四物汤及其单药对血虚证小鼠造血的改善作用及其机制初探

目的 :研究四物汤及各单药对γ射线照射致血虚小鼠造血系统的影响 ,探讨四物汤补血作用的机理及配伍机制。方法 :采用 3 5Gy60 Coγ射线全身一次照射制作小鼠血虚证模型 ,进行外周血象检测及造血祖细胞集落培养 ;MTT法检测四物汤及各单药诱生Peyer’sPatch细胞、NIH3T3细胞上清的活性。结果 :①血虚小鼠骨髓中的CFU GM、BFU E、CFU E、CFU mix较正常组明显减少 ,四物汤及各单药对模型组造血祖细胞集落增殖的作用强度不同 ,四物汤最为明显。②四物汤及各单药能够诱导Peyer’sPatch产生细胞因子刺激骨髓细胞的增殖。③四物汤、当归、白芍诱生NIH3T3细胞上清能显著促进NFS 6 0细胞的增殖。结论 :四物汤及各单药对血虚小鼠造血系统的作用机制 ,可能通过刺激Peyer’sPatch细胞、成纤维细胞或产生造血生长因子 ,或与造血因子协同作用 ,促进骨髓干祖细胞增殖分化来实现的 ;四物汤及各单药作用的靶点和强度不同 ,符合中药复方组方的规律。     

白芍在四物汤中的反佐作用

目的 :观察白芍在四物汤中的反佐作用。方法 :3 5Gy或 5 5Gy6 0 Coγ射线照射致小鼠血虚证模型 ,观察四物汤及单药对NFS 6 0细胞增殖、诱导NIH3T3细胞上清对NFS 6 0细胞的调节、外周血白细胞及造血干祖细胞的影响。结果 :白芍在对NFS 6 0细胞增殖和诱导NIH3T3细胞上清对NFS 6 0细胞的调节方面 ,制约君药和全方的主要功能 ;对外周血白细胞的生长起抑制作用 ;对小鼠骨髓中的CFU GM、CFU E、BFU E、CFU mix、CFU meg均无明显影响。结论 :在所观察的指标中 ,白芍属反佐之品。     

四物汤对血虚证小鼠骨髓细胞CD 34抗原表达的影响

目的：探讨四物汤对^60Coγ射线或环磷酰胺诱导的血虚证小鼠骨髓细胞CD34抗原分子表达的影响。方法：用^60Coγ射线全身照射小鼠升腹腔注射环磷酰胺造成小鼠血虚证模型，实验分正常组、模型组、小剂量组、中剂量组、大剂量组，荧光标记小鼠骨髓细胞并用流式细胞仪 测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例，同时做小鼠骨髓细胞 落培养。结果与结论：四物汤可促进血虚小鼠骨髓中干祖细胞增生，增加CD34抗原分子的表达，为四物汤治疗血虚证提供了依据。     

四物汤对辐射小鼠造血功能影响的初步探讨

目的：观察四物汤对3．5Gyγ射线照射小鼠造血系统的影响，探讨四物汤作用机制。方法：通过外周血象观察、造血祖细胞体外培养、MTT法检测四物汤及其拆方诱导NIH3T3细胞上清对G－CSF依赖细胞株NFS－60增殖等指标的影响研究四物汤的作用机制。结果：四物汤显著升高3．5Gyγ射线照射小鼠外周血白细胞、血小板，促进其造血祖细胞CFU－GM、CFU－meg、CFU－mix集落的增殖；四物汤诱导的NIH3T3细胞上清能显著促进G－CSF依赖细胞株NFS－60细胞的增殖。结论：四物汤对辐射小鼠造血细胞的作用机制与刺激NIH3T3细胞产生类G－CSF作用或与G－CSF产生协同作用而促进外周血白细胞、血小板恢复有关。     

四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用,用60 Coγ射线身全照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例,细胞固定后PI染色测定细胞周期,Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡,结果：四物汤对小鼠骨髓造 血干祖细胞,外周血细胞的恢复有明显促进作用,有保护骨髓和促进骨髓细胞由G1期进入S期的效应,四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡,促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一。     

四物汤及其三味药组方对γ射线照射致血虚证小鼠造血系统的影响

本研究用γ射线照射制备小鼠血虚证模型,通过四物汤及其三味药组方对血虚证小鼠造血系统的影响探讨了四物汤补血作用的配伍机制。实验结果表明：四物汤全方治疗血虚证效果最好;作用靶点不同,四药的君、臣、佐、使含义各一。     

四物汤及其各单药对辐射小鼠骨髓造血的调节作用

目的：研究四物汤及其各单药对射线诱发小鼠血虚证骨髓造血的调节作用,方法：采用3．5或5．5Gy^60Goγ射线全身一次性照射,制成血虚证模型小鼠,在不同时间点观察四物汤及单药对NFS－60细胞,外周血象,造血祖细胞集落培养及骨髓细胞凋亡的影响。结果：四物汤,地黄,当归能升高辐射小鼠外周血中的白细胞,增加造血祖细胞集落数,刺激NFS－60细胞增殖;白芍则降低外周血象,抑制NFS－60细胞增殖;川芎能增加造血细胞集落数,抑制骨髓细胞凋亡,结论：四物汤及各单药作用的靶点和强度不同,。其变化规律符合中医的君臣佐使理论。     

四物汤对再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞增殖的影响研究

目的：研究四物汤对再生障碍性贫血（AA）小鼠骨髓细胞体外增殖的影响，探讨其治疗AA的机制。方法：采用流式细胞仪、骨髓造血祖细胞培养等技术，检测四物汤对从小鼠骨髓细胞的增殖变化。结果：四物汤能促进骨髓有核细胞进入G2／S期、增加CFU—GM、CFU—E、BFU—E集落数，且与自然恢复组有明显增强的差异（P〈0．01）。结论：四物汤在体外有促进从小鼠骨髓细胞增殖的作用，为补血药治疗从提供了实验与理论依据。     

四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用机理。用⁶⁰Coγ射线全身照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34⁺细胞在骨髓有核细胞中的比例;细胞固定后PI染色测定细胞周期;Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡。结果:四物汤对小鼠骨髓造血干祖细胞、外周血细胞的恢复有明显促进作用;有保护骨髓和促进骨髓细胞由G₁期进入S期的效应;四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡;促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一     

四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤治疗环磷酰胺所致小鼠血虚证的作用机理。腹腔注射环磷酰胺制成小鼠血虚证模型;测定小鼠外周血象;骨髓细胞集落形成;CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例;小鼠胸腺指数。结果表明四物汤具有明显促进骨髓造血和增强免疫的作用,并可升高血虚证小鼠的外周血象。四物汤增强免疫、促进造血可能是四物汤治疗小鼠血虚证的机理之一。     

辐射损伤所致血虚证小鼠模型及四物汤反证的代谢组学研究

[目的]通过检测辐射损伤所致血虚证及用四物汤干预治疗后小鼠内源性代谢物的变化,确定辐射损伤所致血虚证小鼠的血清及组织相关的生物标记物,基于代谢组学的方法考察血虚证证本质及四物汤的作用机制。[方法]C57小鼠按体质量随机分为正常组、辐射造模组、四物汤反证组。造模7d后于小鼠股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓,并分别提取血清及组织的脂溶性和水溶性代谢物。[结果]主成分分析结果显示正常组、血虚证模型组以及四物汤反证组能够明显的区分。[结论]四物汤治疗血虚证的机制可能与稳定细胞膜,维持细胞内外渗透压平衡;调节糖酵解,促进机体正常能量代谢以及增强机体抗氧化能力、免疫力有关。     

环磷酰胺所致血虚证小鼠骨髓CD34~ 细胞的变化

目的 :研究环磷酰胺 (CTX)诱发的血虚证小鼠骨髓中干祖细胞的数量和骨髓细胞周期的动态变化。方法 :采用CTX大小两个剂量分别对两组小鼠进行腹腔注射制作小鼠血虚证模型。在不同时相点 ,双荧光标记测定CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例 ,骨髓细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果 :①注射CTX后CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例下降后迅速上升 ,然后又下降。②注射CTX后骨髓细胞增殖受抑 ,然后动员骨髓细胞增殖 ,但药后 10d细胞增殖又受抑。与CD34 细胞在骨髓有核细胞中比例的变化规律有一致性。结论 :CTX可以动员骨髓造血干祖细胞进入细胞周期而增殖 ,增加了骨髓中造血干祖细胞的数量 ,但此过程加速了干祖细胞池的耗竭 ,从而对骨髓造成更大损伤 ,这可能是CTX诱发小鼠血虚证的机理之一。     

环磷酰胺所致血虚证小鼠骨髓CD34^＋细胞的变化

目的：研究环磷酰胺（CTX）诱发的血虚证小鼠骨髓中干祖细胞的数量和骨髓细胞周期的动态变化。方法：采用CTX大小两个剂量分别对两组小鼠进行腹腔注射制作小鼠血虚证模型,在不同时相点,双荧光标记测定CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例,骨髓细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果：（1）注射CTX后CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例下降后迅速上升,然后又下降。（2）注射CTX后骨髓细胞增殖受抑,然后动员骨髓细胞增殖,但药后10d细胞增殖又受抑。与CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中比例的变化规律有一致性。结论：CTX可以动员骨髓造血干祖细胞进入细胞周期而增殖,增加了骨髓中造血干祖细胞的数量,但此过程加速了干祖细胞池的耗竭,从而对骨髓造成更大损伤,这厅能是CTX诱发小鼠血虚证的机理之一。     

四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响

目的:观察四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响,为比较四物汤对不同血虚证模型补血作用提供实验依据。方法:每日按75g·kg^-1体重限食,隔日游泳20min及放血0.4mL共15d,建立小鼠血虚证模型。提前7d,四物汤小,中,大剂量组分别按每天5,10,20g·kg^-1给予四物汤至造模结束,通过血细胞计数仪及流式细胞仪等分析手段,检测外周血象、骨髓细胞周期、骨髓细胞凋亡和CD34⁺细胞数。结果:四物汤小,中,大剂量组可以使血虚证小鼠红细胞由第7天最低值4.6×10¹²·L^-1,分别显著升高到6.5,7.1,7.0×10¹²·L^-1;在第15天,使血虚证小鼠S期骨髓细胞数由11.53%,分别显著增加到14.34%,14.03%,13.58%。结论:四物汤可以在一定程度上逆转综合放血致小鼠的造血损伤。     

四物汤及其组方药对与药味对小鼠原发性痛经模型的影响

目的:研究四物汤及其组方药对、药味对原发性痛经模型小鼠的影响,探讨其组方特点及可能作用机制。方法:采用小鼠原发性痛经模型,观察各给药组对原发性痛经模型小鼠的扭体反应以及子宫组织匀浆中钙离子(Ca2+)、一氧化氮(NO)水平的影响。结果:四物汤组方药对、药味能不同程度地减少痛经模型小鼠的扭体反应次数,降低子宫组织中Ca2+含量,提高NO水平。结论:四物汤及其拆方对小鼠原发性痛经模型的干预作用各有特点,其中熟地对其他3味药在抑制整体动物模型的扭体反应上可能具有拮抗作用,当归-白芍药对可能是抑制小鼠原发性痛经模型的主要贡献药对,为进一步深入研究提供了参考。     

刺五加注射液对^60Co-γ放射损伤小鼠骨髓CFU—E、BFU—E生成的影响

目的观察刺五加注射液对^60Co-γ放射损伤小鼠骨髓红系集落形成单位（CFU—E）和红系爆式集落形成单位（BFU—E）生成的影响。方法小鼠接受6．0Gy^60Co-γ射线照射后立即分别腹腔注射刺五加注射液0．2和0．4ml／10g，均每132次，连续3d；照射后第4日取股骨骨髓制备骨髓有核细胞悬液，甲基纤维素半固体培养法测定CFU—E和BFU—E集落。结果刺五加注射液能明显提高有核细胞CFU—E和BFU—E集落数量，与模型组相比均具有显著差异。结论刺五加注射液能明显提高放射损伤小鼠骨髓有核细胞数量及红系祖细胞集落形成，从而保护受损小鼠骨髓造血功能。     

四物汤及其组方中药的药物血清对MCF-7细胞体外增殖和细胞周期的影响

目的:探讨四物汤及其组方的四味中药的药物血清对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞体外增殖、细胞周期和凋亡的影响,评价其植物雌激素活性.方法:正常性未成熟雌性SD大鼠,体重70±5g,按体重均衡和随机的原则分为7组(正常对照组、己烯雌酚组、四物汤组、熟地组、白芍组、当归组和川芎组),每天分别早、晚两次灌胃给药,给药均持续4d,第5d腹主动脉取血,分离血清,0.22p.m微孔滤膜过滤,-20℃贮存备用.应用MTT法检测药物血清对MCF-7细胞增值率、流式细胞技术检测细胞周期和凋亡率.结果:白芍、当归和川芎等中药的药物血清均可显著促进MCF-7细胞体外增殖(P＜0.01),熟地可促进MCF-7细胞体外增殖(P＜0.05),熟地、当归和川芎等中药的药物血清均可显著促使MCF-7细胞S期细胞数和细胞增殖指数PI增加(P＜0.01),白芍的药物血清均可促使MCF-7细胞增殖指数PI增加(P＜0.05),而在本实验条件下四物汤复方的舍药血清使MCF-7细胞数略有增加,但无统计学意义(P＞0.05);白芍、当归、川芎和四物汤的药物血清均可显著抑制MCF-7细胞的凋亡(P＜0.01);结论:熟地、白芍、当归和川芎等中药有植物雌激素活性,本实验配伍比例条件下,四物汤复方的植物雌激素活性弱于其组方的各味中药.     

综合放血法所致血虚证小鼠模型及 四物汤反证的代谢组学研究

目的:通过检测综合放血法所致血虚证及用四物汤干预治疗后小鼠内源性代谢物的变化,确定综合放血法所致血虚证小鼠的血清及组织相关的生物标记物,从代谢组学角度研究血虚证证本质及四物汤的作用机制.方法:C57小鼠30只,按体重随机分为3组:正常对照组、综合放血模型组、四物汤反证组,每组10只.造模10 d后于小鼠股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓,并分别提取血清及组织的脂溶性和水溶性代谢物.用600 MHz超导傅立叶变换核磁共振波谱仪检测,对所得到的氢谱按每段0.01进行分段积分并归一化,用SIMCA-P10.0软件进行主成分分析.结果:与对照组相比,模型组的血清及各组织的内源性代谢物中乳酸、胆碱、牛磺酸、丙氨酸、低密度脂肪酸、甘油、不饱和脂肪酸、肌醉、乙酞乙酸盐、丙氨酸及庄β-羟基丁酸的含量有明显变化,这些变化在四物汤治疗组中有不同程度的回调.上述代谢物可以作为潜在的生物标记物进行相关机制的研究.结论:综合放血法制作的血虚证小鼠的糖有氧氧化受到抑制,无氧酵解减弱,脂肪动员加强,淋巴细胞增殖受到抑制及机体免疫功能受损.四物汤能够对上述血虚证病理结果进行逆转.     

第17卷第5期 2011年3月 中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol.17,No.5 Mar.,2011 四物汤及其组方药物对小鼠离体子宫收缩的影响

目的:分析评价四物汤及其组方药物对小鼠离体子宫平滑肌收缩的影响,探讨四物汤组方配伍特点。方法:采用小鼠离体子宫收缩痛经模型,观察该方及其组方药对离体子宫痛经模型小鼠子宫平滑肌平均肌张力、收缩幅度、收缩频率的抑制作用,计算抑制率。实验分为空白对照组,四物汤及其组方药给药组,每组6只,分两次平行进行,每次3只,单味药,药对及全方分别按生药量终浓度为0.5,1,2 g·L-1给药。结果:四物汤及其组方对缩宫素诱导的小鼠离体子宫平滑肌收缩幅度、收缩频率和平均肌张力有不同程度的抑制作用,其中,当归-熟地黄药对对离体子宫的收缩幅度抑制作用最强,抑制率为23.195%;当归-白芍药对对离体子宫的收缩频率和平均肌张力的抑制作用最强,抑制率分别为47.826%和14.998%。结论:当归和白芍在抑制缩宫素诱导的小鼠离体子宫收缩效应上是有重要贡献的药味,且两药合用能增强其作用;熟地黄与当归配伍在抑制离体子宫收缩效应上也有协同增效的作用。     

四物汤对环磷酰胺和乙酰苯肼致血虚证模型小鼠骨髓细胞凋亡的影响

目的:探讨四物汤对环磷酰胺和乙酰苯肼致血虚证模型小鼠骨髓细胞凋亡的影响及机制。方法:实验动物随机分为正常对照组、模型对照组、四物汤组和阳性药对照组。除正常对照组外,其余三组小鼠分别于给药后第2天、第5天皮下注射乙酰苯肼每日20 mg/kg、40 mg/kg,从第5天起,每日腹腔注射环磷酰胺40 mg/kg,连续4 d,制备血虚证小鼠模型。利用血细胞计数仪、流式细胞术和蛋白免疫印迹技术分别检测各组小鼠外周血象、骨髓细胞凋亡率及骨髓细胞Bcl-2蛋白表达。结果:与模型对照组相比,四物汤组血红细胞数升高非常显著(P0.01),白细胞数和血红蛋白含量均无显著变化(P 0.05);四物汤组小鼠骨髓细胞凋亡率下降非常显著(P0.01),Bcl-2蛋白表达量显著增加(P0.05)。结论:四物汤能够促进小鼠骨髓细胞中Bcl-2蛋白的表达,抑制骨髓细胞凋亡,提高外周血象,此可能是其发挥补血作用的机制之一。