加入抑制剂后抑制作用增强,差异具有显著性。结论：逆萎康通过抑制AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路的活化,抑制MC细胞的EMT过程。     

TGF-β信号通路调控乳腺癌上皮-间质转化的研究进展

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指具有极性的上皮细胞丧失极性,转化成具有迁移能力的间质细胞的过程。在乳腺癌中,EMT的发生促进原位癌向侵袭性癌发展,并与肿瘤细胞获得耐药性有关。参与调控细胞发生EMT的因素众多,涉及众多信号通路、转录因子及下游相关基因。其中,转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)信号通路在乳腺癌EMT过程中起着重要的作用。本文综述了TGF-β信号通路在调控乳腺癌EMT的研究进展。     

丙戊酸通过GSK3β/β-catenin信号轴抑制胃癌细胞的增殖和迁移

目的探讨丙戊酸(valproic acid,VPA)对胃癌细胞增殖、迁移的影响及可能涉及的分子机制。方法以0、2、4、6和8 mmol·L^-1浓度的VPA分别处理人胃癌细胞AGS、SGC-7901、MGC-803和BGC-82324、48、72 h后,MTT法检测细胞的活性;软琼脂克隆实验检测VPA对胃癌细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell迁移实验检测VPA对胃癌细胞迁移能力的影响;应用STITCH、STRING和Enrichr数据库预测VPA可能影响的信号通路;免疫印迹实验检测上皮间质转化和GSK3β/β-catenin信号通路等标志物的表达情况;免疫荧光实验检测上皮间质化相关标志物的表达情况。结果与对照组相比,VPA可显著抑制AGS、SGC-7901、MGC-803和BGC-823细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性;可抑制AGS和SGC-7901细胞的迁移能力及EMT进程(上皮标志物E-cadherin表达上调,间质标志物Vimentin、Snail表达下调);可下调p-GSK3βser9和β-catenin的蛋白表达水平。结论VPA可有效抑制胃癌细胞的增殖和迁移,其机制可能与GSK3β/β-catenin信号轴的抑制及EMT进程的逆转有关。     

野黄芩苷对卒中后抑郁模型大鼠糖原合成酶激酶3β/β-连环蛋白信号通路的影响

目的 探讨野黄芩苷对卒中后抑郁(PSD)模型大鼠糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响.方法 用线栓法制备大鼠脑卒中模型,待脑卒中模型制备成功后,用孤养结合慢性温和不可预知应激(CUMS)建立抑郁模型.将模型大鼠按体重随机分为模型组,低、中、高剂量实验组和阳性对照组,每组1...     

芍药苷调节PI3K/AKT/NF-κB信号通路对血栓闭塞性脉管炎大鼠的治疗作用研究

目的 探讨芍药苷(PAE)对血栓闭塞性脉管炎(TAO)大鼠的治疗作用及作用机制。方法 通过月桂酸钠注射法建立TAO大鼠模型。将大鼠随机分为假手术组(腹腔注射适量0.9%NaCl)、模型组(腹腔注射适量0.9%NaCl)、低剂量实验组(腹腔内注射5 mg·kg^-1·d^-1 PAE)、高剂量实验组(腹腔内注射20 mg·kg^-1·d^-1 PAE)、高剂量+激动药剂(腹腔注射20 mg·kg^-1·d^-1 PAE+尾静脉注射10 ng·mL^-1·kg^-1·d^-1 740 Y-P)组。用磁珠凝固法检测凝血酶时间(TT);用酶联免疫吸附测定试剂盒检测白细胞介素(IL)-1β、内皮素1(ET-1)水平;用蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、核因子(NF)-κB p65、p-NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 假手术组、模型组...     

小红参乙酸乙酯提取物调控PI3K/AKT/GSK3-β通路对心肌缺血再灌注损伤大鼠雌激素的影响

目的 研究小红参乙酸乙酯提取物通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-OH kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/糖原合成酶激酶3-β(glycogen synthase kinase 3-β,GSK3-β)通路对心肌缺血再灌注损伤大鼠雌激素的影响。方法 选取SPF级SD雌性大鼠50只,空白组10只,建模中死亡10只,随机分为模型组、低剂量组、高剂量组,每组10只。对照组不做任何处理,模型组、低剂量组、高剂量组进行心肌缺血再灌注损伤模型建模,建模成功后模型组不做任何处理,低剂量组、高剂量组分别给予小红参乙酸乙酯提取物灌胃,其剂量分别为56.7 mg/kg、280 mg/kg。观察大鼠心肌损伤[肌钙蛋白I(CTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)]、氧化应激[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)]、一氧化氮(NO)、内皮-氧化氮合酶(eNOS)含量、性激素、PI3K/AKT/GSK3-β信号通路表达量情况。结果 与空白组比较,模型组、低剂量组、高剂量组cTnI、CK-...     

TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化对细胞Wnt/β-catenin表达的影响

目的探讨TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化对细胞信号通路蛋白Wnt/β-catenin表达的影响。方法采用5μg·mL-1 TGF-β1诱导SMMC-7721发生上皮间质转化,分别采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA和总蛋白的表达。结果 TGF-β1能显著诱导肝癌细胞SMMC-7721发生上皮间质转化,细胞中Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA和相应总蛋白的表达均显著增加(P<0.05)。结论 TGF-β1诱导肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化时可促进细胞Wnt/β-catenin的表达。     

血府逐瘀合剂对PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响

摘要：目的:探究血府逐瘀合剂对血小板衍生生长因子（PDGF）-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/糖元合成酶激酶3β/β-连环蛋白（PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin）信号通路的影响。方法:利用重组鼠PDGF-BB体外刺激大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7R5诱导增殖、迁移模型,分为6组：对照组、PDGF-BB组、低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组,CCK-8法检测A7R5细胞增殖活力;流式细胞术检测A7R5细胞周期;细胞划痕实验检测A7R5细胞迁移情况;免疫印迹检测A7R5细胞增殖、迁移相关蛋白及PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路相关蛋白。结果:与对照组比较,PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少（P＜0.05）;与PDGF-BB组比较,低、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著减少,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著增加,且高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组优于低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组（P＜0.05）;与高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组比较,PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少（P＜0.05）。结论:血府逐瘀合剂可抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移,可能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路而实现。     

异橙黄酮通过AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路诱导胃癌AGS细胞凋亡和周期阻滞研究

目的:探讨异橙黄酮对胃癌细胞AGS增殖、凋亡和周期的影响及相关作用机制.方法:用2.5,5和10 μmol·L-1的异橙黄酮处理胃癌AGS细胞,另设阴性对照组,加入等体积的DMSO.应用CCK-8、EDU和流式细胞数检测各组AGS细胞增殖、凋亡和周期情况;分子对接技术明确异橙黄酮的可能作用靶点;Western blot...     

GSK-3β活性调节与肿瘤治疗

糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)作为细胞内主要的丝氨酸/苏氨酸家族激酶,其活性异常与多种疾病的发生发展密切相关。值得关注的是,GSK-3β对肿瘤进程的调节是双向的,当扮演"促瘤因子"角色的GSK-3β被抑制时,不可避免阻断了其"抑瘤因子"的功能,使得Wnt/β-catenin信号通路的激活,成为目前靶向肿瘤GSK-3β引起治疗矛盾的焦点。事实上,生物学的绝缘机制可以使GSK-3β在广泛参与细胞内众多信号通路的调节中互不干扰,从而决定了细胞命运。因此,深入了解GSK-3β在不同信号系统中活性调节的具体机制,或者设计底物特异的竞争性抑制剂,对于在靶向GSK-3β的肿瘤治疗中采取选择性的权衡策略具有重大意义。     

白藜芦醇对胃癌细胞上皮间质转化作用及其机制的研究

目的 探讨白藜芦醇（RSVL）对胃癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响并分析其作用机制。方法 胃癌细胞SGC-7901分为空白对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)组和TGF-β1+RSVL组三组。MTT实验检测增殖情况;Transwell实验检测迁移、侵袭情况;q RT-PCR检测EMT相关转化因子的mRNA表达水平;Western blot检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Snali 1、YAP蛋白表达水平;免疫荧光观察YAP蛋白表达及细胞核内YAP蛋白表达。结果 与空白对照组相比,TGF-β1组24、48、72、96 h细胞增殖率增加（P<0.05）;与TGF-β1组相比,TGF-β1+RSVL组24、48、72、96 h细胞增殖率降低（P<0.05）,均呈时间依赖性。与空白对照组相比,TGF-β1组0、48 h的细胞迁移数、侵袭数增加（P<0.05）;与TGF-β1组相比,TGF-β1+RSVL组0、48 h的细胞迁移数、侵袭数降低（P<0.05）。与空白对照组相比,TGF-β1组E-cadherin mRNA、蛋白表达水...     

转化生长因子-β通路对胃癌细胞增殖、侵袭及slug蛋白、上皮钙黏素表达的影响

目的 研究转化生长因子-β(TGF-β)通路的激活与阻断对人胃癌HGC-27细胞增殖、侵袭及slug蛋白和上皮钙黏素（E-cadherin,E-cad）表达的影响。方法 于2021年1月至2022年1月使用外源性通路激活剂TGF-β1和阻断剂SB431542培养胃癌细胞,后根据对细胞给药不同分为五组。空白对照组：仅使用等量常规培养基;激动剂组：TGF-β1(25μg/L);阻断剂组：SB431542(2 mg/L);激动剂+低浓度阻断剂组：TGF-β1(25μg/L)+SB431542(2 mg/L);激动剂+高浓度阻断剂组：TGF-β1(25μg/L)+SB431542(4 mg/L)。并使用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测各组胃癌细胞增殖活性,使用Transwell侵袭实验检测各组胃癌细胞侵袭能力,使用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测胃癌细胞中slug与E-cad两种蛋白的表达情况。结果 五组胃癌细胞增殖活性、侵袭能力及slug蛋白、E-cad蛋白表达水平比较均差异有统计学意义（P<0.05）。激动剂组胃癌细胞增殖活性（24 h:0.70±0.13）和侵袭能力[细胞穿过小...     

Wnt信号通路诱导肿瘤细胞上皮间质转化的研究进展

肿瘤细胞发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)从而具有侵袭转移的能力,是肿瘤发展的一个重要过程。既往研究发现Wnt信号通路调节控制着许多生命过程,也发现其是诱导EMT不可缺少的重要通路。通过对Wnt信号分子的调控,可以有效的阻断甚至逆转EMT。Wnt诱导EMT发生发展过程的研究,也为抗肿瘤新药开发提供了新思路,推动了药物的研发。该文旨在对近年Wnt信号通路诱导EMT的研究做一综述。     

Urocortin对糖尿病心肌病的保护作用与Akt/GSK-3β信号通路的关系

目的观察内分泌-血管活性肽Urocortin(UCN)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠TGF-β1和CTGF的影响,研究UCN对DCM的保护作用及可能机制。方法建立糖尿病(DM)模型,将大鼠分为5组:Control组、DCM组、UCN组、UCN+Astressin组、UCN+Triciribine组。饲养12周后处理4周,测定血糖、尿糖、尿量,以及血清TGF-β1、CTGF水平;观察心肌细胞形态学;测定心肌组织TGF-β1、CTGT、Akt、GSK-3β、pAkt、p-GSK-3β的表达。结果 DM大鼠心肌形态学符合DCM改变,与Control组相比,DCM组血清与心肌组织TGF-β1、CTGF水平均增高,DCM组心肌组织p-Akt、p-GSK-3β均降低(P <0. 05)。与DCM组相比,UCN组TGF-β1、CTGF水平均降低(P <0. 05),Astressin和Triciribine均能阻断UCN的作用(P <0. 05); UCN组p-Akt、p-GSK-3β表达增高(P <0. 05),Astressin阻断UCN的作用(P <0. 05)。结论 UCN对DCM的保护作用可能通过与CRH-R受体结合后,激活Akt/GSK-3β信号通路,下调炎症因子TGF-β1及CTGF的表达有关。     

TGF-β1诱导人肝癌细胞HepG2上皮间质转化及对JAK-STAT3信号通路的影响

目的探讨TGF-β1诱导人肝癌细胞HepG2上皮间质转化及对JAK-STAT3表达的影响。方法采用5μg·mL^-1 TGF-β1处理人肝癌细胞HepG2细胞,用倒置显微镜观察细胞形态变化,用Real time-PCR检测E-cadherin和Vimentin的mRNA表达变化;Western blot检测E-cadherin、Vimentin、JAK、p-JAK、STAT3及p-STAT3的蛋白表达变化。结果 TGF-β1可激活JAK-STAT3通路,上调Vimentin表达,同时下调E-cadherin的表达,并显著促进其上皮间质转化。结论 TGF-β1可以诱导人肝癌细胞HepG2上皮间质转化,其机制可能与JAK-STAT3信号通路激活有关。     

大蒜素对胃癌细胞上皮间质转化的影响

目的探讨大蒜素对胃癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法IL-6刺激细胞发生上皮间质转化;大蒜素处理胃癌细胞HGC-27;镜下观察细胞形态学改变;免疫细胞化学法检测大蒜素干预前后EMT相关标志分子E-cadherin及Vimentin的表达情况。结果 IL-6刺激后HGC-27细胞向间质细胞形态转化,细胞由聚集状态变为分散状态,多数细胞表现为类似纤维状,部分细胞呈明显的梭形;加入大蒜素培养后细胞由聚集状态变为分散状态,细胞向上皮细胞样形态转化;大蒜素干预后E-cadherin的表达明显升高而Vimentin的表达明显降低(P均<0.05)。结论大蒜素可抑制胃癌细胞发生EMT,进而可能在抑制肿瘤浸润与转移过程中发挥重要作用。     

虎杖苷调节Akt/MDM2/p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的 探讨虎杖苷(PD)调节蛋白激酶B/原癌基因MDM2/抑癌基因p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响。方法 以人胆囊癌细胞株(GBC-SD)为研究对象,体外培养人胆囊癌细胞株(GBC-SD),使用浓度为10～160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,确定最佳实验浓度。将GBC-SD细胞分为对照组(Control组)、虎杖苷低、中、高浓度组(PD-L组、PD-M组、PD-H组)、虎杖苷+Akt激活剂组(PD+SC79组),Transwell小室法评价细胞的迁移能力,Hoechst染色观察细胞的凋亡,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,Western blot检测Akt、MDM2、p53磷酸化水平,建立荷瘤小鼠模型评价虎杖苷对胆囊癌肿瘤生长的影响。结果 浓度为10～160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24 h,可显著抑制GBC-SD细胞的增殖活性,选择10、20、40 mmol/L的虎杖苷进行后续实验;与Control组比较,PD-L组、PD-M组、PD-H组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细...     

基于PI3K/Akt/GSK3β信号通路的芥子酸抗Aβ1-42致PC12细胞损伤的机制研究

目的:基于磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成激酶3β(GSK3β)信号通路探讨芥子酸(SA)抗β淀粉样蛋白1-42(Aβ_1-42)致PC12细胞损伤的作用机制。方法:将大鼠PC12细胞随机分为对照组、Aβ组(Aβ_1-422μmol/L)、Aβ+SA组(Aβ_1-422μmol/L+SA 100μmol/L)、Aβ+SA+LY组[Aβ_1-422μmol/L+SA 100μmol/L+LY294002(PI3K抑制剂)10μmol/L]、Aβ+LY组(Aβ_1-422μmol/L+LY294002 10μmol/L)、LY组(LY294002 10μmol/L)。除对照组、LY组外,其余各组细胞均以Aβ_1-42复制损伤模型。培养24 h后,使用显微镜观察各组细胞的形态,采用MTT法检测各组细胞的存活率;采用Western blotting法检测各组细胞PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β蛋白的表达情况...     

地塞米松通过ROS-PI3K/AKT/GSK3β信号通路诱导成骨细胞凋亡

目的:探讨地塞米松（Dex）对成骨细胞增殖和凋亡的影响及潜在的作用机制。方法:将人成骨细胞hFOB 1.19分为4组：对照组（不加药物）,Dex组（300 μM Dex处理48 h）,Dex+AA组（300 μM Dex+2 000 μM AA处理48 h）和Dex+NAC组（300 μM Dex+500 μM NAC...