以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的酶联免疫斑点技术在脊柱结核感染辅助诊断中的应用价值

目的评价以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的酶联免疫斑点(ELISPOT)技术在脊柱结核感染辅助诊断中的应用价值。方法选取2012年5月至2013年12月广州中医药大学第一附属医院脊柱骨科和南方医科大学南方医院脊柱骨科收治的疑似脊柱结核患者91例,根据临床和细菌性诊断结果分为脊柱结核组(n=52)和对照组(n=39)。采用ELISPOT试验检测脊柱结核组和对照组外周血单个核细胞,观察斑点形成细胞的数量。患者同时接受结核菌素(PPD)皮肤试验、血清抗结核抗体检测、病灶病理学检查、抗酸杆菌涂片和病灶结核分枝杆菌培养,比较不同检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值,分析不同检测结果的一致性。结果 52例脊柱结核患者中共47例接受病灶活检穿刺病理检查,其中41例病理证实为结核。ELISPOT试验在脊柱结核诊断中的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为82.7%、87.2%、89.6%和79.1%;PPD皮肤试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为61.5%、46.2%、60.4%和47.4%;血清抗结核抗体试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为55.8%、61.5%、65.9%和51.1%。在脊柱结核患者中,ELISPOT试验的阳性率显著高于PPD皮肤试验(82.7%比61.5%,χ2=5.786,P=0.016)和血清抗结核抗体试验(82.7%比55.8%,χ2=8.847,P=0.003),与病理学检查比较差异无统计学意义(82.7%比87.2%,χ2=0.396,P=0.529)。ELISPOT试验与病理学检查一致性较好(87.2%,κ=0.498,P=0.001)。结论以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的ELISPOT法应用于脊柱结核诊断有良好的敏感性和特异性,可作为脊柱结核感染辅助诊断的有效方法。     

结核分枝杆菌三种特异性抗体ELISA检测方法的建立

目的 建立以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68为包被抗原检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA检测方法。方法 利用本室构建并纯化的结核分枝杆菌特异性抗原蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68,建立结核分枝杆菌特异性抗体检测的间接ELISA检测方法:ESAT6-ELISA、CFP10-ESAT6-ELISA、ESAT6-PPE68-ELISA。并与PPD-ELISA同时检测220例结核病人血清、30例非结核呼吸疾病病人血清和50例健康人群血清,分别对三种方法的敏感性与特异性进行统计学分析。结果 ESAT6-ELISA的敏感性为25%,特异性为95%;CFP10-ESAT6-ELISA的敏感性为45%,特异性为93%;ESAT6-PPE68-ELISA的敏感性为48%,特异性为85%。结论 三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的敏感性均低于PPD-ELISA,但三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的特异性均高于PPD-ELISA,其中CFP10-ESAT6-ELISA检测的效果最佳,PPE68可作为结核特异性诊断的候选抗原。     

重组融合蛋白CFP10-ESAT6在结核病血清学诊断中的初步应用

目的探讨结核分枝杆菌重组融合蛋白CFP 10-ESAT 6用于结核病血清学诊断的价值。方法分别用CFP 10-ESAT 6、ESAT 6和PPD检测220例确诊的结核病患者血清、30例非结核病呼吸系统疾病患者血清和50例健康人血清。结果rCFP 10-ESAT 6、rESAT 6和PPD检测的敏感性分别为45%、25%和57%;特异性分别为93%、95%和75%。rCFP 10-ESAT 6的敏感性高于rESAT 6,特异性高于PPD（P〈0.05）。结论rCFP 10-ESAT 6应用于结核病血清学诊断具有较好的敏感性和很高的特异性,对于结核病的诊断有很好的应用价值。     

γ-干扰素释放试验(TB-IGRA)在结核性腹膜炎诊断中的价值

【】 目的 探讨γ-干扰素体外释放试验对诊断结核性腹膜炎的应用价值。方法 回顾性分析2013年3月至2014年9月用γ-干扰素释放试验检测21例诊断为结核性腹膜炎的结果。结果21例结核性腹膜炎患者中,结核感染T细胞阳性47.6%(10/21),阴性52.4%(11/21)。结核抗体阳性23.8%(5/21),阴性76.2%(16/21)。其中合并肺结核13例患者中阳性61.5%(8/13),肠结核4例患者中阳性75.9%(3/4),HIV感染患者结核感染T细胞阴性。IGRA检测以此诊断结核性腹膜炎的敏感性为47.6%,特异性为93.3%,阳性预测值为83.3%,阴性预测值为71.8%。结核T细胞、结核抗体、腹水ADA在结核性腹膜炎中比较(χ₂=2.592,P=0.107)。结论γ-干扰素释放试验在结核性腹膜炎的诊断敏感性不高,仅对TBP诊断有一定的参考价值,需结合其他手段综合起来进行诊断。     

结核分枝杆菌CFP10、ESAT6蛋白的原核表达、纯化及ELISPOT检测方法的建立与应用

以结核分枝杆菌CFP10、ESAT6蛋白原核表达、纯化体系为基础,建立稳定的ELISPOT方法;检测164份疑似结核患者标本的外周血ELISPOT,与临床诊断及T-SPOT·TB结果对比. 表达所得重组蛋白浓度和纯度如下:CFP10 为0. 5 mg/ml,84%;ESAT6为4 mg/ml,98%. ELISPOT方法最佳实验条件为每孔细胞密度2 × 105/孔,CFP10、ESAT6蛋白抗原浓度分别为10 μg/孔,细胞孵育时间20 h. ELISPOT的灵敏度与特异度分别为88. 50%、82. 35%,检测结果与 T-SPOT·TB 方法结果一致(χ2 =0. 57).     

结核感染T细胞斑点试验对脊柱结核的辅助诊断价值

目的：探讨结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）对脊柱结核的辅助诊断价值。方法：回顾性分析87例拟诊为脊柱结核患者进行全血T-SPOT.TB试验及结核菌素纯蛋白衍生物试验（TB-PPD）结果。结果：脊柱结核组50例中T-SPOT.TB试验阳性41例,敏感性为82.0％,PPD检测阳性32例,敏感性为64.0％,两者比较差异有统计学意义（χ2=4.48,P<0.05）。T-SPOT.TB试验特异性为91.9%;PPD试验特异性为59.5%,两者比较差异有统计学意义（χ2=8.64,P<0.05）,T-SPOT.TB试验在敏感性、特异性上均明显优于常规PPD试验。结论：T-SPOT.TB检测技术快速敏感,对早期脊柱结核有辅助诊断价值。     

脊柱结核影像学表现及实验室检测分析

目的分析脊柱结核患者的影像学及实验室检查特点。方法收集新乡医学院第一附属医院(河南省结核病医院)骨外科2015年5月至2016年6月收治的经病理学和细菌学检查确诊为脊柱结核的患者65例,所有患者均接受X线、CT、MRI检查以及血沉、C反应蛋白、结核菌素(PPD)皮肤试验、血清抗结核抗体、结核杆菌抗原特异性γ干扰素释放试验(T-SPOT.TB)等实验室检查。收集每例患者的基本临床信息、影像学资料及实验室化验结果,分析并比较各种检测方法对脊柱结核的诊断价值。结果 65例患者中,60例在3种影像学检查中均表现出椎间隙狭窄征象,占92.3%;23例患者X线显示有不同程度的后凸畸形,占35.4%;53例患者CT显示有死骨形成,占81.5%;64例患者MRI表现出椎间盘受累,占98.5%;54例MRI表现出椎旁脓肿征象,占83.1%。PPD皮肤试验、血清抗结核抗体、T-SPOT.TB的阳性率分别为61.5%、41.5%、86.1%。T-SPOT.TB的阳性率高于PPD皮肤实验(P<0.05)和血清抗结核抗体(P<0.05)。结论脊柱结核的3种影像学表现各具特点,3种影像学检查结合起来更有助于脊柱结核的诊断。与传统的结核病检测方法相比,T-SPOT.TB具有较高的敏感性,可以作为脊柱结核的辅助诊断方法。     

结核感染T细胞斑点试验在HIV/AIDS 合并结核病诊断中的应用

目的 探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测在HIV/AIDS合并结核病诊断中的应用价值。方法 选取HIV阳性结核病患者44例、同期住院的HIV阴性结核病患者42例和HIV阳性非结核病患者28例。对3组患者的T-SPOT.TB、血结核抗体试验及外周血CD4⁺T细胞绝对计数等结果进行回顾性分析。结果 T-SPOT.TB对HIV阳性患者诊断结核病的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为81.82％、85.71％、90.00％、75.00％,其中灵敏度、阳性预测值与阴性预测值明显高于结核抗体检查,差异有统计学意义(P＜0.01)。HIV阳性结核病组T-SPOT.TB灵敏度(81.82％)与HIV阴性结核病组T-SPOT.TB灵敏度(83.33％)比较,差异无统计学意义(P=0.54),但HIV阳性结核病组结核抗体检查的灵敏度(25.00％)明显低于HIV阴性结核病组(57.14％)(P＜0.01)。HIV阳性结核病组中,T-SPOT.TB在菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺外结核3种不同类型结核病患者中的灵敏度分别是71.43％、85.71％、88.89％,三者之间差异无统计学意义(P=0.586)。T-SPOT.TB在CD4⁺T淋巴细胞≤200个/μl的HIV合并结核病患者中的灵敏度为62.50%,低于CD4⁺T淋巴细胞＞200个/μl组(92.86%),差异有统计学意义(P=0.019)。结论 T-SPOT.TB灵敏度和特异度较高,对HIV/AIDS合并结核病具有较大的辅助诊断价值。CD4⁺T淋巴细胞的数量对T-SPOT.TB灵敏度有一定影响。     

耐药肺结核患者结核分枝杆菌菌型分布及耐药研究

目的 研究肺结核耐药患者结核分枝杆菌菌型分布及耐药情况。方法 收集2011年4月至2012年7月肺结核患者痰液标本,分离培养后进行菌种鉴定和药敏试验。结果 人结核分枝杆菌约占83.91%,牛结核分枝杆菌约占15.70%;患者对一线抗结核药物耐药率显著高于对二线抗结核药物耐压率,差异有统计学意义(P<0.05);一类抗结核药物单一耐药率显著高于二类抗结核药物(χ²=4.281,P<0.05)。结论 肺结核耐药患者菌型以人结核分枝杆菌最多,对一线抗结核药物的耐药率显著高于对二线抗结核药物的耐药率。     

抗结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片的临床应用

目的验证抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片的临床应用价值.方法结核病人和正常对照的血清经芯片识别仪和ELISA同时检测,分析其敏感性、特异性和总符合率. 结果结核芯片系统检测的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和诊断指数分别为69.91%、84.85%、90.80%、55.56%和154.76%.而ELISA法检测的敏感性、特异性分别为66.81%和86.14%.两检测的总符合率为81.04%.检测结果间差异无显性(x^2=1.5,P＞0.05).结论芯片系统检测的敏感性和特异性符合临床检验要求,具有简便、快速和单人份操作的优点,可用于临床辅助诊断结核病人.     

结核分枝杆菌CFP10和ESAT6优势肽段融合蛋白的表达及其免疫学研究

目的：构建结核分枝杆菌分泌蛋白的重组质粒及工程菌,获得纯化的CFP10-ESAT6P蛋白抗原,制备初步用于检测结核病患者的特异性抗体。方法：根据编码结核分枝杆菌基因序列设计引物,克隆表达结核CFP10-ESAT6重组蛋白,表达产物免疫新西兰大白兔,其中80％可产生高价的抗体。利用产物建立IgG间接ELISA方法鉴定其抗原性及实用性。结果：应用ELISA法,通过检测113例结核病患者、82例非结核病患者及健康献血员,CFP10-ESAT6P和对照PPD对结核病患者血清检测的敏感性分别为89．4％和79．6％,特异性分别为96．3％和93．9％。结论：高效表达纯化的CFP10-ESAT6蛋白抗原性强,可用于结核病患者抗体的检测,用于结核病的辅助诊断。     

结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测在结核诊断中的应用

目的采用结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点（简称Elispot）检测技术对不同的人群进行检测,评价其在结核诊断中的应用情况。方法290例结核病人（结核组）,其中肺结核221例中痰抗酸染色（AFB）阳性者89例,AFB阴性者132例;同时选取133例健康志愿者为健康组。采用自行建立的Elispot技术对2组外周血结核菌特异性IFN-γ水平进行检测;对11例结核病人和10例健康者同时采用T-SPOT.TB试剂盒进行平行检测。结果Elispot反应阳性率结核组为83.79%,显著高于健康组的16.54%（P〈0.001）;AFB（＋）肺结核病人阳性率为89.89%,AFB（—）肺结核病人阳性率为81.06%,两者差异无显著性意义（P〉0.05）。T-SPOT.TB与Elispot平行检测阳性率比较,差异无显著性意义（P〉0.05）。结论结核菌特异性IFN-γElispot检测技术在结核诊断中显示出较好的特异性和敏感性,可作为临床结核病诊断的辅助手段。     

比较结核感染T细胞斑点试验、结核菌素试验以及血清结核抗体检测对诊断肺结核的价值

目的：比较结核感染T细胞斑点试验(T-cell spot of tuberculosis,T-SPOT.TB)、结核菌素试验(purified protein derivative,PPD)以及血清结核抗体(Tuberculosis antibody,TB-Ab)检测对肺结核的诊断价值。方法随机选取自2014年1月—2016年8月在该院确诊为肺结核患者60例,作为肺结核组;确诊非肺结核就诊者30名作为非肺结核组,两组就诊者均接受了T-SPOT.TB、PPD以及TB-Ab检测。比较两组接受不同检测方法对诊断肺结核灵敏性与特异性的差异。结果 T-SPOT.TB检测诊断肺结核的敏感性为73.30%,特异性为80.00%;PPD试验诊断肺结核的敏感性为60.00%,特异性为86.70%;血清TB-Ab检测检测诊断肺结核的敏感性为53.30%,特异性为66.70%。结论 T-SPOT.TB诊断肺结核的敏感性高于PPD试验和血清结核抗体检测;T细胞斑点试验T-SPOT.TB诊断肺结核的特异性高于血清结核抗体检测,与PPD试验差异无统计学意义。     

酶联免疫斑点法检测结核性胸水T淋巴细胞分泌IFN-γ的免疫功能

目的:研究结核性胸膜炎患者胸水T淋巴细胞(TLC)特异性分泌γ-干扰素(IFN-γ)的免疫反应,为结核性胸水的诊断提供依据。方法:应用淋巴细胞分离技术分离13例结核性胸水和11例恶性胸水TLC,体外利用PPD抗原刺激,用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测两组胸水TLC分泌IFN-γ的免疫反应。每例患者院内常规做PPD试验。结果:结核性胸水TLC分泌IFN-γ的免疫反应阳性率为84.62%(11/13例),明显高于恶性胸水组18.18%(2/11例),两者之间差异有显著性(P<0.01)。ELISPOT和PPD试验的敏感性分别为84.62%,46.15%,两者之间有明显差异性(P<0.01)。而ELISPOT和PPD试验的特异性分别为81.82%,90.91%,两者之间差异不明显。结论:ELISPOT检测结核性胸膜炎的敏感性和特异性均较高,有助于临床上对结核性胸水的鉴别诊断。     

血清结核抗体检测和PPD试验在结核病诊断中的应用

目的 对运用结核抗体检测以及PPD试验在结核诊断中的价值进行评估.方法 对我站收治的200例肺结核患者以及100例排除结核的其他疾患者的血清内结核抗体进行检测,同时对每组患者进行PPD试验.结果 采用结核抗体检测结核病患者有166例出现阳性反应,PPD试验中有170例出现阳性,两组方法在阳性检出率方面比较,差异无统计学...     

卡介苗缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用

目的 探讨卡介苗( BCG)缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用.方法 选取主流结核病血清学检测抗原的4种不同组合试剂A(结核分枝杆菌抗体IgG检测试剂)、B(结核分枝杆菌抗体检测试剂)、C(结核杆菌特异性抗体检测试剂)、D(活动性结核抗体检测ELISA系统),通过免疫印迹、胶体金和酶联免疫吸附等免疫学方法检测109例活动性结核患者和97名健康人群[分为结核菌素纯蛋白衍生物试验(PPD)阳性和阴性组]的结核抗体,应用贝叶斯概率统计学方法,综合分析不同抗原组合对结核病检测准确率的影响.结果 试剂A、B、C、D对活动性结核病IgG检出率分别是80.0％、66.7％、80.7％、56.0％,明显高于健康人群的23.9％、8.9％、6.6％、1.0％,差异均有统计学意义(x2值分别为47.53,51.59,90.48,69.68,均P＜0.01).其中试剂A、B对健康人群结核抗体检出率随PPD阳性反应强度而增高(x2值分别为2.124,2.220,均P＜0.05),试剂C、D对健康人群结核抗体检出率与PPD反应强度无相关性(x2值分别为0.122,0.479,均P＞0.05),试剂D的准确率最高,其对活动性肺结核患者IgM检出率为2.1％.结论 IgG检出的敏感性与抗原的选择及组合数量呈正相关,高的检测敏感性常伴随特异性的损失,选择BCG缺失抗原可显著提高检测特异性.     

结核感染T细胞斑点试验联合纤维支气管镜检在结核病患儿诊断中的应用

目的评价结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)联合纤维支气管镜检在肺结核患儿诊断中的价值。方法 2010年3月—2012年12月住院疑诊肺结核的患儿67例,均行PPD试验、红细胞沉降率、胸部CT、TSPOT.TB、支气管镜检(包括灌洗液作结核杆菌培养、荧光定量PCR和病理活检)检查。结果经检查临床确诊肺结核49例,慢性或迁延性肺炎9例,咳嗽变异性哮喘7例,支气管异物1例,淋巴瘤1例。纤维支气管镜检查炎性浸润型18例(36.7%),干酪坏死型5例(10.2%),肉芽增殖型11例(22.5%),瘢痕狭窄型15例(30.6%)。单项检测结核菌培养和病理活检与临床诊断相比较,一致性差(Kappa值分别为0.09和0.29),T-SPOT.TB和FQ-PCR单项检测与临床诊断结果相比,一致性一般(Kappa值分别为0.54和0.46)。联合检测:纤维支气管镜检测(FQ-PCR+结核菌培养+病理活检)与临床诊断结果相比,一致性一般(Kappa值为0.55);T-SPOT.TB联合FQ-PCR检测,一致性较好(Kappa值为0.64),T-SPOT.TB与纤支镜联合检测,一致性极高(Kappa值为0.85)。结论 T-SPOT.TB联合纤维支气管镜为诊断肺结核的有效手段。     

Real time endobronchial ultrasound transbronchial needle aspiration for the diagnosis of tuberculous intrathoracic lymphadenopathy: Saudi Arabian Western region experience

Objectives:To assess the utility of endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration (EBUS-TBNA) for presumptive tuberculosis (TB) patients with intrathoracic enlarged lymph nodes in a country with low to moderate TB incidence.Methods:Thirty-one patients with clinical features of TB and intrathoracic lymphadenopathy, who had EBUS-TBNA sampling and final confirmation of intrathoracic TB lymphadenopathy, were retrospectively reviewed over an 8-year period. Routine clinical and laboratory evaluations including computerized tomography scans were performed before the EBUS-TBNA. Sociodemographic characteristics, clinical profile, pathological, and microbiological findings were collected.Results:The EBUS-TBNA confirmed TB diagnosis in 26 (83.9%) subjects with a consistent pathological finding or positive culture of Mycobacterium tuberculosis. Pathological analysis had findings consistent with TB in 25 (80.6%) patients. Culture of the EBUS-TBNA sample was positive for Mycobacterium tuberculosis in 12 (38.7%) patients. Other supportive investigations like purified protein derivative (PPD) skin test was positive in 28 (90.3%) participants. Overall, the sensitivity of the EBUS-TBNA alone was 83.9%. No complications were recorded during the procedure. The EBUS-TBNA aspirate culture positivity was significantly related to having a larger size lymph node (p=0.048) only, while PPD positivity was significantly related to baseline and clinical features of the participants.Conclusion:The EBUS-TBNA demonstrated effective utility and safety in the evaluation and diagnosis of intrathoracic TB lymphadenopathy among individuals with compatible symptoms in a country with low-moderate TB-incidence.     

酶联免疫斑点技术辅助诊断小儿结核性脑膜炎的临床意义

目的:探讨酶联免疫斑点技术(ELISPOT)在小儿结核性脑膜炎诊断中的应用价值。方法:收集0~14岁疑似结核性脑膜炎患儿共17例进行ELISPOT检测,对最终确诊病例进行分析,并与头颅CT/MRI检查、结核菌纯蛋白衍生物试验(PPD)试验、脑脊液检查、结核抗体检查、胸片结果相对比。结果:在最终确诊的13例结核性脑膜炎中,头颅CT/MRI、PPD、脑脊液、结核抗体、胸片在入院5d内的检查阳性率分别为30.8%、30.8%、23.1%、12.5%、30.8%,而ELISPOT阳性率为76.9%,显著高于其它辅助检查方法(P<0.05)。结论:ELISPOT检查灵敏、快速,对于小儿结核性脑膜炎有早期诊断价值。