TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对帕金森病模型动物的旋转行为及神经生化的影响

背景：神经干细胞(neuronal stem cells，NSCs)能提供多巴胺能神经元来治疗帕金森病(Parldnson disease，PD)，但脑内移植NSCs治疗PD的疗效目前观察结果欠佳。研究显示酪氨酸羟化酶(tyrosine hydIDxylase，TH)基因脑内移植能缓解PD的症状，TH基因修饰的NSCs脑内移植可能使PD的治疗效果出现新的结局。目的：探讨TH基因修饰的NSCs脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响。设计：完全随机对照实验。地点和对象：本实验选择105只大鼠，在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。干预：构建pN2ATH反转录病毒载体质粒，用PA317细胞包装，G418筛选阳性克隆，病毒上清感染NSCs，将NSCs和表达TH的NSCs植入PD大鼠皱状体内，测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和3，4-二羟基苯乙酸(dihydroxy-phenyl acetlc acid，OOPAC)含量变化。主要观察指标：PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和DOPAC含量变化。结果：TH基因修饰的NSCs移植8周后能显降低PD大鼠旋转行为。增加纹状体多巴胺和DOPAC含量，疗效好于单纯NSCs移植组和对照组。结论：TH基因修饰的NSCs脑内移植能增加纹状体多巴胺和DOPAC含量，降低PD大鼠旋转行为，从而对PD大鼠有明显的治疗作用。     

神经干细胞移植对帕金森病模型小鼠行为的影响

目的 评价神经干细胞移植对帕金森病(PD)模型小鼠行为缺陷的改善作用。方法 采用自发运动、Morris水迷宫和转杆实验对小鼠的行为进行评价。结果 与对照组相比，PD模型小鼠的自发运动次数明显减少，水迷宫寻台潜伏期延长，转杆时问缩短。经单侧和双侧纹状体神经干细胞移植后2周、4周和8周，PD模型小鼠的自发运动次数明显增加，水迷宫寻台时间显著缩短，转杆时间延长。结论 神经干细胞移植能够有效改善PD模型小鼠的行为缺陷。     

神经前体细胞纹状体注入对帕金森病模型大鼠行为的影响

背景：胚胎干细胞经诱导产生神经前体细胞，再进行脑内移植，依旧具备增殖与分化的潜能，与宿主神经组织整合，使其有强的可塑性，这将有助于帕金森病的治疗效果观察。 目的：观察小鼠胚胎干细胞分化为神经前体细胞，以及定点移植对改进型帕金森病大鼠模型行为学的影响。设计：随机对照动物实验。单位：解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室和神经生物学教研室。材料：健康成年Wistar大鼠50只，随机分为实验组45只，对照组5只。 方法：①实验组大鼠黑质致密部与中脑腹侧背盖区两点各注射6-羟基多巴5μL（2g／L）制备帕金森病大鼠模型，对照组注射生理盐水5μL／点，术后1周开始行为学检测，测定模型成功率，1次／周，连续7周。②选取成功帕金森病模型大鼠20只实施纹状体神经前体细胞移植，剂量为2μL[细胞悬液记数为（5～8）&;#215;10^6个／μL]。另取5只模型大鼠纹状体注射生理盐水2μL为生理盐水对照组。主要观察指标：①帕金森病模型成功率。②神经前体细胞移植对帕金森病模型大鼠旋转次数的影响。③移植的神经前体细胞在体分布，存活与分化情况。 结果：①6周后实验组45只大鼠中共有33只（73％）达到成功帕金森病模型标准。②细菌培养皿上用无血清培养基培养形成胚胎体5d后，约85％胚胎干细胞分化为Nestin阳性的神经前体细胞。③神经前体细胞脑内移植后的帕金森病大鼠的旋转次数明显少于生理盐水对照组。多数移植的神经前体细胞存活，部分分化为TH阳性神经元。 结论：小鼠胚胎干细胞诱导的神经前体细胞脑内移植后，分化为TH阳性神经元，帕金森病大鼠旋转次数明显减少。     

神经前体细胞纹状体注入对帕金森病模型大鼠行为的影响

背景:胚胎干细胞经诱导产生神经前体细胞,再进行脑内移植,依旧具备增殖与分化的潜能,与宿主神经组织整合,使其有强的可塑性,这将有助于帕金森病的治疗效果观察。目的:观察小鼠胚胎干细胞分化为神经前体细胞,以及定点移植对改进型帕金森病大鼠模型行为学的影响。设计:随机对照动物实验。单位:解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室和神经生物学教研室。材料:健康成年Wistar大鼠50只,随机分为实验组45只,对照组5只。方法:①实验组大鼠黑质致密部与中脑腹侧背盖区两点各注射6-羟基多巴5μL(2g/L)制备帕金森病大鼠模型,对照组注射生理盐水5μL/点,术后1周开始行为学检测,测定模型成功率,1次/周,连续7周。②选取成功帕金森病模型大鼠20只实施纹状体神经前体细胞移植,剂量为2μL[细胞悬液记数为(5～8)×106个/μL]。另取5只模型大鼠纹状体注射生理盐水2μL为生理盐水对照组。主要观察指标:①帕金森病模型成功率。②神经前体细胞移植对帕金森病模型大鼠旋转次数的影响。③移植的神经前体细胞在体分布,存活与分化情况。结果:①6周后实验组45只大鼠中共有33只(73%)达到成功帕金森病模型标准。②细菌培养皿上用无血清培养基培养形成胚胎体5d后,约85%胚胎干细胞分化为Nestin阳性的神经前体细胞。③神经前体细胞脑内移植后的帕金森病大鼠的旋转次数明显少于生理盐水对照组。多数移植的神经前体细胞存活,部分分化为TH阳性神经元。结论:小鼠胚胎干细胞诱导的神经前体细胞脑内移植后,分化为TH阳性神经元,帕金森病大鼠旋转次数明显减少。     

神经干细胞移植治疗帕金森病的实验研究

目的:神经干细胞的发现为神经系统退行性疾病的治疗,提供了新的方法。通过碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)反应性神经干细胞的移植,探讨神经干细胞在帕金森病(Parkinson'dis-ease,PD)治疗中的作用。方法:体外用bFGF作为丝裂原培养E16大鼠中脑神经干细胞,经BrdU标记后植入PD大鼠纹状体,了解PD大鼠旋转行为的改善情况。结果:神经干细胞移植组PD大鼠旋转行为改善明显。结论:bFGF反应神经干细胞移植对PD有明显的治疗作用。     

移植的神经干细胞在帕金森病模型小鼠脑内的存活与分化

目的 观察移植的神经干细胞在帕金森病(PD)模型小鼠脑内的存活与分化。方法 C57BL／6小鼠皮下注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)造成PD模型。用5-溴尿嘧啶(BrdU)标记的神经干细胞分别移植到模型鼠的一侧或两侧纹状体。用酪氨酸羟化酶免疫荧光评价MPTP对黑质多巴胺能神经元的毒性。用免疫组织化学和激光共聚焦鉴定移植的神经干细胞在体内的存活与分化。结果 MPTP使黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞显著减少；在细胞移植的纹状体内发现有明显散在分布的BrdU阳性细胞，表明移植的神经干细胞已经存活；激光共聚焦显示部分BrdU阳性细胞已分化为酪氨酸羟化酶阳性细胞。结论 移植的神经干细胞能在PD模型小鼠纹状体存活，并可分化出特定的多巴胺能神经元。     

脐血干细胞移植对帕金森病大鼠旋转行为的影响

背景：目前帕金森病的临床治疗还是以药物为主,细胞移植实验也多见于骨髓间充质干细胞,脐血来源干细胞移植能否改善帕金森病的旋转行为报道较少。目的：观察脐血间充质干细胞移植对帕金森病大鼠旋转行为的影响。方法：帕金森病模型大鼠随机分成实验组和对照组。实验组大鼠纹状体内植入用Hoechst33258标记的第4代脐血间充质干细胞,对照组注射PBS。此后每周腹腔注射阿扑吗啡以观察大鼠的旋转行为;并在移植后3,6,9周用免疫荧光双标法检测间充质干细胞的存活、迁移情况以及胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶和突触素的表达。结果与结论：移植脐血间充质干细胞后大鼠的旋转行为与对照组相比有明显改善（P〈0.05）;间充质干细胞可在大鼠脑内存活,随时间延长迁移范围扩大,分布于纹状体、胼胝体和皮质;胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶都有表达,突触素无表达。结果可见移植脐血间充质干细胞后能明显改善帕金森病大鼠旋转行为,有望成为治疗帕金森病的种子细胞。     

神经干细胞移植对帕金森病鼠纹状体多巴胺含量的影响

目的观察神经干细胞定向移植后对帕金森鼠纹状体多巴胺含量的影响,证实神经干细胞移植治疗的可行性。方法建立帕金森病模型大鼠以及体外培养神经干细胞,然后将神经干细胞悬液立体定向移植到帕金森病模型鼠黑质纹状体区,测定纹状体的多巴胺含量,并与生理盐水组和非移植组相比。结果神经干细胞移植后帕金森病模型鼠纹状体多巴胺含量(346±26)μg/g与生理盐水组(58±56)μg/g和非移植组(72±60)μg/g比较明显增多,经t检验差异有显著性意义(t=13.99,12.57,P<0.05)。结论神经干细胞移植能减轻6-羟基多巴胺对黑质纹状体多巴胺能神经元的损伤。     

胚胎神经上皮干细胞脑内移植治疗大鼠帕金森病

背景：研究表明胚胎干细胞移植可改善血管性痴呆大鼠的学习记忆功能,增强神经的可塑性,诱导自身定向迁移并分化为成熟神经元。目的：观察胚胎神经上皮干细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠及移植细胞的迁徙情况。方法：将绿色荧光蛋白转基因鼠的胚胎神经上皮干细胞分别移植到帕金森病大鼠的黑质、纹状体和侧脑室内,移植后检测移植细胞的存活、迁徙与分化;利用高效液相色谱法检测实验动物脑内多巴胺神经递质的含量：对比实验动物旋转行为的改变,评估胚胎神经上皮干细胞移植对帕金森病大鼠的治疗作用。结果与结论：移植细胞存活良好且分化出了酪氨酸羟化酶阳性细胞,向黑质纹状体环路迁徙趋势明显;脑内多巴胺含量增加,动物旋转行为改善明显。表明移植到帕金森病大鼠脑内的神经上度干细胞多向黑质纹状体环路迁徙,且可增加脑内多巴胺神经递质的含量治疗帕金森病。     

同种异体胚胎神经干细胞移植修复脊髓损伤的时效性观察

目的:观察同种异体胚胎神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠双后肢运动功能的修复作用,并分析其移植时效性。方法:实验于2003-07/08在大连医科大学分子生物学实验室和大连理工大学环境与生命学院生物医学实验室完成。①取孕14￣16d的大白鼠1只,引颈处死,剖腹,取出胎鼠,钳取大脑皮质及皮质下脑室旁的脑组织,体外培养大鼠胚胎神经干细胞。②将30只成年SD大鼠按随机数字表法分为3组,即损伤对照组、早期移植组和延期移植组,每组10只。3组大鼠均制作脊髓横断损伤模型,造成大鼠下肢瘫痪,早期移植组、延期移植组大鼠分别在伤后3d及3周移植胎鼠脑组织神经干细胞。观察移植后大鼠双后肢的运动功能恢复情况,通过胶质原纤维酸性蛋白及神经元特异性烯醇化酶免疫组化染色法观察各组大鼠的脊髓组织形态学变化,胶质原纤维酸性蛋白是星形胶质细胞特异性标志蛋白,神经元特异性烯醇化酶是神经元特异性蛋白。结果:脊髓损伤建模实验纳入大鼠30只,全部进入结果分析,无脱失。①各组大鼠神经干细胞移植后双后肢的功能恢复情况:早期移植组和延期移植组大鼠双后肢的运动功能均有明显改善,但早期移植组表现尤为显著。早期移植组和延期移植组细胞移植后五六天即可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复,二三周后可出现爬行,4周后后肢活动活跃;损伤对照组大鼠的瘫痪肢体无任何恢复。②移植4周后早期移植组大鼠移植区脊髓组织的形态学变化:脊髓移植区肉眼可见有增生的组织充填,镜下有大量新生的细胞,表现为神经元和神经胶质细胞阳性染色(胶质原纤维酸性蛋白( ),神经元特异性烯醇化酶( ))。结论:神经干细胞移植对脊髓横断大鼠运动功能恢复有促进作用,早期移植疗效更好。     

骨髓间充质干细胞、过表达Nurrl蛋白的骨髓间充质干细胞与胎细胞移植治疗帕金森病大鼠的比较

目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）和过表达Nurr1蛋白的MSC移植治疗帕金森病（Parkinson disease,PD）的效果。方法携带Nurr1基因的真核表达质粒pcDNA3．1／Nurr1转染大鼠MSC,构建稳定高表达Nurr1蛋白的MSC克隆（Nurr1—MSC）;分别将Nurr1—MSC（Nurr1—MSC组）、MSC（MSC组）、胎鼠中脑腹侧细胞（VMC组）及生理盐水（对照组）植入PD大鼠纹状体,检测移植区Nurr1蛋白表达,观察移植前、后PD大鼠旋转行为变化,评估不同细胞移植治疗PD大鼠效果。结果移植术后8周内,Nurr1—MSC持续高表达Nurr1蛋白,3种移植细胞均明显改善PD大鼠症状（P〈0．01）,VMC组疗效最佳且持久;Nurr1—MSC组4周内效果优于MSC组（P〈0．05）,随时间延长其疗效逐渐减弱,至术后8周时与MSC组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论MSC及Nurr1—MSC移植PD大鼠纹状体后均可改善PD症状,Nurr1—MSC治疗PD大鼠模型效果短期内优于MSC,长期效果与MSC接近,胎鼠中脑腹侧细胞治疗效果最佳。     

骨髓间充质干细胞、过表达Nurr1蛋白的骨髓间充质干细胞与胎脑细胞移植治疗帕金森病大鼠的比较

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)和过表达Nurr1蛋白的MSC移植治疗帕金森病(Parkinson disease,PD)的效果。方法携带Nurr1基因的真核表达质粒pcDNA3.1/Nurr1转染大鼠MSC,构建稳定高表达Nurr1蛋白的MSC克隆(Nurr1-MSC);分别将Nurr1-MSC(Nurr1-MSC组)、MSC(MSC组)、胎鼠中脑腹侧细胞(VMC组)及生理盐水(对照组)植入PD大鼠纹状体,检测移植区Nurr1蛋白表达,观察移植前、后PD大鼠旋转行为变化,评估不同细胞移植治疗PD大鼠效果。结果移植术后8周内,Nurr1-MSC持续高表达Nurr1蛋白,3种移植细胞均明显改善PD大鼠症状(P<0.01),VMC组疗效最佳且持久;Nurr1-MSC组4周内效果优于MSC组(P<0.05),随时间延长其疗效逐渐减弱,至术后8周时与MSC组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MSC及Nurr1-MSC移植PD大鼠纹状体后均可改善PD症状,Nurr1-MSC治疗PD大鼠模型效果短期内优于MSC,长期效果与MSC接近,胎鼠中脑腹侧细胞治疗效果最佳。     

神经干细胞与帕金森病

背景：帕金森病已经成为中老年人常见的运动障碍性疾病之一,目前对其治疗的主要方式仍然是在药物和手术等领域,而神经干细胞作用于帕金森病的功能康复已经受到国内外学者的广泛关注。目的：在分析神经干细胞的生物特性及其帕金森病的病理特征的基础上,探讨了神经干细胞对帕金森病的作用,旨在为神经干细胞移植促进帕金森病康复的应用提供科学依据。方法：应用计算机检索Medline数据库、CNKI数据库和维普数据库（1994-01/2010-08）以＂Parkinson disease,Neural Stem Cell,Rehabilitation＂为英文检索词,以＂帕金森病;神经干细胞;康复＂为中文检索词,通过对与帕金森病、神经干细胞等的相关文献,以权威期刊、近年来发表的文献作为纳入标准,以重复性研究、陈旧性研究为排除标准等,对所得文献进性整理分析。结果与结论：神经干细胞作用于帕金森病患者的康复具有取材方便、低免疫原性、多向分化潜能、可定向诱导分化等优势,被作为治疗包括帕金森病在内的神经损伤类疾病的新的手段,但如果要将神经干细胞真正应用于临床治疗仍需要不断的开展研究,主要体现在对于神经干细胞得分化和功能修复机制还不清楚,移植后的细胞能否与体内损伤细胞相整合,建立起正常得神经系统突触联系还需要进一步研究。     

神经干细胞与帕金森病

背景:帕金森病已经成为中老年人常见的运动障碍性疾病之一,目前对其治疗的主要方式仍然是在药物和手术等领域,而神经干细胞作用于帕金森病的功能康复已经受到国内外学者的广泛关注.目的:在分析神经干细胞的生物特性及其帕金森病的病理特征的基础上,探讨了神经干细胞对帕金森病的作用,旨在为神经干细胞移植促进帕金森病康复的应用提供科学依据.方法:应用计算机检索Medline数据库、CNKI数据库和维普数据库(1994-01/2010-08)以"Parkinson disease,Neural Stem Cell,Rehabilitation"为英文检索词,以"帕金森病;神经干细胞;康复"为中文检索词,通过对与帕金森病、神经干细胞等的相关文献,以权威期刊、近年来发表的文献作为纳入标准,以重复性研究、陈旧性研究为排除标准等,对所得文献进性整理分析.结果与结论:神经干细胞作用于帕金森病患者的康复具有取材方便、低免疫原性、多向分化潜能、可定向诱导分化等优势,被作为治疗包括帕金森病在内的神经损伤类疾病的新的手段,但如果要将神经干细胞真正应用于临床治疗仍需要不断的开展研究,主要体现在对于神经干细胞得分化和功能修复机制还不清楚,移植后的细胞能否与体内损伤细胞相整合,建立起正常得神经系统突触联系还需要进一步研究.     

止颤汤干预神经干细胞移植帕金森病大鼠脑内多巴胺及其代谢产物的变化

背景:如何促进脑内多巴胺含量的增加以及减少多巴胺的代谢,是治疗帕金森病的热点所在.目的:从多巴胺代谢途径角度观察止颤汤对神经干细胞移植帕金森病大鼠的脑黑质中多巴胺及其代谢产物含量的变化.方法:以大鼠脑立体定位和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶建立帕金森病大鼠模型.应用高效液相色谱法测定帕金森病大鼠中脑多巴胺及其代谢产物的含量.结果与结论:止颤汤可以提高神经干细胞移植后帕金森病大鼠中脑多巴胺及其代谢产物双羟苯乙酸的含量,但对代谢产物高香草酸无明显影响.通过促进帕金森病大鼠干细胞移植后神经干细胞的存活,使之定向分化为多巴胺能神经元并分泌多巴胺,同时抑制多巴胺分解达到治疗作用.     

止颤汤干预神经干细胞移植帕金森病大鼠脑内多巴胺及其代谢产物的变化

背景：如何促进脑内多巴胺含量的增加以及减少多巴胺的代谢,是治疗帕金森病的热点所在。目的：从多巴胺代谢途径角度观察止颤汤对神经干细胞移植帕金森病大鼠的脑黑质中多巴胺及其代谢产物含量的变化。方法：以大鼠脑立体定位和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶建立帕金森病大鼠模型。应用高效液相色谱法测定帕金森病大鼠中脑多巴胺及其代谢产物的含量。结果与结论：止颤汤可以提高神经干细胞移植后帕金森病大鼠中脑多巴胺及其代谢产物双羟苯乙酸的含量,但对代谢产物高香草酸无明显影响。通过促进帕金森病大鼠干细胞移植后神经干细胞的存活,使之定向分化为多巴胺能神经元并分泌多巴胺,同时抑制多巴胺分解达到治疗作用。     

抑颤汤对帕金森病模型大鼠行为学及脑黑质细胞形态学的作用

背景目前治疗帕金森病( Parkinson disease,PD)仍以多巴胺替代疗法为主,但因其副作用多,有效时间短等弊病,使神经保护性治疗的探索日益受到重视,而中药治疗具有良好的效果且不良反应较少,探讨其作用机制将有利于临床应用. 目的观察抑颤汤治疗 PD在保护和促进黑质细胞修复方面的效果及其相关机制. 设计完全随机对照实验研究. 地点和对象解放军总医院医学实验动物中心,实验动物为 SD大鼠,分为正常组、生理盐水组、抑颤汤组. 干预 6-羟基多巴胺诱发建立 PD大鼠模型,抑颤汤组大鼠灌胃法给药,生理盐水组和正常组生理盐水灌胃.给药后第 5周开始观察大鼠行为学改变,连续观察 4周,给药结束后,各组大鼠断头处死,制备大脑切片,经苏木精-伊红染色后,用光学显微镜及电子显微镜观察脑黑质细胞形态的改变. 主要观察指标各组大鼠行为学改变和脑黑质细胞形态. 结果造模后经阿朴吗啡诱发,正常组大鼠旋转次数平均为 22圈 /40 min,无固定旋转方向;造模组大鼠旋转次数平均为 343圈 /40 min,两组相比差异有显著性意义( t=3.390, P< 0.001);治疗后,抑颤汤组大鼠旋转次数为 340圈 /40 min,两组相比差异有显著性意义( t=2.648, P< 0.01).病理形态学观察,抑颤汤组脑黑质细胞数量较生理盐水组明显增多,神经元体积饱满,结构清晰,细胞内高尔基体、线粒体等趋于正常. 结论抑颤汤能明显改善 PD模型大鼠的旋转行为,促进受损脑黑质细胞的修复,提示其疗效具有神经保护性特点.