3,4-二羟基苯乙酮调控JNK/Nrf2信号通路减轻ox-LDL诱导的内皮细胞损伤的作用研究

目的：观察3,4-二羟基苯乙酮（3,4-DHAP）减轻氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的内皮细胞损伤的作用,并从c-Jun氨基末端激酶（JNK）/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路来探讨其可能的作用机制。方法：将常规培养的EA. hy926细胞随机分为空白对照（CON）组、3,4-DHAP(0.1 mmol/L)对照（3,4-DHAP-C）组、ox-LDL(100 mg/L)组,ox-LDL+低剂量（0.01 mmol/L）3,4-DHAP(3,4-DHAP-L)组及ox-LDL+高剂量（0.1 mmol/L）3,4-DHAP(3,4-DHAP-H)组。通过免疫荧光法观察细胞活性氧（ROS）的生成,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力,硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）水平;酶联免疫吸附法（ELISA）检测内皮素1(ET-1)水平,CCK-8法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡情况;RT-qPCR法检测Nrf2和血红素加氧酶1(HO-1)的mRNA表达;Western blot法检测JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、Nrf2和HO-1蛋白水平。结果：与ox-L...     

黄芪甲苷抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌H9c2细胞凋亡

目的:探讨黄芪甲苷(ASⅣ)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心肌H9c2细胞凋亡的作用及其机制。方法:用不同浓度Ang Ⅱ及ASⅣ处理心肌H9c2细胞,CCK-8法检测Ang Ⅱ及ASⅣ对心肌细胞活力的影响,选取Ang Ⅱ的最佳作用浓度为1μmol/L,ASⅣ浓度梯度设为25、50和100μmol/L。实验分为6组:对照组、ASⅣ组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+ASⅣ (25μmol/L)组、Ang Ⅱ+ASⅣ (50μmol/L)组和Ang Ⅱ+ASⅣ (100μmol/L)组。倒置相差显微镜下观察细胞形态并进行细胞计数检测细胞生长情况,TUNEL法检测细胞凋亡,DCFH-DA标记法检测活性氧簇(ROS)的水平, Western blot法检测Bax、Bcl-2、核因子E2相关因子2(Nrf2)及其下游因子血红素加氧酶1(HO-1)的表达情况。用negative control shRNA(NC)或Nrf2-shRNA(shRNA)质粒转染H9c2细胞,转染后实验分为8组,NC+control组、NC+AngⅡ组、NC+ASⅣ组、NC+AngⅡ+ASⅣ组、shRNA+control组、shRNA+AngⅡ组、shRNA+ASⅣ组和shRNA+AngⅡ+ASⅣ组,检测各组ROS水平及Nrf2和HO-1蛋白表达情况。结果:Ang Ⅱ呈浓度依赖性降低心肌H9c2细胞的活力,ASⅣ能逆转Ang Ⅱ对心肌H9c2细胞活力降低的作用,并呈浓度依赖性(P0.05);与对照组相比,Ang Ⅱ组细胞凋亡率显著增加,ROS水平显著升高,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2、Nrf2和HO-1蛋白表达水平显著降低;与Ang Ⅱ组相比,ASⅣ可呈浓度依赖性逆转Ang Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡率升高情况,降低ROS水平,下调Bax蛋白表达水平,上调Bcl-2、Nrf2和HO-1蛋白的表达水平(P0.05)。转染shRNA后,ASⅣ降低Ang Ⅱ诱导的ROS产生及上调Nrf2和HO-1表达的作用被消除。结论:ASⅣ抑制Ang Ⅱ诱导的心肌H9c2细胞凋亡,这一保护作用与其降低ROS水平、介导Nrf2/HO-1信号通路相关。     

下调牛磺酸调节基因1减轻氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞氧化损伤

目的研究牛磺酸调节基因1(TUG1)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的影响。方法将HUVECs分为:对照组、ox-LDL组(含有100 g/mL的ox-LDL细胞培养液)、si-NC+干预组(转染siRNA阴性对照)和si-TUG1+干预组(转染TUG1 siRNA)。实时定量PCR检测HUVECs中TUG1表达;DCFH-DA法检测细胞活性氧(ROS)水平;WST法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性;TBA比色法检测培养液中丙二醛(MDA)含量;LD-P法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;硝酸还原酶法检测培养液中一氧化氮(NO)含量;流式细胞计量术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中c-caspase-3蛋白水平。结果 ox-LDL组HUVECs中TUG1表达水平较对照组升高(P0.05)。TUG1 siRNA转染可下调TUG1的表达(P0.05)。ox-LDL组HUVECs中的ROS水平升高(P0.05),SOD活性降低(P0.05),培养液中MDA含量升高(P0.05),LDH活性升高(P0.05),NO含量降低(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),细胞中c-caspase-3蛋白水平升高(P0.05)。si-TUG1+干预组显著减轻ox-LDL组的上述变化(P0.05)。结论下调TUG1减轻ox-LDL诱导的HUVECs氧化损伤,减少HUVECs凋亡。     

茯苓酸通过激活Nrf2 / HO-1 信号通路改善OX-LDL 诱导的人脐静脉 内皮细胞损伤

目的:研究茯苓酸(PA)对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的影响及其作用的信号通路。方法:预先使用不同浓度的茯苓酸预处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)12 h,再加入OX-LDL刺激HUVEC 24 h,采用CCK-8法检测HUVEC细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,化学荧光法检测活性氧(ROS)水平,采用WST-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,采用蛋白免疫印迹法检测Nrf2蛋白、HO-1蛋白以及凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3)的表达水平。使用RT-PCR法检测内皮细胞在各种处理条件下Nrf2/HO-1的mRNA表达情况。结果:与对照组相比,OX-LDL作用于HUVEC后,能够明显降低细胞活力,增加细胞凋亡率及促凋亡相关蛋白的表达,并使细胞内ROS产生增多,促氧化物(MDA)表达增加,抗氧化物(SOD)活性降低。而茯苓酸预处理后,能显著改善OX-LDL对内皮细胞活力及凋亡的影响,减轻氧化应激损伤。蛋白免疫印迹法及RT-PCR结果显示相比于OX-LDL组,PA预处理后通路蛋白Nrf2/HO-1表达增加,并且细胞内Nrf2/HO-1的mRNA表达水平上调,而使用HO-1特异性抑制剂锌原卟啉(Znpp)后能消除这一作用。结论:茯苓酸(PA)可通过激活Nrf2/HO-1信号通路,减轻OX-LDL诱导的内皮细胞氧化应激损伤。     

山栀苷对6-羟基多巴胺损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用及其机制

目的：观察山栀苷对6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用,并探讨其作用的分子机制。方法：以6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞为帕金森病体外细胞模型,分别以5、50、100和200μmol/L山栀苷作用于受损细胞,另设空白组及50μmol/L栀子苷阳性对照组。CCK-8法检测细胞活力;倒置显微镜下观察细胞形态学改变;流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）的荧光强度;分子对接技术评价山栀苷、栀子苷与Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)的结合情况;Western blot检测Keap1、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平;RT-qPCR检测HO-1的mRNA水平。结果：（1）与空白组比较,模型组细胞活力降低,细胞数量减少,形态改变明显,ROS水平显著升高,Nrf2和HO-1蛋白表达均显著下降,HO-1的mRNA水平显著降低（P<0.05）;(2)与模型组比较,山栀苷预处理2 h可提高6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞的活力,其中100μmol/L山栀苷组的细胞活力最高（P<0.05）,还可显著降低ROS水平...     

花姜酮通过抑制氧化应激减轻MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的:探讨花姜酮(zerumbone,ZER)对1-甲基-4-苯基-吡啶鎓离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP~+)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的作用及其可能的分子机制。方法:采用CCK-8法检测MPP~+对SH-SY5Y细胞的毒性作用以及ZER的保护作用,采用流式细胞术检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡情况,采用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术抑制人帕金森病蛋白7(Parkinson disease protein 7,PARK7)基因的表达,采用Western blot法检测PARK7、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)和血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的蛋白表达水平。结果:MPP~+可显著抑制SH-SY5Y细胞活力(P0.05),并呈剂量和时间依赖性;ZER可使经600μmol/L MPP~+处理24 h的SH-SY5Y细胞活力升高,PARK7和Nrf2蛋白表达水平显著升高(P0.05),ROS含量和细胞凋亡明显减少(P0.05),抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)具有相似的作用;沉默PARK7基因后,Nrf2和HO-1蛋白的表达水平明显下降(P0.05),ROS含量和细胞凋亡显著增加(P0.05)。结论:ZER可在体外剂量依赖性地减轻MPP~+对SH-SY5Y细胞的毒性作用,这可能与ZER激活PARK7/Nrf2/HO-1通路,继而抑制MPP~+诱导的ROS生成和细胞凋亡有关。     

KLF6基因对THP-1细胞诱导分化的巨噬细胞凋亡的影响

目的:探讨过表达Kruppel样因子6(KLF6)基因对THP-1细胞诱导分化的巨噬细胞活力、凋亡、活性氧簇(ROS)水平及AKT信号通路的影响。方法:使用佛波酯(PMA)将人单核细胞株THP-1诱导分化为巨噬细胞,将巨噬细胞随机分为pcDNA3.1组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+pcDNA3.1组和ox-LDL+pcDNA3.1-KLF6组,其中pcDNA3.1转染参照Lipofectamine~(TM) 2000试剂盒说明。细胞处理24 h,通过MTT实验、Annexin V-FITC/PI双标细胞凋亡试剂盒和H_2DCF-DA探针分别检测细胞活力、凋亡率和ROS水平的变化;Western blot检测Bcl-2、Bax和p-AKT的蛋白水平。结果:pcDNA3.1-KLF6转染巨噬细胞后,KLF6表达明显升高(P0.05)。ox-LDL可明显抑制巨噬细胞的活力,诱导细胞凋亡,诱导细胞ROS的产生,上调Bax表达,下调Bcl-2和p-AKT的蛋白水平;而过表达KLF6可明显减弱ox-LDL对细胞活力、凋亡、ROS水平及Bcl-2、Bax和p-AKT蛋白水平的影响(P0.05)。结论:KLF6基因可明显降低ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,机制可能与降低细胞ROS水平及激活AKT信号通路有关。     

绿原酸调控miR-124/STAT3轴减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞炎症损伤

目的：探讨绿原酸（CGA）通过调节miR-124/信号转导和转录活化因子3(STAT3)轴对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）炎症损伤的影响。方法：体外培养HUVECs细胞，分为对照组、ox-LDL组、ox-LDL+CGA 25、50、100μmol/L组、ox-LDL+CGA 100μmol/L+NC inhibitor组、ox-LDL+CGA 100μmol/L+miR-124 inhibitor组，ox-LDL浓度均为150μg/ml。RT-qPCR检测细胞中miR-124、STAT3 mRNA水平；CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡率；ELISA检测细胞培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平；Western blot检测细胞中STAT3、CyclinD1、Bax、Caspase-3蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-124与STAT3的靶向关系。结果：与对照组相比，ox-LDL组HUVECs凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、STAT3 mRNA及蛋白表达水平显著升...     

沉默VCAM-1基因降低ox-LDL诱导的HUVECs氧化损伤和凋亡

目的探讨血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤及凋亡的影响。方法将体外培养的HUVECs随机分为对照组、ox-LDL组(加入100μg/mL ox-LDL培养24 h)、siRNA-NC组和siRNA-VCAM-1干预组。在Lipofectamine 2000介导下将siRNA-NC或siRNA-VCAM-1转染HUVECs。Western blot检测VCAM-1蛋白水平,MTT法检测细胞活性,流式细胞计量术检测细胞凋亡率和活性氧(ROS)活性,试剂盒检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果 VCAM-1在ox-LDL诱导的HUVECs表达量上调(P0.05);siRNA-VCAM-1显著降低在ox-LDL诱导的HUVECs VCAM-1蛋白水平(P0.05);下调VCAM-1能够增加细胞活性(P0.05),降低凋亡率和ROS及MDA水平(P0.05),升高SOD活性(P0.05)。结论下调VCAM-1可增加HUVECs活性、降低凋亡及抑制氧化应激反应。     

柿叶提取物对HEK293-APPswe 转基因细胞模型的抗氧化作用及对Nrf2 / HO-1 途径的影响

目的:观察柿叶提取物(PLE)对阿尔茨海默病细胞模型HEK293-APPswe(20E2)的抗氧化应激的影响,并从 核因子E2 相关因子2(Nrf2) / 血红素加氧酶1(HO鄄1)信号通路研究其作用机制。方法:Western blot 检测APP 蛋白表达水平, ELISA 检测各组细胞上清Aβ_1-40 的量,确定细胞模型是否建立成功。用CCK-8 检测不同浓度的柿叶提取物对细胞活性的影 响,选定干预最佳浓度。设分组:SH-SY5Y 为空白对照组(NC 组),20E2 为模型组(20E2 组),用柿叶提取物干预为加药组 (20E2+PLE 组)。DCFH-DA 荧光探针检测各组细胞内ROS 的变化,ELISA 检测各组细胞上清Aβ_1-42的量,Western blot 检测胞 核、胞浆Nrf2 和全细胞HO鄄1 蛋白的表达水平变化。结果:与模型组相比,加药组ROS 表达减少,细胞外Aβ_1-42浓度降低,细胞 核内Nrf2 表达增多, HO-1 蛋白含量增加。结论:柿叶提取物能有效降低模型组氧化应激的水平,可能是通过降低Aβ_1-42的聚 集,激活Nrf2/ HO-1 信号途径,促进Nrf2 合成和核转位,从而促进下游抗氧化蛋白HO鄄1 的表达来减弱氧化应激的损伤。     

柚皮素通过调控AMPK/Nrf2/HO-1信号通路减轻糖尿病小鼠心肌损伤

目的:探讨柚皮素(naringenin,NAR)对糖尿病小鼠心肌的保护作用及对腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)信号通路的影响。方法:将50只C57BL/6小鼠随机分为正常组(N组)和模型组。模型组采用连续腹腔注射链脲佐菌素的方法建立1型糖尿病小鼠模型,成模后将其分为糖尿病组(D组)、低剂量NAR干预组(D+L-NAR组)、中等剂量NAR干预组(D+M-NAR组)和高剂量NAR干预组(D+H-NAR组),对干预组小鼠分别给予低、中、高剂量NAR灌胃,N组和D组给予与D+M-NAR组等体积的生理盐水灌胃。6周后处死小鼠,观察NAR对小鼠体重及血糖的影响;HE和Masson染色观察心脏形态学改变,测量心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);免疫组化观察心脏组织中白细胞介素6(interleukin...     

姜黄素抑制ox-LDL诱导HUVECs凋亡

目的研究姜黄素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用及其可能机制。方法体外培养HUVECs,实验分为:对照组、ox-LDL组、ox-LDL加内质网应激(ERS)抑制剂PBA组、姜黄素组、ox-LDL加姜黄素组和ox-LDL加姜黄素加PI3K抑制剂LY294002组。CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察活化转录因子6(ATF6)转位;Western bolt检测ERS相关蛋白:糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)和肌醇激酶-1(IRE-1)以及相关通路蛋白:LOX-1、AKT和p-AKT的表达。结果与对照组相比,ox-LDL可增加细胞凋亡,提高ERS相关蛋白的表达(P0.01),促使ATF6向核内转位,以及提高LOX-1(P0.01)和降低p-AKT的表达(P0.01);与ox-LDL组相比,PBA可抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡(P0.01),姜黄素可抑制ox-LDL诱导的ERS相关蛋白和LOX-1的表达(P0.01),ATF6的核转位,内皮细胞的凋亡(P0.01),同时它还可提高ox-LDL引起的p-AKT表达下调(P0.01);LY294002可部分削弱姜黄素抑制ox-LDL诱导ERS相关蛋白表达的作用(P0.05)。结论姜黄素可降低ox-LDL诱导HUVECs的凋亡,其可能机制是通过抑制LOX-1的表达和激活AKT通路减轻细胞ERS来实现的。     

DAPT在ox-LDL损伤HUVECs过程中的细胞保护作用

目的:探究γ-分泌酶抑制剂N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester(DAPT)在氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)损伤人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)模型中的细胞保护作用及其对Notch信号通路的调控。方法:体外培养HUVECs,用oxLDL处理HUVECs构建细胞损伤模型。实验分为对照组、ox-LDL处理组、DAPT处理组和DAPT+ox-LDL处理组。用倒置相差显微镜观察不同处理方法下细胞的形态变化;CCK-8法检测细胞存活率;Western blot法检测蛋白Notch1、Notch4和Jagged1的表达情况。结果:体外培养HUVECs,倒置相差显微镜下发现ox-LDL处理组细胞死亡和碎片增多,经DAPT预处理后,ox-LDL作用造成的细胞损伤死亡较少,细胞碎片较少。通过CCK-8法检测发现ox-LDL处理组细胞存活率降低,DAPT处理组细胞存活率升高,DAPT预处理后ox-LDL造成存活率降低的幅度变小。在ox-LDL作用下,Notch1和Jagged1蛋白表达量降低,Notch4表达量升高;而DAPT作用下Notch1和Jagged1表达量升高,Notch4表达量降低;ox-LDL与DAPT共同作用时蛋白接近正常水平。结论:ox-LDL对HUVECs具有损伤作用;DAPT减轻ox-LDL对HUVECs造成的损伤;DAPT保护HUVECs免受ox-LDL损伤的作用与Notch信号通路有关。     

紫草素对高糖诱导的血管内皮细胞凋亡和氧化应激的影响

目的:探讨紫草素(shikonin)对高浓度葡萄糖诱导的血管内皮细胞凋亡和氧化应激水平的影响及其可能的作用机制。方法:体外培养的大鼠胸主动脉内皮细胞随机分为5组:正常对照组(培养基中葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)、高糖组(培养基中葡萄糖浓度为33 mmol/L)、高糖+低浓度紫草素组(培养基中葡萄糖浓度为33mmol/L,紫草素浓度为0.1μmol/L)、高糖+中浓度紫草素组(培养基中葡萄糖浓度为33 mmol/L,紫草素浓度为1μmol/L)和高糖+高浓度紫草素组(培养基中葡萄糖浓度为33 mmol/L,紫草素浓度为10μmol/L)。各组细胞经相应处理后,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率;此外,检测细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的水平,以反映细胞的氧化应激状态;Western blot检测Nrf2/HO-1信号通路的活性。结果:相较于高糖组,紫草素处理可呈剂量依赖性地逆转高糖所致的内皮细胞活力降低及凋亡率增加。与正常对照组相比,高浓度葡萄糖可升高内皮细胞中MDA和ROS的含量,同时降低SOD和GSH-Px的活性;相较于高糖组,给予紫草素干预后,细胞内MDA和ROS的含量降低,SOD和GSH-Px的活性升高。此外,高糖可致内皮细胞中cleaved caspase-3、HO-1及核内Nrf2蛋白表达的增加;与高糖组相比,给予紫草素干预后细胞中cleaved caspase-3、HO-1和核内Nrf2的表达部分下降。结论:紫草素可显著改善高糖所致的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路并降低细胞的氧化应激水平有关。     

蜂胶醇提物通过抑制C/EBP同源蛋白表达减轻氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:研究蜂胶醇提物(ethanol extract of propolis,EEP)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),给予EEP(7.5、15和30 mg/L)、4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;4 mmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)或衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞活力和凋亡情况;试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和细胞内caspase-3活性。分别采用Western blot和real-time PCR技术检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)和Bcl-2的表达变化。结果:与ERS抑制剂PBA相似,EEP呈剂量依赖性地减轻ox-LDL所诱导的HUVECs损伤,表现为细胞活力增加(P0.01或P0.05),LDH漏出、凋亡率和caspase-3活性降低(P0.05或P0.01),且可抑制ERS诱导剂TM所致的HUVECs活力下降(P0.05),以及LDH漏出、细胞凋亡率和caspase-3活性增加(P0.05或P0.01);与PBA相似,EEP可抑制ox-LDL所诱导的CHOP上调和Bcl-2下调(P0.05或P0.01);另外,与TM组比较,EEP预处理组CHOP蛋白和mRNA表达上调也受到明显抑制(P0.05或P0.01)。结论:EEP可减轻oxLDL所诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与抑制CHOP介导的ERS凋亡途径有关。     

胱抑素C对氧化型低密度脂蛋白诱导的人血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的： 研究胱抑素C（cystatin C）对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人血管平滑肌细胞（VSMC）的作用，以探讨cystatin C在心血管疾病中的生物学特性。方法：利用ox-LDL诱导人VSMC，MTT法检测ox-LDL诱导时间及浓度对细胞存活率的影响，确定ox-LDL最佳诱导浓度和时间，将对数生长期的人VSMC随机分成正常细胞组、pCDNA3.1-cystatin C转染组、ox-LDL诱导组以及ox-LDL+ pCDNA3.1-cystatin C转染组，检测各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）、活性氧（ROS）、三磷酸腺苷（ATP）生成量以及caspase-3活性变化，并通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting法测定各组凋亡相关基因bax、bcl-2和Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果：ox-LDL+ pCDNA3.1-cystatin C转染组与ox-LDL诱导组比较，LDH、ROS生成量和caspase-3表达量明显降低，差异有统计学意义（P<0.01）；ATP生成量显著升高，差异有统计学意义（P<0.01）。RT-PCR和Western blotting法测定显示ox-LDL诱导组促凋亡基因bax及Bax蛋白表达增加、抗凋亡基因bcl-2和Bcl-2蛋白表达减少，ox-LDL＋pCDNA3.1-cystatin C转染组Bcl-2表达增加、Bax表达减少，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Cystatin C抑制ox-LDL诱导的VSMC凋亡，其机制可能与其上调Bcl-2及下调Bax表达有关。     

miR-92a-3p promotes ox-LDL induced-apoptosis in HUVECs via targeting SIRT6 and activating MAPK signaling pathway

Atherosclerosis could be induced by multiple factors, including hypertension, hyperlipidemia, and smoking, and its pathogenesis has not been fully elucidated. MicroRNAs have been shown to possess great anti-atherosclerotic potential, but the precise function of miR-92a-3p in atherosclerosis and its potential molecular mechanism have not been well clarified. Flow cytometry assay and 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazol-3-ium bromide (MTT) assay were performed to evaluate effects of oxidized low-density lipoprotein (ox-LDL) on proliferation and apoptosis of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), respectively. Malondialdehyde and superoxide dismutase levels in cell lysate were assessed with biochemical kits. The expression levels of miR-92a-3p and Sirtuin6 (SIRT6) in HUVECs exposed to ox-LDL were estimated by real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR). In addition, the protein levels of SIRT6, c-Jun N-terminal kinase (JNK), phosphorylation JNK (p-JNK), p38 mitogen activated protein kinase (p38 MAPK), and phosphorylation p38 MAPK (p-p38 MAPK) were measured by western blot assays. The relationship between miR-92a-3p and SIRT6 was confirmed by dual-luciferase reporter assay. Ox-LDL induced apoptosis and oxidative stress in HUVECs in concentration- and time-dependent manners. Conversely, miR-92a-3p silencing inhibited apoptosis and SIRT6 expression in HUVECs. The overexpression of miR-92a-3p enhanced apoptosis and phosphorylation levels of JNK and p38 MAPK as well as inhibited proliferation in ox-LDL-induced HUVECs. In addition, SIRT6 was a target of miR-92a-3p. miR-92a-3p negatively regulated SIRT6 expression in ox-LDL-induced HUVECs to activate MAPK signaling pathway in vitro. In summary, miR-92a-3p promoted HUVECs apoptosis and suppressed proliferation in ox-LDL-induced HUVECs by targeting SIRT6 expression and activating MAPK signaling pathway.     

TRIM8在高糖高脂诱导的小鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨含三基序蛋白8(TRIM8)对高糖高脂(HGHF)诱导的小鼠心肌细胞(MCMs)凋亡的影响及机制。方法:将MCMs分为正常糖(NG)组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)、高糖(HG)组(葡萄糖浓度为33 mmol/L)、高脂(HF)组(软脂酸钠浓度为300μmol/L)和HGHF组(葡萄糖浓度为33 mmol/L,软脂酸钠浓度为300μmol/L);用siRNA沉默MCMs中TRIM8的表达后,再将MCMs分为对照(control)组(仅给予转染试剂)、Scra-siRNA/PBS组(转染scrambled siRNA)、TRIM8-siRNA/PBS组(转染TRIM8特异性siRNA)、Scra-siRNA/HGHF组和TRIM8-siRNA/HGHF组;为探索TRIM8在HGHF诱导的MCMs损伤中的可能作用机制,将MCMs分为HGHF/DMSO组、HGHF+TRIM8-siRNA+DMSO(HGHF+Ts/DMSO)组、HGHF/ML385组和HGHF+TRIM8-siRNA+ML385(HGHF+Ts/ML385)组。采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;流式细胞术及D...     

Wnt3a减轻黑素细胞iMC65氧化应激损伤

目的探讨Wnt3a对氧化应激损伤的i MC65黑素细胞的保护作用及机制。方法将黑素细胞分成对照组,Wnt3a组,H2O2处理组,Wnt3a干预组,750μmol/L的H2O2作用模拟黑素细胞的氧化应激损伤。MTT实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞产生活性氧(ROS),荧光素酶报告基因检测Nrf2/ARE通路的激活,Western blot检测Nrf2/ARE通路的相关蛋白表达。结果与对照组相比,H2O2处理组的细胞活性明显下降(P0.01),凋亡比率明显上升(P0.01),ROS的产生明显增加(P0.01)。而Wnt3a干预组能显著缓解H2O2处理组细胞活性的降低(P0.05)、降低凋亡比率(P0.05),减少ROS的产生(P0.05)。Wnt3a也能上调Nrf2和HO-1蛋白水平的表达。结论 Wnt3a可以保护氧化应激状态下的黑素细胞,其机制可能与激活Nrf2/ARE有关。