壳聚糖基去甲斑蝥素膜片体内抗H22肿瘤生长的研究

目的 评价壳聚糖基水凝胶载去甲斑蝥素的抗肿瘤活性。方法 以叠氮化羟乙基壳聚糖(AZ-HE-CTS)为原料,制备了AZ-HE-CTS膜片,以小鼠成纤维细胞L929和SD大鼠模型评价细胞相容性和体内降解性;并制备了AZ-HE-CTS载去甲斑蝥素(NCTD)膜片,将载药膜片植入H22荷瘤小鼠体内给药,测定小鼠瘤重、胸腺指数、脾脏指数、血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度,评价载药膜片体内对H22肝肿瘤生长的抑制效果。结果 AZ-HE-CTS膜片具有良好的细胞相容性,体内降解缓慢,组织炎症反应轻;载药膜片原位植入对小鼠H22肿瘤具有抑制作用,能调动小鼠免疫系统,促进血清中TNF-α的表达。结论 壳聚糖基去甲斑蝥素膜片具有显著的抗肿瘤活性。     

肝靶向去甲斑蝥素微乳的研究

目的考察去甲斑蝥素(NCTD)微乳的形态、粒径分布及生物安全性，研究去甲斑蝥素微乳及其注射液在小鼠体内的组织分布、药代动力学和体外药效学。方法用气相法测定小鼠体内去甲斑蝥素含量。数据用3P87处理，得到各主要药代动力学参数。采用体外细胞毒性和体内全身急性毒性试验方法，评价去甲斑蝥素微乳的抗肿瘤活性及其生物安全性。结果微乳平均粒径为(44±9) nm。血浆中成分及制剂中辅料不干扰去甲斑蝥素测定。小鼠静脉注射去甲斑蝥素微乳及其去甲斑蝥素注射液后的药-时曲线均符合二室模型。去甲斑蝥素微乳的药代动力学研究表明，在同剂量条件下，NCTD微乳可在体内较长时间保持较高浓度，即可在一定程度上延长体内循环时间；微乳及注射液的AUC，MRT，T_1/2分别为(29.7±0.9)，(9.25±0.09) mg·h·L^-1，(110±11)，(86.7±0.8)，(103±12)，(42±4) h，NCTD微乳改变NCTD注射剂在小鼠体内的药时曲线和血药浓度的高低，其消除T_1/2和MRT比其注射剂分别增加了2.48和1.27倍，AUC增加了3.21倍；NCTD微乳在肝、肾中的靶向指数分别为0.43和0.12。去甲斑蝥素微乳的生物安全性与其市售注射液比较无显著性差异。结论去甲斑蝥素微乳较去甲斑蝥素注射液增强了药物的肝靶向性，降低了肾脏分布，在一定程度上延长药物在小鼠体内的循环时间。     

去甲斑蝥素壳聚糖纳米粒在小鼠体内分布及肝靶向作用

目的:研究去甲斑蝥素壳聚糖纳米粒(NCD-NP)在小鼠体内的分布及肝靶向性.方法:利用离子交联法制备去甲斑蝥素壳聚糖纳米粒后,经小鼠尾静脉给药,采用HPLC法检测去甲斑蝥素在小鼠血浆、心、肝、脾、肺、肾中的浓度随时间的变化,与去甲斑蝥素溶液(NCD-SOL)组进行比较.并以靶向指数TI=(AUC)NCD-NP/(AUC)NCD-SOL来判断NCD-NP对主要器官的靶向性.结果:NCD-NP组在肝脏中组织浓度明显高于NCD-SOL组,肝、脾的靶向指数大于1,而在其他器官靶向指数小于1.结论:去甲斑蝥素纳米粒可通过网状内皮系统吞噬作用实现肝脏被动靶向,能够提高药物疗效,降低全身毒副作用.     

去甲斑蝥素对裸鼠原位结肠癌的抑制作用

目的探讨去甲斑蝥素对裸鼠原位结肠癌的抑制作用,从而研究去甲斑蝥素对结肠癌病人的治疗价值。方法 20只荷人结肠腺癌细胞株HT-29移植瘤裸鼠,随机分成空白(无药)对照组10只和NCTD(实验)组10只。空白对照组0.9%生理盐水腹腔注射0.2mL(1次/2d,d1～d20);NCTD(实验)组NCTD2mg/kg腹腔注射(1次/2d,d1～d20)。给药后第21天处死所有裸鼠留取结肠肿瘤组织,比较原位肿瘤生长情况。结果 NCTD组的瘤体积和瘤重均比空白对照组显著减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论去甲斑蝥素能明显抑制肿瘤细胞的增殖和生长。     

去甲斑蝥素白蛋白微球在小鼠体内肝靶向作用

目的:研究去甲斑蝥素(NCTD)白蛋白微球在小鼠体内的组织分布、体外细胞毒性及肝靶向性。方法:采用体外细胞毒性和体内全身急性毒性试验方法,评价NCTD白蛋白微球的抗肿瘤活性及其生物安全性;通过小鼠尾静脉给药得到各主要药动学参数,并与NCTD注射液组比较得其靶向效率。结果:NCTD白蛋白微球在肝脏和肾脏的靶向效率分别为2.389 1和0.375 4。NCTD白蛋白微球体内外的生物安全性与其注射液比较无显著差异。体外细胞毒性显示其对肿瘤细胞具有特殊亲和力和靶向释药作用。结论:NCTD白蛋白微球具有肝脏靶向性,能降低肾脏分布,提高药物疗效,降低全身不良反应。     

去甲斑蝥素-壳聚糖缓释制剂长期毒性研究*

目的 观察连续给予去甲斑蝥素-壳聚糖缓释制剂(NCTD-CTS)和去甲斑蝥素(NCTD)对大鼠长期毒性的损伤表现、程度及可逆性,为进一步的实验研究提供依据。方法 SD大鼠分为实验组(NCTD-CTS组)、阳性对照组(NCTD组)及空白对照组(给予等体积生理盐水),实验组和阳性对照组分为高、中、低三个剂量组,腹腔注射,连续12周(1次/天)。除观察一般状况外,检测血液学指标、血液生化学指标,剖杀大鼠,称取心、肝、脾、肺、肾脏等重要脏器,计算脏器指数,进行常规病理检查,停药后,进行恢复期观察。结果 连续给予不同剂量的NCTD-CTS和NCTD均可导致大鼠体质量下降,饮食、饮水不佳。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)活性升高。NCTD-CTS组的肝脏指数均不同程度的增大,NCTD组的肝脏指数、肺指数和肾指数均有不同程度的增大,毒性损伤程度与给药剂量呈现一定的剂量依赖相关性,经过恢复期观察,部分病变不可逆。结论 NCTD-CTS和NCTD对大鼠长期毒性表现主要是肝、肺、肾脏的损伤,且部分病变为不可逆损伤,但NCTD-CTS对大鼠的长期毒性程度低于NCTD。     

HPLC-MS/MS法研究PVP包衣去甲斑蝥素壳聚糖纳米粒在大鼠体内的药代动力学

目的:建立HPLC-MS/MS方法测定大鼠血浆中去甲斑蝥素(NCTD)浓度,并考察PVP包衣去甲斑蝥素-壳聚糖纳米粒制剂(PVP coated NCTD-chitosan nanoparticles,PVP-NCTD-NP)在大鼠体内药代动力学及相对生物利用度。方法:使用电喷雾电离负离子源(ESI-),多重反应离子(MRM)模式检测药物;采用高氯酸作为蛋白沉淀剂,测定大鼠尾静脉注射PVP-NCTD-NP和原药NCTD溶液后的血药浓度;利用3P97软件计算药代动力学参数。结果:NCTD在0.102 5～10.25μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 2),最低检测限为50 ng·mL-1;经3P97软件拟合,NCTD的药代动力学过程符合二室模型,与原药相比,PVP-NCTD-NP相对生物利用度为325.5%。结论:本法灵敏、准确、选择性高,适用于NCTD药代动力学的研究;PVP-N-CTD-NP可促进药物的吸收,显著提高NCTD的生物利用度。     

乳糖化-去甲斑蝥素抗肿瘤药效学及急性毒性试验研究

目的:观察乳糖化-去甲斑蝥素(Lac-NCTD)及其纳米粒(Lac-NCTD-NPs)的体内外抗肿瘤的作用,并进行急性毒性考察。方法:采用MTT法考察Lac-NCTD及Lac-NCTD-NPs对肿瘤细胞株HepG2、SMMC-7721和SGC-7901的细胞毒作用和半乳糖化小牛血清(Gal-FBS)的竞争性抑制作用,并建立H22肝癌细胞小鼠荷瘤模型考察药物在体内抗肿瘤活性;通过急性毒性实验计算Lac-NCTD腹腔给药的最大耐受量(MTD)。结果:HepG2、SMMC-7721细胞培养48h的体外细胞毒结果显示:Lac-NCTD-NPs的最强,其次是Lac-NCTD,且均能显著被Gal-FBS抑制;对SGC-7901,Lac-NCTD-NPs和Lac-NCTD的细胞毒作用并不比去甲斑蝥素(NCTD)强,且不受Gal-FBS的影响;体内抗肿瘤实验表明Lac-NCTD能有效地抑制H22肿瘤的生长。Lac-NCTD单次给药时最大耐受量MTD>20g/kg,多次给药时MTD>30g/kg,毒性远小于NCTD。结论:Lac-NCTD是毒性较小的安全的新型抗肿瘤药物。     

去甲斑蝥素聚乳酸-聚乙二醇纳米粒的制备及细胞毒性实验

目的:制备去甲斑蝥素纳米粒(norcantharidin nanoparticles,NCTD-NP),并考察其缓释特性和细胞毒性。方法:以聚乳酸-聚乙二醇为载体,采用相分离法制备NCTD-NP。用激光粒度仪测定纳米粒的粒径,以透射电镜观察其形态,以HPLC法测定其包封率,以紫外分光光度法考察其体外释放特性。应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)比较NCTD-NP和NCTD对胆囊癌GBC-SD细胞的细胞毒性。结果:纳米粒的粒径为(97.4±14.5)nm,表面光滑,包封率为(51.7±1.32)%,具有良好缓释性能。相同浓度的NCTD-NP和NCTD的细胞毒性在24 h之前基本相同,但NCTD-NP对GBC-SD细胞的生长有更持久的抑制效果,在IC50浓度48 h时仍抑制(56.42±9.45)%,而NCTD组仅抑制(23.14±3.77)%,两组有显著差异(P<0.01)。结论:NCTD-NP具有良好的缓释性能,并且可较长时间抑制胆囊癌GBC-SD细胞的生长。     

去甲斑蝥素对非小细胞肺癌模型小鼠免疫功能的影响

目的研究去甲斑蝥素体内对非小细胞肺癌3LL模型小鼠免疫功能的调节作用。方法常规培养3LL细胞,接种于ICR小鼠,将荷瘤小鼠随机分为5组,阴性对照组,5-fu阳性对照组以及NCTD 3个剂量组,另设空白对照组。腹腔注射给药2周后,取血检测血常规以及血清TNF-α和IFN-γ含量;处死小鼠,分别剥取瘤块、脾脏和胸腺,称重并计算抑瘤率和脏器指数;取脾脏,制备脾淋巴细胞并测淋巴细胞增殖情况。结果NCTD体内可抑制3LL模型小鼠肿瘤的生长;增加荷瘤小鼠白细胞总数;上调TNF-α和IFN-γ水平;降低脾脏指数和胸腺指数;促进T、B淋巴细胞增殖。结论 NCTD体内可调节非小细胞肺癌3LL模型小鼠的免疫功能。     

参苓胶囊对实验性肿瘤的治疗及对化疗药减毒作用研究

目的：研究参苓胶囊对小鼠移植性肿瘤S180肉瘤,H22肝癌和Lewis肺癌的抗肿瘤作用及对环磷酰胺（CTX）所致小鼠免疫功能抑制的保护作用。方法：根据抗癌药物筛选标准进行体内抑瘤试验。采用CTX制备免疫功能低下模型,测定参苓胶囊与CTX配伍对小鼠白细胞数、胸腺指数、脾指数和NK细胞活性的影响。结果：不同浓度的参苓胶囊对小鼠移植性肿瘤S180肉瘤,H22肝癌和Lewis肺癌均有抑制作用,其中高剂量组效果最佳,抑制率分别为44．8％,52．2％,43．3％（P〈0．01）,且对小鼠体重生长无明显影响。参芩胶囊可明显减少CTX所致的小鼠白细胞下降,免疫器官重量和NK细胞活性降低等副作用。结论：参苓胶囊具有明显的抗肿瘤和免疫增强作用。     

糙苏素的抗肿瘤作用及机制研究

目的:研究糙苏素的抗肿瘤作用及其对端粒酶活性和细胞周期的影响。方法:采用血清药理学与体内、外抑瘤实验相结合的方法,MTT法检测糙苏素含药血清对体外培养的人白血病K562细胞增殖的抑制作用,聚合酶链反应-酶联免疫吸附法检测K562细胞在糙苏素作用后端粒酶活性的变化,流式细胞仪分析细胞周期的改变;体内实验采用小鼠肝癌H22细胞株接种小鼠,连续给药14d,计算抑瘤率。结果:糙苏素含药血清在10%～50%剂量范围内对K562细胞有抑制作用,且呈剂量依赖关系(P<0.05);糙苏素作用后端粒酶活性出现抑制,且各给药组随糙苏素浓度增加抑制作用显著增强(P<0.01),同一浓度随作用时间延长,抑制作用逐渐增强(P<0.05);K562细胞的DNA合成后期/分裂期(G2/M)细胞含量显著增高(P<0.01);糙苏素(2.5、5、10mg·kg-1)灌胃能显著抑制小鼠移植性肝癌H22细胞的生长。结论:糙苏素具有抗肿瘤作用,其作用是通过抑制肿瘤细胞的端粒酶活性而实现的。     

去甲斑蝥素肝动脉栓塞缓释微球的制备及其体外释放性评价

目的:制备去甲斑蝥素肝动脉栓塞缓释微球(NCTD-MS),并考察其体外释放特性。方法:以NCTD为主药,海藻酸钠ALG)/壳聚糖(CS)为复合载体,采用内部凝胶化法制备NCTD-MS;选取ALG浓度、凝胶化反应剂冰醋酸的用量、药物-载体重量比(简称药载比)为因素,以粒径偏差、载药量及包封率为指标进行正交设计优化最佳处方并进行验证;动态透析法考察微球在不同介质(磷酸盐缓冲液和生理盐水)中的体外释放特性,并与NCTD原料药的释放性进行比较。结果:最佳处方为ALG浓度2.0%、冰醋酸1.0mL、药-载重量比0.8∶1,以该处方制备的微球平均粒径为(309.75±2.19)μm、载药量为(12.65±0.87)%、包封率为(68.66±0.38)%;NCTD-MS在2种介质中24h释放可达80%,释放行为均遵循Weibull方程,而NCTD原料药在3h内即释放完毕。结论:NCTD-MS制备工艺简单,缓释效果明显。     

青龙衣煎膏剂对H22肿瘤小鼠抗肿瘤作用的实验研究

目的研究青龙衣煎膏剂对H22型肿瘤小鼠抑瘤作用及生命延长率的影响。方法建立H22型肿瘤小鼠模型,随机分为5组,雌雄各半,每组12只小鼠。分别为阴性对照组:生理盐水组;阳性对照组:顺铂组;青龙衣煎膏剂低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组。计算抑瘤率、生命延长率。结果抑瘤率最高可达66.07%,生命延长率最高可达83.73%。结论青龙衣煎膏剂对H22生长有明显的抑制作用,且随剂量的增加而增强。并可明显延长小鼠的生存时间。     

N-三甲基壳聚糖对尼莫地平凝胶透皮吸收促进作用的体外研究

目的：考察N-三甲基壳聚糖对尼莫地平凝胶透皮吸收促进作用。方法：以季胺化程度为60％的,N-三甲基壳聚糖（TMC60）为透皮吸收促进剂,以泊洛沙姆407为凝胶基质,制备尼莫地平凝胶（TMC60组）。用Franz扩散池进行体外透皮研究,并与含同浓度的氮酮（氮酮组）、油酸（油酸组）的尼莫地平凝胶及不含促进剂的尼莫地平凝胶（空白组）的效果进行比较。结果：空白组、氮酮组、TMC60组及油酸组的稳态透皮速率（J,μg·cm^－2·h^-1）分别为6．59,13．22,16．39和16．77。与空白组相比,TMC60尼莫地平凝胶有显著的透皮吸收促进作用（P〈0．05）,且作用强度明显优于氮酮（P〈0．05）,与油酸相似（P〉0．05）。结论：TMC60可较好地促进尼莫地平凝胶的体外透皮扩散。     

牛黄天龙方药对荷瘤小鼠免疫功能的影响及其抗肿瘤作用的实验研究

目的了解中药复方牛黄天龙方药对荷瘤小鼠免疫功能方面的影响。方法建立H22荷瘤小鼠模型;分高、中、低3个剂量组灌胃给药,疗程结束后,取小鼠血清,检测白细胞介素-2（IL-2）及肿瘤坏死因子（TNF—α）水平;分离脾细胞培养,测定自然杀伤细胞（NK）,淋巴因子活化杀伤细胞（LAK）活性;分离睥细胞检测T淋巴细胞亚群。结果牛黄天龙方药具有明显增强H22荷瘤小鼠细胞免疫功能的作用并可延长荷瘤小鼠的生存时间（P〈0．05）。结论牛黄天龙方药对H22荷瘤小鼠具有显著免疫调节的抗肿瘤作用。     

去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠从聚合物基质中的释药行为比较

目的：比较去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠从聚合物基质中的释放行为。方法：采用混合和压膜方法制备载药的聚己内酯片,然后剪切成小片后考察其在不同释放介质中的释药行为,并探讨其释药机制。结果：去甲斑蝥酸钠的释药行为受磷酸缓冲盐浓度以及缓冲盐中氯化钠浓度的影响,而去甲斑蝥素的释药行为则基本不受其影响。结论：去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠从聚合物中释药行为差异主要由药物渗透压引起。     

环磷酰胺衍生物SLXM-2对小鼠肝癌H_（22）细胞的DNA损伤作用

化合物SLXM-2是一种环磷酰胺衍生物,前期研究已经证实其具有良好的肿瘤抑制作用,并具有较低的毒副作用。但是其作用机制尤其是对细胞DNA的损伤作用仍不清楚。本研究旨在评价SLXM-2对肝癌H22腹水小鼠的生命延长作用与DNA损伤的关系,并探讨可能的分子机制。实验结果证实,SLXM-2能够显著提高肝癌H22腹水小鼠的生命延长率（P〈0.05）。进一步实验表明,SLXM-2能够造成肝癌H22细胞DNA损伤,显著上调γH2AX（Ser139）,p-Chk1（Ser296）,p-Chk2（Thr68）,p-p53（Ser15）,p-p53（Ser20）和p21的蛋白表达,并显著下调p-ATR（Ser428）和p-ATM（Ser1981）的表达（P〈0.05）。总之,SLXM-2对肝癌H22细胞具有显著的抑制作用,分子机制与其能够造成肿瘤细胞DNA损伤有关。     

菝葜抗小鼠移植性肿瘤的实验研究

目的研究菝葜乙酸乙酯提取物体内抗移植性肿瘤的作用及其对小鼠的免疫调节作用,为菝葜的临床应用提供理论依据。方法菝葜乙酸乙酯提取物灌饲接种过H22的荷瘤小鼠,并通过测定其抑瘤率、胸腺指数、脾指数及碳廓清指数(K值)和吞噬指数(a值)来进一步探讨其抗瘤活性和对机体的免疫调节作用。结果菝葜乙酸乙酯提取物具有抗移植性肿瘤H22的作用,抑瘤率达43.3%;同时对机体也有明显的提高免疫力作用。结论菝葜具有抗移植肿瘤的作用,并可提高荷瘤小鼠的机体免疫力。