葛根素对缺氧再复氧心肌细胞损伤的保护作用

目的 观察葛根素对缺氧再复氧心肌细胞损伤的保护作用,探讨其保护作用的可能机制.方法 将原代培养的新生大鼠心肌细胞分成2组:缺氧再复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)对照组和缺氧再复氧 葛根素(puerarin)保护组.葛根素浓度分别用200 μmol/L、100 μmol/L、50 μmol/L.检测两组心肌细胞存活率(Viability)、培养基中乳酸脱氢酶(laetate dehydrogenase,LDH)活性、肌酸激酶(creatine kinase,CK)活性以及心肌细胞Ca2 浓度、超氧物歧化酶活性(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondial dehyde,MDA)含量.结果 缺氧再复氧造成心肌细胞存活率显著降低(P＜0.01),LDH和CK外泄;而葛根素处理能显著提高细胞存活率(P＜0.01),显著减少LDH和CK外泄(P＜0.01).同时各葛根素处理组心肌细胞SOD活性显著高于对照组(P＜0.01),而Ca2 和MDA含量则显著低于对照组(P＜0.01).结论 葛根素对缺氧再复氧心肌细胞损伤有明显的保护作用,其保护效应的机制可能与葛根素抑制心肌细胞Ca2 超载、保护心肌细胞SOD活性、防止细胞膜过氧化作用有关.     

缬草提取物预处理对大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察缬草提取物(VOL)预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注(I/R)损伤和相关生化指标以及细胞内游离钙的影响,探讨VOL抗I/R损伤的机制.方法:利用Langendorff建立大鼠离体心脏I/R模型,观察左心室发展压(LVDP)恢复和再灌注痉挛度.用生化技术检测冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)的活性以及心肌细胞线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、ATP酶(ATPase)活性和丙二醛(MDA)含量,并用激光扫描共聚焦显微镜,借用Fluo-3/AM荧光染色技术观察心肌细胞内Ca2+强度.结果:①VOL预处理对心肌I/R损伤具有明显保护作用,并随浓度增加,对心脏保护作用逐渐增强,再灌注痉挛度明显减弱,心脏从缺血后恢复跳动更迅速,心律失常的发生越来越少,与I/R组相比,100 mg/L VOL使LVDP的恢复从(20.35±2.81)％增加到(91.87±6.52)％(P＜0.01),再灌注痉挛度从(89.27±9.31) mmHg减轻为(12.23±3.51)mmHg(P＜0.01).②VOL预处理明显降低LDH、CK活性和MDA含量,显著增加SOD、GSHPx、ATPase的活性,且随VOL浓度增高,上述作用更加明显,100 mg/L VOL预处理组各项生化指标与对照组无明显差异.③VOL使I/R损伤后心室肌细胞内Ca2+荧光强度明显减少,随着VOL浓度增高,减少细胞内Ca2+的作用更加强烈.与I/R组相比,100 mg/L的VOL使心肌细胞内Ca2+荧光强度从144.85±16.41减少到了51.83±11.61(P＜0.01).结论:VOL预处理能明显抵抗I/R损伤,可能机制与VOL减少心脏I/R时心肌细胞内游离钙浓度的增加和抗脂质过氧化有密切关系.     

亚低温缺血预处理对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨亚低温缺血预处理(MHIP)对肠缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用及机制.方法 32只大鼠随机分为4组, 比较假手术对照组、缺血再灌注组、缺血预处理组、 MHIP组小肠组织湿干重比、 Ca2+-Mg2+-ATPase含量以及血清乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二酸(MDA)活力、总抗氧化(TAX)能力的变化, 并观察各组肠组织超微结构及Bcl-2、 Bax蛋白表达.结果缺血再灌注后小肠湿干重比值增高、 LDH、 MDA含量极明显上升(P＜0.01), Ca2+-Mg2+-ATPase、 SOD活性及TAX能力明显下降, Bcl-2和Bax蛋白表达密度值明显增高(P＜0.01); 缺血预处理组与缺血再灌注组比较及MHIP组与缺血预处理组比较小肠湿干重比值减小、 LDH、 MDA含量明显下降, Ca2+-Mg2+-ATPase、 SOD活性及TAX能力明显上升, Bcl-2蛋白表达光密度值增高, Bax蛋白表达光密度值降低(P＜0.01, P＜0.05), Bcl-2/Bax光密度比值明显增高.结论亚低温缺血预处理可减轻肠缺血再灌注损伤.     

当归红芪超滤物对氧化损伤乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制

目的 探讨当归红芪超滤物对H2O2致乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法 用高浓度的H2O2(400μmol/L)在 Wistar 乳鼠原代培养的心肌细胞上建立氧化损伤模型,用不同质量浓度的当归红芪超滤物 (3.75、7.5、15 mg/mL) 进行干预。在倒置显微镜下观察各实验组心肌细胞的搏动频率,用 MTT 法检测心肌细胞的存活率,用试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶 (LDH)、肌酸激酶 (CK) 的活性及细胞内超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性、丙二醛 (MDA)、髓过氧化物酶 (MPO) 的量。RT-PCR 技术检测 caspase-3、hsp70 基因在心肌细胞中的表达情况。结果 当归红芪超滤物显著提高氧化损伤心肌细胞的细胞活力;与损伤组比较,当归红芪超滤物各干预组心肌细胞 LDH、CK、MPO、MDA 量显著降低 (P〖WT＜0.01),SOD 活性显著提高 (〖WTBX〗P〖WTBZ〗＜0.01),caspase-3 基因表达显著降低 (P＜0.05),hsp70 基因表达显著提高 (P＜0.05),差异具有统计学意义;并且当归红芪超滤物的抗氧化损伤作用呈剂量依赖性。结论 当归红芪超滤物具有良好的抗氧化损伤作用,其机制可能与清除自由基、上调 hsp70 表达、抑制 caspase-3 活性有关。     

通塞脉制剂对过氧化氢致PC12细胞损伤的保护作用

目的观察通塞脉制剂对过氧化氢(H2O2)作用下PC12细胞的保护作用。方法体外培养PC12细胞,将细胞分为正常对照组,过氧化氢组,通塞脉高剂量组(5mg/mL),通塞脉中剂量组(0.5mg/mL),通塞脉低剂量组(0.05mg/mL)。200μmol/L过氧化氢被加入作为刺激物孵化4h后,再加入终浓度5、0.5、0.05mg/mL的药物,继续培养24h,用MTT法测定并计算药物对H2O2致PC12细胞损伤的保护率;取各组细胞上清液,按照试剂盒的操作方式,测定超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO),乳酸脱氢酶(LDH)及钙离子含量(Ca2+)。结果通塞脉制剂(5、0.5、0.05mg/mL)对过氧化氢致PC12细胞损伤均有保护作用。过氧化氢组细胞上清液中SOD活性,SOD抑制率降低(P0.05~0.01),MDA,LDH,NO含量与Ca2+含量增加(P0.05~0.01)。而各给药组能提高SOD活性及抑制率,降低LDH,MDA,NO以及Ca2+含量,与过氧化氢组比较有显著性差异(P0.05~0.01)。结论通塞脉制剂对PC12细胞损伤有显著性保护作用,其机制与钙超载,氧化应激等因素有关。     

促红细胞生成素对心肌缺血再灌注后诱导型一氧化氮合酶蛋白的影响

目的:探讨促红细胞生成素对大鼠心肌缺血再灌注后诱导型一氧化氮合酶蛋白的影响及其对心肌保护作用与机制。方法:采用结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注120min的方法,建立大鼠模型缺血再灌注损伤模型,将30只大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组、治疗组(EPO 5000IU/kg)3组,每组10只,测定再灌注末血清和心肌组织磷酸肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化,应用免疫组织化学方法检测iNOS蛋白的表达,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡的变化。结果:与正常对照组相比,缺血再灌注组细胞上清液中LDH、MDA含量明显升高(P<0.01),SOD活力则显著降低(P<0.01),缺血组再灌注组凋亡率均升高明显(P<0.01)。治疗组的LDH、MDA显著低于对照组和缺血再灌注组(P<0.01),SOD则高于对照组和缺血再灌注组(P<0.01),缺血再灌注后细胞凋亡率与对照组相比均明显升高(P<0.01),治疗组再灌组的凋亡率与对照组相比均显著下降(P<0.01)。对照组有少量iNOS表达,缺血再灌注组iNOS表达升高(P<0.01)而EPO治疗组表达减少(P<0.01),与缺血再灌注组相比差异有显著性意义(P<0.01)。结论:EPO抑制iNOS蛋白的表达以减少心肌细胞凋亡,减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,从而对心肌有保护作用。     

芝麻素对大鼠心肌缺血再灌损伤的保护作用

目的:探讨芝麻素对缺血再灌所致大鼠心肌损伤的保护作用及其可能机制。方法:SD大鼠50只随机分为正常对照组、模型组、假手术组、芝麻素低剂量组[80 mg/(kg·d)]及芝麻素高剂量组[160 mg/(kg·d)],每组10只。芝麻素组灌胃给予芝麻素7 d,每日1次,结扎冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌模型;假手术组大鼠只穿线,不接扎。HE染色观察心肌病理学变化,比色法测定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及心肌组织MDA、SOD水平。结果:芝麻素明显改善缺血再灌所致大鼠心肌损伤,减轻细胞水肿、变性、坏死及心肌间质炎症细胞浸润,降低血清CK、LDH水平(P<0.05或P<0.01)。芝麻素显著提高大鼠血清和心肌组织SOD活力,降低MDA水平(P<0.05或P<0.01),改善缺血再灌诱导的氧化应激。结论:芝麻素可明显改善缺血再灌所致大鼠心肌损伤,其机制与提高机体抗氧化能力、减轻缺血再灌所致氧化应激损伤有关。     

金属硫蛋白对阿霉素致心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的 观察金属硫蛋白(metallothionein,MT)对阿霉素(adriamycin,ADR)致心肌细胞氧化损伤的保护作用.方法 将培养的心肌细胞随机分5组进行实验:①对照组;②阿霉素(1 mg/L)组;③阿霉素(1 mg/L)+MT1(5×10-9mol/L)组;④阿霉素(1 mg/L)+MT2(10-8mol/L)组;⑤阿霉素(1 mg/L)+MT3(5×10-8mol/L)组.MTT法计算心肌细胞存活率;试剂盒检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、细胞丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果 与对照组相比,阿霉素组心肌细胞存活率下降(P＜0.01),细胞LDH漏出量增加(P＜0.01),细胞MDA及NO含量升高(P＜0.01),细胞SOD活力降低(P＜0.01).分别应用5×10-9,10-8,5×10-8 mol/L MT与阿霉素共同处理心肌细胞,细胞存活率分别较单用阿霉素增加31.8%,47.8%和51.4%(均P＜0.01);细胞LDH漏出量分别较单用阿霉素降低20.5%,23.3%和34.6%(均P＜0.01);细胞MDA含量分别较单用阿霉素降低16.3%(P＜0.05),21.1%(P＜0.01),36.5%(P＜0.01);NO含量分别较单用阿霉素降低17.7%(P＜0.05),19.8%(P＜0.05)和30.1%(P＜0.01);心肌细胞SOD活性分别较单用阿霉素增加31.2%,36.5%和39.1%(均P＜0.01).结论 阿霉素导致心肌细胞氧化损伤,外源性MT具有降低这种心肌细胞氧化损伤的作用.     

蒺藜皂苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨蒺藜皂苷 (GSTT) 后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 56 只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注模型组、缺血后处理组、阳性药尼可地尔 1.0 mg/kg 组、GSTT (100、30、10 mg/kg) 组。采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支的方法,制备心肌缺血再灌注损伤模型,分离血清,采用分光光度法测定乳酸脱氢酶 (LDH)、丙二醛 (MDA) 水平和超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性,ELISA 法测定血清中肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 和白细胞介素-6 (IL-6) 的量。光学显微镜下观察受损心肌病理组织学改变,采用 TUNEL 法检测心肌细胞凋亡情况。结果 与模型组比较,GSTT 100、30 mg/kg 组 LDH、MDA、TNF-α 和 IL-6 的量明显降低、SOD 的活性明显升高 (P＜0.01),凋亡细胞数量明显减少 (P＜0.01),心肌组织形态明显改善。结论 再灌注同时 ip GSTT 进行药物后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,能减少自由基生成,抑制心肌细胞凋亡。     

头针对兔心肌缺血再灌注心律失常的实验研究

目的观察头针"额旁1线"对家兔心肌缺血再灌注损伤所致的实验性心律失常的作用。方法 18只家兔随机分为假手术组(S组)、缺血再灌组(IR组)、头针治疗组(SA组)。采用结扎左冠状动脉前降支制备家兔心肌缺血再灌注模型,以光镜下心肌结构、再灌性心律失常、血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量、心肌Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性作为观察指标。结果 SA组再灌注心律失常发生率低于IR组(P0.05),光镜下心肌结构损害减轻,血清中MDA含量显著降低(P0.05),SOD、Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性显著提高(P0.05,P0.01)。结论头针具有防治心肌缺血再灌性心律失常的作用,其机制可能与对抗氧自由基损伤、减轻Ca2+超载有关。