Toll样受体2基因敲除通过myd88依赖的p38MAPK减轻高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织氧化应激

目的探究Toll样受体(TLR)2基因敲除对高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织氧化应激的影响。方法健康雄性C57BL/6小鼠和TLR2基因敲除小鼠随机分为正常对照组、肥胖组、TLR2基因敲除组和TLR2基因敲除肥胖组,高脂饮食或普通饮食16 w后Western印迹检测各组小鼠脂肪组织TLR2、myd88、p38MAPK蛋白相对表达量,专用试剂盒检测活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,荧光实时定量PCR检测肿瘤坏死因子(TNF)-αmRNA和白细胞介素(IL)-6 mRNA。结果与正常对照组小鼠相比,肥胖组小鼠脂肪组织TLR2、myd88、p38MAPK、TNF-αmRNA和IL-6 mRNA高表达,ROS和MDA含量明显增加,SOD含量明显减少,与肥胖组相比,TLR2基因敲除肥胖组小鼠脂肪组织myd88、p38MAPK、TNF-αmRNA和IL-6 mRNA表达减少,ROS和MDA含量明显减少,SOD含量明显增加。结论 TLR2基因敲除通过myd88依赖的p38MAPK减少了高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织氧化应激。     

高脂喂养对载脂蛋白O基因敲除小鼠表型的影响

目的 探究载脂蛋白O(ApoO)基因敲除促进高脂饮食诱导的肥胖及代谢紊乱表现.方法 将ApoO基因敲除杂合小鼠进行配种繁殖,提取子代小鼠的组织DNA,用PCR技术检测小鼠的基因型.实时荧光定量PCR和Western blot检测ApoO基因敲除mRNA和蛋白表达水平.饲喂高脂饮食后,通过小鼠体型、摄食量、肝脏脂质组学等...     

木贼对动脉粥样硬化早期大鼠内皮细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的 观察木贼对大鼠动脉粥样硬化早期血管内皮细胞凋亡及bax、bcl—2表达的影响。方法 高脂饲料复制SD大鼠高脂血症和早期动脉粥样硬化模型，同时给以不同剂量木贼水煎刑灌胃，实验10w后，流式细胞术定量检测各组主动脉内皮细胞凋亡率及bax、bcl—2基因蛋白表达。结果 模型组内皮细胞凋亡率及两个基因表达明显高于正常组(P＜0．01)；木贼组内皮细胞凋亡率与bax表达量显著低于模型组(P＜0．01)，bcl—2比较虽无统计学意义，但用药后bax／bcl—2比值差异具有显著性。结论 木贼可从基因水乎调控早期动脉粥样硬化主动脉内皮细胞凋亡，干预动脉粥样硬化始动环节及其发生。     

自身免疫性甲状腺疾病甲状腺组织中bcl-2家族蛋白的表达

目的研究凋亡相关基因bcl鄄2家族蛋白bcl鄄2、mcl鄄1、bcl鄄XL和bax在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)甲状腺组织中的表达特征及与AITD发病机制之间的内在联系。方法以甲状腺腺瘤旁正常甲状腺组织为对照(C组,20例),采用免疫组织化学ElivisionTM二步染色法检测凋亡相关蛋白bcl鄄2、mcl鄄1、bcl鄄XL和bax在桥本甲状腺炎(HT组,33例)和Graves病(GD组,28例)患者甲状腺组织中的表达与分布。结果bcl鄄2蛋白表达强度GD组>C组>HT组(P<0.01);mcl鄄1蛋白表达强度GD组>C组>HT组(P<0.01);bcl鄄XL蛋白表达强度HT组和GD组强于C组(P<0.01),但HT组和GD组间差异无统计学意义(P>0.05);bax蛋白的表达强度HT组>GD组和C组(P<0.01),但GD组和C组间差异无统计学意义(P>0.05);HT组中,在淋巴细胞浸润区域附近的甲状腺滤泡上皮细胞(TEC)bcl鄄2表达弱,bax和mcl鄄1表达强;远离淋巴细胞浸润区域的TECbcl鄄2表达强,bax和mcl鄄1表达弱(P<0.05)。结论(1)抗凋亡bcl鄄2和mcl鄄1蛋白在HT中表达的减弱以及在GD中表达的增强对于HT甲状腺滤泡细胞凋亡的增加和GD甲状腺滤泡细胞的增殖可能起一定作用;(2)bax蛋白在HT中表达增强所起的促凋亡的作用对疾病的发生发展起一定作用;(3)bcl鄄2与bax表达强度的比值对于凋亡的调控起重要作用;(4)bcl鄄2家族蛋白bc     

肌肉生长抑制素前肽基因干预对高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂代谢的影响

目的 探讨肌肉生长抑制素前肽(MPRO)基因对高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂代谢的影响及其分子机制.方法 60只雄性C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为4组(每组15只):正常对照组(NC组),高脂饮食组(HF组),高脂饮食+绿色荧光蛋白组(HF+ GFP组)及高脂饮食+MPRO组(HF+ MPRO组).高脂饮食诱导肥胖小鼠模型,以重组腺相关病毒(rAAV)为载体介导MPRO基因或对照基因GFP在小鼠体内表达,观察并检测小鼠体重、皮下及内脏脂肪、血及肝脏甘油三酯水平的变化.Western印迹法检测肝脏AMP活化蛋白激酶α(AMPKα)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉碱棕榈酰基转移酶-1(CPT-1)的表达情况.结果 HF组体重、皮下及内脏脂肪、血及肝脏甘油三酯水平较NC组显著升高(t=9.033 ～ 35.459,P均＜0.05),HF+ MPRO组体重、皮下及内脏脂肪、血及肝脏甘油三酯水平较HF组显著降低(t=5.233～21.500,P均＜0.05).Western印迹法显示HF组肝脏AMPKα、ACC磷酸化水平及CPT-1的表达较NC组显著降低(t=16.630～ 23.671,P均＜0.05);HF+ MPRO组肝脏AMPKα、ACC磷酸化水平、CPT-1的表达较HF组显著升高(t=8.143 ～ 10.314,P均＜0.05).结论 MPRO基因可能通过激活AMPK通路,明显改善肥胖小鼠的脂代谢紊乱.     

白细胞介素-22对高脂饮食诱导的ApoE~(-/-)小鼠主动脉内质网应激的影响

目的观察IL-22对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠主动脉内质网应激的影响。方法 24只健康雄性ApoE~(-/-)小鼠(8周龄)被随机分为对照(Control)组、高脂(HF)组、HF+IL-22组,每组8只。Control组给予普通饲料,另外2组给予高脂饲料喂养12周。HF+IL-22组同时腹腔注射用PBS(含5%海藻糖)稀释的重组小鼠白细胞介素(rmIL-22)溶液0.1 mL/d,浓度200 ng/mL,其余小鼠腹腔注射等量的PBS溶液(含5%海藻糖)。实验12周后,检测各组小鼠血脂水平、主动脉内质网应激相关蛋白[葡萄糖调节蛋白(GRP) 78、GRP94、C/EBP同源蛋白(CHOP)]mRNA及GRP78蛋白的表达水平。结果与Control组相比,HF组TC、HDL-C、TG和LDL-C水平显著升高(P0.05),GRP78、GRP94和CHOP的mRNA表达量亦显著升高(P0.05),GRP78蛋白表达量也显著升高(P0.01); HF+IL-22组较HF组TC和LDL-C水平显著降低(P0.05),GRP78、GRP94的mRNA表达量显著降低(P0.001),GRP78蛋白表达量也显著降低(P0.05),且HF+IL-22组较Control组LDL-C、TC、TG、HDL-C水平增高,GPP78、CHOP mRNA、GRP78蛋白表达增高,GRP94 mRNA水平降低(P0.05)。结论 IL-22能够改善高脂饮食诱导的ApoE~(-/-)小鼠主动脉内质网应激。     

脂联素及其受体mRNA表达与血清游离脂肪酸、肿瘤坏死因子α的研究

目的 了解肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和游离脂肪酸(FFA)与脂联素及脂联素受体mRNA表达的关系.方法 19例肥胖和29例正常体重受试者,采用RT-PCR检测腹部皮下与大网膜脂肪组织中脂联素及其受体mRNA的表达水平,同时测定血清脂联素、TNF-α、FFA等指标.结果 (1)肥胖患者的血清TNF-α、FFA高于正常体重组;脂联素降低.(2)肥胖组中网膜脂肪组织脂联素mRNA表达量低于皮下脂肪组织和正常体重组网膜脂肪组织.(3)网膜脂肪组织脂联素mRNA表达量与脂联素水平呈负相关.(4)腹部皮下脂肪组织的脂联素受体1、脂联素受体2 mRNA表达水平与血清脂联素、FFA呈负相关.结论 肥胖人群的血清TNF-α、FFA升高,脂联素降低,且其网膜脂肪组织中脂联素mRNA表达量亦降低;血清FFA升高与腹部皮下脂联素受体表达下调相关.     

N-乙酰半胱氨酸通过抑制活性氧-p38通路减轻缺氧复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)抑制缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的机制.方法 心肌细胞培养48 h后随机分为对照组、缺氧复氧组(H/R组)、缺氧复氧+NAC组(100 p.mol/L)(H/R+NAC组).H/R组心肌细胞先缺氧6 h,随后复氧72 h,H/R+NAC组在H/R组细胞培养液中加NAC(100 μmol/L).采用锥虫蓝检测心肌细胞活性.流式细胞仪与Annexin V测定细胞早期凋亡.TUNEL检测细胞晚期凋亡.活性氧绿色荧光显色试剂检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度.RT-PCR检测bcl2、bax基因mRNA水平.Western blot检测bel2、bax、p38与pp38基因蛋白水平.结果 H/R组有活性的细胞数量为74.9%,显著低于对照组(93.5%,P<0.01),H/R+NAC组有活性的细胞数为89.9%,显著高于H/R组(P<0.01).H/R组早期凋亡的心肌细胞数为25.2%,显著高于对照组(6.5%,P<0.01),H/R+NAC组早期凋亡的细胞数为11.1%,显著低于H/R组(P<0.01).H/R组晚期凋亡的心肌细胞数为33.5%,显著高于对照组(3.5%,P<0.01),H/R+NAC组晚期凋亡的细胞数为13.5%,显著低于H/R组(P<0.01).H/R组心肌细胞ROS产生显著高于对照组,H/R+NAC组心肌细胞ROS产生显著低于H/R组.H/R组pp38/p38条带密度比值(13.40)也显著高于对照组(3.89).H/R+NAC组pp38/p38条带密度比值(1.95)显著低于H/R组(13.4),P<0.01.H/R组bcl2 mRNA与蛋白水平显著低于对照组,bax mRNA与蛋白水平显著高于对照组.H/R+NAC组bcl2 mRNA与蛋白水平显著高于H/R组.H/R+NAC组bcl2/bax mRNA水平比值(1.79)显著高于H/R组(1.22),P<0.05,但仍低于对照组(1.85).H/R+NAC组bcl2/bax条带密度比值(0.71)显著高于H/R组(0.50),P<0.05,但仍低于对照组(2.53).结论 NAC通过抑制ROS-p38通路减轻缺氧复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,这一作用具有潜在的临床应用价值.     

罗格列酮对肥胖糖尿病小鼠脂肪组织中Perilipin基因表达的影响

目的观察罗格列酮（RGZ）对肥胖糖尿病小鼠脂肪组织中脂滴包被蛋白（Perilipin）表达的影响,并探讨其作用机制。方法36只雄性C57BL／6小鼠随机分为对照（Nc）组、糖尿病（DM）组及干预（RGZ）组,建立肥胖糖尿病小鼠模型,并应用RT—PCR检测各组小鼠脂肪组织中Perilipin基因的表达水平。结果与NC组比较,DM组小鼠脂肪组织中Perilipin基因表达水平明显下调（P〈0．01）。而经RGZ干预后,RGZ组小鼠脂肪组织中Perilipin基因表达水平明显高于DM组（P〈0．01）。结论RGZ能上调肥胖糖尿病小鼠脂肪组织中Perilipin基因表达,并调节脂代谢紊乱及改善胰岛素抵抗。     

BVT.2733和吡格列酮改善胰岛素抵抗作用机制的研究

目的 观察BVT.2733和吡格列酮(PGZ)对肥胖小鼠干预结果的异同,探讨BVT.2733在改善胰岛素抵抗中的作用机制.方法 构建高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型,分为正常对照组、肥胖对照组、BVT.2733治疗组、PGZ治疗组,对照组给予安慰剂,治疗组分别给予BVT.2733、PGZ灌胃2周,放免法检测小鼠空腹胰岛素水平,生化法检测血糖,ELISA法检测血清脂联素含量,实时定量PCR检测脂肪组织脂联素和瘦素的mRNA表达.观察4组小鼠在胰岛素抵抗方面的差异.结果 与正常对照组相比,肥胖对照组小鼠脂肪细胞明显增大,体重增加,空腹血糖、血清胰岛素水平升高(P<0.05).与肥胖对照组比较,BVT.2733、PGZ治疗组鼠脂肪细胞体积减小,空腹血清胰岛素明显下降(P<0.01);PGZ组血清脂联素含量升高、脂肪组织脂联素和瘦素表达明显上调(P<0.05).BVT.2733治疗组小鼠体重明显减轻,而血清脂联素含量、脂肪组织脂联素和瘦素表达变化无统计学意义.结论 BVT.2733能够显著减轻体重,改善胰岛素抵抗,但其不能影响脂肪细胞的分泌功能.